docDetekce antigen specifických buněk
download 
Stížnost Transkript
Detekce antigen specifických buněk
Průtoková cytometrie antigen-specifických buněk Jozef Janda Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR Centrum PigMod Přehled T cells MHC tetramers Calcium flux Jak T lymfocyty rozpoznávají antigen Jak T lymfocyty reagují na antigen PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Prezentace antigenních peptidů v komplexu s MHC TCR signalling Mobilizace kalcia Fosforylace signálních molekul Exprese aktivačních markerů - fenotypizace Produkce cytokinů Cytotoxicita Proliferace Dynamika T buněčné odpovědi T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation TCR – rozpoznání antigenu T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation TCR se specificky váže s určitým komplexem MHC a antigenního peptidu T lymfocyty reagují na antigen jen když je prezentován v komplexu s MHC CD4 a CD8 T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Jak lymfocyty reagují na antigen T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Fosforylace Phenotype Mobilizace vápníku Cytokines Cytotoxicity Proliferation Exprese genů Proliferace Jak lymfocyty reagují na antigen T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation T cells Studium antigen-specifických T lymfocytů MHC tetramers Detekce Ag-specifických T lymfocytů Calcium flux Funkce T lymfocytů PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Počet Dynamika v průběhu onemocnění nebo pokusu Proliferace Exprese aktivačních markerů Produkce cytokinů Cytotoxicita Izolace antigen-specifických T lymfocytů T cells Detekce antigen-specifických T lymfocytů MHC tetramers MHC multimery Calcium flux PhosFlow Phenotype Intracelulární cytokiny Cytokines Cytotoxicity Proliferation Využívá specifickou vazbu mezi TCR a MHC nesoucím antigenní peptid Výhoda – přímá detekce ex-vivo bez potřeby stimulace Nevýhoda – potřeba specifických reagencií, potřeba znát antigenní peptid, funguje jen u jedinců s daným MHC Ag-specifické buňky produkují po stimulaci antigenem cytokiny (IFNg) Potřeba stimulace in vitro, blokování sekrece Fixace a permeabilizace ELISPOT Proliferace MHC multimery T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation MHC multimery T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Funkce T lymfocytů T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Mobilizace vápníku (calcium flux) Fosforylace signálních proteinů Fenotypizace Produkce cytokinů Cytotoxicita – specifická lýza Proliferace Mobilizace vápníku T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Indo-1 Poměr emisí 440nm a 530nm Mobilizace vápníku T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Fosforylace signálních proteinů T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Fenotypizace T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Funkce T lymfocytů T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Mobilizace vápníku (calcium flux) Fosforylace signálních proteinů Fenotypizace Produkce cytokinů Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Barvení intracelulárních cytokinů Sekrece cytokinů (ELISA, bead-based assays) ELISPOT Cytokine capture Exprese mRNA - qPCR Cytotoxicita – specifická lýza Proliferace Intracelulární cytokiny T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Stimulace buněk Antigen, TCR cross-linking, PMA-iono Blokování sekrece Brefeldin A, monensin Barvení povrchových molekul Fixace, permeabilizace Intracelulární barvení Funkce T lymfocytů T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Mobilizace vápníku (calcium flux) Fosforylace signálních proteinů Fenotypizace Produkce cytokinů Cytotoxicita – specifická lýza Chromium release Flow cytometric Proliferace Cytolytická aktivita T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation Proliferace – CFSE dilution T cells MHC tetramers Calcium flux PhosFlow Phenotype Cytokines Cytotoxicity Proliferation
Podobné dokumenty
Vyuziti prutokove cytometrie v imunologii
FLICA (fluorochrome-labelled inhibitors of caspase activity)
Protilátky proti aktivní formě enzymu
Fixace a permeabilizace – nelze užít live/dead diskriminaci
Služby pro predikci struktury proteinů
Formování struktury záleží na rotaci molekul kolem
uhlíků C-alpha a C-beta v peptidech
Rozdělení na Alfa a Beta formace (kladné/záporné úhly)
CNS
GynekoloGické záněty v ambulantní praxi
menstruačního cyklu, v těhotenství a u uživatelek kontraceptiv
s vyššími hladinami estrogenů. Častěji ji nalézáme u diabetiček,
u uživatelek kortikoidů, antibiotik a estrogenů. Charakteristickým
př...
▫ dárcem CMV-specifických lymfocytů bude jeden z rodičů (3rd party donor)
▫ lymfocyty budou získány magnetickou separací na CliniMACS pomocí
Streptamerů
Autor prezentace: Ing. Eva Procházková
