CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M

CHORUS
BETA 2-GLYCOPROTEIN-M
86052
(36 testů)
Výrobce:
DIESSE Diagnostica Senese
Via delle Rose 10
53035 Monteriggioni (Siena) – Itálie
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
CZ
OBSAH
1
Úvod ................................................................................................................ 3
2
Princip testu ..................................................................................................... 3
3
Složení soupravy .............................................................................................. 4
4
Další potřebné vybavení k provedení testu ...................................................... 5
5
Skladování a stabilita komponent .................................................................... 5
6
Bezpečnost práce ............................................................................................. 6
7
Technické připomínky ...................................................................................... 7
8
Vzorky a jejich skladování ................................................................................ 7
9
Pracovní postup. .............................................................................................. 8
10 Validita testu.................................................................................................... 8
11 Hodnocení výsledků ......................................................................................... 8
12 Interpretace výsledků....................................................................................... 8
13 Charakteristika soupravy .................................................................................. 9
14 Literatura ....................................................................................................... 10
15 Vysvětlení symbolů ........................................................................................ 12
2/12
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
CZ
Semikvantitativní stanovení IgM protilátek proti
β2-glykoproteinu I v lidském séru na přístrojích Chorus pomocí
jednorázového testovacího zařízení
1
Úvod
Protilátky proti β2-glykoproteinu I patří do skupiny antifosfolipidových protilátek,
které jsou primárně namířeny proti komplexům skládajících se z negativně nabitých
fosfolipidů (např. kardiolipin). Dále jsou tyto protilátky namířené proti plazmovým
proteinům, jako jsou β2-glykoprotein I, protrombin, protein C a protein S.
Pozorujeme také reaktivitu proti izolovanému β2-glykoprotein I. Z tohoto důvodu
o β2-glykoproteinu I mluvíme jako o samostatném autoantigenu. β2-glykoprotein I,
nazývaný též apolipoprotein H, je 50 kDa velký beta-2 globulin asociovaný in vivo
s lipoproteinem, krevními destičkami a fosfolipidy. Předpokládá se, že inhibuje
koagulační kaskádu, aktivitu protrombinázy a shlukování ADP podmíněných krevních
destiček.
Antifosfolipidové protilátky se často vyskytují v sérech pacientů postižených
systémovým lupus erythematodes a podobnými autoimunitními nemocemi. Tyto
nemoci jsou navíc typické pro sekundární vývoj antifosfolipidového syndromu (APS).
U pacientů, kteří netrpí žádným jiným autoimunitním onemocněním, charakterizují
antifosfolipidové protilátky naopak primární APS.
Mnoho studií ukazuje na korelaci mezi těmito autoprotilátkami a zvýšeným
výskytem trombóz, trombocytopenie a opakovaného potratu plodu (následkem
placentálního infarktu). Přesný mechanizmus, kterým patogenní antifosfolipidové
protilátky navozují trombózu, nebyl prozatím odhalen.
2
Princip testu
Jednorázový test připravený k použití na přístrojích Chorus umožňuje stanovení IgM
protilátek proti β2-glykoproteinu I. Test je založen na principu ELISA (Enzyme linked
Immunosorbent Assay).
Vysoce purifikovaný lidský nativní β2-glykoprotein I se naváže na pevnou fázi.
V průběhu inkubace vzniká vazba mezi specifickými protilátkami vyšetřovaného séra
a imobilizovaným antigenem. Po promytí, která eliminují nenavázané proteiny, se
provádí inkubace s konjugátem. Konjugát je roztok s obsahem monoklonálních
protilátek proti lidským imunoglobulinům značených křenovou peroxidázou. Po další
sérii promytí, které odstraní nenavázaný konjugát, se přidá substrát reagující
s peroxidázou. Intenzita modrého zbarvení, které vznikne, je přímo úměrné
koncentraci specifických protilátek přítomných v testovaném lidském séru.
Jednorázový test obsahuje všechny reagencie nutné k provedení testu na přístrojích
Chorus.
3/12
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010
CZ
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
Výsledek testu je vyjádřen v arbitrážních jednotkách (AU/ml.)
3
Složení soupravy
Souprava umožňuje provést 36 stanovení.
Testovací jednotka
6 × 6 ks
6 samostatných balení po 6 jednotlivých jednorázových
testech
Kalibrátor
Roztok lidského séra s obsahem specifických IgM
protilátek, v pracovním ředění
Pozitivní kontrola
Roztok lidského séra s obsahem specifických IgM
protilátek, v pracovním ředění
Pracovní návod
1 ks
Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu a ze samostatných balení
odeberte stanovený počet jednorázových testů pro vlastní analýzu. Zbylé
jednorázové testy vraťte zpět do obalu se sušidlem (silikagel – gel obsahující oxid
křemičitý), vytlačte vzduch a hermeticky uzavřete stisknutím uzávěru. Skladujte při
+2 °C až +8 °C.
4/12
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010
CZ
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
Obrázek 1 Schéma jednorázového testu
Pozice 8
Místo pro štítek s čárovým kódem
Pozice 7
Prázdná pozice
Pozice 6
Mikrotitrační jamka s potaženými antigeny
Vysoce purifikovaný lidský nativní β2-glykoprotein I
Pozice 5
Nepotažená mikrotitrační jamka
Pozice 4
TMB Substrát
0,3 ml
Tetrametylbenzidin 0,26 mg/ml a 0,01% H2O2 stabilizovaný
v 0,05 mol/l citrátového pufru (pH 3,8)
Pozice 3
Ředicí roztok vzorků
0,35 ml
Proteinový roztok Tris, konzervovaný azidem sodným
Pozice 2
Konjugát
0,35 ml
Roztok protilátek proti lidskému IgM značených peroxidázou
Pozice 1
Prázdná jamka
Do této jamky se přidá neředěné vyšetřované sérum
4
Další potřebné vybavení k provedení testu
Tyto reagencie nejsou součástí balení.
Promývací roztok pro testy na stanovení autoimunitních onemocnění
Čistící roztok 2000
83605
Sanitační roztok
83604
Destilovaná nebo deionizovaná voda
Běžné laboratorní sklo: odměrné válce, zkumavky atd.
Mikropipety na přesný odběr 50 až 200 μl roztoku
Jednorázové rukavice
Roztok chlornanu sodného (5 %)
Nádoby na potenciálně infekční materiál
5
86004
Skladování a stabilita komponent
Reagencie se musí skladovat při teplotě +2 °C až +8 °C. V případě skladování při
nesprávné teplotě se musí zopakovat kalibrace a validovat test pomocí kontrolního
séra (viz 10, Validita testu).
5/12
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010
CZ
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
Datum exspirace je uvedeno na každé komponentě a na štítku soupravy.
Po otevření mají reagencie omezenou stabilitu.
 Jednorázový test – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
 Pozitivní kontrola – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
 Kalibrátor – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
6
Bezpečnost práce
Souprava je určena pouze pro diagnostické účely in vitro.
Tato souprava obsahuje materiály lidského původu, které byly testovány a vykázaly
negativní výsledky při použití metod schválených FDA pro stanovení přítomnosti
HbsAg a anti-HIV-1, anti-HIV-2 a anti-HCV protilátek. Protože však žádný
diagnostický test nemůže poskytnout úplnou záruku, že infekční agens nejsou
přítomna, je třeba s veškerým materiálem lidského původu zacházet tak, jako by byl
potenciálně infekční. Při zacházení s materiálem lidského původu je nutné dodržovat
všechny místní předpisy týkající se bezpečnosti práce.
Likvidace zbytků pro provedení testu
S použitými vzorky sér, kalibrátory, jednorázovými testy je třeba zacházet jako
s potenciálně infekčním materiálem a likvidovat je v souladu s platnou legislativou.
Zdravotní a bezpečnostní informace
1. Nepipetujte ústy. Používejte rukavice na jedno použití a ochranu očí. Po umístění
jednorázového testu do přístroje Chorus si důkladně umyjte ruce.
2. Některé reagencie obsahují nízké koncentrace škodlivých nebo dráždivých látek
Pokud se některá s těchto reagencií dostane do kontaktu s kůží nebo očima,
důkladně omyjte dané místo vodou.
3. Neutralizované kyseliny nebo jiný tekutý odpad by se měl dekontaminovat
přidáním dostatečného množství chlornanu sodného tak, aby konečná
koncentrace dosahovala minimálně 1,0 %. Pro zajištění účinné dekontaminace
ponechejte tento odpad 30 minut v 1% chlornanu sodném.
4. Rozlitý potenciálně infekční materiál je třeba okamžitě odstranit pomocí
absorpčního papírového ručníku a kontaminovanou oblast umýt, například 1,0%
chlornanem sodným, a to předtím, než budete v práci pokračovat. Chlornan
sodný nepoužívejte na rozlité tekutiny s obsahem kyseliny, ty musíte nejprve
otřením vysušit.
5. Materiály použité k čištění potřísněných povrchů, včetně rukavic, se musí
likvidovat jako potenciálně životu nebezpečný odpad. Materiály obsahující
chlornan sodný nevkládejte do autoklávu.
6/12
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
7
CZ
Technické připomínky
Pro získání spolehlivých výsledků je nutné přesné dodržování návodu.
Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu (+18 °C až +30 °C) a test
proveďte do 60 minut.
Zkontrolujte a dodržujte následující informace:
 Substrát obsažený v pozici 4 je bezbarvý. Nepoužívejte jednorázové testy, které
toto nesplňují.
 Testovaný vzorek je dokonale na dně jamky rozprostřen.
 Zkontrolujte zda-li všechny reagencie v testu jsou přítomny a jestli není
jednorázový test poškozen. Nepoužívejte testy, které nemají reagencie.
 Jednorázové testy jsou určeny pro použití na přístroji Chorus. Důkladně
dodržujte pokyny pro použití a řiďte se návodem k obsluze přístroje.
 Chorus přístroj správně nastavený (viz návod k obsluze).
 Neměňte čárový kód umístěný na držadle jednorázového testu. Nepoužívejte
testy s poškozenými štítky s čárovými kódy.
 Defektní čárové kódy lze vložit do přístroje manuálně.
 Během skladování a použití nevystavujte jednorázové testy silnému světlu ani
výparům chlornanu.
 Použití silně hemolytických vzorků nebo vzorků s mikrobiální kontaminací může
vést k nereprodukovatelným výsledkům.
 Než vložíte jednorázový test do přístroje, zkontrolujte, že reakční jamka
neobsahuje cizí tělesa.
 Pipetujte sérum (50 µl) do pozice 1 jednorázového testu (viz obrázek 1).
 Nepoužívejte jednorázový test po uplynutí expiračního data.
 Zkontrolujte prosím, zda-li byl k přístroji Chorus připojen promývací roztok
určený pro testy ke stanovení autoimunitních onemocnění (Washing Buffer
Autoimmunity
86004.
8
Vzorky a jejich skladování
Jako vzorek k vyšetření může být použito sérum, získané odběrem žilní krve. Zachází
se s ním v souladu se všemi opatřeními předepsanými správnou laboratorní praxí.
Čerstvé sérum lze skladovat 4 dny při +2 °C až +8 °C. Séra je možné uchovávat
při -20 °C a lze je rozmrazit maximálně 3krát. Neskladujte vzorky v mrazácích s funkcí
vlastního rozmrazování. Rozmrazené vzorky je potřeba před použitím důkladně
protřepat. Kvalita vzorku může být vážně narušena kontaminací, která vede k
chybným výsledkům. Nepoužívejte silně lipemické, ikterické, hemolytické nebo
kontaminované vzorky. Test nelze použít na lidskou plazmu.
7/12
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010
CZ
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
9
Pracovní postup.
6. Otevřete balení, vyjměte požadovaný počet jednorázových testů a zbytek
uzavřete zpět do sáčku poté, co vytlačíte vzduch.
7. Zkontrolujte stav jednorázového testu (viz 7 Technické připomínky).
8. Pipetujte 50 μl neředěného séra do pozice 1 každého testu. Při každé změně
šarže soupravy použijte jednorázový test pro kalibraci.
9. Jednorázový test umístěte do přístroje. Proveďte kalibraci (je-li nutná) a vlastní
stanovení podle pokynů uvedených v návodu k obsluze Chorus přístroje.
10 Validita testu
Pomocí kontrolního séra ověřte správnost získaných výsledků. Použijte je v souladu
s instrukcemi uvedenými v návodu na obsluhu. Pokud test ukáže, že se hodnota
kontrolního séra pohybuje mimo přijatelné rozmezí, kalibraci je třeba opakovat.
Předchozí výsledky budou automaticky opraveny.
Pokud je výsledek kontrolního séra i nadále mimo přijatelné rozmezí, kontaktujte
prosím:
Tel:
+39-0577-587556 (centrum péče o zákazníka)
Tel:
+39-0577-587154 (technickou podporu)
11 Hodnocení výsledků
Přístroj Chorus vyjadřuje výsledky v arbitrážních jednotkách (AU/ml) vypočítané na
základě grafu, který je uložený k příslušné šarži v přístroji. Hodnocení výsledků je
popsáno v tabulce (Tabulka 1).
Tabulka 1 Hodnocení výsledků
AU/ml
Hodnocení
menší než 12
negativní
12 až 18
hraniční
větší než 18
pozitivní
V případě hraničního výsledku zopakujte test. Pokud zůstává test nadále hraniční, je
vhodné opakovat z nového odběru.
12 Interpretace výsledků
Serologický nález je třeba vždy interpretovat pouze v kontextu s výsledky ostatních
laboratorních testů a s klinickým obrazem pacienta.
8/12
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010
CZ
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
13 Charakteristika soupravy
13.1 Analytická citlivost
Analytická citlivost této soupravy byla zjištěna při hodnotě 1,0 AU/ml.
13.2 Diagnostická citlivost a specifita
Nebyla zjištěna žádná zkřížená reaktivita s jinými antigeny autoimunitních
onemocnění. Souprava vykazuje 100% specifitu a 47% citlivost.
13.3 Linearita
Vybraná séra byla testována pomocí této soupravy a bylo zjištěno, že ředění je
lineární. Kvůli heterogenní povaze lidských autoprotilátek se však mohou vyskytnout
vzorky, které se tímto pravidlem neřídí. Výsledky linearity jsou uvedeny v tabulce
(Tabulka 2).
Tabulka 2 Linearita
Vzorek
1
2
9/12
Ředění
Naměřená hodnota
AU/ml
Očekávaná hodnota
AU/ml
Výtěžnost (%)
Neředěný
56,9
57
99,8
1:2
27,6
28,5
96,8
1:4
13,8
14,3
96,5
1:8
6,9
7,1
97,2
Neředěný
98,6
100
98,6
1:2
46,8
50
93,6
1:4
24,9
25
99,6
1:8
12
12,5
96
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010
CZ
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
13.4 Přesnost měření
 Intra-assay a Inter-assay stanovení: testované vzorky byly opakovaně změřeny;
průměr naměřených hodnot, variační koeficient (%) jsou uvedeny v tabulce
(Tabulka 3).
Tabulka 3 Intra-assay a Inter-assay stanovení
Intra-assay
Vzorek
Inter-assay
Průměr (AU/ml)
Variační koeficient
(%)
Průměr (AU/ml)
Variační koeficient
(%)
1
56,4
3,8
58,7
4,2
2
75,4
7,9
82,7
7,7
3
254
6,1
264,4
6,6
14 Literatura
10. Schousboe I (1985) Blood 66: 1086-1091.
11. Nimpf J et al. (1986) Biochim. Biophys. Acta 884: 142-149.
12. Nimpf J et al. (1987) Artheriosclerosis 6: 109-114.
13. Harris EN et al (1983) Lancet Nov. 26 : 1211-1214.
14. Galli M et al. (1990) Lancet 335 : 1544-1547.
15. Wöhrle R et al : 82000) J. Autoimmunity 15 : A60.
10/12
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
CZ
16. Poznámky
11/12
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010
CZ
CHORUS Beta 2‑Glycoprotein‑M
15 Vysvětlení symbolů
Datum výroby
Použít do data
Nepoužívat opakovaně
Čtěte přiložené dokumenty
Výrobce
Počet testů
Skladovací teplota
Čtěte návod k použití
Biologická rizika
Katalogové číslo
Diagnostický zdravotnický prostředek in vitro
Číslo šarže
Kalibrátor
Pozitivní kontrola
17.
Diesse Diagnostica Senese
Via delle Rose 10
53035 Monteriggioni (Siena) – Italy
Tel. 0577-587111
12/12
IO-09/219; IFU 86052 – Ed. 07.04.2010