cholesterol hdl, přímý

CHOLESTEROL HDL, PŘÍMÝ
IMUNOINHIBIČNÍ METODA
Přímá metoda,dvousložková kapalná souprava
Diagnostická souprava pro kvantitativní in vitro stanovení “high density lipoprotein” cholesterolu
(HDL-C) v lidském séru nebo plasmě fotometricky.
REF
F03115
250 ml 4 x 50 ml
R1
1 x 50 ml
R2
Nutno objednat zvlášť:
F03711SV
1 x 1 ml LDL Cholesterol Calibrator
F14715SV
1 x 3 ml HDL/LDL kalibrátor
D13585SV
1 x 3 ml DIACAL Lipids
D99486
3 x 3 ml Diacon Lipids
D99486SV
3 x 3 ml Diacon Lipids
D11487
3 x 3 ml Diacon Lipids High
D11487SV
1 x 3 ml Diacon Lipids High
D98481
12 x 5 ml Diacon N
D14481
5 x 5 ml Diacon N
D98481SV
1 x 5 ml Diacon N
D98482
12 x 5 ml Diacon P
D14482
5 x 5 ml Diacon P
D98482SV
1 x 5 ml Diacon P
PARAMETRY MĚŘENÍ
Metoda:
kolorimetrie, endpoint, nárůst absorbance, imunoinhibice
Vlnová délka:
600/700 nm (bichromatické měření)
Teplota:
37 °C
Vzorek:
Sérum, heparinová plasma
Linearita:
do 4,66 mmol/l
Mez detekce:
0,009 mmol/l
Mez stanovitelnosti: 0,03 mmol/l
Shrnutí
Viz anglický návod
PRINCIP
Protilátky proti lidským -lipoproteinům v činidle R 1 vážou do komplexu lipoproteiny (chylomikrony, VLDL a LDL) kromě
HDL. Komplex antigen-protilátka blokuje enzymatické reakce probíhající v reakční směsi po přidání činidla R 2, takže
cholesterolesteráza a cholesteroloxidáza reagují pouze s HDL-cholesterolem. Vznikající peroxid vodíku je stanoven
oxidační kondensací F-DAOS s 4-aminoantipyrinem za účinku peroxidázy. Absorbance takto vzniklého barevného
komplexu je přímo úměrná koncentraci HDL-cholesterolu ve vzorku.
LDL, VLDL, Chylomikrony
Protilátka proti lidskému ß-lipoproteinu
HDL-Cholesterol + H2O +O2
CHE & CHO
> Antigen-protilátka komplex + HDL
>Cholesterol-3-on + mastné kyseliny + H2O2
H2O2 + F-DAOS + 4-Aminoantipyrin POD > modrý komplex + H2O
Rev. 07-1510
Strana 1 z 4
VYSVĚTLIVKY
F-DAOS
CHE
CHO
POD
=
=
=
=
N-Ethyl-N-(2-Hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-Dimethoxy-4-Flouroanilin, sodná sůl
Cholesterolesteráza
Cholesteroloxidáza
Peroxidáza
SLOŽENÍ A VÝSLEDNÁ KONCENTRACE
R1
Gooddův pufr
pH 7.0
4-Aminoantipyrin
Peroxidáza
Askorbátoxidáza
Protilátka k lidským β-lipoproteinům
R2
Good´s Buffer
pH 7.0
Cholesterolesteráza
Cholesteroloxidáza
F-DAOS
30
0.9
2,4
2,7
mmol/l
mmol/l
kU/l
kU/l
30
4
20
0.8
mmol/l
kU/l
kU/l
mmol/l
PŘÍPRAVA ČINIDEL
Start substrátem R 2: Činidla jsou připravena k přímému použití.
Start vzorkem: Není možný (eliminace ostatních lipoproteinů při inkubaci s R1)
STABILITA A SKLADOVÁNÍ ČINIDEL
Podmínky:
Chráňte před světlem!
Ihned po použití dobře uzavřete!
Zabraňte kontaminaci!
Nezmrazujte!
Skladování:
Stabilita:
při 2 – 8°C
po celou dobu exspirace
VZOREK - STABILITA A SKLADOVÁNÍ
Sérum nebo heparinová plasma. Před odběrem je doporučeno lačnění 12 hodin, oddělení séra nebo plasmy
od krevních elementů do 3 hodin. Zabraňte kontaminaci vzorku.
při 20 – 25 °C
2 dny
při 2 - 8 °C
7 dní
při - 20 °C
3 měsíce
Nepoužívejte kontaminované vzorky. Zmrazte pouze jednou!
Stabilita:
DALŠÍ POTŘEBNÝ MATERIÁL
Fyziologický roztok
Běžné laboratorní vybavení
MANUALNÍ PROVEDENÍ TESTU
Činidla vytemperujte na laboratorní teplotu.
Blank
Vzorek, kalibrátor
-
10 µl
1000 µl
1000 µl
vzorek nebo kalibrátor
Činidlo R 1
Promícháme, inkubujeme 5 min. při 37 °C, odečteme absorbanci (A1) a přidáme:
Činidlo R 2
250 µl
250 µl
Promícháme, inkubujeme 5 min. při 37 °C, odečteme absorbanci (A2).
A = [(A2 – A1) vzorek nebo kalib.] - [(A2 – A1) blank]
KALKULACE (optická dráha kyvety 1 cm)
HDL–C[mmol/l] =
Rev. 07-1510
A vzorku
A kalibrátoru
x konc.kal. [mmol/l]
Strana 2 z 4
PŘEVOD JEDNOTEK
mg/dl x 0.02586 = mmol/l
REFERENČNÍ ROZMEZÍ (7)*
≥0,9 mmol/l
Studie prokázala, že nízké hodnoty HDL_Cholesterolu (do 0,9 mmol/l u mužů a do1,1 mmol/l u žen) zvláště
ve spojení s vysokou hodnotou triglyceridů (nad 2 mmol/l) silně zvyšují riziko infarktu.
* doporučujeme v každé laboratoři stanovit vlastní referenční rozmezí
HODNOCENÍ FUNKČNÍ ZPŮSOBILOSTI
LINEARITA
Metoda pro stanovení koncentrace HDL-cholesterolu je lineární v rozsahu 0,03 – 4,66 mmol/l. Při vyšší
hodnotě koncentrace je nutno vyšetření opakovat ze vzorkem ředěným 1+ 1 roztokem NaCl o koncentraci
154 mmol/l. Výsledek násobíme faktorem 2.
REPRODUKOVATELNOST (při 37°C)
v sérii
průměr
SD
n = 20
[mmol/l]
[mmol/l]
Vzorek 1
0,98
0,006
Vzorek 2
1,80
0,012
CV
[%]
0,57
0,69
průměr
[mmol/l]
0,89
1,89
2,39
CV
[%]
0,96
0,58
0,66
den ze dne
n = 20
Vzorek 1
Vzorek 2
Vzorek 3
SD
[mmol/l]
0,009
0,011
0,016
POROVNÁNÍ METOD
Při porovnání Dialab HDL Cholesterolu (y) s komerčně dostupným testem (x) (52 vzorků)byly získány
následující výsledky: y=0.96x+0,041 mmol/l; r=0.990.
INTERFERUJÍCÍ LÁTKY
Nedochází k interferenci pokud je koncentrace nižší než:
kyselina askorbová
2,8 mmol/l
bilirubin
684 mol/l
hemoglobin
5
g/l
triacylglyceroly
13,5 mmol/l
KONTROLA KVALITY
Všechna komerční kontrolní séra, kde je uvedena hodnota HDL-cholesterolu pro tuto metodu stanovení.
Doporučujeme:
D99486
D99486SV
D11487
D11487SV
D98481
D14481
D98481SV
D98482
D14482
D98482SV
3 x 3 ml
3 x 3 ml
3 x 3 ml
1 x 3 ml
12 x 5 ml
5 x 5 ml
1 x 5 ml
12 x 5 ml
5 x 5 ml
1 x 5 ml
Diacon Lipids
Diacon Lipids
Diacon Lipids High
Diacon Lipids High
Diacon N
Diacon N
Diacon N
Diacon P
Diacon P
Diacon P
KALIBRACE
Doporučujeme:
F03711SV
1 x 1 ml LDL Cholesterol Calibrator
F14715SV
1 x 3 ml HDL/LDL kalibrátor
D13585SV
1 x 2 ml DIACAL Lipids
Hodnoty kalibrátorů jsou certifikovány referenčním materiálem JCCRM 224 (ReCCS).
Rev. 07-1510
Strana 3 z 4
AUTOMATIZACE
Na požádání jsou k disposici aplikační listy pro běžné typy automatických analyzátorů.
ODPADOVÉ HOSPODÁŘSTVÍ
Prázdný obal zneškodněte v rámci tříděného odpadu v souladu se zákonem o odpadech.
UPOZORNĚNÍ
1. Činidlo R1: Varování
H317: Může vyvolat alergickou kožní reakci
P280: Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv/ochranné brýle/obličejový štít.
P302+352: PŘI STYKU S KŮŽÍ: Omyjte velkým množstvím vody/mýdla.
P333+313: Při podráždění kůže nebo vyrážce: Vyhledejte lékařskou pomoc/ošetření
2. Ve vzácných případech poskytují vzorky pacientů s gamopatií nesprávné výsledky.(7).
3. N-acetycystein, acetaminofen a metamizol způsobují nízké výsledky vzorků léčených pacientů.
4. Pokud je použitá metoda založena na enzymovém stanovení esterů cholesterolu, nelze zcela vyloučit
kontaminaci nebo interference v dalších metodách. Pokud k tomu dojde, pročtěte si pečlivě manuíl
přístroje a upravte nastavení a mycí cykly.
5. Další informace naleznete v bezpečnostním listu. Dodržujte správnou laboratorní praxi.
6. K diagnostickým účelům je potřeba porovnat výsledky diagnostických testů s anamnézou pacienta
s celkovým klinickým obrazem.
7. Pouze pro profesionální použití.
LITERATURA
1. Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids, lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of
Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B Saunders Company; 1999. P. 809-61.
2. Recommendation of the Second Joint Task Force of European and other Societies on Coronary Prevention. Prevention of coronary
heart disease in clinical practice. Eur Heart J 1998; 19: 1434-503.
3. Wiebe DA, Warnick GR. Measurement of high-density lipoprotein cholesterol. In: Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH, eds.
Handbook of lipoprotein testing. Washington. AACC Press, 1997. p. 127-44.
4. Nauck M, Maerz W, Wieland H. New immunoseparationbased homogenous assay for HDL-cholesterol compared with three
homogenous and two heterogeneous methodsfor HDL-cholesterol ClinChem 1998; 44: 1443-51.
5. Guder WG, Zawta B et al. The quality of DiagnosticSamples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001; p.22-3.
6. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 5thed. Volume 1 and 2. Washington, DC: The American
Association for Clinical Chemistry Press 2000.
7. Schaefer EJ, McNamara J. Overview of the diagnosis andtreatment of lipid disorders. In: Rifai N, Warnick GR,
Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing.Washington: AACC Press; 1997. p. 25-48.
8. Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinicalchemistry assays: Mechanism, detection and prevention.
Clin Chem lab Med 2007; 45(9); 1240-1243.
Bezpečnostní listy jsou k dispozici na vyžádání
Skladujte při 2-8 °C, nezamrazujte.
Určeno pro "in vitro" diagnostické použití.
DIALAB spol. s r.o.
Nám. Osvoboditelů 1, 153 80 Praha 5
Tel./Fax:257 910 255
257 910 260
257 910 263
e-mail: [email protected]
IČO: 14889200
Rev. 07-1510
Strana 4 z 4