MININEPH IgG ANTISERUM

Tento výrobek by měly používat pouze vhodně školené osoby a to pouze k účelům, k nimž je
výrobek určen. Doporučuje se dodržovat dané postupy.
KRYSÍ JÁTRA, LEDVINA, ŽALUDEK
SOUPRAVY/SUBSTRÁTOVÁ SKLA
PRO IFA
6
SKLADOVÁNÍ A STABILITA
Neotevřené soupravy nebo skla je nutné skladovat při 2-8°C a lze je používat až do
uvedeného data exspirace. NEZAMRAZUJTE. Pokud jsou skla z alobalového sáčku vyjmuta,
měla by být použita okamžitě. Naředěný tlumivý roztok PBS lze skladovat při 2-8°C až po
dobu jednoho měsíce. Všechny reagencie by měly být skladovány při 2-8°C.
Czech
Pro diagnostické použití in vitro
Kód výrobku: FK013.1
FK013.2
FS013._
7
ODBĚR VZORKŮ
Vzorky krve by měly být odebrány venepunkcí, ponechány přirozeně koagulovat a sérum
odděleno co nejdříve, aby nedošlo k hemolýze. Sérum lze skladovat při 2-8°C po dobu až 7
dnů před testem (11), nebo pro účely delšího skladování je séra třeba rozplnit po malých
množstvích a skladovat při teplotě –20°C nebo nižší. NIKDY séra nezmrazujte a
nerozmrazujte více než jednou. Nepoužívejte lipemická, hemolytická nebo mikrobiálně
kontaminovaná séra, protože by se mohly vyskytnout snížené titry nebo nejasně vybarvené
struktury.
8
METODIKA
Vyrobeno ve společnosti:
The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, UK
www.bindingsite.co.uk
8.1
Dodávané materiály
8.1.1
Souprava FK013.1 pro 50 testů
Telefon: +44 (0) 121 436 1000
Fax: +44 (0) 121 430 7061
e-mail: [email protected]
1.
8.
9.
10.
11.
12.
10 x Rat liver, kidney, stomach slide (5-well) (5-jamková substrátová skla
s krysími játry, ledvinou, žaludkem)
1 x 1mL ANA Positive Control (ANA pozitivní kontrola, předředěná)
1 x 1mL Negative Control (negativní kontrola, předředěná)
1x1 mL Mitochondrial Positive Control (pozitivní kontrola pro mitochondrie,
předředěná)
1 x 1mL Smooth Muscle Positive Control (pozitivní kontrola pro hladký sval,
předředěná)
1 x 6,2mL Anti-human IgG (H+L) AFF FITC (protilátka proti lidskému IgG (H+L)
AFF FITC, konjugát)
1 x 3mL 1% Evans Blue Counterstain (1% roztok Evansovy modři k docílení
kontrastu vybarvení)
2 x 60mL PBS Buffer (koncentrovaný tlumivý roztok PBS, 20x)
1 x 3mL Mounting Medium (montovací médium)
20 x Blotters (savých papírů)
10 x Coverslips (krycích sklíček, 22 x 70mm)
1 x návod k použití
8.1.2
Souprava FK013.2 pro 250 testů
1.
25 x Rat liver, kidney, stomach slide (10-well) (10-jamková substrátová skla
s krysími játry, ledvinou, žaludkem)
1 x 1mL ANA Positive Control (ANA pozitivní kontrola, předředěná)
1 x 1mL Negative Control (negativní kontrola, předředěná)
1x1 mL Mitochondrial Positive Control (pozitivní kontrola pro mitochondrie,
předředěná)
1 x 1mL Smooth Muscle Positive Control (pozitivní kontrola pro hladký sval,
předředěná)
1 x 15,5mL Anti-human IgG (H+L) AFF FITC (protilátka proti lidskému IgG (H+L)
AFF FITC) (konjugát)
1 x 3mL 1% Evans Blue Counterstain (1% roztok Evansovy modři k docílení
kontrastu vybarvení)
2 x 60mL PBS Buffer (koncentrovaný tlumivý roztok PBS, 20x)
1 x 10mL Mounting Medium (montovací médium)
50 x Blotters (savých papírů)
25 x Coverslips (krycích sklíček, 22 x 70mm)
1 x návod k použití
2.
3.
4.
5.
1
6.
POUŽITÍ
Tento výrobek je určen pro použití při screeningu a titraci cirkulujících autoprotilátek v lidském
séru a jako pomůcka při stanovení diagnózy při sledování léčby různých autoimunitních
chorob. Čtyři hlavní stanovované protilátky jsou: antinukleární protilátky (ANA),
antimitochondriální protilátky (AMA), protilátky proti hladkému svalu (ASMA) a protilátky proti
gastroparietálním buňkám (AGPCA).
2
SOUHRN A VÝKLAD
Nepřímá imunofluorescence je referenční metoda pro screening a titraci cirkulujících
autoprotilátek v lidském séru. Tkáňové řezy živočišného původu, např. z krysy, jsou
všeobecně preferovány před jinými obvykle používanými substráty včetně lidských tkáňových
řezů a buněčných preparátů, a to především proto, že nedochází k interferenci s protilátek
proti HLA a/nebo proti ostatním krevním skupinám. Použití tří různých druhů tkání (játra,
ledvina, žaludek) umožňuje snadnější identifikaci autoprotilátek ve srovnání s výsledky
dosaženými na jednotlivých tkáních.
Určitý typ autoprotilátek může být spojen s množstvím různých chorob. ANA se téměř vždy
vyskytují se SLE (systémový lupus erythematodes), ale jsou také obecně nacházeny u
pacientů s chorobami pojivových tkání a s revmatickými chorobami. AMA jsou často přítomny
u primární biliární cirhózy, ale mohou být nalezeny i u pacientů s ostatními jaterními
chorobami. ASMA jsou často spojeny s chronickou aktivní hepatitidou a primární biliární
cirhózou, ale v nízkých koncentracích jsou nalézány u řady dalších onemocnění. AGPCA se
objevují v séru většiny pacientů s perniciózní anemií. Detailnější popis toho, které
autoprotilátky jsou spojeny s kterými chorobami, je uveden v oddílu 9 (1-9).
3
PRINCIP
Při tomto stanovení se používá technika nepřímé imunofluorescence, při níž se pacientské
vzorky a příslušné kontroly inkubují na substrátových sklech (10). Nenavázané protilátky se
odmyjí a přidá se konjugát příslušné sekundární protilátky s fluoresceinem. Nenavázaný
konjugát se odmyje a substrátová skla se vyhodnocují pod fluorescenčním mikroskopem.
Pozitivní vzorky vykazují jablkově zelenou fluorescenci, jejíž buněčná lokalizace odpovídá
oblastem zmrazených tkáňových řezů, kde došlo k navázání autoprotilátky.
4
4.1
4.3
4.4
4.5
4.6
4.7
4.8
4.9
4.10
4.11
5
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
8.1.3
FS013.1, FS013.2
1.
FS013.1 - 10 x Rat liver, kidney, stomach slide (5-well) (5-jamková skla s krysími
játry, ledvinou, žaludkem)
FS013.2 - 25 x Rat liver, kidney, stomach slide (10-well) (10-jamková skla
s krysími játry, ledvinou, žaludkem)
1x návod k použití
2.
REAGENCIE
Tkáňové řezy krysích jater, ledviny, žaludku na 5-jamkových nebo 10-jamkových
sklech.
Pouze soupravy:
4.2
7.
ANA homogenní pozitivní kontrolní sérum obsahující 0,099% azid sodný.
Předředěno, připraveno k použití.
Negativní kontrolní sérum obsahující 0,099% azid sodný. Předředěno,
připraveno k použití.
Afinitně purifikovaná ovčí protilátka proti lidskému IgG (H+L), konjugovaná s
fluorescein isothiokyanátem (FITC), obsahující 0,099% azid sodný. Předředěno,
připraveno k použití.
Pozitivní kontrolní sérum pro mitochondrie, obsahující 0,099% azid sodný.
Předředěno, připraveno k použití.
Pozitivní kontrolní sérum pro hladký sval, obsahující 0,099% azid sodný.
Předředěno, připraveno k použití.
1% roztok Evansovy modři k docílení kontrastu vybarvení dle volby uživatele.
Izotonický fosfátový tlumivý roztok (PBS), dodávaný ve formě dvacetinásobně
koncentrovaného roztoku.
Savé papíry (blotters), určené k vysoušení skel po promytí.
Montovací médium obsahující činidlo, které zabraňuje spontánnímu vyhasínání
fluorochromu (DABCO, 1, 4 diazabicyklo [2.2.2] oktan).
Krycí sklíčka (22 x 70mm).
8.2
Další požadovaný materiál
8.2.1
8.2.2
8.2.3
8.2.4
Destilovaná voda k naředění koncentrovaného PBS.
Láhev pro tlumivý roztok PBS.
Mikropipety a špičky na jedno použití k nanesení pacientských vzorků.
Vlhká komůrka pro inkubační kroky (např. Magnetic Staining Chamber, kód
BD010).
Fluorescenční mikroskop s excitačním filtrem 495nm a bariérovým filtrem
515nm.
Plastová střička pro počáteční oplach PBS.
Pokud používáte pouze substrátová skla, je možno další komponenty objednat
od firmy The Binding Site: PBS (CON 3.3), negativní kontrola (CON 92), ANA
homogenní kontrola (FA105), mitochondriální pozitivní kontrola (FA128),
pozitivní kontrola pro hladký sval (FA134), protilátka proti lidskému IgG (H+L)
FITC konjugát (FA003), montovací médium (CON 195) a 1% roztok Evansovy
modři (CON 93).
8.2.5
8.2.6
8.2.7
8.3
Kontrola jakosti. Pozitivní a negativní kontroly by měly být použity pro každou
sérii testovaných vzorků.
8.3.1
Montovací médium. Před použitím vyjměte montovací médium z lednice a
ponechte vytemperovat na laboratorní teplotu (18-28°C).
8.3.2
Ředění koncentrovaného PBS. Koncentrovaný PBS řeďte destilovanou vodou (1
díl koncentrovaného PBS + 19 dílů destilované vody) a promíchejte. PBS se
používá k ředění pacientských vzorků a jako promývací tlumivý roztok.
8.3.3
Ředění pacientských vzorků
Screening: Nařeďte pacientské vzorky v poměru 1/20 přidáním 50μL séra
k 950μL tlumivého roztoku PBS.
Titrace: Vzorky, které byly při screeningu pozitivní nařeďte tlumivým roztokem
PBS geometrickou řadou s koeficientem 2 (např. 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320
atd.).
Např.: Vezměte 100μL vzorku naředěného v poměru 1/20 a promíchejte se
100μL PBS, výsledné ředění je 1/40. Opakujte pro další naředění.
8.3.4
Substrátová skla. Před vyjmutím z alobalového sáčku ponechte skla volně
v laboratoři pro dosažení laboratorní teploty (18-28°C). Skla patřičně označte,
umístěte je do vlhké komůrky a nakapejte po jedné kapce pozitivní a negativní
UPOZORNĚNÍ
Všichni dárci dodávaného lidského séra (pouze soupravy) byli s negativním výsledkem
testováni na přítomnost povrchového antigenu hepatitidy B, protilátek proti viru hepatitidy C a
protilátek proti viru lidské imunodeficience (HIV 1 & 2).
Tyto testy však nezaručují nepřítomnost infekčního agens a proto je třeba při práci zacházet
s tímto výrobkem jako s každým potenciálně infekčním materiálem. Používat tyto metody by
mělo být povoleno pouze osobám adekvátně školeným.
Evansova modř a kontroly dodávané v soupravách obsahují 0,099% azid sodný jako
konzervační látku a je proto nutné s nimi zacházet opatrně – nesmí dojít k požití nebo ke
kontaktu s pokožkou nebo sliznicemi. Pokud dojde k potřísnění, opláchněte postižené místo
velkým množstvím vody a vyhledejte lékařskou pomoc. Azid sodný může reagovat s olovem
nebo mědí v potrubí za vzniku výbušných azidů kovů. Proto likvidované reagencie splachujte
velkým množstvím vody, aby nedocházelo k usazování azidu v potrubí.
Pracovní postup testu
Insert Code: CIN006.Cz, Version: 1 October 2006 (Rev. 01), Page 1 of 2
kontroly do příslušných jamek. Do zbývajících jamek nakapejte po 50μL
naředěných pacientských vzorků.
8.3.5
Inkubace substrátových skel. Substrátová skla inkubujte po dobu 20 minut ve
vlhké komůrce při laboratorní teplotě (18-28°C).
8.3.6
Oplach PBS. Vyjměte skla z vlhké komůrky a krátce střičkou s PBS opláchněte.
Nestříkejte přímo do jamek. Skla umístěte do držáku, ponořte do tlumivého
roztoku PBS a protřepávejte nebo míchejte po dobu 5-10 minut.
8.3.7
Přidání konjugátu s fluoresceinem. Oklepněte přebytek PBS a osušte plochu
skel kolem jamek savým papírem, dodávaným se soupravou. Skla umístěte zpět
do vlhké komůrky a okamžitě převrstvěte každou jamku fluorescentním
konjugátem. JAMKY NENECHÁVEJTE NEZAKRYTÉ DÉLE NEŽ 15 VTEŘIN.
Zaschnutí substrátu ovlivňuje závažným způsobem výsledky.
8.3.8
Inkubace substrátových skel. Skla inkubujte po dobu 20 minut ve vlhké komůrce
při laboratorní teplotě (18-28°C) v temnu.
8.3.9
Oplach PBS. Opakujte krok 8.3.6. Dobarvení kontrastu na základě vlastní volby
uživatele: Přidejte 2-3 kapky 1% Evansovy modři na 100mL PBS před
ponořením skel do tlumivého roztoku.
8.3.10
Zalití preparátu a překrytí krycím sklíčkem. Vyjměte jedno sklo z promývací
lázně PBS. Pomocí savých papírů k sušení substrátových skel rychle osušte
okolí jamek a do každé jamky přidejte kapku média na zalití preparátu (mounting
medium). Velmi opatrně pokládejte substrátové sklo na krycí sklíčko tak, aby
nedošlo k tvorbě vzduchových bublin. Pokud se vzduchové bubliny objeví,
nesnažte se je odstranit. Opatrně odsajte veškeré nadbytečné montovací
médium okolo hran krycího sklíčka.
8.3.11
9
9.1
Poznámka: Každá laboratoř by si měla určit mez, od níž bude pozitivní výsledek považován za
klinicky významný.
Prohlížení skel pod fluorescenčním mikroskopem. Skla mohou být skladována
v temnu při teplotě 2-8°C až 3 dny, aniž by došlo k signifikantní ztrátě
fluorescence.
VÝSLEDKY
Pozitivní kontrolní vzorek se specificitou pro ANA by měl poskytovat jasný, jablkově zelený
homogenní imunofluorescentní obraz buněčných jader. Pozitivní kontrolní vzorek se
specificitou pro mitochondrie by měl dávat jasné, jablkově zelené zabarvení renálních tubulů a
gastroparietálních buněk. Pozitivní kontrolní vzorek se specificitou pro hladký sval by měl
poskytovat jasné, jablkově zelené zabarvení svalových vrstev žaludku.
Negativní kontrolní vzorek musí vykazovat matné nevýrazně zelené zabarvení ve všech
tkáních, bez rozeznatelné fluorescence. Pokud kontrolní vzorky neposkytují popsané
imunofluorescentní vzory, je test neplatný a měl by být opakován.
9.2
Interpretace výsledků
9.2.1
10.2
Imunofluorescentní vzory se často mění podle toho, jak dalece je vzorek dotitrován do
koncového bodu. Je to obvykle způsobeno, zvláště u ANA, přítomností více než jedné
autoprotilátky.
10.3
Negativní výsledek u této soupravy může být zapříčiněn remisí choroby nebo
přítomností autoprotilátek, které nelze pomocí této techniky stanovit.
10.4
Citlivost stanovení bude u tohoto produktu ovlivněna zdrojem světla, filtry a optikou
různých typů fluorescenčních mikroskopů. Na funkci mikroskopu má velký vliv správná
údržba, zejména vycentrování rtuťové výbojky a výměna výbojky po určené době.
10.5
Autoprotilátky mohou být aktivovány nebo indukovány velkou řadou léků včetně
perorálních antikoncepčních prostředků a antibiotik.
10.6
Zkřížená kontaminace vzorků a kontrol by se mohla objevit na 10-ti jamkových
substrátových sklech v důsledku malé vzdálenosti mezi jamkami. Při práci s těmito skly
(speciálně při oplachování a odmývání tlumivým roztokem) je třeba dbát na to, aby k
takovéto kontaminaci nedošlo.
10.7
Vhodnost použití s IFA reagenciemi ostatních výrobců nebyla stanovena, ale není
nutně vyloučena.
Informace FDA (USA) - viz titulní strana anglického návodu.
11
11.1
OČEKÁVANÉ HODNOTY A SPECIFICKÉ CHARAKTERISTIKY STANOVENÍ
Očekávané výsledky
Negativní výsledky
Pozitivní výsledky
Jsou pozorovány jako signifikantní fluorescence ve specifických oblastech tkáně a poskytují
jeden nebo více z následujících imunofluorescentních vzorů:
ANA poskytují zabarvení jader následujících buněk: jaterní buňky, distální a proximální renální
tubuly, gastroparietální buňky a zymogenní buňky. Téměř všichni pacienti se SLE mají v séru
ANA, ale ANA mohou být nalezeny také u různých chorob pojivových tkání včetně revmatoidní
artritidy. ANA se mohou objevit také při chronické aktivní hepatitidě a primární biliární cirhóze
a jako odpověď na užívání určitých léků.
Při interpretaci imunofluorescentních nukleárních vzorů pro ANA je možno získat ještě další
dodatečné informace (viz níže). Je doporučeno všechny ANA pozitivní vzorky vytitrovat do
koncového bodu, aby bylo možné prokázat směsné reakce, které by jinak nemusely být
zjištěny. Je rovněž doporučeno provést u takových vzorků další analýzu na autoprotilátky proti
dvouvláknové DNA a proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA).
Obvyklé antigeny
Homogenní
ds DNA, histony
Obvodový
(lem)
Zrnitý
Přirozená/ds DNA
Extrahovatelné nukleární
antigeny
Ribonukleoprotein
Scl-70
SSB
4-6S sRNA
Asociace s chorobami
SLE
Revmatoidní artritida (RA)
Směsná choroba pojivové tkáně
Polékový lupus
SLE
Sklerodermie
Sjögrenův syndrom
Směsná choroba pojivové tkáně
SLE
Sklerodermie
Sjögrenův syndrom
SLE, RA a progresivní systémová
skleróza
Imunofluorescentní vzory tkáňově specifických autoprotilátek zahrnují:
Protilátka
Antimitochondriální
protilátky (AMA)
Protilátky proti hladkému
svalu (ASMA)
Protilátky proti
parietálním buňkám
(AGPCA)
Protilátky proti retikulinu
(ARA)
Asociace s hlavní
chorobou
Asociovaná tkáň
Cytoplasma distálních tubulů
ledviny a proximální tubuly
(v menším rozsahu).
Cytoplasma hepatocytů (játra)
a cytoplasma
gastroparietálních buněk
(žaludek)
Muskulární vrstvy (žaludek)
Muskulární vrstvy tepének
(ostatní tkáně)
Parietální buňky (žaludek)
Primární biliární cirhóza
& další jaterní choroby
AMA
ASMA
ARA
Peritubulární vlákna &
pouzdro glomerulu (ledvina)
Membrány hepatických buněk,
sinusoidální stěny (játra)
Crohnova choroba
Celiakie
Herpetiformní dermatitida
11.2
Perniciózní anémie
Literatura
2
7
2
8
9
Klinické diagnózy
SLE
Směsná choroba pojivové tkáně
Ostatní autoimunitní choroby
(RA, sklerodermie, Sjögrenův
syndrom, dermatomyozitida)
Primární biliární cirhóza
Chronická hepatitida
Primární biliární cirhóza
Crohnova choroba
Celiakie
Herpetiformní dermatitida
Perniciózní anémie
Výskyt v procentech
99
90
15-50
Literatura
4
3
3, 5
>95
70
50
24
38-50
22
90
3
3
3
6
3, 6
6
9
Srovnávací studie
Srovnávací studie byla provedena u 96 klinických vzorků za použití této soupravy a komerčně
dostupné referenční metody. U 93 z 96 testovaných vzorků byly výsledky stanovené těmito
dvěma metodami identické. Co se týká fluorescentních vzorů, popsaných v oddíle 9.2,
pohybovala se relativní citlivost v rozmezí 89-100%, relativní specificita byla 100% a relativní
shoda byla v rozmezí 93-100%. U vzorků které se lišily, bylo dosaženo slabého pozitivního
barvení pro ANA nebo SMA, a to pouze u referenční metody, což předpokládá, že tyto vzorky
byly na hranici pozitivity a/nebo existují mírné rozdíly v citlivosti mezi oběma použitými
metodami.
12
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
13
Chronická aktivní
hepatitida
Výskyt v procentech
0-2
0-8
3
5
10-15 (u starších)
Abnormální hodnoty
AGPCA
Antinukleární protilátky (ANA)
Vzor
Protilátka
ANA
AMA
ASMA
ARA
AGPCA
ANA
Jsou pozorovány jako matné nevýrazně zelené zabarvení ve všech řezech, bez rozeznatelné
fluorescence. Slabé reakce je třeba opakovat při vyšším ředění (např. 1/40). Pokud se
opakovaný výsledek jeví stejně jako ten původní, je test považován za negativní.
Nukleolární
OMEZENÍ POSTUPU
Tento test sám o sobě nemůže být považován za diagnostický. Všechny ostatní faktory,
včetně klinické historie pacienta a dalších sérologických nebo bioptických výsledků,
musí být brány do úvahy.
Normální hodnoty
Kontrola jakosti
9.2.2
10
10.1
13.1
13.2
13.3
13.4
13.5
13.6
13.7
13.8
13.9
13.10
13.11
13.12
LITERATURA
Tan, E M (1989). Antinuclear Antibodies: Diagnostic markers for autoimmune
diseases and probes for cell biology. Adv. Immunol. 44, 93-151.
Doniach, D et al (1986). Tissue antibodies in primary biliary cirrhosis, active
chronic (lupoid) hepatitis, cryptogenic cirrhosis and other liver diseases and their
clinical implications. Clin. Exp. Imm 1: 237-262.
Wallington, T B & Gooi H C (1990). Clinical Immunology. A practical approach.
Ed. Gooi, H C & Chapel, H. Publ. IRL Press, Oxford UK. 195-220.
Cavallaro, J J et al (1976). Immunofluorescent detection of autoimmune
diseases, Immunology Series No. 7. CDC, Atlanta, GA.
Seah, P P et al (1971). Antireticulin antibody: Tissue autoantibodies in dermatitis
herpetiformus and adult coeliac disease. Lancet 1, 834-836.
Seah, P P et al (1973). Antireticulin antibody: Incidence and diagnostic
significance. Gut 14, 311-315.
Goudie, R B et al (1966). Serological and histological diagnosis of primary biliary
cirrhosis. J. Clin. Path, 19, 527-538.
Rizzeto, M & Doniach, D (1973). Types of reticulin antibodies detected in human
sera by immunofluorescence. J. Clin. Path. 26, 841-851.
Bird, A G (1990). Clinical Immunology. A practical approach. Ed. Gooi, H C &
Chapel, H. Publ. IRL Press, Oxford, UK. pp175-194.
Weller, TH, Coons, AH (1954). Fluorescent antibody studies with agents of
Varicella and Herpes zoster propagated in vitro. Proc.Soc.Exp.Biol.Med. 86,
789-794.
Protein Reference Handbook of Autoimmunity (3rd Edition) 2004. Ed. A Milford
Ward, GD Wild. Publ. PRU Publications, Sheffield. 14.
SOUHRN PROVEDENÍ TESTU
Vytemperujte montovací médium na laboratorní teplotu.
Nařeďte PBS destilovanou vodou.
Nařeďte pacientská séra pomocí PBS v poměru 1/20.
Substrátová skla nechte vytemperovat na laboratorní teplotu (18-28°C).
Aplikujte po 50μL pozitivních a negativních kontrol a naředěných pacientských
sér do příslušných jamek.
Inkubujte ve vlhké komůrce po dobu 20 minut.
Promývejte v PBS po dobu 5-10 minut.
Okolí každé jamky osušte a okamžitě překryjte každou jamku kapkou konjugátu.
Inkubujte stejně jako v bodě 13.6.
Promývejte stejně jako v bodě 13.7.
Přidejte montovací médium a přiložte krycí sklíčko.
Skla prohlížejte pod fluorescenčním mikroskopem.
Insert Code: CIN006.Cz, Version: 1 October 2006 (Rev. 01), Page 2 of 2