Praktické zkušenosti s diagnostikou pertuse

Praktické zkušenosti
s diagnostikou pertuse
Ivana Stiborová, Josef Richter,
Eva Jílková, Romana Mikešová,
Vlastimil Král
Centrum imunologie a mikrobiologie
Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem
„Aktuality v diagnostice virových a bakteriálních infekcí“
odborný seminář firmy VIDIA, SZÚ Praha, 26.5.2014
Osnova sdělení
• Pertuse v ZU UL
– Historie
– Metody používané v diagnostice pertuse
• Interpretace výsledků, mezinárodní standardy
• Vakcinace proti B. pertussis
• Příklady z laboratoře
Alergie Supplementum 1/2012
Metody používané v diagnostice pertuse
CIM ZU UL
• Celkové (polyvalentní) protilátky proti celobuněčnému
antigenu
– aglutinace (Test-Line), titr
• Protilátky proti toxinu B. pertussis – IgG, IgA, IgM
– ELISA (Sekisui Virotech), jednotky VE/ml
• Protilátky proti PT, FHA, ACT – IgG, IgA
– Imunoblot (Euroimmun)
• Přímý průkaz
– PCR (Cepheid)
• B. pertussis (103 bp IS481), B. parapertussis (101 bp IS1001)
• Odběr nasofaryngeálního aspirátu (vykloktání cca 15-20 ml sterilního
fyziologického roztoku po dobu cca 10 s, odběr do sterilní zkumavky, centrifugace 5
000 rpm, odsát supernatant, ponechat cca 0,5 ml, sediment resuspendovat, kolonková
izolace soupravou fy QIAGEN )
Mezinárodní standardy
WHO Reference Reagent
Pertussis Antiserum
(Human) 1st RR
NIBSC code: 06/142
•
•
•
•
Mezinárodní porovnávací studie - zpráva WHO (Expert commitee on Biological
standardization 10/2008)
Postup přípravy standard (anti-PT, anti-FHA, anti-PRN) a ověření jejich možnosti
využití při stanovení postvakcinačních i postinfekčních hladin protilátek proti B.
pertussis
na ákladě nově stanovených standardů lidského antiséra proti antigenům B.
pertussis byly porovnány výsledky ELISA stanovení 22 laboratoří z 15 zemí světa
Podle dokumentu ECDC „Guidance and protocol for the serological diagnosis of
human infection with Bordetella pertussis“(2012) odpovídají IU/ml dříve
používaným jednotkám EU/ml (ELISA units/ml), ve kterých jsou také uvedené
výsledky mezinárodních studií ESEN.
Interpretace sérologických výsledků
– postinfekční hladiny protilátek
ECDC TECHNICAL DOCUMENT
Guidance and protocol for the serological diagnosis of human infection with
Bordetella pertussis
As part of the EUpert-Labnet surveillance network
Stockholm, October 2012, ISBN 978-92-9193-394-5, doi 10.2900/64470
Produkce protilátek
1 – 4 týdny po infekci
Anti-PT IgG
< 40 IU/ml
40 – 100 IU/ml
Žádné známky
akutní infekce
B. pertussis
Nejasný
sérologický nález
> 100 IU/ml
Akutní infekce
B. pertussis
Stanovení anti-PT IgA (anti-FHA IgG, IgA)
Sérologické metody vs. přímý průkaz
Senzitivita
testu
Kultivace
PCR
Sérologie
Katarální
stadium
++
++
-/+
Paroxysm.
stádium
-/+
++
++
Rekonvalescence
++
Epidemiol. Mikrobiol. Imunol., 62, 2013, č. 3, s. 106–111
Iniciály
pacienta
Vzestup
titru
Výsledky
ELISA
PCR
Rodinné
vztahy
M
Doba
trvání
příznaků
3 týdny
8x (P)
N
P
9
M
3 týdny
4x (P)
N
P
bratři
(dvojčata)
BJ
29
Ž
3 týdny
2x (N)
IgM i IgG
N
JJ
52
Ž
4 týdny
4x (P)
N
P
TJ
56
M
4 týdny
2x (N)
IgG
P
DP
32
Ž
5 týdnů
2x (N)
IgM
P
TP
13
M
10 týdnů
0x (N)
IgG
N
JŽ
22
M
3 týdny
2x (N)
N
P
VŽ
20
M
3 týdny
4x (P)
N
P
AP
8
Ž
5 týdnů
8x (P)
N
N
AP
18
Ž
5 týdnů
32x (P)
IgG
N
ML
10
M
5 týdnů
4x (P)
N
N
Věk
Pohlaví
AP
9
MP
dcera,
matka,
otec
matka a
syn
bratři
sestřenice
a
bratranec
Interpretace sérologických výsledků
– postvakcinační hladiny protilátek
• Séronegativní jedinci <5 EU/mL
• U séronegativních osob postvakcinační hladiny anti-PT IgG >20 EU/mL.
• U séropozitivních jedinců (>5 EU/mL a <20 EU/mL) čtyřnásobný vzestup
původní hladiny anti-PT IgG
• U séropozitivních jedinců >20 EU/mL nejméně dvojnásobný vzestup
původní hladiny anti-PT IgG
• Není znám korelát séroprotekce!
Registrované očkovací látky
proti pertusi v ČR
Název vakcíny
Složení vakcíny
Poznámka
ADACEL
toxoid DTP, FHA, pertaktin, fimbrie typ 2,3
Dospělí a děti >4 roky
ADACEL POLIO
toxoid DTP, FHA, pertaktin, fimbrie 2,3, PV1,2,3
>3 roky
BOOSTRIX
toxoid DTP, FHA, pertaktin
>4 roky
BOOSTRIX POLIO
toxoid DTP, FHA, pertaktin, PV 1,2,3
>4 roky
INFANRIX
INFANRIX HEXA
toxoid DTP, FHA, pertaktin, HiB, VHB, PV
INFANRIX HiB
INFANRIX POLIO
INFANRIX – IPV+HiB
toxoid DTP, FHA, pertaktin HiB, PV
zdroj: www.vakciny.net, 2012
Muž, *1959
4.7.2013
22.7.2013
7.8.2013
18.10.2013
> 4069
512
512
1024
B. parapertussis [titr]
4069
> 4069
2048
1024
BP toxin IgM [VE/ml]
3,0
6,3
2,0
2,9
BP toxin IgA [VE/ml]
39,0
22,8
17,4
15,5
BP toxin IgG [VE/ml]
11,0
33,8
26,9
19,0
B. pertussis [titr]
Infekce B. pertussis, B. parapertussis (?)
Žena, *1973
24.1.2014
20.2.2014
28.3.2014
B. pertussis [titr]
64
128
128
B. parapertussis [titr]
32
32
32
BP toxin IgM [VE/ml]
6,1
3,0
3,8
BP toxin IgA [VE/ml]
43,1
18,8
6,6
BP toxin IgG [VE/ml]
24,5
27,3
21,3
Infekce B. pertussis
Žena, *1994
18.12.2013
24.1.2014
28.2.2014
13.5.2014
B. pertussis [titr]
64
512
256
256
B. parapertussis [titr]
32
2
2
nestanoveno
BP toxin IgM [VE/ml]
7,7
6,2
3,7
4,1
BP toxin IgA [VE/ml]
11,9
39,9
22,6
23,8
BP toxin IgG [VE/ml]
23,0
28,3
43,2
36,4
Infekce B. pertussis
Žena, AS *1953
17.3.2014
14.4.2014
32
64
BP toxin IgM [VE/ml]
nestanoveno
5,0
BP toxin IgA [VE/ml]
nestanoveno
3,0
BP toxin IgG [VE/ml]
4,0
12,9
B. pertussis [titr]
BOOSTRIX
toxoid DTP,
FHA, pertaktin
Muž, ZS *1951
17.3.2014
14.4.2014
16
128
BP toxin IgM [VE/ml]
nestanoveno
7,5
BP toxin IgA [VE/ml]
nestanoveno
3,5
BP toxin IgG [VE/ml]
0,9
5,6
B. pertussis IgG blot
nestanoveno
PT, FHA
B. pertussis IgA blot
nestanoveno
FHA
B. pertussis [titr]
BOOSTRIX
toxoid DTP,
FHA, pertaktin
Muž, OCh *1945
4.10.2010
17.3.2014
14.4.2014
B. pertussis [titr]
2
32
16
B. parapertussis [titr]
4
nestanoveno
nestanoveno
BP toxin IgM [VE/ml]
0,6
nestanoveno
3,0
BP toxin IgA [VE/ml]
1,3
nestanoveno
25,8
BP toxin IgG [VE/ml]
4,6
2,5
10,1
BOOSTRIX
toxoid DTP,
FHA, pertaktin
Žena, VCh, *1951
17.3.2014
14.4.2014
32
32
BP toxin IgM [VE/ml]
nestanoveno
3,2
BP toxin IgA [VE/ml]
nestanoveno
15,2
BP toxin IgG [VE/ml]
3,4
25,6
B. pertussis IgG blot
nestanoveno
ACT, PT, FHA
B. pertussis IgA blot
nestanoveno
FHA
B. pertussis [titr]
BOOSTRIX
toxoid DTP,
FHA, pertaktin
Muž, *1952
23.11.2013
18.6.2013
18.10.2013
25.11.2013
B. pertussis [titr]
2
4
32
16
B. parapertussis [titr]
32
32
16
4
BP toxin IgM [VE/ml]
nestanoveno
nestanoveno
2,8
3,8
BP toxin IgA [VE/ml]
nestanoveno
nestanoveno
5,6
10,0
BP toxin IgG [VE/ml]
0,9
nestanoveno
0,9
8,7
Anti-FHA IgG poz.
20.12.2013
4.4.2014
B. pertussis [titr]
256
16
B. parapertussis [titr]
32
32
BP toxin IgM [VE/ml]
nestanoveno
2,6
BP toxin IgA [VE/ml]
nestanoveno
0,6
BP toxin IgG [VE/ml]
8,5
3,8
B. pertussis IgG blot
nestanoveno
ACT, FHA
B. pertussis IgA blot
nestanoveno
ACT
ADACEL
toxoid DTP,
FHA, pertaktin,
fimbrie typ 2,3
OA: pertuse v dětství
Pertussis: Challenges Today and for the Future
James D. Cherry
Pediatric Infectious Diseases, Mattel Children’s Hospital, Los Angeles, California, USA
The Department of Pediatrics, David Geffen School of Medicine at the University of California Los Angeles, Los Angeles, California, USA
PLOS Pathogens | www.plospathogens.org | July 2013 | Volume 9 | Issue 7 | e1003418
The Future – Recently, much attention has been devoted to the
resurgence of pertussis and solutions to the problem. On the table are
new acellular pertussis vaccines and live attenuated vaccines. However, as
I have stated previously, from the data presented above, the development
of DTaP vaccines that are better than DTwP vaccines would seem unlikely.
And, although not discussed here, it is my opinion that live vaccines will
not provide as good protection as good DTwP vaccines. Therefore, I
believe a high priority should be given to the development of less
reactogenic whole-cell vaccines.
Děkuji za pozornost …
… a kolegům
(Josef Richter, Eva Jílková, Romana Mikešová, Vlastimil Král)
za spolupráci