Časopis - Beckman Coulter

Transkript

informační magazín číslo 4 - 2006
CENA ARNOLDA BECKMANA - VYHLÁŠENÍ VÍTĚZŮ
HEMATOLOGIE POD DROBNOHLEDEM
BECKMAN COULTER NA GERLACHU
O ČEM JEŠTĚ USLYŠÍTE: COMP
CENA ARNOLDA
BECKMANA
Vyhlašovaná Immunotech a.s., českou
pobočkou společnosti Beckman Coulter Inc.
a Českou společností pro biochemii
a molekulární biologii
1. ročník ceny Arnolda Beckmana už má své vítěze ve všech třech vyhlašovaných kategoriích. Přihlášené publikace byly v každé kategorii zaslány k hodnocení dvěma nezávislým hodnotitelům z vysokých škol a z akademie věd.
Hodnotitelé sestavili pořadí prací a zdůvodnili svůj návrh vítězné publikace.
V případě vyrovnaného hodnocení měl o vítězi rozhodnout třetí hodnotitel
– předseda ČSBMB prof. RNDr. Václav Pačes,DrSc. Výsledky však byly tak jednoznačné, že jeho hlasu nebylo třeba.
Vítězi ceny Arnolda Beckmana, ročníku 2004-2005, se stávají:
Kategorie:
Buněčná biologie a imunologie
Vlada Filimoněnko, ÚEM AV ČR (dnes ÚMG AV ČR)
Za práci:
Nuclear actin and myosin I are required for RNA polymerase I transcription
Nature Cell Biol 6, 1169-1172, 2004
Vlada V. Philimonenko1,5, Jian Zhao2,5, Sebastian Iben2, Hana Dingová1, Katarína Kyselá1, Michal Kahle1, Hanswalter Zentgraf3, Wilma A. Hofmann4, Primal
de Lanerolle4, Pavel Hozák1 and Ingrid Grummt2,6
1
Department of Cell Ultrastructure and Molecular Biology, Institute of Experimental Medicine, Academy of Sciences of the Czech Republic, Prague
14220, Czech Republic. 2Division of Molecular Biology of the Cell II, German
Cancer Research Center, D-69118 Heidelberg, Germany. 3Applied Tumorvirology, German Cancor Research Center, D-69118 Heidelberg, Germany. 4Department of Physiology and Biophysics, University of Illinois at Chicago,
Chicago IL 60612, USA. 5These authors contributed equally to this work.
Kategorie:
Proteomika
Petr Man, MBÚ AV ČR
Za práci:
Mass spectrometric analysis of the glycosphingolipidenriched microdomains
of rat natural killer cells
Proteomics 5, 113–122, 2005
Prague, Czech Republic, 2 Department of Biochemistry, Charles University, Prague, Czech
Republic, 3 Ludwig Institute for Cancer Research, University of Lausanne, Epalinges,
Switzerland
Kategorie:
Genomika, genetika a analýza
nukleových kyselin
Tomáš Vacík
Za práci:
Segmental trisomy of chromosome 17: A mouse
model of human aneuploidy syndromes
PNAS 102, 4500–4505, 2005
Tomáš Vacík1, Michael Ort2,3, Soň a Gregorová1,
Petr Strnad1, Radek Blatný1, Nathalie Conte4, Allan
Bradley4, Jan Bureš2, and Jiří Forejt1
Institutes of 1Molecular Genetics and 2Physiology,
Academy of Sciences of the Czech Republic,
14220 Prague, Czech Republic; 3Department of
Psychiatry, First School of Medicine, Charles University, 11636 Prague, Czech Republic; and 4The
Wellcome Trust Sanger Institute, Wellcome Trust
Genome Campus, Hinxton, Cambridge CB10 1SA,
United Kingdom
Blahopřejeme vítězům, děkujeme všem soutěžícím a těšíme na vaše příspěvky do soutěže o cenu
Arnolda Beckmana v ročníku 2006-2007.
JIŘÍ MOOS
Petr Man1, 2, Petr Novák1, 2, Marek Cebecauer3, Ondrej Horváth1, Anna Fišerová1, Vladimír Havlíček1 and Karel Bezouška1, 2
1
Institute of Microbiology, Academy of Sciences of the Czech Republic,
2
E-MAIL: [email protected]
Obsah
Nové možnosti v přístrojové analýze subpopulací
leukocytů (WBC) a erytrocytů (RBC)
4
Osvědčená a mnoha roky prověřená technologie Beckman Coulter
VCS zásadním způsobem změnila pohled na buněčné subpopulace
leukocytů. Kombinace průtokové cytometrie, vysokofrekvenční
vodivosti a impedanční metody poprvé v historii přístrojové analýzy
leukocytů nabízí možnost standardizace a kvantifikace vlastností
jednotlivých typů leukocytů.
Nová řada hematologických analyzátorů
Beckman Coulter LH780 a LH785
6
XXX Pro stolní ultracentrifugy a vysokovýkonné centrifugy Beckman Coulter
Průtoková cytometrie v hematologické laboratoři
7
Důležitou součástí laboratorní hematologie se v posledních
desetiletích stala průtoková cytometrie.
Časopis vydává a distribuuje
IMMUNOTECH a.s., Radiová 1, 102 27 Praha 10
Časopis připravují
Mgr. Jiří Moos, CSc.
Mgr. Patrik Šaf
RNDr. Helena Kurzweilová,
RNDr. Běla Říčařová, CSc
Ing. Petr Suchan
Mgr. Markéta Krupařová
Ing. Roman Šandrik, PhD
Ing. Kateřina Ťukova
Monika Lahodová
Do časopisu přispěli
Mgr. Jiří Moos, CSc.
Ing. Petr Boudal
Mgr. Pavel Kružík
RNDR. Libor Kozák, CSc., FN Brno
MUDr. Pavla Šigutová , FN Plzeň
Ing. Roman Šandrik, PhD
Pavol Skočdopole
RNDr. Helena Kurzweilová
RNDr. Vladimír Vilím, CSc., Revmatologický
ústav, Praha
Mgr. Markéta Krupařová
MUDr. Pavla Šigutová – titulní foto
Grafická podoba
Nina Nováková
Tiskárna
REPRO servis s. r. o.
Starochuchelská 15/195, 159 00 Praha 5
Náklad čísla
1200 výtisků
Detekce rozsáhlých delecí a duplikací
v genech metodou MLPA
9
V současné době jsme svědky expanze DNA a RNA diagnostiky
a rozsáhlých možností jejího využití v řadě medicínských oborů.
Převratné diagnostické a terapeutické úspěchy z posledních let jsou
výsledkem aplikace nových molekulárně biologických technik.
Příklady hodnocení diferenciálních
rozpočtů leukocytů na Coulter LH 750
10
Od listopadu 2005 pracujeme ve fakultní hematologické laboratoři
s novým analyzátorem Coulter LH 755, od května 2005 máme Coulter
LH 750 i v naší druhé laboratoři vzdálené 8 km.
XIII. Slovensko – česká konferencia
o hemostáze a trombóze Martin 2006
15
V dňoch 4.- až 6. mája 2006 sa uskutočnila v Martine medzinárodná
konferencia o Hemostáze a Trombóze.
Beckman Coulter na špici
16
Výstup „Beckman Coulter“ na Gerlachovský štít, august 2006.
O čem ještě uslyšíte COMP
18
COMP je akronymum anglického označení „cartilage oligomeric
matrix protein“. Jedná se o nekolagenní protein, který je podstatnou
součástí tzv. extracelulární matrix chrupavky. Řadí se do rodiny
extracelulárních proteinů thrombospondinů. Odtud pochází jeho
další označení thrombospondin 5.
Kde se můžeme setkat
(září – prosinec 2006)
20
Konference/seminář s účastí společnosti Immunotech
formou stánku
3
Nové možnosti v přístrojové
analýze subpopulací leukocytů
(WBC) a erytrocytů (RBC)
Osvědčená a mnoha roky prověřená technologie Beckman Coulter VCS zásadním způsobem změnila pohled na buněčné subpopulace leukocytů. Kombinace průtokové cytometrie, vysokofrekvenční vodivosti a impedanční metody poprvé v historii přístrojové analýzy leukocytů nabízí možnost
standardizace a kvantifikace vlastností jednotlivých typů leukocytů.
Zavedení měřítka pro velikost leukocytu, velikost jeho jádra, granularitu,
poměr velikosti jádra k velikosti leukocytu, umožňuje použití matematických a statistických metod pro analýzu vlastností jednotlivých buněčných subpopulací leukocytů a zavedení statistického aparátu pro popis
jejich patologií.
Technologie Beckman Coulter VCS používá tři
fyzikálně nezávislé metody analýzy vlastností buňky
Historicky prvním pokusem jak statisticky popsat vlastnosti buněčné populace
v hematologii bylo zavedení parametru RDW, variačního koeficientu populace
erytrocytů. Tradiční mikroskopická hematologie používala a používá na popis velikostní různosti erytrocytů pojem anizocytóza a stupeň (kvantifikaci) tohoto jevu
popisuje počtem křížků (+, ++, +++). Použití impedanční metody počítání erytrocytů za standardních fyzikálně-chemických podmínek umožnilo i standardizaci
výsledků, kalibraci velikosti erytrocytů a zavedení měřítka v jejich distribuční křivce. Grafické zobrazení distribuce erytrocytů, charakteristické pro tuto populaci
a známé jako Price-Jonesova křivka, dovoluje přímé vyčíslení vrcholu křivky =
MCV a číselné vyjádření variačního koeficientu =
RDW = míra anizocytózy erytrocytů. Tento parametr
se stal nedílnou součástí krevního obrazu a každý
z nás se s ním setkává mnohosetkrát denně. Hlavní
výhodou číselného vyjádření (kvantifikace) této
vlastnosti je možnost zavedení mezí pro normalitu
a patologii, např. hodnota RDW mezi 12,5 a 15 je
normální, vyšší hodnoty znamenají anizocytózu, jejíž
stupeň je přesně charakterizován hodnotou RDW.
Pro popis populace erytrocytů, jejich vlastností a
případných patologií zavádí nová řada analyzátorů
LH780 patentované parametry Red Cell Size Factor
(RSF) a Microcytic Anemia Factor (MAF). Praktické
klinické aplikace a použití těchto parametrů je dokladováno sérií právě dokončovaných a publikovaných
studií.
Podobně je možné zachytit i vlastnosti populace
retikulocytů a popsat tak stav erytropoézy pacienta.
Nová řada hematologických analyzátorů Beckman
Coulter LH780 a LH785 přináší pro retikulocyty vedle
stávajících parametrů IRF, MRV, další parametr RDW-Retic-SD (RDWR-SD).
Increased Neutrophil Mean Volume (cells other
than mature neuts are present) and SD
(increases the spread of the neut sizes)
Normal Mean Volume and SD
For Neutrophil population
Patentovaná třírozměrná prostorová analýza diferenciálu leukocytů pomocí technologie VCS umožňuje, za použití výkonné počítačové techniky a softwaru, zavedení podobných parametrů i pro jednotlivé
subpopulace leukocytů. Patentové řízení na ochranu
autorství Beckman Coulter pro tyto parametry pro-
4
Ukazuje se, že znalost a kontrola
středního objemu (Mean) a šířky (SD)
jednotlivých subpopulací leukocytů
je dnes tou správnou cestou jak zvýšit kvalitu a spolehlivost přístrojového diferenciálu v rutinním provozu.
běhlo na přelomu roku 2005/2006 a v současné době
se dokončuje jejich softwarová implementace do hematologických systémů Beckman Coulter. Budeme se
tedy brzy setkávat s pojmy jako např.: střední objem
neutrofilů, anizocytóza neutrofilů, mikro/makrocytóza neutrofilů, střední objem lymfocytů, anizocytóza
lymfocytů, atd. Číselné vyjádření těchto hodnot je v
současné době již používáno u posledních modelů
analyzátorů řady LH750 ke generování varovných
návěstí, případně pokynů k provedení automatického
nátěru na sklíčko v lince LH755 a slouží k číselnému
definování „posunu doleva“, to znamená výskytu
mladších, nezralých forem granulocytů.
Plné využití analytického potenciálu nabídne nový model Beckman Coulter
LH780, jehož vyhodnocovací software již zohlední výsledky mnoha nezávislých
klinických studií, které již proběhly nebo jsou právě dokončovány. Do tříletého
projektu se zapojila řada předních světových hematologických pracovišť – Mayo
Clinic USA, Hosp. Hammersmith London GB, které po celou dobu úzce spolupracovaly a konzultovaly výsledky s týmem
specialistů koncernu Beckman Coulter
Numerická charakteristika „posunu doleva“, vlevo je normální diff a postupně
složeným ze softwarových a hematologicse vpravo progresivně zvětšuje počet a stupeň nezralých granulocytů
kých odborníků vedených Dr. Ramonem
Lopez Simonem. Smyslem veškeré této
práce není samoúčelné zavedení „nových
parametrů hematologigkého analyzátoru“
bez klinického významu, ale vytvoření validních hematologických pojmů s dokladovatelným klinickým významem a praktickou použitelností. Ukazuje se, že znalost
a kontrola středního objemu (Mean) a šířky (SD) jednotlivých subpopulací leukocytů je dnes tou správnou cestou jak zvýšit
kvalitu a spolehlivost přístrojového diferenciálu v rutinním provozu, jak do maxiTypická polomální míry ochránit laboratoř před falešně
ha neutrofilnegativními výsledky a jak pomoci zachyních prekurzotit i takové fáze patologií, které jsou ještě
rových buněk
klasickými manuálními metodami nedetev Beckman
kovatelné. Filozofie vyhodnocovacího
Coulter VCS
Scatterplotu
software analyzátorů Beckman Coulter
byla a je koncipována tak, aby ochránila
pacienta – rozhodnutí analyzátoru je vždy
na straně bezpečnosti - nejasné výsledky
jsou interpretovány jako pozitivní a laboratoř pozitivitu potvrdí nebo vyloučí v dalším analytickém kroku. Cílem rozhodně
není konstrukce automatického analyzátoru, který by vyloučil člověka z analytického procesu a sám stanovoval diagnózu,
ale přístroj, který co možná nejspolehlivějším způsobem zpracuje většinu běžného
Příklad typických hodnot VCS pro různé typy buněk
rutinního provozu, bezpečně zachytí a vytřídí možné nebo reálné patologie a maximem informací pomůže morfologovi při
zkoumání nátěru. Právě toto je často opomíjená výhoda; představme si, že každý
pětipopulační hematologický analyzátor
Splenic
Reactive
Hairy Cell
Beckman Coulter počítá diferenciál z cca.
Normal
Lymphoma
Lymph
Leukemia
10 000 leukocytů a nalezne v nich např.
Marginal Zone
80 blastů. Jaká je asi pravděpodobnost, že
Lymph Mean
85
87
100
126
Volume
je v našem nátěru a odečtu na 100 buněk
uvidíme???
Lymph Mean
Conductivity
111.5
113
121
98
PETR BOUDAL
E-MAIL:[email protected]
5
Nová řada hematologických
analyzátorů Beckman Coulter
LH780 a LH785
Preanalysis:
Preanalytická fáze měření začíná u LH780 zadáním požadavků na krevní obraz
do laboratorního informačního systému (LIS). Tyto informace jsou automaticky
zaslány do řídicího počítače LH780 a u každého vzorku jsou selektivně analyzovány pouze opravdu požadované parametry (KO, Diff, Reti). Díky použití čárového kódu je vyloučeno riziko záměny vzorků, pacientský vzorek je jednoznačně identifikován včetně požadavků na měřené metody a odpadá další
zadávání nebo vyplňování Worklistů. Toto uspořádání se označuje pojmem
Full-Random-Access. Výrobci hematologických analyzátorů řeší tento problém
v zásadě dvojím způsobem: Jedni zpracovávají krevní obraz vždy s maximálním
počtem parametrů a zobrazují pouze vyžádané metody.
Nevýhodou této koncepce je neustálá a zbytečná spotřeba všech reagencií.
Ostatní výrobci zařazují krátký promývací cyklus vždy před přechodem z malého krevního obrazu (KO bez diff) na velký (KO+Diff+Reti). Přínosem je částečná
úspora reagencií, nevýhodou je nutnost shromažďovat vzorky do sérií podle
typu vyšetření. Přístroj LH780 je vybaven novými, bezúdržbovými keramickými
ventily, které otvírají vždy pouze patřičné reagenční dráhy bez nutnosti proplachu. To šetří čas i peníze, a tak se podařilo dosáhnout skutečně selektivní analýzy bez dalších přidružených nákladů.
Analysis:
Vzorek krve je možno aspirovat manuálně – statimový vstup nebo aspirace
z atypických náběrovek, rutinní provoz používá kazetový podavač s kontinuálním předmícháváním vzorků. Bezprostředně při aspiraci vzorku je vestavěnou
čtečkou čárových kódů načtena identifikace vzorku a je tak zcela vyloučena
záměna vzorků. Nový typ kamerové čtečky čárových kódů toleruje jakoukoliv
polohu štítku na náběrovce.
6
Vlastní analyzátor je založen na osvědčeném
Coulter-impedančním principu a neustále dále
rozvíjené a prověřené VCS technologii. Vysoká hustota integrace polovodičových prvků spolu s použitím velmi rychlých procesorových jednotek a Hi-Tech elektronických dílů umožnily vylepšení
a zrychlení analytických algoritmů a především výrazné zlepšení odstupu signál – šum. Tento parametr je vysoce kritický a rozhoduje, mimo jiné,
o schopnosti analyzátoru registrovat a spolehlivě
vyhodnocovat velmi malé a početně málo zastoupené částice (PLT - shluky, NRBCs, RETI,…).
Nové, rychlejší analytické algoritmy kontrolují
celou fázi průletu buňky měřicí aperturou tzv.
„Flight-Time“ a optimalizují následný čas potřebný
pro ustálení systému tzv. „Wait-Time“. Výsledkem je
znatelné zvětšení linearity, stability a rozsahu měření především u leukocytů a trombocytů. Horní
hranice linearity měření leukocytů je 400 000
WBC/ml a u trombocytů 3 000 000 PLT/ml, horní
hranice měřicího rozsahu je přitom cca 800 000
WBC/ml a 5 000 000 PLT/ml. Byly tak značně překonány hranice, jichž dříve dosahovaly pouze některé optické metody. Na opačném konci měřící
škály leží hodnoty, se kterými se v každodenní rutinní praxi setkáváme možná častěji – leukocytopenie a především trombocytopenie. Všechny dosud
vyráběné hematologické systémy Coulter automaticky upozorňovaly u vzorků s počtem trombocytů
menším než 20 000 PLT/ml na nutnost manuální
kontroly. LH780 díky vysokému odstupu signál –
šum a vynikající stabilitě umožňuje přesné a lineární měření až do 5 000 PLT/ml. Celý měřící proces
byl testován a validován podle referenční metody
FDA a ISLH (International Society of Laboratory
Hematology), kterou je průtoková cytometrie
(CD41, CD61).
Přesné a spolehlivé měření v této oblasti je rozhodující pro terapeutické podávání trombokoncentrátů a nabízí možnost zbavit se neoblíbených
a značně subjektivních komůrkových metod. Vyspělá technologie VCS, s proměnným počítacím
časem, je schopna validně diferencovat leukopenické vzorky již od 0,3 WBC. Dalším významným
přínosem je automatická detekce přítomnosti normoblastů, jejich numerické vyhodnocení a automatická korekce počtu leukocytů u každého vzorku
bez nutnosti použití dalších reagencií, do LIS je
možné přenášet i nekorigovaný počet leukocytů
UWBC. Pro stanovení počtu retikulocytů a jejich
maturačního indexu je možno díky VCS technologii
použít průtokovou cytometrii, která je zároveň i referenční metodou. VCS technologie spolu s Intelli-Kinetic metodou optimalizace pracovních podmínek analyzátoru a vylepšený způsob „gatování“
nabízí stabilnější diferenciální rozpočet leukocytů
především u starších a leukocytopenických vzorků.
Veškeré subpopulace leukocytů jsou charakterizovány novými parametry Mean a SD jednotlivých
populací a tyto hodnoty je možné i přenášet do
sítě LIS k dalšímu využití.
Postanalysis:
Komplet hematologického analyzátoru Beckman
Coulter LH780 je možné modulově doplnit o nátěrový a barvicí automat (model LH785), který podle
výsledků vlastního měření a libovolných externích
kriterií nebo jejich kombinací (druh patologie, diagnóza, oddělení, ošetřující lékař, …) připraví v reálném čase standardní nátěr obarvený klasickou metodou a popsaný číslem a jménem pacienta včetně
čárového kódu. Rozsáhlý, několikavrstvý systém
outo metodou se provádí imunofenotypizace lymfomů a leukemií a stanovují se
prognosticky významné znaky. Stanovení
kmenových buněk se stalo nezbytnou součástí transplantací autologních a alogenních
transplantací kostní dřeně nebo periferních
progenitorových buněk.
Průtokový cytometr FC500 je vybaven pěti detektory pro fluorescence a dvěma detektory pro
měření optických vlastností buněk a částic. Optická
lavice přístroje je osazena jedním nebo dvěma lasery (488 a 633 nm) a fotonásobiči citlivými v rozsahu 185 – 900 nm. Aspirace vzorků je zajištěna
z podavače zkumavek s karuselem.
Softwarové vybavení umožňuje analyzovat buňky periferní krve, kostní dřeně, uzlin a dalších biologických materiálů. Pro stanovení imunofenotypu
lymfomů a leukemií je určena řada monoklonálních protilátek IOTest®3, které jsou konjugovány
s fluorochromy FITC, PE a ECD. Tato kombinace
umožňuje dále přidat monoklonální protilátky značené fluorochromy PC5 nebo APC a PC7. Tímto
způsobem lze provádět pokročilé značení se čtyřmi
nebo pěti monoklonálními protilátkami současně.
Přístroj byl oceněn stříbrnou medailí za průmyslový design, sponzorovanou publikací Industry Business Outlook (IBO). Tato cena je udělována za
výjimečný design analytických přístrojů a přístrojů
pro biologické vědy. Druhým oceněním je cena
udělená společností Frost&Sulivan, jednou z před-
kontroly kvality výsledků, přesnosti a stability kalibrace běží neustále na pozadí
analytického software a umožňuje nepřetržitou kontrolu celého analytického
procesu. Rozsáhlé softwarové vybavení nabízí optimální využití kapacity analyzátoru a redukci času nutného pro obsluhu, vyhodnocování a validaci výsledků.
LH780/ LH785 je nejnovějším produktem ve vývojové řadě hematologických
analyzátorů koncernu Beckman Coulter a dalším významným posunem k vyšší
kvalitě, bezpečnosti a ekonomii provozu našich laboratoří.
PETR BOUDAL
Průtoková
cytometrie
v hematologické
laboratoři
Důležitou součástí laboratorní hematologie se
v posledních desetiletích stala průtoková
cytometrie.
ních světových firem v oblasti poradenství. Důvodem k udělení ceny je výjimečná kvalita ve výrobě a užitné vlastnosti přístroje, který nabízí automatizaci,
vedoucí ke komplexním výsledkům analýz.
Kombinace monoklonálních protilátek pro imunofenotypizaci
chronických lymfoproliferací z buněk B.
obj.
číslo
Popis
Formát
počet
testů
A07706
KAPPA/LAMBDA/CD19
IOTest FITC/PE/ECD Liquid
25 testů
A07707
CD5/CD10/CD19
25 testů
A07708
CD20/CD10/CD19
25 testů
A07709
FMC7/CD23/CD19
25 testů
A07710
CD5/CD23/CD19
25 testů
A07711
CD25/CD11c/CD19
25 testů
A07712
CD103/CD11c/CD19
25 testů
7
Kombinace monoklonálních protilátek pro imunofenotypizaci
non- B lymfoproliferací.
obj.
číslo
Popis
Formát
počet
testů
A07724
HLA-DR/CD7/CD45
25 testů
A07725
CD5/CD7/CD3
25 testů
A07726
CD8/CD4/CD3
25 testů
A07727
CD25/CD4/CD3
25 testů
A07728
CD16/CD56/CD3
25 testů
Velmi důležitou aplikací průtokové cytometrie je detekce minimální reziduální choroby po léčbě pacientů s lymfomy a leukemiemi. Toto stanovení je založeno na průkazu rozdílné exprese vybraného znaku (molekuly) nádorovými
a zdravými buňkami.
Specializovaný stemCxP software je určen ke stanovení procentuálního zastoupení a absolutních počtů kmenových buněk (CD34 pozitivních) v obvodové krvi, čerstvých nebo rozmražených aferézních produktech, čerstvé kostní
dřeni a čerstvých nebo rozmražených vzorcích pupečníkové krve. Software je
založen na požadavcích International Society for Cellular Therapy.
Nové monoklonální protilátky
pro průtokovou cytometrii
Konjugované protilátky řady IOTest® jsou univerzální reagencie pro průtokovou cytometrii určené pro všechny typy průtokových cytometrů. Tyto reagencie jsou určeny pro značení povrchových a intracelulárních antigenů.
IOTest® CD21-PE
obj. číslo A32536, 100 testů, klon BL13
Monoklonální protilátka BL13 rozeznává antigen o molekulové hmotnosti 140
kDa přítomný na lymfocytech B v sekundárním lymfoidním folikulu lymfatických uzlin a tonzil.
Protilátka nereaguje s cirkulujícími lymfocyty B, lymfocyty T, monocyty a granulocyty.
IOTest® CD43-PE
obj. číslo A32560, 100 testů, klon DFT1
Antigen CD43 je exprimován na krevních destičkách a na všech leukocytech,
slabě na klidových lymfocytech B, po aktivaci se exprese zvyšuje.
IOTest® CD44-PE
obj. číslo A32537, 100 testů, klon J.173
Molekula CD44 je přítomna na většině buněk a tkání, s výjimkou krevních destiček, hepatocytů, srdečního svalu atd. Byla popsána řada izoforem CD44.
IOTest® CD118 (LIFR) -PE
obj. číslo A32346, klon 7G7
Antigen CD118 (LIFR, human leukemia inhibitor
factor receptor) se nenachází na cirkulujících krevních buňkách, ale je exprimován na širokém spektru buněk včetně embryonálních kmenových buněk,
hepatocytech, adipocytech, nervových a gliových
buňkách, osteoblastech a myoblastech.
IOTest® CD123-PE
obj. číslo A32535, 100 testů,
klon SSDCLZ107D2
Antigen CD123, podjednotka receptoru pro IL-3, je
přítomen na hematopoietických kmenových/progenitorových buňkách, většině buněk myeloidni
řady a některých CD19+ buňkách. Chybí na CD3+
buňkách
Jiným výrobkem, který obsahuje protilátku CD123,
je kombinace CD(14+16)-FITC/ILT3-PE (CD85k)/
CD123-PC5, která slouží ke stanovení plazmacytoidní populace dendritických buněk.
IOTest® CD164-PE
obj. číslo A32347, klon 67D2
Antigen CD164 je přítomen na
CD34+ buňkách kostní dřeně
a pupečníkové krve.
Monoklonální protilátka 67D2
rozeznává epitop třídy IIIb.
IOTest® Anti-Rat CD3-FITC/
CD4-PC7/CD8-APC
obj. číslo A32909, klony 1F4/
OX-38/OX-8, 50 testů
IOTest® Anti-Rat CD3-FITC/
CD45RA-PC7/CD161a-APC
obj. číslo A32910, klony 1F4/OX-33/10/78, 50
testů
Zcela nově se v naší nabídce objevují dva nové
výrobky pro výzkumná pracoviště IOTest® Anti-Rat
CD3-FITC/CD4-PC7/CD8-APC (reagencie pro stanovení subpopulací lymfocytů T) a IOTest® Anti-Rat CD3-FITC/CD45RA-PC7/CD161a-APC (reagencie pro stanovení lymfocytů T, B a buněk NK). Obě
kombinace konjugovaných monoklonálních protilátek jsou použitelné na průtokových cytometrech
FC500 s dvěma lasery.
Tato tříbarevná konfigurace (FITC/PC7/APC) výrazně usnadňuje analýzu na průtokovém cytometru bez potřeby nastavování kompenzací. Navíc je
možné podle potřeby přidat další monoklonální
protilátku značenou PE, např. pro stanovení aktivačních znaků.
PAVEL KRUŽÍK
8
etody molekulární genetiky
se zaměřují na vyhledávání
mutací, tj. rozdílů v sekvencích DNA specifických genů.
Mutace na DNA v konečném
důsledku vedou k patologické
aktivitě, stabilitě nebo expresi
kódovaných proteinů. Rozeznáváme několik typů
mutací. V případě, kdy je zaměněn jeden nukleotid
na DNA za jiný, hovoříme o bodových mutacích. Někdy pozorujeme při analýze DNA ztrátu nebo naopak
nadbytek několika nukleotidů. Takovéto mutace nazýváme krátké delece nebo inzerce. Mohou však nastat i případy, kdy chybí nebo je přítomno navíc několik tisíc bazí zahrnující jeden nebo více exonů
daného genu. Toto jsou případy rozsáhlých delecí
nebo duplikací uvnitř genů. Nejčastěji vznikají homologní rekombinací (nerovnoměrným crossing-overem) mezi repetitivními Alu sekvencemi ležícími
uvnitř genů v intronových oblastech.
Běžná analýza mutací v genech je založená na
amplifikaci jednotlivých exonů pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR) a následném sekvenování.
Avšak tato tzv. „exon by exon“ screeningová metoda
může selhat v případě detekce mutantních alel typu
rozsáhlých delecí, neboť primery použité v PCR reakci se nemohou do příslušných oblastí DNA navázat.
K chybným interpretacím výsledků při DNA diagnostice může docházet například u složených heterozygotů pro jednu mutantní alelu s bodovou
mutací a druhou mutantní alelou s rozsáhlou delecí.
Tito pacienti se mohou buď jevit jako falešní homozygoti pro bodovou mutaci nebo u nich druhou mutaci nelze běžnými metodami nalézt.
Detekce velkých genových přestaveb obvykle vyžaduje alternativní techniky. Nejprve se pro tyto
účely používala metoda Southern blottingu. Jedná
se však o časově velice náročnou a pracnou techniku, která navíc vyžaduje velké množství DNA. Později používaná metoda, long-range PCR, která umožňuje amplifikaci fragmentů až do velikosti 20 kb, se
zdála být ve srovnání se Southern blottingem k detekci velkých delecí nebo duplikací výhodnější. Avšak
studujeme-li geny větší než 20 kb, je zapotřebí analyzovat několik vzájemně se překrývajících amplikonů. Pokud jsou delece nebo duplikace rozsáhlejší, je
tato metoda neúčinná. Proto byla nedávno pro detekci velkých genových přestaveb popsána nová metoda nazvaná multiplexová ligačně podmíněná amplifikace (MLPA) (1). MLPA je metoda umožňující
v jedné reakci identifikovat v genech rozsáhlé delece
nebo duplikace v řádech několika desítek až stovek
kilobazí, které nejsou běžnými PCR technikami zjistitelné. Metoda se skládá z několika kroků. V první fázi
dochází k denaturaci genomové DNA a hybridizaci
jednovláknových DNA molekul se specifickými oli-
Detekce rozsáhlých
delecí a duplikací
v genech metodou
MLPA
V současné době jsme svědky expanze DNA
a RNA diagnostiky a rozsáhlých možností jejího využití v řadě medicínských oborů. Převratné diagnostické a terapeutické úspěchy
z posledních let jsou výsledkem aplikace nových molekulárně biologických technik.
gonukleotidovými sondami vážícími se do exonových oblastí studovaného genu.
Sondy jsou navrženy tak, že se do příslušné exonové oblasti váží vždy dvě sondy,
které k sobě těsně přiléhají. V dalším kroku dochází působením ligázy ke spojení
hybridizovaných sond v jeden DNA fragment, který je v následném kroku amplifikován univerzálními primery, z nichž jeden primer je fluorescenčně značený.
Sondy jsou navrženy tak, aby každý exon vytvářel během PCR různě dlouhý produkt. Směs PCR produktů ze všech exonů vyšetřovaného genu je v konečné fázi
podrobena fragmentační analýze. Když jeden nebo několik exonů vlivem rozsáhlé delece na jedné z alel chybí, nedochází k navázání sondy do příslušné oblasti
a při fragmentační analýze je detekována poloviční velikost píku odpovídající danému exonu (viz. obr. 1). Při duplikaci na jedné alele je pík naopak zvýšen. Pro
bezchybnou analýzu se do reakce přidávají i kontrolní sondy, vážící se do jiných
oblastí na genomu, a musí tudíž dávat u všech jedinců vždy identický signál. Více
o MLPA na http://www.mlpa.com.
MLPA metodu jsme s úspěchem použili pro detekci rozsáhlých delecí v genu
pro fenylalaninhydroxylasu (PAH) u pacientů s fenylketonurií (PKU) s jednou zatím neurčenou mutantní alelou (2). U celkem 31 pacientů byla pomocí MLPA
detekována delece buď třetího nebo pátého exonu PAH genu – příklad viz. obr. 1.
V současné době pátráme pomocí MLPA po rozsáhlých delecích či duplikacích
v genu pro LDL receptor u velkého množství vzorků pacientů s familiární hypercholesterolemií (FH). Fragmentační analýzu provádíme na 8-kapilárním automatickém sekvenátoru Beckman-Coulter CEQ 8000. Tento přístroj je schopen během
krátké doby kvalitně analyzovat velké množství vzorků. Výhodou CEQ 8000 je
snadná obsluha, velká výkonnost a vhodně řešený software pro zpracování a tisk
dat.
9
Obr. 1: Příklad MLPA analýzy genu pro
fenylalaninhydroxylasu (PAH). Čísla nad píky označují
jednotlivé exony PAH genu, A a C: normální MLPA profil. B:
Profil PKU pacienta s delecí 3. exonu na jedné alale. D: Profil
PKU pacienta s delecí 5. exonu na jedné alele.
Příklady
hodnocení
diferenciálních
rozpočtů
leukocytů
na Coulter
LH 750
Od listopadu 2005 pracujeme
ve fakultní hematologické
laboratoři s novým analyzátorem Coulter LH 755, od května 2005 máme Coulter LH
750 i v naší druhé laboratoři
vzdálené 8 km.
Závěrem lze konstatovat, že MLPA je vhodná rychlá a spolehlivá metoda k detekci delecí a duplikací uvnitř genů. Je vhodná také k detekci větších chromozómových přestaveb a numerických chromozómových aberací jako např. Downův nebo Turnerův syndrom. MLPA jistě brzy najde široké uplatnění v DNA
diagnostice řady dalších závažných genetických onemocnění.
Literatura
1) J. P. Schouten, C. J. McElgunn, R. Waaijer, D. Zwijnenburg, F. Diepvens, G. Pals.
Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligation-dependent probe amplification. Nucleic Acids Res. 30 (2002):e57.
2) L. Kozák, E. Hrabincová, J. Kintr, O. Horký, P. Zapletalová, I. Blaháková, P. Mejstřík,
D. Procházková. Identification and characterization of large deletions in the phenylalanine hydroxylase (PAH) gene by MLPA: evidence for both homologous and
non-homologous mechanisms of rearrangement. Mol. Genet. Metab. In press.
laboratoři klademe velký důraz
na rychlost a přesnost stanovení
kompletního krevního obrazu pro
ambulantní i lůžková oddělení a kliniky
fakultní nemocnice i pro mimonemocniční klienty.
Diferenciální rozpočet leukocytů pokročilou
technologií analýzy krevních částic ve 3D prostoru pomocí tří nezávislých fyzikálních veličin umožnil
významně omezit počty vyšetření rozpočtu leukocytů
v mikroskopu, k čemuž přispívá i nově zavedená mikroskopická validace automaticky zhotovených rozpočtů.
Způsob nastavení nátěrového a barvicího automatu
dovolí laborantkám neměnit osvědčené pracovní postupy při zlepšení kvality nátěrů a úspoře manuální
práce (zůstává stejný typ nátěrů, fixace, barvení). Denně
zpracováváme krevní obrazy nevybočující z fyziologických mezí, krevní obrazy s reaktivními změnami
i množství vysoce patologických nálezů u dětských
i dospělých pacientů s hematoonkologickými a onkologickými diagnózami.
Předkládáme několik příkladů hodnocení patologických krevních obrazů.
Závěr:
Mikroskopické hodnocení nátěru periferní krve zůstává
i nadále základem dobré práce v hematologické laboratoři. Kvalitní analyzátor krevního obrazu tuto práci významně ulehčí, a tak je možné plně vyhovět různorodým požadavkům kladeným na moderní laboratoř.
MUDR. PAVLA ŠIGUTOVÁ, ÚSTAV KLINICKÉ
RNDR. LIBOR KOZÁK, CSC., CENTRUM MOLEKULÁRNÍ
BIOCHEMIE A HEMATOLOGIE, FAKULTNÍ
BIOLOGIE A GENOVÉ TERAPIE, FAKULTNÍ NEMOCNICE BRNO
NEMOCNICE PLZEŇ, ALEJ SVOBODY 80,
ČERNOPOLNÍ 9, 625 00 BRNO, E-MAIL: [email protected]
304 60 PLZEŇ, E-MAIL: [email protected]
10
Anémie z poruchy tvorby erytrocytů – z poruchy syntézy hemu
Příklad 1:
13letý chlapec je 5
měsíců po laparoskopické splenektomii pro thalasémii
major, navíc s přítomnou hemoglobinopatií E. Těžká
hypochromní mikrocytární anémie,
trombocytémie,
extrémní přítomnost
normoblastů v periferní krvi. Retikulocyty v tomto případě
nestanoveny.
histogram erytrocytů (Price Jonesova křivka)
krevní obraz vydaný
laboratoří
numerické hodnoty krevního obrazu a „flagging“ – detekce abnormálních vzorků
Anémie ze zvýšené
ztráty erytrocytů
Příklad 2:
47letý muž s dědičnou sférocytózou,
nyní vyšetřován pro
sideropenickou
anémií nejspíše při
skluzné hiátové
hernii.
scatterplot
Akutní myeloidní leukémie
Příklad 3:
62letý muž odeslaný do hematologické ambulance z okresní nemocnice s podezřením na CLL (hodnoceno pravděpodobně pouze podle numerických hodnot vydaných analyzátorem). Nejedná se o lymfocyty v periferní krvi (viz
scatterplot a „flagging“), je nutné mikroskopické hodnocení s nálezem blastů,
dalším vyšetřením zjištěna akutní myeloidní leukémie M1-2 dle FAB klasifikace.
parametry retikulocytů
histogram leukocytů
scatterplot retikulocytů
numerické hodnoty leukocytů
krevní obraz vydaný laboratoří
myeloblast
v periferní krvi
scatterplot a „flagging“
11
Akutní myeloidní
leukémie
Příklad 4:
47letá žena s prvozáchytem akutní
myeloidní leukémie subtypu M2 dle
FAB klasifikace, na scatterplotu je
podezření na monocyty, jedná se
však o blasty. V kostní dřeni 25%
infiltrace lehce POX pozitivními
blasty.
scatterplot
numerické hodnoty krevního obrazu a „flagging“
Akutní lymfatická leukémie
Příklad 5:
37letá žena s prvozáchytem akutní lymfoblastické leukémie, pro-B-ALL dle EGIL klasifikace, v periferní krvi převaha lymfoblastů.
Myeloproliferativní
nemoci - chronická
myeloidní leukémie
Příklad 6:
47letá žena s prvozáchytem chronické
myeloidní leukémie. Jasný patologický
obraz dobře zhodnocený analyzátorem.
scatterplot leukocytů
lymfoblasty v periferní krvi
scatterplot a „flagging“
laboratoří
nátěr periferní krve
numerické hodnoty krevního obrazu
numerické hodnoty krevního obrazu a „flagging“
12
laboratoří
Myeloproliferativní nemoci
– primární myelofibróza
Příklad 7:
83letá pacientka léčena mnoho let pro myelofibrózu, před
měsícem ukončena léčba hydroxyureou.
nátěr periferní krve
Myeloproliferativní nemoci
– primární eosinofilní syndrom
krevní obraz
vydaný laboratoří
Maligní lymfoproliferativní nemoci –
nehodgkinovský lymfom (NHL)
Příklad 8:
13letá dívka s primárním
eosinofilním syndromem
před zahájením léčby kortikoidy. Automatický i mikroskopický rozpočet leukocytů
souhlasí.
Příklad 9:
80letý muž s původní diagnózou
NHL typu mantle
cell lymfomu, po
cytostatické léčbě
byl v remisi. Nyní
progrese onemocnění s nálezem
prolymfocytů v periferní krvi.
laboratoří
prolymfocyt v periferní krvi I
prolymfocyt v periferní krvi II
13
laboratoří
Chronická lymfatická leukémie (CCL)
Příklad 10:
73letý muž s diagnózou B-CLL 0 st dle Raie stanovenou před 2
lety, před měsícem se objevila těžká trombocytopenie nikoliv jako
IV. st. nemoci, ale jak bylo ověřeno dalším vyšetřením, jednalo se
o kombinaci základního onemocnění CLL a idiopatické trombocytopenické purpury (ITP).
histogram trombocytů
Benigní lymfoproliferativní choroby – infekční mononukleóza
Příklad 11:
17letá dívka s infekční
mononukleózou, při
prvozáchytu krevní
analyzátor hodnotí
jako podezření na
přítomnost nezralých
buněk granulopoezy.
aktivní lymfocyt v periferní krvi
scatterplot leukocytů a „flagging“
14
V dňoch 4.- až 6. mája 2006 sa uskutočnila v Martine medzinárodná konferencia o Hemostáze
a Trombóze. Bol to už XIII. zjazd, ktorý organizovala
hematologická a Transfuciologická spoločnosť SLS
Hremalofogické společnost ČSL J. E. Purkyně, Jesseniova Lekárska fakulta Univerzity Komenského
v Martine, Martinská fakultná nemocnica a 4 ďalšie
odborné subjekty spoločnosti. Garantom konferencie bolo predsedníctvo v zložení prof. MUDr. P. Kubisz, DrSc. a prof. MUDr. J. Malý, PhD. Podujatie
bolo tiež významne podporované EHA (Európskou
Hematologickou Asociáciou).
Cieľom konferencie bolo vymeniť si odborné skúsenosti v oblasti hemostázy a trombózy. Zúčastnili
sa na ňom odborníci zo Slovenska, Českej republiky
ako i zo zahraničia.
Vedecký program bol venovaný nasledovným
témam:
Hemofília a trombofília
Antitrombotická terapia
Bypasová terapia
Laboratórna diagnostika porúch hemostázy
Nádorové ochorenia a hemostáza
Aktuálne otázky manifestácie porúch hemostázy
v chirurgických odboroch
Konferencia bola hodnotená 12.3 CME Creditmi a zúčastnilo sa na nej
340 špecialistov
bolo na nej prednesených 57 odborných
príspevkov
bolo zverejnených 29 posterov
prezentovalo sa 12 firiem
Počas zjazdu sa uskutočnil krst novej učebnice
od prof. P. Kubusza „Hematológia a transfusiológia“, ktorú vydáva v tomto roku vydavateľstvo
GRADA.
XIII. Slovensko –
česká konferencia
o hemostáze
a trombóze
Martin 2006
Ako sa prezentoval na podujatí Beckman Coulter
a Instrumentation Laboratory?
Spoločnosť Beckman Coulter a Instrumentation Laboratory potvrdili globálne
partnerstvo v oblasti hemostázy i na tomto podujatí, kde sme spoločne prezentovali obidve spoločnosti. Instrumentaion Laboratory je na Slovensku zastupovaná spoločnosťou Immunotech a v Českej republike spoločnosťou COMESA.
Na tomto podujatí sme mali spoločný stánok.
Prezentáciu sme sústredili na analyzátory
ACL 7000, 9000 a 10000
CL1
HmX a LH 750
D-Dimery
novinky testov HemosIL Faktor XIII Antigen
Účastníkom konferencie boli k dipozícii naši predstavitelia a produktoví špecialisti. Z Instrumentation Laboratory (Milano) pricestoval pán Alberto Strada,
z Comesy Česká republika boli prítomní pan Š. Lukeš, M. Hejduková a V. Blažková. Z Immunotechu R. Šandrik, Ľ. Horenitzká, T. Torda
Hlavným príspevkom spol. Instrumentation Laboratory
k odbornému programu konferencie bola prednáška prof. Paolo Simioniho
z Univerzity Padova (Taliansko). Názov prednášky bol „Trombophilia: Klinické
a laboratórne aspekty“. Prof. Simioni sa venoval histórii venóznej trombo-ebolií, jej riziku vo veku nižšom ako 45 rokov, periodickej a opakujúcej sa venóznej
trombo-ebolií. Prednáška prof. P. Simioniho zaujala veľa odborníkov a jej
odozvou bola zaujímavá diskusia. Ak máte o prednášku záujem je možné si ju
vyžiadať na adrese [email protected].
Informácie o konferencii je možné nájsť na www stránkach www.jfmed.uniba.sk,
alebo www.hematology.cz
ROMAN ŠANDRIK
E-MAIL:[email protected]
15
Beckman
Coulter na špici
VÝSTUP „BECKMAN COULTER“ NA
GERLACHOVSKÝ ŠTÍT AUGUST 2006
ňa 1. 8. 2006 ráno o 5.00 vyrazila skupina vysokohorských nadšencov zdolať najvyšší vrchol Vysokých Tatier Gerlachovský štít
2655 m n.m. 5 účastníkov pod vedením 2 horských vodcov Mirom
a Marekom sa rozhodli vyniesť zástavu s logom Beckman Coulter
na vrchol. Predpoveď počasia nebola práve najlepšia, na nálade
nám nepridala ani informácia, že ostatní horskí vodcovia zrušili na
tento deň plánované túry.
Trasa začína na Sliezkom dome. Turistická značka vedie popri Velickom plese
cez skalný prah „Večný dážď“, čo sme si mali možnosť vyskúšať na vlastnej koži.
Značka ide pod previs, kde stále kvapká voda. Nad skalným prahom sa odbočuje do Velickej próby, kde začína lezenie. Niektorí si prvýkrát vyskúšali horolezecké náradie. Po výstupe Velickou próbou sme sa ocitli na hrebeni, odkiaľ sa nám
naskytol nádherný výhľad na okolité doliny a vrcholy. Pri postupe po hrebeni
sme videli, ako prichádza dážď.
Keď sme dorazili na vrchol Gerlachovského štítu (okolo 9,30) bola už hmla
dážď a vietor. Po pol hodinovej prestávke na občerstvenie som začal ľutovať, že
nemám rukavice. Studené skaly, reťaze a kramle boli ako balzam na naše skrehnuté ruky. Zostup Batizovskou próbou v daždi po šmykľavých skalách bol na
niektorých exponovaných miestach skutočný adrenalín. V ústí žľabu do Batizovskej doliny sme absolvovali ešte čerešničku na torte – asi 30 m dlhé snehové pole, kde pri prudkom sklone sa nebolo možné udržať na nohách. Zostup
dolinou k Batizovskému plesu, kde sme sa pripojili na turistickú značku bola už
16
pohoda. Ja som podcenil kondičnú prípravu a skončil som so svalovicou asi na polovici tela.
Po celkovom zhodnotení mi nedá nepovedať, že
naša expedícia dopadla úspešne. Trasu zvládli všetci po vlastných nohách v čase 9 hodín, prevýšenie
cca. 1000 metrov, napriek počasiu, ktoré nebolo
práve najlepšie. Najväčší optimisti (ja a Ľudo) chceli ešte pridať vrchol zadného Gerlachu, ale boli sme
prehlasovaní ostatnými a nakoniec sa ukázalo, že 3
hodiny navyše by nebolo práve to najlepšie pre
naše nohy. Teším sa na ďalšie stretnutie vo Vysokých Tatrách.
Športu zdar a horolezectvu zvlášť!
PAVOL SKOČDOPOLE
Jak se daří vašim buňkám?
Přesvědčte se na vlastní oči
Vi-CellTM XR
Cell Viability
Analyzer
Mějte
buňky pod
dohledem!
Vi-CellTM Cell Viability Analyzer vám umožní monitorovat počet
buněk v kultuře, jejich životnost, velikost i distribuci velikosti
a tvar buněk.
Vi-CellTM umožňuje:
■ Obrazovou analýzu buněk v rozmezí koncentrací 5x104 - 107
■ Obrazovou analýzu buněk v rozmezí velikostí 2 - 70 µm
■ Pomocí distribuce velikostí rozeznat subpopulace buněk v kultuře
■ S využitím trypan blue rozeznat a vyhodnotit podíl živých
a mrtvých buněk
■ Plně automatickou analýzu trvající 2,5 minuty
Přístroj je vybaven autosamplerem na 12 pozic. Na jednu analýzu
potřebujete pouze 0,5 ml vzorku. Pokročilá zobrazovací technologie je vybavena automatickým zaostřováním, CCD kamerou
o rozlišení 1394 x 1040 a dodatečným zoomem k rozlišení detailů
jednotlivých buněk a jejich shluků. Systém je vybaven uživatelsky
příjemným software, který umožňuje kvantitativní zpracování
dat, statistické vyhodnocení, 3D grafy či sledování trendů. Data
mohou být exportována jako Excelový soubor. Software vyhovuje
požadavkům 21 CFR Part 11.
e-mail pro odborné dotazy [email protected] a telefon pro odborné dotazy +420 267 008 513
17
O čem ještě uslyšíte
COMP
COMP je akronymum anglického označení „cartilage oligomeric matrix protein“. Jedná se o nekolagenní protein, který je
podstatnou součástí tzv. extracelulární matrix chrupavky. Řadí se do
rodiny extracelulárních proteinů thrombospondinů. Odtud pochází jeho další označení thrombospondin 5.
COMP byl poprvé izolován z hovězí chrupavky (1). Struktura
lidské varianty této molekuly byla charakterizována o dva roky později (2). COMP je glykoprotein s velkou molekulovou hmotností (524 kDa),
který ve své struktuře váže vápenaté ionty (3). Jeho molekula je složena z pěti identických podjednotek s molekulovou hmotností 86 650 kDa (4). Podjednotky jsou navzájem spojeny v oligomerizující doméně nacházející se na N-
18
-konci a struktura je stabilizována disilfidickými
můstky.
Nativní molekula proteinu se za přítomnosti
zinečnatých iontů váže ke kolagenu I , II , IX (5).
Předpokládá se, že COMP se podílí na vzniku zesíťované fibrilární struktury kolagenu, která propůjčuje příslušným tkáním značnou odolnost vůči
tahu a torzi.
Důkazem významu COMP pro normální funkci
zdravé chrupavky jsou dvě dědičná onemocnění
skeletu - pseudoachondroplasie a mnohočetné
epifyzeální dysplasie (6). U obou onemocnění
byla zjištěna přítomnost mutace genu COMP.
Charakteristickým rysem obou chorob je nápadně
malý vzrůst postižené osoby, tzv. zakrslost, a čas-
to je pozorován brzký nástup osteoartrózy. Mechanizmus, jakým mutace proteinu brzdí růst, je
ale v současnosti stále předmětem výzkumu.
Osteoartróza je velmi rozšířené onemocnění,
které přináší bolest a sníženou hybnost kloubů.
V České republice je postiženo asi 10 % populace.
Četnost výskytu narůstá významně s věkem.
Odhaduje se, že u osob nad 60 let je postiženo až
50 %. Osteoartróza se vyznačuje postupnou destrukcí kloubní chrupavky doprovázenou změnami subchondrální kosti. Krajním řešením problému
jsou kloubní náhrady. Diagnóza osteoartrózy, založená tradičně na rentgenu a bolestivosti, je již
obvykle prováděna v době pokročilého poškození
tkáně. Proto bylo mnoho pozornosti zaměřeno na
vývoj diagnostiky založené na biochemických
markerech, zejména na stanovení makromolekul
nebo jejich částí vyskytujících se v chrupavce.
Zvýšené uvolňování těchto molekul z kloubů do
krevního oběhu může být odrazem narušeného
obratu kloubní tkáně. Vyvstala zejména potřeba
najít takový marker, který by citlivě predikoval iniciaci a progresi onemocnění osteoartrózou. Úvodní studie, využívající monoklonální protilátky
proti COMP, naznačují, že tímto užitečným prognostickým markerem progrese osteoartrózy
může být právě tento protein (7, 8, 9, 10, 11).
Další chorobou, u níž dochází k poškození chrupavky, je revmatoidní artritida. Jedná se o chronické progresivní onemocnění postihující zánětlivou reakcí periferní klouby. Důsledkem progresivní
destrukce těchto kloubů je snížená fyzická výkonnost, bolestivost kloubů a také zkrácení délky života. Závažnost onemocnění podtrhuje i jeho vysoká prevalence. Uvádí se, že je jím postiženo 0,5
až 1 % populace. Agresivita, s jakou destrukce
kloubů postupuje, se liší pacient od pacienta. Proto jsou hledány sérové markery, které by pomohly
předpovědět míru agresivity onemocnění a umožnily tak stanovit včas odpovídající léčbu. Jedním
z možných kandidátů je i COMP. Klinické studie
postupně prokazují, že stanovení COMP může být
užitečným nástrojem pro určení prognózy vývoje
Omluva redakce:
šotek opět zasahuje
V předcházejícím čísle časopisu opět řádil
redakční šotek. Tentokrát se mu zalíbil článek Aktiviny a inhibiny v klinickém výzkumu
i praxi. Hned ve druhém odstavci si pohrával
s řeckými písmenky, která označují podjednotky inhibinu B. Správné složení inhibinu B
je tedy α-βB, nikoliv β - βB. Omlouváme se
všem, kterým šotek zamotal hlavu.
u pacientů s diagnostikovanou revmatoidní artritidou (12, 13). Další možnosti jeho využití spočívají při hodnocení efektu léčby revmatoidní artritidy
(14, 15).
Glykoprotein COMP má nepopiratelně velmi důležitý význam pro vytvoření
plně funkční struktury chrupavky, šlach a kostí. Možnosti využití stanovení
jeho sérových hladin pro diagnostické účely jsou široké a jsou dále ověřovány
v rámci mnoha klinických studií. Již nyní lze říci, že COMP je považován za
marker degradace chrupavky. Jeho sérové hodnoty tak mohou být využity
k monitorování procesu její destrukce (16,17).
Literatura
(1) Hedbom et al. J Biol Chem. 267(9): 6132-6 (1992)
(2) Newton et al. Genomics. 24(3): 435-9 (1994)
(3) Chen et al. J Biol Chem. 275(34): 26538-44 (2000)
(4) Zaia et al. J Biol Chem. 272(22): 14120-6 (1997)
(5) Rosenberg et al. J Biol Chem. 273(32): 20397-403 (1998)
(6) Briggs et al. Nat Genet. 10: 330–336 (1995)
(7) Sharif et al. Br. J. Rheumatol. 34: 306–310 (1995)
(8) Petersson et al. Br.J.Rheumatol. 37: 46–50 (1998)
(9) Conrozier et al. Ann. Rheum. Dis. 57: 527-532 (1998)
(10) Vilím et al. Osteoarthritis Cartilage 9: 612-618 (2001)
(11) Vilím et al. Osteoarthritis Cartilage 10: 707-713 (2002)
(12) Skoumal et al. Scand.J.Rheumatol. 32: 156-161 (2003)
(13) Forsblad d‘Elia et al. Arthritis Res Ther. 6(5): 457-68 (2004)
(14) den Broeder et al. Ann Rheum Dis. (4): 311-8 (2002)
(15) Weitoft et al. Ann Rheum Dis. 64(12): 1750-3 (2005).
(16) Otterness et al. Osteoarthritis Cartilage 8: 180-185 (2000)
(17) Larsson et al. Rheumatology 41: 996-1000 (2002)
RNDR. VLADIMÍR VILÍM, CSC.
REVMATOLOGICKÝ ÚSTAV, PRAHA
Soutěž „Pomozte nám chytit šotka“
Šotek tentokrát řádil v naší redakci už podruhé. Zlobí nás, že ho nemůžeme polapit. Proto jsme se rozhodli požádat vás o pomoc. A jelikož by
každé úsilí mělo být odměněno, ti z vás, kteří budou v lovu šotka úspěšní, obdrží hrnek s naším logem.
Čtěte tedy toto číslo obzvlášť pečlivě a hledejte překlep jako stopu po
šotkově řádění. Může to být např. zkomolené slovo, přehozená písmenka nebo zaměněný index ve vzorci. Své úlovky posílejte nejpozději do
31.10. 2006 na e-mailovou adresu [email protected]. Jako
předmět zprávy uveďte, prosím, slovo ŠOTEK.
ŠOTKU, TĚŠ SE!
VAŠE REDAKCE
19
Kde se můžeme setkat
(září – prosinec 2006)
Konference/seminář s účastí společnosti Immunotech formou stánku
26. - 27. 9. 2006
25. - 28. 10. 2006
23. – 24. 11. 2006
Seminář „Výzvy a otázky
proteomiky“
Liběchov
XXIII. Sjezd alergologů
a klinických imunologů a XI.
Kongres imunologů
Hradec Králové
VII. Česko-slovenské dny
laboratorní hematologie
s mezinárodní účastí
Hradec Králové
26. – 27. 10.2006
6. – 7. 12. 2006
II. Bratislavské hematologické
a transfuzilogické dni
s medzinárodnou účasťou
Bratislava
Pracovní dny Sekce
biochemických laborantů ČSKB
Karlova Studánka
1. - 4. 10. 2006
4. metodické dny
Železná Ruda
4. – 6.10.2006
IX.Medzinárodný zjazd vojenských
internistov, pneumológov,
laboratórnych pracovníkov
Nová Polanka, Vysoké Tatry
7. – 8. 12. 2006
26. 10. 2006
Seminář klinická genetika
Brno
10. Celostátní konference o DNA
diagnostice
Brno
5. - 7. 10. 2006
5th Meeting of the European
Mucosal Immunology Group
Praha
8. 11. 2006
Pracovní dny Automatizace
Olomouc
MARKÉTA KRUPAŘOVÁ,
[email protected]

Časopis - Beckman Coulter

Transkript

Podobné dokumenty

Neposkvrněné početí • Žádný kněz, žádný kříž • Radost z maličkostí

matematika a řešení úloh

nejrychlejší kopačka dostala mozek

vitejte .3.indd