Využití metody GISH

VYUŽITÍ METODY GISH PRO
IDENTIFIKACI ODRŮD RODOVÝCH
HYBRIDŮ
David KOPECKÝ, Adam J. LUKASZEWSKI a Jaroslav DOLEŽEL
Ústav experimentální botaniky Akademie věd České republiky, Olomouc
Department of Botany and Plant Sciences, University of California, Riverside, USA
Záměr
Zjištění genomového složení u hybridů Lolium × Festuca
L. multiflorum × F. arundinacea
(zpětné křížení s F. arundinacea)
Hykor (Česká republika)
Felina (Česká republika)
Korina (Česká republika)
Lesana (Česká republika)
L. multiflorum × F. pratensis
Perun (Česká republika)
Paulita (Německo)
Punia (Litva)
L. multiflorum × F. glaucescens
99-01 (Francie)
Princip metody GISH
• Izolace genomové DNA
rodičovských druhů
• Příprava sondy – Nick translace
• Příprava blokovací DNA
• Příprava roztlakového preparátu
metafázních chromozómů
• Vlastní hybridizace DNA:DNA
převzato z Heslop-Harrison, 1999
Výsledky
L. multiflorum × F. pratensis
Perun
Punia
0,65
Paulita
1,64
0,45
8,82
11,55
11,7
14,7
15,82
16,91
L. multiflorum
Rekombinace LmxFp
F. pratensis
*) absolutní čísla znamenají
průměrný počet chromozómů
Výsledky
L. multiflorum × F. arundinacea
Korina
Lesana
6,86
Felina
27,73
6,33
27,42
L. multiflorum
4,95
6,69
7,5
6,86
Hykor
Rekombinace LmxFa
10,21
8,76
25,79
F. arundinacea
25,89
*) absolutní čísla znamenají
průměrný počet chromozómů
Výsledky
L. multiflorum × F. glaucescens
99-01
10,33
11,67
5,33
L. multiflorum
Rekombinace LmxFg
F. glaucescens
*) absolutní čísla znamenají
průměrný počet chromozómů
Shrnutí
Perun
Punia
0,65
99-01
Paulita
0,45
1,64
8,82
11,55
11,7
14,7
10,33
11,67
15,82
16,91
5,33
Korina
Lesana
6,86
Felina
27,73
6,33
27,42
L. multiflorum
4,95
6,69
7,5
6,86
Hykor
Rekombinace LxF
10,21
8,76
25,79
Festuca
25,89
*) absolutní čísla znamenají
průměrný počet chromozómů
Fa (2n=6x=42)
Fp (2n=2x=14)
Fg (2n=4x=28)
Humphreys a kol., 1995
Jak spolu rekombinují jednotlivé genomy v
hybridech L. multiflorum × F. arundinacea?
Dvojitá in situ hybridizace
DNA Lm – značená digoxigeninem
zelenožlutá barva
DNA Fg – značená biotinem
fialová barva
DNA Fp – blokovací DNA,
podbarveno DAPI – modrá barva
Fa
Fg + Fp
1,5 TC
0-4 break-pointů
7,1 TC
9-20 break-pointů
Lm
Další využití metody GISH:
Charakterizace androgenních regenerantů
hybridů Lolium x Festuca
27 chromozómů
DNA Fp – značená
digoxigeninem,
zelenožlutá barva
DNA Lolium –
blokovací DNA,
podbarveno PI –
červená barva
Děkuji za pozornost a přeji příjemně strávený zbytek dne…