Dokument ke stažení

Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem
Moskevská 15, 400 01, Ústí nad Labem
Z Á V Ě R E Č N Á
Z P R Á V A
o řešení programového projektu s účelovou podporou Interní grantové
agentury ministerstva zdravotnictví ČR
Název programu:
Protektivní a imunomodulační vliv suplementace RNA,
srovnání klinického testování a experimentálního
modelu
Registrační číslo:
NJ 6888 – 3
Doba řešení projektu:
2001 – 2003
Řešitel projektu:
MUDr. Josef Richter
Spoluřešitelé:
RNDr. Petr Šíma, CSc. MBÚ AV Praha
MUDr. Ivan Pfeifer, CSc., Univerzita Karlova Praha
Odborná spolupráce:
RNDr. Vlastimil Král, CSc., ZÚ se sídlem v Ústí n. Lab.
MUDr. Dalibor Jílek, CSc., ZÚ se sídlem v Ústí n. Lab.
Ing. Ivana Stiborová, ZÚ se sídlem v Ústí n. Lab.
MUDr. Stanislava Richterová, ZÚ se sídlem v Ú. n. Lab.
Jitka Pešková, ZÚ se sídlem v Ústí nad Labem
MUDr. Dagmar Slížová, Ústav anatomie LFUK HK
Mgr. Lucie Dobiášová, ZÚ se sídlem v Ústí n. Lab.
Ekonomicko-hospodářské zajištění:
Ing. Miroslav Štráchal
Ing. Jana Adamcová
Martina Škvárová
Irena Zemanová
1
Obsah
Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem 29.1.2004
Úvod
3
EXPERIMENTÁLNÍ ČÁST
4
1. Cíl experimentální části projektu
4
2. Experimentální model
4
3. Výsledky
5
4. Preventivní programy
13
5. Suplementace školních dětí
15
6. Nové cesty suplementace
17
KLINICKÁ ČÁST
19
1. Přínos speleoterapie s nutričním režimem
pro léčbu alergických onemocnění
19
2. Ovlivnění zdravotního stavu u jedinců s klinickými
projevy únavového syndromu s definicí EBV infekce
22
3. Suplementace pacientů s inhalační alergií způsobenou
roztoči domácího prachu
23
4. Suplementace nukleotidy u zánětlivých onemocnění
gastrointestinálního traktu
24
5. Výstup
26
Seznam použité literatury
27
Publikace grantu - seznam
30
2
Úvod
Neadekvátní výživa se podílí na narušení zdravotního stavu obyvatelstva nejenom nesprávným
způsobem stravování, ale i nevyvážeností základních nutričních složek v potravinách. Obecně je
kalkulováno se skutečností, že 15-25% všech úmrtí má souvislost s nesprávnou výživou.
Optimální zastoupení vitaminů a stopových prvků ve stravě je stále opakovaným požadavkem
podmiňujícím kvalitu zdravotního stavu populace. Jednostranná skladba potravy působí na imunitní
systém jedince analogicky jako její nedostatek a to zejména v obou stranách věkového rozpětí
člověka, v období růstu (dětství) a v období stárnutí. Z těchto základních předpokladů vycházejí
současné koncepce světové zdravotní politiky, které se soustřeďují na preventivní programy se
snahou postihnout pokud možno nejširší vrstvy senzitivní populace. Především z těchto důvodů by
měl být do naší zdravotní politiky zahrnut výzkum a klinické ověřování různých zdravotních
doplňků, u kterých je prokázáno jejich kladné působení na metabolické, fyziologické a imunitní
funkce. Tyto aspekty se významně prosazují ve vyspělých zemích, kde je věnována zvýšená
pozornost otázkám potravinové suplementace různými mikronutrienty. Jak v Japonsku, USA, tak
již i v některých zemích Evropy se sledují otázky tzv. funkční stravy. Řada výše uvedených
aspektů je řešena i v materiálech SZO „ Zdraví pro všechny v 21.století“.
Cílem našeho projektu bylo ověření možností ovlivnění zdraví a imunitního stavu výživou
cestou suplementace dietním přípravkem s vysokým obsahem DNA. Sledovali jsme účinky vysoce
čištěné DNA kvasnicového původu na vybrané imunitní parametry a to jak v experimentu tak i
v klinických a preventivních studiích. Zjistili jsme, že stejný účinek lze dosáhnout s preparátem
Imuregen s vysokým obsahem aminokyselin, polypeptidů, oligo a polynukleotidů. Výhodou tohoto
preparátu je vysoká finanční dostupnost (náklady na jeden den aplikace 20x nižší). Stanovili jsme
optimální dávku suplementu a to v závislosti na dávkování preventivním i dávkování léčebném.
V záměru projektu jsme vycházeli z předpokladu, že imunoregulační účinky exogenní DNA
spočívají v její využitelnosti pro syntézu nukleových kyselin při dělení buněk. Dietární nukleotidy
jsou z hlediska energetického krytí v této aplikaci daleko výhodnější i proto, že jejich částečné
štěpení v GI traktu vede k jejich rychlému využití a tím ke zlepšení reparace buněčných substrátů
různých tkání organizmu závislých na přívodu exogenních nukleotidů. V řadě případů lze hovořit o
tom, že dietární nukleotidy jsou z tohoto hlediska ve významu výživy esenciální. Absence
dietárních nukleotidů v organizmu člověka může vést i k příznakům malnutrice, která je popisována
pod názvem NAIDS (Nutritionally Acquire Immune Disfunction Syndromes). Snažili jsme se v naší
studii nejenom potvrdit funkčnost suplementace dietárními nukleotidy, ale i jejich příznivý efekt
jak v preventivní tak v klinické aplikaci. V rozvržení jednotlivých klinických studií jsme překročili
rozsah zadání vzhledem k tomu, že jsme dosáhli významného účinku při podávání dietárních
nukleotidů u řady onemocnění. Proto pokračujeme v této studii klinických indikací dále. Za
podstatný přínos považujeme možnost rozšíření preparátu ve formě nápoje, který v současné době
zkouší společnost Dobrá voda.
Vzhledem k tomu, že rozsah studie byl v takové šíři, bude řada dalších výstupů publikována
v průběhu roku 2004. České i zahraniční publikace budou postupně zveřejňovány jednak po
zpracování dokončených etap, dále pak i po dokončení studií v dostatečném počtu sledovaných
jedinců.
3
Experimentální část
1.Cíl experimentální části projektu
V rámci cíle projektu, kterým je ověření možnosti pozitivního ovlivnění imunitního systému
výživou prostřednictvím suplementace potravinovými přípravky s vysokým obsahem dietárních
nukleotidů (dNT) a tím celkového zdravotního stavu populace, bylo nutné doplnit klinické studie
výsledky na experimentálním zvířecím modelu, které nelze získat v klinických studiích z
praktických nebo etických důvodů u lidí, a které jsou významné pro objasnění mechanismů
imunoregulačního působení dNT.
1.1. Výchozí premisy:
Přesný mechanismus ovlivnění imunitních procesů dNT není zcela jasný. Předpokládá se, že dNT
v organismu působí na mnoha úrovních, zejména zvyšují zásobu endogenních nukleotidů, které jsou
využívány proliferujícími a diferencujícími se imunokompetentními buňkami. Intenzivní nástup
tvorby nukleotidů po aktivaci imunokompetentních buněk antigenem je vysvětlován vysokými
požadavky na přípravu energetického metabolismu potřebného pro syntézu nukleových kyselin a
také tím, že lymfoidní buňky mají omezenou schopnost syntézy a endogenní reutilizace zejména
pyrimidinových nukleotidů.
Bylo prokázáno, že omezení dNT ve stravě se odrazí ve snížení imunologické pohotovosti
organismu, zvláště reakcí buněčné (T-složky) imunity (odhojení aloštěpu a snížení proliferace
lymfoidních buněk po alogenní indukci, snížení produkce interleukinu-2 a nižší exprese receptoru
pro IL-2) a humorální (B-složky), která je efektivní v antiinfekční imunitě.
Naopak suplementace dNT podporuje nejen normální fyziologické funkce, ale stává se
nezbytnou pro zajištění regeneračních pochodů. Řada údajů naznačuje, že antigenem stimulované
imunocyty a buňky aktivně metabolicky se účastnící imunitních funkcí (makrofágy, granulocyty aj.)
mají zvýšené požadavky na přísun dNT.
Proliferačně diferenciační procesy antigenem aktivovaných lymfocytů vyžadují další zvýšený
přísun nukleotidů (ať už zajištěný endogenní syntézou, nebo reutilizací z exogenního zdroje nutrice), které jsou využívány v energetickém metabolismu a později při syntéze nukleových
kyselin při klonální expanzi v průběhu imunitní odpovědi.
2.Experimentální model
Pro stanovení základních parametrů antiinfekční a protinádorové imunity byla jako
experimentální zvířata použity myši definovaného inbredního kmene Balb/c (MBÚ AV ČR, Praha) a
myši definovaného inbredního kmene C57Bl/6 (AnLab, Praha) ve stáří 3 měsíců a hmotnosti cca
20g chované za standardních podmínek (teplota, osvit, unifikovaná základní dieta ad libitum);
kontrolní a testovací skupiny byly po 16 myších. C57Bl/6 myši byly s.c. inokulovány melanomovými
buňkami B16F10 (Weizmann Inst., Rehovot, Israel). Všechny pokusy byly prováděny ve dvou
paralelních liniích a třikrát opakovány.
Jako zdroje dNT bylo použito standardní vysoce čištěné kvasinkové RNA (Ribonucleic acidcore Torula sp. Type II-C, Sigma-Aldrich Chemie, Gmbh, Steinheim Germany) a přípravku
Imuregen® (Uniregen s.r.o., Náchod) v preventivním časovém protokolu (4 týdny) pitného
(krmného) programu ad libitum a dávkování (100 mg/l (kg) dNT) stanovených podle programů
doporučovaných literárními údaji.
4
Vycházejíce z výše uvedených předpokladů, stanovovali jsme základní parametry antiinfekční a
protinádorové imunity po aplikaci dNT podle zadaného harmonogramu projektu u myšího
experimentálního modelu ve srovnání s kontrolními (dNT neovlivněnými) zvířaty.
3. Výsledky
3.1. Ovlivnění produkce IL-2, IL-4, IL-12, TNF-α a IFN-γ
3.1.1. Kritéria výběru cytokinů:
IL-2 je markerem aktivace Th1 lymfocytů antigenem. Je růstovým faktorem pro T i B
buněčnou populaci a také Tc a NK buněk. V Th buňkách stimuluje tvorbu IL-4 a IFN-a. Stimuluje
proliferaci a diferenciaci CTL a NK buněk a zvyšuje jejich cytotoxickou aktivitu. Rovněž zvyšuje
proliferaci a diferenciaci B buněk. Zvýšení produkce IL-2 znamená zvýšení T složky imunity a IL-2
je terapeuticky využíván v onkologii.
IL-4 je produkován Th2 lymfocyty a stimuluje diferenciaci B buněk ke tvorbě IgM a IgG
protilátek. Rovněž podporuje diferenciaci CTL a granulocytů, snižuje produkci prozánětlivých
cytokinů (např. TNF- α).
IL-12 je produkován buňkami monocytárního-makrofágového systému a podporuje aktivaci a
cytotoxicitu NK buněk a jejich přeměnu do účinnějších LAK buněk podobně jako IL-2. Dále je
klíčovým stimulátorem tvorby IFN-γ v Th1 buňkách. Je aplikován při léčbě nádorů a parazitárních
onemocnění.
TNF-α (kachektin) má cytostatické a cytotoxické účinky na nádorové buňky. Jako
prozánětlivý faktor (endogenní pyrogen) indukuje zánět (přes stimulaci tvorby hlavně IL-1 a GMCFS) a podporuje toxické účinky endotoxinu G- baktérií. Produkce TNF-α je inhibována jinými
cytokiny a také IL-4.
IFN-γ má pleiotropní regulační účinky v imunitním systému. Mimo jiné podporuje diferenciaci
B a T buněk a stimuluje expresi HLA-1, čímž usnadňuje protinádorový zásah CTL. Je aktivátorem
makrofágů a endoteliálních buněk. Rekombinovaný IFN-γ je používán pro prevenci i terapii virových
onemocnění (Actimun).
3.1.2. Uspořádání experimentu:
Preventivní aplikace dNT (Torula) 30 dnů myším kmene C57Bl/6 inokulovaným nádorovými
melanomovými buňkami. Koncentrace cytokinů byly identifikovány metodou ELISA (viz Obr. 1).
Obr. 1. Srovnání koncentrací vyšetřovaných cytokinů oproti kontrolám
5
pg/ml
Srovnání koncentrací vyšetřovaných cytokinů oproti
kontrolám
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
kontrola
Torula
IL-2
IL-4
IL-12
TNF-a
IFN-gama
cytokiny
3.1.3. Závěry:
Preventivní 30 denní aplikace dNT u nádorových myší se oproti neovlivněným kontrolám
projevila významným zvýšením IL-2, IL-4, IL-12 a nejvíce IFN-γ, zatímco produkce TNF-α nebyla
ovlivněna a jeho koncentrace zůstaly na úrovni kontrol.
Lze konstatovat, že preventivní aplikace dNT podporuje produkci regulačně významných
cytokinů, zejména těch, které jsou důležité pro rozvoj protinádorové složky imunity, tj. přímo
stimulují diferenciaci a aktivitu CTL a buněk NK (IL-2, IL-4, IL-12, IFN-γ), a z nichž některé jsou
již terapeuticky používány (IL-2, IL-12, IFN-γ), anebo jsou důležité pro rozvoj komplexní imunity,
tozn. také B-složky, na níž spočívá antiinfekční imunita (IL-2, IL-4) a buněk monocytárněmakrofágového systému důležitých při zpracování a prezentaci antigenu při T a B buněčných
kooperacích (IFN-γ). Naopak preventivní aplikace dNT nezpůsobila zvýšení TNF-α, který je
významným prozánětlivým faktorem a lze nepřímo usuzovat, že by tak mohlo být v důsledku
zvýšení produkce IL-4, který TNF-α inhibuje (viz výše).
Lze uzavřít, že účinky dNT aplikovaných formou preventivního dlouhodobého pitného režimu
mají v prostředí experimentálně navozeného nádorového procesu (myš-melanom) prokazatelně
podpůrný vliv na produkci cytokinů pozitivně ovlivňujících přípravu a rozvoj protinádorové složky
imunity. Naopak, nepůsobí na výši produkce TNF-α, který přes svoje cytostaticko-cytotoxické
účinky je především silným prozánětlivým faktorem.
3.2. Kvantifikace buněk tvořících hemolytické protilátky IgM a IgG
3.2.1. Kritéria stanovení počtů IgM a IgG:
IgM představuje hlavní třídu protilátek při nástupu primární imunitní reakce. Výkonná
humorální imunita v pozdějších fázích imunitní odpovědi spočívá především na protilátkách třídy
IgG. Kvantifikací buněk tvořících hemolytické protilátky IgM a IgG lze získat informaci, do jaké
míry jsou preventivní aplikací dNT ovlivněny nejen diferenciace prekurzorových
imunokompetentních buněk pro obě třídy imunoglobulinů, ale také dynamika molekulárního
přesmyku IgM v IgG v průběhu primární imunitní reakce.
6
3.2.2. Uspořádání pokusu:
Absolutní počty slezinných lymfoidních buněk tvořících hemolytické protilátky tříd IgM a IgG
po i.p. imunizaci T-závislým antigenem (0,5 ml 4% ovčích erytrocytů) 5. den primární imunitní
odpovědi byly zjišťovány modifikovanou Jerneho plakovou metodou, kdy jsou buňky secernující
protilátky identifikovány vazbou morčecího komplementu a tvorbou hemolytických zón (plaků).
Byly srovnávány myši Balb/c po 30. denní aplikaci preventivního pitného režimu dNT (Torula a
Imuregen). Hodnoty jsou uvedeny jako průměry absolutních počtů buněk tvořících hemolytické
protilátky stanovených u jednotlivých pokusných zvířat a přepočteny na 10 8 lymfoidních buněk.
Průměrné hodnoty paralelních pokusů, které byly třikrát opakovány jsou uvedeny v Tab.1. a Obr. 2.
Tab. 1. Průměrné absolutní počty buněk tvořících hemolytické protilátky IgM a IgG v přepočtu na
108 slezinných buněk
IgM
SD
IgG
SD
Kontrola
5837
236
33281
3563
Torula
15889
770
115945
1599
Imuregen
14674
269
105170
3344
Obr. 2. Průměrné absolutní počty buněk tvořících hemolytické protilátky IgM a IgG v přepočtu na
108 slezinných buněk
Průměrné absolutní počty buněk tvořících hemolytické protilátky
IgM a IgG
140000
počet buněk
120000
100000
80000
kontrola
Torula
60000
Imuregen
40000
20000
0
IgM
IgG
3.2.3. Závěry:
Po 30 denní preventivní aplikaci dNT ve formě pitného režimu u obou testovaných přípravků
Torula a Imuregen významně zvýšily absolutní počty buněk tvořících hemolytické protilátky IgM a
IgG ve slezině imunizovaných zvířat oproti kontrolním dNT nesuplementovaným zvířatům. Rozdíly
mezi oběma testovanými přípravky nebyly významné. Zvýšení absolutních počtů buněk však není
exhaustivní (přesahuje pouze 1 řád).
Lze očekávat, že po dlouhodobém přísunu dNT ve formě preventivního pitného režimu
s testovanými vzorky Torula a Imuregen se vytváří tendence k neexhaustivní stimulaci
diferenciace imunokompetentních buněk k tvorbě humorálních ochranných protilátek a tím k vyšší
7
pohotovosti B buněčné složky imunitního systému, na jejíž buněčné kapacitě přímo závisí účinnost
antiinfekční imunity.
3.3. Ovlivnění cytotoxicity efektorových buněk (přirozených zabíječů NK)
3.3.1. Kritéria určení cytotoxické kapacity NK buněk:
Stanovení cytotoxické aktivity lymfoidních buněk umožňuje získat informaci o působení dNT na
diferenciaci NK buněk.
3.3.2. Uspořádání pokusu:
Buněčná cytotoxicita je kvantifikována měřením množství 51Cr, který je uvolňován ze značených
cílových (nádorových) buněk (T), které jsou zabíjeny efektorovými NK z buněk (E) testovaného
zvířete. Jako cytotoxický testovací systém byly použity cílové buňky myší nádorové linie YAC-1
(American Type Culture Collection).
Byly srovnávány myši Balb/c po 30. denní aplikaci preventivního pitného režimu dNT přípravků
Torula a Imuregen. Hodnoty jsou uvedeny jako průměrná procenta cytotoxické aktivity splenocytů
po 3,5 a 18 hodinové inkubaci efektorových buněk s cílovými buňkami YAC1 značenými 51Cr v
poměrech E : T: 200 : 1; 100 : 1; 50 : 1; 25 : 1. Hodnoty cytotoxické aktivity byly vypočítány podle
vztahu:
% cytotoxicity = (cpmexp - cpmspont : cpmmax - cpmspont) x 100
z maximálních výtěžků cytotoxicity a jsou vyjádřeny jako průměry procent cytotoxických aktivit
stanovených u jednotlivých pokusných zvířat a 3 x opakovaných pokusů (Obr. 3).
Obr. 3. Průměrná cytotoxická aktivita lymfoidních efektorových buněk sleziny (NK) po preventivní
aplikaci pitného režimu dNT; srovnání přípravků Torula a Imuregen
8
Cytotoxický test proti cílovým buňkám Yac
60
% cytotoxicity
50
40
kontrola
dNT
30
20
10
0
Torula
3,5h
Torula
18h
Imuregen
3,5h
Imuregen
18h
3.3.3. Závěry:
30 denní preventivní aplikace dNT ve formě pitného režimu u obou testovaných přípravků
Torula a Imuregen nevýznamně zvýšila cytotoxickou aktivitu efektorových cytotoxických
splenocytů (NK buněk) zaměřených na nádorové cílové buňky YAC1 v in vitro modelovém buněčném
systému.
Lze usuzovat, že dlouhodobý přísun dNT podávaných v přípravcích Torula a Imuregen formou
preventivního pitného režimu bude mít tendenci pozitivně stimulovat některou součást
protinádorové složky imunity. Tyto výsledky odpovídají nálezům při testování proliferační aktivity
kostimulované mitogenem ConA, který stimuluje hlavně T-buněčnou subpopulaci (viz níže odst.
3.4.3).
3.4. Stanovení proliferačních aktivit lymfoidních buněk
3.4.1. Kritéria stanovení proliferačních aktivit:
Imunokompetentní buňky po setkání s antigenem procházejí proliferačními procesy, v jejichž
průběhu se diferencují do terminálního stádia efektorových buněk. Proto je stanovení proliferační
aktivity lymfoidních buněk základní informací o stavu imunitního potenicálu organismu. Kostimulace
T-závislým mitogenem ConA určuje vliv zkoušené látky na T buněčnou složku, kostimulace LPS dává
obraz o vlivu na B buněčnou složku.
3.4.2. Uspořádání pokusu:
Buněčná proliferace v proliferačním testu ex vivo je kvantifikována měřením množství 3Hthymidinu, který se v S fázi buněčného cyklu inkorporuje do jaderné DNA.
9
Byly srovnávány myši Balb/c po 30. denní aplikaci preventivního pitného režimu dNT přípravků
Torula a Imuregen. Byla měřena celková bazální („klidová“) proliferace splenocytů neovlivněných
mitogeny a porovnávána s proliferací po kostimulaci ConA a LPS. Průměrné hodnoty proliferačních
aktivit jsou uvedeny jako proliferační indexy udávající intenzitu buněčného dělení (viz Obr. 4).
Obr.4. Bazální a kostimulované proliferační aktivity
Indexy bazální a stimulované proliferace ConA a LPS u
lymfoidních slezinných buněk
proliferační index
14000
kontrola
Imuregen
Torula
12000
10000
8000
6000
4000
2000
0
bazální
ConA
LPS
3.4.3. Závěry:
Celková bazální proliferace lymfoidních slezinných buněk není po 30 denní preventivní aplikaci
dNT ve formě pitného režimu u obou testovaných přípravků (Torula a Imuregen) významně
ovlivněna. Oproti proliferačním aktivitám kontrol (neovlivněných dNT) jsou významně zvýšeny
proliferační aktivity kostimulovaných lymfoidních buněk dNT ovlivněných myší (Torula a
Imuregen), zejména však ConA indukovaná T buněčná subpopulace (srv. výše odst. 3.3.3.).
Aplikace dNT podávaných v přípravcích Torula a Imuregen formou dlouhodobého preventivního
pitného režimu významně stimuluje proliferující lymfoidní buňky indukované T i B mitogeny. Lze
očekávat, že přísun dNT pozitivně ovlivní více T buněčnou složku imunity.
3.5. Průtoková cytometrie
Průtokovou cytometrií byly identifikovány specifické povrchové markery IgM a IgG, CD4 a
CD8, CD11b, CD14, CD45 a Dx5 na splenocytech experimentálních myší obou kmenů, kterým byly
aplikovány dNT (Torula a Imuregen) a kontrolních myší (bez ovlivnění dNT). Aplikace dNT
v preventivním 30 denním pitném režimu neovlivnila expresi žádného ze sledovaných markerů
oproti kontrolám. Z tohoto důvodu nejsou uvedeny výsledné hodnoty.
3.5.1. Závěr
U experimentálního modelu (myši Balb/c; nádor nesoucí myši C57Bl/6) neměla preventivní
aplikace dNT (zdroj Torula a Imuregen) podávaných po 30 dní formou pitného režimu obecně
toxické účinky na organizmus.
1
Imunologické testy zaměřené na základní projevy přirozené i specifické humorální a
protinádorové imunity neprokázaly inhibiční účinky v žádném z experimentálních uspořádání.
Preventivní aplikace dNT průkazně podporuje buněčnou i humorální složku imunity a tak i
celkovou imunitní pohotovost organismu.
Experimentální testování naznačilo, že dNT by se mohly stát vhodným suplementem nutrice
doporučované v preventivních zdravotnických programech.
3.6.
Regenerace sliznice ilea dietou obohacenou nukleotidy
Epitel gastrointestinálního traktu hraje důležitou roli nejen při trávení a vstřebávání živin, ale
i při předávání antigenních a patogenních signálů ke střevní lymfatické tkáni. Nejčastější příčinou
selhání imunitního systému jsou různé stupně a formy malnutrice.
Vědecké práce, zabývající se v posledních letech problematikou dietárních nukleotidů docházejí
k závěru, že oligo- a polynukleotidy, které jsou přítomny v potravě, představují nejdůležitější
složky výživy vzhledem k jejich významu pro celou řadu metabolických a energetických pochodů
v organizmu. Nukleotidy jsou základem pro syntézu nukleových kyselin při regeneraci tkání.
Exogenní nukleotidy jsou nezbytným stavebním kamenem pro některé buněčné systémy, neschopné
využít endogenních zdrojů, například buňky červené krevní řady, bílé krevní řady, centrální
nervové soustavy i částečně buněčný substrát jaterní tkáně.
Většina dosud publikovaných prací udává příznivý vliv dietárních nukleotidů na růst a zrání
střevního epitelu. Již dříve jsme publikovali výsledky zvířecího modelu s podáváním extraktů
živočišného původu s výrazným dopadem na zvýšení imunitní odpovědi.
3.6.1 Materiál a metodika
V této studii byly tříměsíční samice myší kmene Balb/c krmeny jednak standardní dietou ( 1 ),
dietou obohacenou o suplement ( 2 ) a dále pak dietou a vodou obohacenou suplementem v dávce
100mm/l. Ve všech případech byl podáván preparát Imuregen firmy Uniregen s.r.o., Náchod, ČR.
Doba podávání suplementu byla ve všech případech čtyři týdny.
Vzorky terminálního ilea ze všech tří skupin byly odebrány pro histologické vyšetření a pro
pozorování v rastrovacím elektronovém mikroskopu. Tkáň pro histologické vyšetření byla fixována,
zalita do parafinu a barvena hematoxilinem eozinem a metodou na průkaz kyselých
mukopolysacharidů podle Hale-Mullera a studována ve světelném mikroskopu. Délka klků střevní
sliznice byla hodnocena morfometricky. Vzorky pro rastrovací elektronový mikroskop byly
vysušeny hexametyldisylazanem, pozlaceny a prohlíženy v rastrovacím elektronovém mikroskopu
TESLA BS 301.
3.6.2.Výsledky
V žádné sledované skupině nebyly zjištěny patologické změny střevních klků. Nejvyšší nárůst
klků byl zjištěn ve skupině č.3, které byla podávána standardní dieta s vodou suplementovanou
Imuregenem. Vyhodnocení morfometrických údajů prokázalo statisticky výzanmný rozdíl v délce
klků jednotlivých experimentálních skupin ( graf l.) Morfologie jednotlivých vybraných nálezů ze
skupiny 1 – 3 je znázorněna na obrázcích 1, 2 a 3.
1
Obr.1.
Obr.2.
1
Obr.3.
3.6.3. Statistické zhodnocení
Rozptyly naměřených hodnot výšky klků kontrolní a obou pokusných skupin byly porovnána
Snedeckovým F – testem. K ověření platnosti nulové hypotézy o rozdílu průměrů naměřených
hodnot byl použit Studentův t-test. Rozdíly v průměrných hodnotách výšky klků byly považovány
za statisticky významné, pokud hodnota testovací charakteristiky byla větší než příslušný kvantil
Studentova rozdělení na 5% hladině významnosti.
3.6.4. Závěry
V experimentu byl nalezen statisticky významný nárůst průměrné délky klků terminálního ilea u
myších samic kmene Balb/c po 4 týdnech podávání směsi oligo- a polynukleotidů v dietetickém
přípravku Imuregen oproti kontrolní skupině.
K výraznějšímu nárůstu došlo v případě podávání Imuregenu v pití ( p<0,0005 )než v případě
obohacení krmiva tímtéž přípravkem ( p< 0,025 ). V experimentálních skupinách zvířat nebyly
nalezeny žádné patologické změny střevních klků.
Při daném pokusném uspořádání byl tudíž prokázán pozitivní vliv
směsi nukleotidů
v dietetickém imunostimulačním přípravku Imuregen na regeneraci a růst epitelu terminálního ilea.
1
4. Preventivní programy
4.1. Nutriční kompenzace u dětí předškolního věku
Je stále více důkazů o tom, že i ve společnosti s vysokým standardem životní úrovně dochází
k nerovnoměrnému přísunu složek výživy, což si vynucuje řešení kompenzačními nutričními
opatřeními. V posledních letech dochází ke snahám o zlepšení kvality suplementace. K vitamínům a
minerálům přistupují další mikronutrienty, jako například flavonoidy, DNA a nukleotidy. Podnětem
pro tuto část práce byla snaha ověřit účinek preparátu s vysokým obsahem oligo a polynukleotidů u
rostoucí dětské populace.
4.1.1. Soubor a metodika
Soubor dětí mateřských škol byl rozdělen do dvou skupin. První skupina dostávala
suplementovanou stravu, druhá skupina dostávala stravu s placebem. Kurz suplementace je
znázorněn na obrázku 1.
Program projektu suplementace
Supleme
ntace
29.11.o
dběry
břez
prosinec en
listopad
14.
3.
20.
6.
dub
en
květ
en
červ
en
4.1
0.
červe
nec
srp
en
zá
ří
říj
en
Suplementace probíhala v rozmezí 3 měsíců na jaře a stejnou dobu na podzim.
V průběhu studie byly provedeny odběry slin a to vždy před suplementací a po ní v jarním i
podzimním období.
Ve slinách byla sledována koncentrace lyzozymu, SIgA a albuminu metodou jednoduché
radiální imunodifuze. Z hodnot SIgA a albuminu byl kalkulován sekreční index.
Byla sledována nemocnost dětí v průběhu suplementace a to jednak z hlediska frekvence
onemocnění, dále pak z hlediska délky onemocnění.
Výsledky byly statisticky zhodnoceny s použitím příslušenství Microsoft Excel a s použitím
programu dostupných v InStat 3. Dvojice vzorků jednotlivých dětí byly zhodnoceny s pomocí
dvoustranného párového T-testu.
4.1.2. Výsledky
Z výsledků je patrné, že největší změny při porovnání hodnot suplementovaného a
kontrolního souboru jsme nalezli u hodnot albuminu. Zatímco u suplementovaných došlo vždy po
1
kursu suplementace k poklesu hodnot albuminu (snížená zánětlivá reakce), u kontrolního souboru
docházelo v obou obdobích k vzestupu (obr.2).
Obr. 2: Hodnoty salivárního albuminu u suplementovaných
a kontrol
odběr č.
4
3
2
Nukleotidy
Kontrola
1
0
20
40
60
albumin mg / L slin
80
100
120
Méně jsou výrazné změny hodnot lysozymu, kde jak u kontrol, tak u suplementovaných byly
změny výrazněji ovlivněny sezónní a cirkadiánní rytmicitou (obr. 3). Pouze po jarní suplementaci
došlo k výraznějšímu vzestupu hodnot lyzozymu ve skupině suplementovaných.
1
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
p=0,045
lysozym mg/L
Obr. 3.: Hodnoty lyzozymu u kontrolních a suplementovaných dětí
Suplementovaní
Kontrolní soubor
1
2
odběr č.
3
4
Stejné nálezy jsme zjistili v hodnotách SIgA, kde rovněž došlo k významné změně u
suplementovaných pouze v jarním odběru po suplementaci.
1,9
1,85
1,8
1,75
1,7
1,65
1,6
NS
Suplementovaní
p=0,0015
SIgA mg / L
Hodnoty SIgA u kontrolních a suplementovaných dětí (log. průměry)
NS
NS
Kontrolní soubor
1
2
odběr č.
1
3
4
Jak je patrné z grafu 4, jsou nálezy sekrečního indexu (poměr albumin / SIgA) statisticky
vysoce významné, což je ovlivněno především poklesem zánětlivé iritace ve skupině
suplementovaných.
1,3
1,2
1,1
1
0,9
1
p=0,0005
Poměr SIgA / Albumin u suplementovaných a kontrol ( log.
průměry)
Suplementovaní
Kontrolní soubor
2
3
4
Odběr č.
Za podstatný přínos suplementace považujeme výrazné ovlivnění nemocnosti ve sledovaném
souboru suplementovaných dětí. V ovlivňované skupině byl snížen výskyt onemocnění o 50% a
statisticky významně zkrácen počet prostonaných dní u dětí se suplementačním režimem. Tyto
nálezy považujeme za přínosné i z toho hlediska, že potvrzují význam racionální suplementace a
dokumentují náš názor, že ústup od suplementační politiky dětské populace není příliš šťastným
řešením. Uvědomujeme si to především v kontextu se vstupem do Evropské unie, kde je
suplementace především mléčnými produkty běžnou normou.
5. Suplementace školních dětí
5.1. – rómská populace
Jako vstupní studii pro projekt SZO-RHN jsme provedli komplexní sledování dětské
populace základních škol v Ústí nad Labem. V rámci této studie byla sledována
nejenom
ekonomická a sociální kritéria, ale i aspekty zdravotní. Vycházeli jsme z literárních podkladů
uvádějících predispozici pro řadu onemocnění, například zvýšenou
prevalenci poruch štítné žlázy. Přistoupili jsme k modelu suplementace, ve kterém jsme použili
humanizované mléko (přídavek nukleotidů) spolu s navážkou 150ug jodidu draselného denně.
Přesnídávky pro tuto studii připravila firma Nutricia Opočno. Suplement byl podáván po dobu 2
měsíců.
5.1.1. Soubor a metoda
U souboru 120 rómských dětí jsme provedli odběry slin před a po nutriční intervenci. Z celkového
počtu 120 dětí jsme získali dvojice vzorků slin od 77 dětí, to je 64,2%. 33 dětí dostávalo mléko se
suplementem 34 bez suplementu, denně v množství 200 ml mléka.
Odebrané sliny byly vyšetřeny metodou jednoduché radiální imunodifuse a byly sledovány
hodnoty SIgA, albuminu a lysozymu. Opět bylo využito poměru SIgA a albuminu pro výpočet
sekrečního indexu. Statistické zhodnocení bylo provedeno s použitím programu Microsoft Excel a
InSTAT 3.
1
albumin mg /L (log)
Graf 1.: Salivární albumin před a po suplementaci (log hodnoty)
2,1
2,05
2
1,95
1,9
p<0,0356
1,85
1,8
suplementovaní
nesuplementovaní
33
31
29
27
25
23
21
19
17
15
13
11
9
7
5
3
1
albumin mg / L slin
Graf 2.: Albumin ve slinách u kontrolního souboru
500
450
400
350
300
250
200
150
100
50
0
dvojice č.
albumin mg / L slin
600
Graf 3.: Albumin ve slinách u suplementovaných
dětí
500
400
300
200
100
0
1
3
5
7
9
11
13
15
17
dvojice
č.19
1
21
23
25
27
29
31
33
5.1.2.Výsledky a diskuse
index
Graf 4.: Sekreční index před a po suplementaci (log
hodnoty )
1,05
1
před
po
0,95
0,9
0,85
suplementovaní
nesuplementovaní
V grafu 1 jsou znázorněny hodnoty salivárního albuminu u suplementovaných a
nesuplementovaných dětí před a po nutričním ovlivnění. Je patrné, že u suplementovaných došlo
k výraznému poklesu hodnot albuminu z průměrné hodnoty 117 mg/l slin na hodnotu 79 mg/l slin.
Zatímco u nesuplementovaných se hodnoty nesignifikantně, avšak přesto zvýšily z hodnoty 95 mg/l
slin na 105 mg/l slin. Vyšší hodnoty u kontrolního souboru ukazují na setrvávající zánětlivou iritaci,
která může být i ve vztahu k úrovni hygieny ústní dutiny.
Překvapující jsou nálezy jednotlivých dvojic albuminu před a po suplementaci u kontrolního
souboru a u suplementovaného souboru. Zatímco u kontrolního souboru došlo v několika případech
ke zvýšení i ke snížení hodnot (graf 2.), je v grafu 3 patrný velice významný pokles hodnot
albuminu u suplementovaných dětí, především ve vzorcích s extrémně vysokými hladinami albuminu.
Tento pokles je natolik významný, že po suplementaci se v hodnotách signalizujících zánět (nad 100
mg/l slin) nacházelo pouze 7 jedinců z původních 14 extrémně zvýšených nálezů. Tyto nálezy
dokumentují výrazné protizánětlivé působení nukleotidů, pravděpodobně na bázi aktivace
imunitních funkcí celého imunitního systému GALT. Jak jsme ve zvířecích modelech prokázali,
výrazné zvýšení a reparace střevních klků vede pravděpodobně nejenom ke zvýšení imunitních
funkcí, ale i aktivací alfa a beta defenzinů k celkovému zlepšení homeostázy imunitních funkcí.
V grafu 4. se ukazuje, že lokální produkce IgA je u suplementovaných dětí daleko výraznější než u
dětí nesuplementovaných. Na tomto místě je nezbytné podotknout, že vybraná skupina sledované
populace byla často v nutričním deficitu a jak jsme zjistili z dotazníkové akce, byla námi podávaná
svačinka u většiny druhým jídlem celodenní spotřeby.
5.1.3. Závěry
Nutriční suplementace mlékem obohaceným nukleotidy a polypeptidy významně ovlivnila
parametry sekreční imunity. Účinek je výraznější ve skupině rómských dětí především z důvodů
krytí nezbytných základních energetických požadavků. Prokázali jsme v kontextu s názory jiných
autorů význam ekoimunonutričních zásahů v regulaci a udržování homeostázy imunitních
mechanizmů sliznic.
6. Nové cesty suplementace
6.1. Seniorské populace
Existuje řada složek potravy, u kterých již dnes vykazují epidemiologické studie významný
přínos v prevenci nádorových, srdečně cévních i autoimunních onemocnění. I když tyto látky mají
mnohem větší význam především v ranném věku, nelze podceňovat jejich účinek pro zdraví i
v období časného a pozdního seniorského věku.
1
Po zkušenostech našich pracovišť s aplikací nukleotidů, o jejichž významu v reparaci řady
fyziologických funkcí bylo ve světové literatuře předloženo mnoho důkazů, jsme přistoupili ke
studiu účinku nukleotidů v komplexu preparátu ve složení:
• 1 mg Imuregenu
• 5 mg dihydroquercetinu
• 50 mg vitamínu C
• 20 mg Zn laktátu
Preparát byl podáván ve skupinách seniorské populace v různých zařízeních Ústeckého kraje.
6.1.1. Soubor a metoda
3-měsíční podávání preparátu 30 seniorům bylo kontrolováno souborem 15 jedinců, kterým
byl poskytován placebo preparát. Pro sledování účinku jsme využili odběrů provedených v rámci
pravidelné komplexní prověrky zdravotního stavu. Kromě série 17 parametrů humorální imunity
jsme sledovali i kvalitu psychického stavu jedince a jeho pohody. Hodnocení bylo provedeno ze
vstupního vyšetření a vyšetření po skončení programu.
6.1.2. Výsledky a diskuse
Hodnocení výsledků u jednotlivých sledovaných osob jak se suplementem tak bez
suplementu bylo velmi obtížné především z důvodu věkové heterogenity skupiny a mnohdy
výrazných změn při vstupním vyšetření, signalizující často vážné onemocnění. Přesto jsme
zaznamenali významné ovlivnění v ukazatelích zánětu, kde jsme prokázali pokles hodnot Creaktivního proteinu ze 75 na 43 mg/l (P=0,01). V souvislosti s tím jsme zjistili zlepšení hodnot
složek komplementu - především C3, kde došlo ke zvýšení z 96 na 123 mg (p=0,001). Významný je
rovněž vzestup hodnoty prealbuminu z 0,221 mg/l na 233 mg/l a to především z důvodu jeho
poklesu v kontrolní skupině 0,219 na 0,174 mg/l (p=0,047). To ukazuje na výrazné zlepšení
nutričního stavu. Velmi překvapující jsou pro nás nálezy změn hodnot revmatoidního faktoru, kde
oproti kontrolní skupině jsme po tříměsíční suplementaci zjistili významný pokles (p=0,0039) (graf
1.). Tomu odpovídá i významný pokles hodnot cirkulujících imunitních komplexů, zatímco u kontroly
došlo k jejich zvýšení. Zkvalitnění imunitní odpovědi již po této krátkodobé suplementaci je
dokumentováno vzestupem průměrných hodnot přirozených protilátek (xenoaglutininů), které u
kontrolní skupiny nevykázali žádnou změnu.
Graf 1.: Revmatoidní faktor před a po suplementaci seniorů
140
120
ředění
100
80
60
40
20
0
CH Staff
DD CH
DEM
OHS
před
LT S
po
1
LT K
6.1.3. Souhrn a závěr
Opakovaně jsme prokázali význam suplementace seniorské populace s použitím suplementu
s obsahem nukleotidů. Bereme v úvahu i zřejmý aditivní účinek kladného vlivu psychického ovlivnění
tohoto populačního vzorku. Soudíme, že nutriční ovlivnění má význam i v populaci seniorské,
především z důvodu ovlivnění zdraví i psychické pohody. V souhlase s literaturou považujeme za
nezbytné věnovat pozornost této problematice mimo jiné i proto, že seniorská populace bude
vykazovat v následujících letech neustálý vzestup.
LFT (ředění séra)
Hodnoty LFT u s uplem entované a kontrolní s eniors ké populace (před a po
s uplem entaci)
300
250
200
150
100
50
0
249
150
52
39
p=0,039
p=0,096
s uplem entovaní
nes uplem entovaní
KLINICKÁ ČÁST
1. Přínos speleoterapie s nutričním režimem pro léčbu alergických onemocnění
Nápadný růst alergických onemocnění v celé naší dětské populaci vede k hledání dalších
možných léčebných zásahů, které by přispěly ke zlepšování zdravotního stavu postižených dětí.
Jednou z možných cest je odstranění dítěte z expozice škodlivin jak domácího (bytového)
prostředí tak prostředí exteriérů. U alergických dětí pak jsou v naší republice již dlouhodobě
využívány kapacity různých zařízení s vhodným klimatem pro přídatnou léčbu alergiků. Jsou to
například pobyty s režimem speleoterapie, při kterých jsou využívány další možné přístupy včetně
nutričního zásahu. V rámci řešení výzkumu jsme sledovali vliv speleoterapie na zdravotní stav
alergiků.
1.1. Soubor a metoda
V první etapě jsme porovnávali zdravé jedince bez výjezdu s alergickými jedinci rovněž bez
výjezdu a alergiky, kteří absolvovali režim speleoterapie. V první skupině zdravých jedinců jsme
sledovali 23 dětí ve věku 8-12 let, ve druhé skupině alergiků bez výjezdu 21 dětí se stejným
věkovým průměrem a ve třetí skupině 31 dětí, které absolvovali 3 týdenní pobyt v léčebně ve
Zlatých horách s režimem speleoterapie (bez nutričního zásahu). U všech sledovaných jedinců byly
provedeny odběry před zahájením studie, dále po absolvování režimu za tři týdny a poslední vzorek
za tři měsíce. Ve slinách byly vyšetřeny hodnoty IgG, SIgA, IgM, lysozymu a albuminu. Výsledky
byly statisticky zpracovány s použitím programu Microsoft Excel a InSTAT 3.
2
1.2. Výsledky a diskuse
Z grafu 1 je patrné, že hodnoty albuminu u zdravých dětí byly statisticky významně nižší
oproti alergickým dětem s výjezdem i bez výjezdu. Tyto hodnoty se v průběhu celého sledování u
kontrolních zdravých dětí prakticky nezměnily. Rovněž tak hodnoty salivárního albuminu u
alergických dětí bez výjezdu nevykazovaly statisticky významné změny v průběhu celého sledování.
U dětí s režimem speleoterapie jsme však zjistili významný pokles hodnot albuminu po absolvování
režimu speleoterapie, avšak za tříměsíční epizodu došlo k pozvolnému vzestupu těchto hodnot.
Přesto tyto hodnoty byly významně nižší než u alergiků bez režimu speleoterapie a nelišily se od
nálezů zdravých dětí.
Graf 1: Salivární albumin u alergických dětí a kontrol
(průměrné hodnoty a SD)
150
albumin mg / l slin
100
50
0
1
2
3
zdraví
54,8
52,2
58,8
alergici bez výjezdu
88,2
86,3
91,2
speleoterapie
95,1
26,8
65,5
odběry
Z grafu 2 vyplývá, že hodnoty SIgA jsou u alergiků statisticky významně vyšší než u
kontrolní skupiny dětí. Je to způsobeno částečně i kontaminací slin sérovým IgA. U alergiků, kteří
absolvovali režim speleoterapie jsme zjistili významný pokles hodnot SIgA, který setrvával
v posledním odběru.
Graf 2: SIgA sledovaných souborů dětí (průměrné hodnoty a SD)
SIgA mg / l slin
100
80
60
40
20
0
1
2
3
zdraví
46,1
46,1
27
alergici bez výjezdu
81,2
83,1
85,2
speleoterapie
77,4
64,6
53
2
Dynamika změn IgA a albuminu se projevila u hodnot sekrečního indexu (graf 3), kde jsme nalezli
významný vzestup ve druhém odběru sledovaným poklesem do stejných hodnot jako u jedinců bez
výjezdu do režimu speleoterapie.
sekreční index
Graf 3: Poměr SIgA/albumin (sekreční index)
(průměrné hodnoty a SD)
600
400
200
0
1
2
3
zdraví
156,1
155,6
83,6
alergici bez výjezdu
178,5
177,2
185,2
speleoterapie
167,5
324,9
190,4
odběr
Souhrn
V této první části jsme prokázali příznivý vliv léčebného pobytu s režimem speleoterapie u
dětí s alergickým onemocněním. Považujeme za významné sledovat tento efekt opakovaně
s využitím delšího režimu léčby a se zajištěním dalších postupů, které by příznivě ovlivnily
zdravotní stav alergické populace. Z tohoto důvodu jsme přistoupili k režimu speleoterapie
v kombinaci s nutričním ovlivněním dětské populace.
albumin mg /L slin
Graf 1.: Salivární albumin u dětí s astma bronchiale a
recidivujícími infekcemi HCD před a po speleoterapii
(skupina a + c = suplementovaní)
200,00
150,00
100,00
50,00
0,00
a
b
c
d
Řada1
175,33
141,06
145,99
137,90
Řada2
98,86
128,67
107,53
128,21
Skupiny:
A: astma bronchiale + suplement
B: dtto bez suplementu
C: recidivující infekce HCD + suplement
D: dtto bez suplementu
2
V pokračování studie jsme zařadili celkem 45 dětí s astma bronchiale a 43 dětí s
onemocněním recidivujících infekcí horních cest dýchacích. Jak je patrné z grafu 1, došlo
k výraznému zlepšení nálezů především u dětí s nutričním režimem (suplement s poly a
oligonuklotidy), skupina A a C. Hodnoty albuminu u jedinců s astma bronchiale statisticky významně
poklesly a stejně tak i u dětí s onemocněním recidivujících infekcí HCD. Zlepšení u dětí bez
suplementu bylo méně výrazné avšak prokazatelné. Tyto nálezy jsou v souladu s literárními údaji,
které uvádějí, že již krátká suplementace odpovídající dávkou nutričního suplementu může vést
k rychlé úpravě imunitních parametrů.
V této studii pokračujeme s hodnocením odběrů, které jsou prováděny po 6-ti měsících po
absolvovaném léčebném režimu.
2. Ovlivnění zdravotního stavu u jedinců s klinickými projevy únavového syndromu s definicí
EBV infekce
Klinické projevy únavy jsou doprovodným jevem řady chronických infekcí, nutričních
incuficiencí (deficit železa) a dalších dodnes dobře nespecifikovaných onemocnění. Ukazuje se, že
klinika únavového syndromu je vyjádřením neschopnosti medicíny definovat blíže a specificky řadu
onemocnění. Aspekty chronické EBV infekce, respektive polyherpetického syndromu japonských
autorů, jsou neustálým předmětem sledování ve světové literatuře. Všichni postižení touto
klinickou jednotkou vykazují spolu s klinickými projevy únavy i vysoké skóre Holmesových kritérií.
V rámci komplexního sledování a léčby této jednotky jsme kromě léčby přenosovým faktorem
využili i možnosti nutriční suplementace sledovaných jedinců jednak minerály a pro tuto studii i
přípravkem Imuregen s vysokým obsahem polypeptidů, oligo a polynukleotidů.
2.1. Soubor a metoda
Do souboru jsme zařadili celkem 26 pacientů, polovina s placebo preparátem, druhá
polovina s preparátem Imuregen v dávkování 2x2 tablety denně po dobu 3 měsíců. Před a po
nutriční suplementaci bylo provedeno komplexní imunologické vyšetření, sledující parametry
humorální imunity, protilátkovou odpověď proti herpetickým virům (HSV1, HSV2, HSV6) a proti
CMV a EBV. Buněčná imunita byla vyšetřena imunofenotypizací metodou průtokové cytometrie. Na
základě nálezů zvířecího modelu jsme věnovali pozornost především sledování populace buněk
spontánní cytotoxicity (NK).
2.2. Výsledky
Výsledky jsou patrné v grafu 1. Zatímco v souboru placebo nedošlo k významným změnám
této lymfocytární subpopulace, v souboru s podáváním nukleotidů došlo ke zvýšení počtu buněk
z průměrné hodnoty 257 na 354 buněk na mikrolitr séra (p=0,000913).
NK lymfocyty u EBV infekce po nutričním zásahu
( N = suplementovaní - P = placebo)
CD16+56+/ bb/uml
400
350
300
250
p=0,0009
200
150
100
p1
p2
n1
2
n2
Společně se zlepšením nálezu buněčných lymfocytárních subpopulací došlo i ke zlepšení
parametrů Holmesova kritéria, významné úpravě klinických projevů a ke zlepšení funkčních
jaterních testů.
2.3. Závěr
Nutriční suplementace pacientů s únavovým syndromem na bázi aktivované EBV infekce
jsme dosáhli nutriční suplementací významné úpravy laboratorních parametrů i klinických projevů
onemocnění.
3.Suplementace pacientů s inhalační alergií způsobenou roztoči domácího prachu
Neustálý vzestup projevů inhalační alergie v celém světě i v naší republice je vážným
zdravotnickým problémem. V současné době zjišťujeme v epidemiologických studiích provedených
v okrese Ústeckého kraje již více než 50% respondentů s pozitivitou buď celkového IgE nebo
specifických protilátek IgE proti inhalačním alergenům, potravinovým alergenům a alergenům
latexu. V tomto populačním vzorku s pozitivní odpovídavostí nacházíme více než 30% jedinců
s jasnými klinickými projevy inhalační alergie. Kromě klasické léčby alergických onemocnění je ve
světě stále častěji používáno nutričních zásahů nejenom s preventivním záměrem (těhotné ženy),
ale i se snahou akcelerovat odpovídající základní léčbu.
3.1. Soubor a metoda
Do souboru zařazujeme postupně
inhalační alergiky definované klinickými projevy
onemocnění spolu s aktivitou specifických protilátek IgE proti alergenu d1 (Dermatophagoides
pteronyssin). U všech jedinců bylo vyšetřováno celé základní spektrum inhalačních alergenů
s použitím diagnostických souprav firmy Phadiatop. Dále byly sledovány hodnoty celkového IgE,
hodnoty ECP, hodnoty základních proteinů a hodnoty eosinofilů. Na tomto místě referujeme o
prvních výsledcích studie, ve které jsme podávali kromě základní léčby i suplement nukleotidů
odpovídající dávce dvou tablet denně a individuální vakcínu proti roztočům domácího prachu.
Celkem bylo suplementováno 12 jedinců, placebo dostávalo 8 jedinců.
3.2. Výsledky a diskuse
Výsledky suplementovaných pacientů s respirační alergií léčených standardní léčbou,
vakcinací se suplementací a bez suplementace (placebo preparát ve stejném balení) jsou
znázorněny na grafu 1.
Vliv suplementace nukleotidy na desenzibilizaci s alergenem d1
20
NUKLEOTIDY
18
d1 kU/L séra
16
PLACEBO
14
12
10
8
6
4
2
0
1
2
3
odběr
2
Z grafu je patrné, že průběh desenzibilizace od vstupního vyšetření je v průběhu jednoho roku
aplikace nukleotidů spolu s vakcínou významně účinnější. Dochází ke statisticky významnému
poklesu protilátek proti d1 ve srovnání se skupinou placebo, avšak i v této skupině je patrný
významný efekt vakcinace. Toto zlepšení je pravděpodobně způsobeno reparačními pochody
obnovujícími střevní sliznici s indukcí dalších mediátorů, které ovlivňují rozpoznání podávané
vakcíny a její účinek. V neposlední řadě kalkulujeme rovněž s možností indukce dalších regulačních
mechanizmů jak na buněčné úrovni tak na úrovni imunitních procesů sliznice střevního traktu
(betalyziny, muciny atd.). Této problematice se hodláme nadále věnovat. Rychlá reparace klinických
projevů u suplementovaných jedinců s respirační alergií nás vede ke snahám o stejný postup u
alergických projevů s potravinovou alergií a atopiků.
4. Suplementace nukleotidy u zánětlivých onemocnění gastrointestinálního traktu
Chronické nespecifické záněty střevního traktu jsou provázeny velice často extrémními
ztrátami nejenom energetickými, ale i ztrátami mikronutrientů. Obecně jsou studovány změny u
nemocných touto klinickou jednotkou jak v imunitní odpovědi specifické tak i nespecifické a
neustále přetrvává snaha o detailní definici patogeneze onemocnění. Tradiční pozornost tomu
věnovalo ústecké pracoviště pod vedením doc. Bittra na počátku sedmdesátých let. S tímto
pracovištěm spolupracujeme s různým časovým odstupem. V souvislosti s našimi předchozími
nálezy se snažíme nivelizovat dopady chronického zánětu na parametry imunitní odpovědi jak u
nemocných ulcerózní kolitidou tak i Crohnovou chorobou. V této studii jsme se věnovali otázkám
energetické suplementace s použitím jak DNA tak nukleotidů u souboru 30 nemocných ulcerózní
kolitidou.
4.1. Soubor a metoda
Pro studii jsme si vybrali 30 pacientů s onemocněním ulcerózní kolitidou, s definovaným
klinickým průběhem, potvrzeným histologicky. Sledujeme celkem 17 žen ve průměrném věku 63,5
let (v rozmezí 44 – 90 let) a 13 mužů s průměrným věkem 65,7 let ( rozmezí 38 – 79 let).
Všichni sledovaní pacienti byli suplementováni přípravkem Imuregen s vysokým obsahem
oligo a polynukleotidů a byli imunologicky sledováni po dobu 2 měsíců suplementace v dávce 2 – 6
tablet denně (dle hmotnosti). Kontrolní odběry byly provedeny po 6 měsících od začátku
suplementace. V této části studie jsme se zaměřili na sledování parametrů humorální imunity a to
především indikátorů zánětu a indikátoru nutričního stavu.
4.2. Výsledky a diskuse
V grafu 1 jsou znázorněny hodnoty prealbuminu při vstupním vyšetření, po aplikaci a ve
třetím vzorku za 6 měsíců po aplikaci preparátu. Nalezli jsme statisticky významné zvýšení
hodnoty prealbuminu mezi prvním a druhým a prvním a třetím odběrem, což dokumentuje nejenom
zlepšení nutričního stavu, ale i zlepšení imunitního potenciálu sledovaných jedinců. Vyšší hodnota
prealbuminu dokumentuje vyšší úroveň imunoregulačních funkcí orgasmu. Je známo, že prealbumin
má strukturu velice blízkou k thymickým působkům (Thymosin), působícím jako modulátor Tbuněčné imunitní odpovědi. Stejně tak jsme zjistili významnou reakci u parametrů sledované složky
komplementu C3 (graf 2).
2
Graf 1: Prealbumin s souboru Colitis ulcerosa suplementace Imuregenem
Prealbumin mg/l séra
320
310
300
290
280
270
p=0,001
260
1
2
3
Odběr č.
Nalezli jsme statisticky významný pokles hodnot C3 prakticky u všech sledovaných, což
dokumentuje na jedné straně snížení reakce chronického zánětu, na druhé straně pak i významně
sníženou spotřebu složky C3 (graf 2). Tomu odpovídá i dynamika změn hodnot imunoglobulinů třídy
M, kde po prvním zvýšení v odběru po suplementaci dochází k normalizaci hodnot, která
dokumentuje významně nižší zánětlivou alteraci a pravděpodobně zvýšenou schopnost sekreční
imunita nivelizovat antigenní impulsy cestou GI traktu (graf 3). To nasvědčuje tomu, že nukleotidy
přispívají stejně jako v modelových pokusech k urychlené reparaci sliznice GI traktu, zvýšené
produkci mucinu a dalších složek nespecifické imunity jako například lysozymu a betadefenzinu.
Společně s touto úpravou konstatujeme i významný pocit spokojenosti pacientů s léčbou. Vzhledem
k tomu, že soubor evidovaných pacientů Masarykovy nemocnice v Ústí nad Labem je dostatečně
široký a dobře klinicky definovaný, považujeme za účelné dále sledovat tyto jedince nejenom
z hlediska nutričního ovlivnění, ale i z hlediska jejich bližší imunogenetické klasifikace. V rámci
studie jsme zjistili, že onemocnění ulcerózní kolitidou postihuje daleko častěji pacienty s poruchou
serpinů (nález ZZ deficitu alfa 1 antitrypsinu), která je u těchto postižených 40x častější než u
normální populace.
Graf 3.: Vliv suplemenatce Imuregenem na parametry složky komplementu C3
C3 mg / séra
160
140
120
100
80
60
p = 0,001
40
20
p = 0,001
0
1
2
odběr č.
2
3
IgM mg / l séra
Hodnoty IgM po suplementaci Imuregenem u nemocných ulcerózní kolitídou
140
120
100
80
60
40
20
0
p = 0,05
p = 0,05
1
2
3
odběr č.
4.3. Závěr
Naše výsledky ukazují, že suplementace dietárnímu nukleotidy přispívá významnou měrou
pro reparaci imunitních funkcí nemocných postižených onemocněním ulcerózní kolitidou.
5. Výstup
V rámci projektu jsme zvažovali možnost uplatnění preparátu české provenience, vhodného
pro aplikaci v nutriční suplementaci, jak v preventivní tak v klinické medicíně. V porovnání
s preparáty DNA jsme zjistili, že prakticky stejný účinek jako ekonomicky náročné preparáty
DNA, připravené z kvasinek (firma SIGMA) mají preparáty naší provenience na bázi oligo a
polynukleotidů. Dokumentujeme to při aplikacích jak preventivních, u dětí mateřských i základních
škol, u seniorské populace. Účinek dokumentujeme i v řadě klinických onemocnění, což odpovídá
experimentálním studiím provedených v rámci tohoto projektu. Dobré zkušenosti s preparátem
včetně jeho finanční nenáročnosti nás vedly k úvaze o možném rozšíření preparátu v aplikaci
v pitné formě v prvé řadě pro populaci významně exponovanou zvýšeným rizikům profesionální
expozice chemickým a fyzikálním škodlivinám. Doporučili jsme na základě našich zjištění využít
formuli preparátu oligo a polynukleotidů (Imuregen) spolu s navážkou flavonoidů (Grape seed oil) a
s vitamínem C spolu s nízkou dávkou zinku. V pilotní studii jsme testovali účinek preparátu tohoto
složení v malé krátkodobé sérii u pracovníků firmy Glaverbel, kde jsme měli možnost počítačovým
systémem definovat jak spotřebu nápoje s uvedeným preparátem tak i výsledný efekt podávání.
Zjistili jsme, že aplikace preparátu vedla v kritickém období chřipkové epidemie 2003/2004
k významné redukci nemocnosti. Na základě těchto údajů jsme ve spolupráci s Ústavem pracovního
lékařství / SZÚ (Prof. Cikrt) doporučili rozšíření aplikace na další rizikové provozy. V současné
době je nápoj výše uvedeného složení programován a schválen útvarem hlavního hygienika MZČR.
2
Publikace grantu IGA NJ – 688-3
1. Agostoni, C., Gianni, M. , Gamboni, M. et al. : Characterictics of the new milks for infants: fatty
acids, nucleotides, selenium. Acta Biomed Ateneo Parmense ., 68, 1997, s. 29 – 34.
2. Almansouri, H. M. S. , Yamamoto, S., Kulkarni, A. D. et al.: Effect of Dietary and Nucleotides on
Murine Allergic Rhinitis. The American Journal of the Medical Sciences.,312, 1996, č.5, s. 202 – 205.
3. Arnaud, A. , Lopez-Pedrosa, J. M., Torres, M. I., Gill, A. : Dietary nukleotides modulate mitochondrial
funktion of intestinal mucosa in weanling rats with chronic diarrhea. J Pediatr Gastroenterol Nutr,
August 1, 2003, 37 (2): s. 124-31.
4. Axelsson, I., Flodmark, C. E. , Tacconi, M. et al. : The influence of dietary nukleotides on erythrocyte
membrane fatty acids and plasma lipids in preterm infants. Acta paediatr 86, 1997, s. 539-544.
5. Barness, L. A. : Dietary Sources of Nucleotides – From Breast Milk to Weaning, J Nutr., 124, 1994,
s. 128 – 130.
6. Berthold, K., CraIN, p. f., Gouni, I. et al. : Evidence for incorporation of intact dietay pyrimidine
nucleosides into hepatic RNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 1995, 10123 – 10127.
7. Bower R. H., Cerra , F. B., Bershadsky, B. et al. : Early enteral administration of a formula
supplemented With arginine, nukleotides, and fish oil in intensive care unit patients: results of a
multicenter, prospective, randomized, clinical trial. : Crit Care Med 1995, Mar 23(3), s.436 – 49.
8. Buren, C. T. Kulkarni, A. D., Rudolph, F. B. : The role of nucleotides in adult nutrition. J Nutr , 1994,
Jan, 124 , Suppl. 1, s. 160 – 164.
9. Calder, P. C. :Dietary nucleic acids and TH1/Th2 balance: a clue to cow s milk allergy? . Clin.and Exp.
Allergy, 2000, Volume 30, s. 908 – 911.
10. Carver, j. D. : Dietary Nucleotides: Cellular Immune, Intestinal and Hepatic Systém Effects. J Nutr
1994, Jan., 124 Suppl 1, s. 144 – 148.
11. Carver, J. D. , Pimentel, B., Cox, W. I. et al. : Dietary nucleotide effects upon immune function in
infants. Pediatrics, 1991, Aug, 88(2), s. 359 – 63.
12. Carver, J. D., Saste, M., Sosa, R. et al. : The Effects of Dietary Nucleotides on Intestinal Blood
FloW in Preterm Infants. Pediatric Research52, 2002, č.3, s. 425 – 429.
13. Carver, J. D. : Dietary nucleotides: effects on the immune and gastrointersticial systems. Acta
Paediatr Suppl., 1999, 88(430). S. 83 – 8.
14. Carver, J. D. , Walker, A. : The role of nucleotides in human nutrition. Nutritional Biochemistry , 6,
1995, s. 58 – 72.
15. Cosgrove, M., Davies, D. P., Jenkins, H. R. : Nucleotide supplementation and the growth of term small
for gestational age infants. Archives of Disease in Childhood, 74, 1996, s. 122 – 125.
16. Cosgrove, M. : Perinatal and infant nutrition. Nucleotides. Nutrition, 1998, 14(10), s. 748 – 51.
17. Cunningham-Rundles, S., Ho Lin, D.: Nutrition and the Immune Systém of the Gut. Nutrition, 1998,
č.14, s. 573 – 579.
18. Čolic, M., Gašić, S., Vasilijić, S. et al.: A nucleoside analoque, 7-thia-8-oxoguanosine stimulates
proliferation of thymocytes in vitro. Immunology Letters , 1999, č. 69, s. 293 – 300.
19. Demeneix, B. A., Boussif, O., Zanta, M. A. et al.: Delivery of polynucleotides With polyamine lipids
and polymers. Nucleosides/Nucleotides , 1997, 16(7-9), s. 1121 – 1127.
20. Gil, A.: Modulation of the immune response mediated by dietary nucleotides. Eur J Clin Nutr, 2002,
56 Suppl. 3, s. 1 – 4.
21. Goodman, G. M., Reitz, A. B., Chen, R. et al. : Selective Modulation of Elements of the Immune
Systém by Low Molecular Weight Nucleosides. The Journal of Pharmatology and Exp. Therapeutics,
1995, 274, č. 3, s. 1552 – 1557.
22. Grimble, G. K. : Why are dietary nucleotides essential nutrients?. Bbritish Journal of Nutrition,
1996, č.76, s. 475 – 478.
23. Grimble, G. K., Westwood, O. M. R.: Nucleotides. In: Nutrition and Immunology, edit.: Gershwin, M.
E., German, J. B., Keen, C. L., Humana Press, 2000.
24. Guo, Z., Heydari, A., Richardson, A.: Nucleotide excision repair of actively transcribel versus
nontranscribed DNA in rat hepatocytes: effect of age and dietary restriction. Exp Cell Res, 1998,
245(1), s. 228 – 238.
2
25. Hamosh, M.: Introduction: Should Infant Formulas Be Supplemented With Bioactive Compoments
and Conditionally Essential Nutrients Present in Human Milk?. The Journal of Nutrition , 1997, č.5, s.
971 – 974.
26. He, F., Tuomola, E, Arvilommi, H. et al.:Modulation of human humoral immune response through orally
administered bovine colostrum. FENS Immunology and Medical Microbiology , 2001, č. 31, s. 93 – 96.
27. Chen, T., Wang, M., Liang, Y. et al.: A Nucleoside - Nucleotide Mixture May Reduce Memory
Deterioration in Old Senescence – Accelerated Mice. Journal of Nutrition, 2000, č. 130, 3085 - 3089.
28. Iijima, S., Tsujinaka, T., Kishibuchi, M. et all. : A Total Parenteal Nutrition Solution Supplemented
With a Nucleoside and Nucleotide Mixture Sustains Intestinal Integrity, but Does Not Stimulate
Intestinal Function after Massive Bowel Resection in Rats. J. Nutr. , 1996, č. 126, s. 589 – 595.
29. Jackson, C. D., Weis, C., Miller, B. J., James, S. J.: Dietary Nucleotides: Effects on Cell Proliferation
Following Partial Hepatectomy in Rats Fed NIH-31, AIN-76A, or Folate/Methyl-Deficient Diets. The
Journal of Nutrition , 27 , 1997, č.5, s. 834 – 837.
30. Jackson, C. D., Weis, C., Miller, B. J. et all. : Comparison of cell proliferation following partial
hepatectomy in rats fed NIH – 31 or semipurified
AIN-76A diets: effects of nucleic acid
supplementation. FNutrition Research, 15, 1995, č.10, s. 1487 – 1495.
31. Jackson, C. D., Weis, C., Miller, B. J. et all. : Dietary Nucleotides: Effects on Cell Proliferation
Folowing Partial Hepatectomy in Rats Fed NIH – 31, AIN – 76A, or Folate/Methyl-Deficient Diets.
J.Nutr., 127, 1997s. 835 – 837.
32. Jyonouchi, H., Sun, S., Winship, T. et all. : Dietary Ribonucleotides Modulate type 1 and type 2 THelper Cell Responses against Ovalbumin in Young BALB / cJ Mice. Journal of Nutritio, 2001, č. 131, 1165
– 1170.
33. Jyonouchi, H.:Nucleotide actions on humoral immune responses. J Nutr, 1994, 124 (1 Suppl), s. 138 –
143.
34. Jyonouchi, H., Sun, S., Sato, A. S.:Nucleotide – Free Diet Suppresses Antigen – Driven Cytokine
Production by Primed T Cells: Effectsd of Supplemental Nucleotides and Dietary Fatty Acids.
Nutrition,12, 1996, č.9, 608 – 615.
35. Jyonouchi, H.: Nucleotide Action on Humoral Immune Responses. J Nutr. , 1994, č. 124, s. 138 – 143.
36. Kolopp-Sarda, M., Béné, M. C., Allaire, J. M. et all. : Kinetics of specific salivary IgA responses in
man after oral challenge by a Ribosomal immunostimulant. J. Immunopharmac, 1997, č.3. s. 181 – 186.
37. Kulkarni, A. D., Rudolphů, F. B.: The role of dietary sources of nucleotides in immune function a
review. J Nutr, 1994, 124 s. 1442 – 1446.
38. Kulkarni, A. D., Fanslow, W. C., Rudolph, F. B. et all.: Effect of Dietary nucleotides on response to
bacterial infections. J Parenter Enteral Nutr, 1986, 10(2), s. 169 – 171.
39. Leach, J. L., Baxter, J. H., Molitor, B. E. et all.: Total potentially available nucleosides of human milk
by stage of lactation. J. of Clinical Nutrition , 1995, č. 61, 1224 – 1230.
40. Lesourd,B. M., Mazari, L. : Immune responses during recovery from protein-energy malnutrition.
Clinical Nutrition,16, 1997, č.16, s. 37 – 46.
41. Leite, L. H., Moreira-Vaz, E., Rosa, G. Et all. : The influence of dietary nucleotides and long-chain
polyunsattrated fatty acids on the incorporation of (3H) arachidonic acid on experimental liver
cirrhoůsis. Arch Latinoam. Nutr, 2000, 50(3), s. 257 – 264.
42. Levy, J. : Immunonutrition: The Pediatric Experience. Nutrition, 1998, č.14, s. 641 – 647.
43. López-Navarro, A. T., Orteega, M. A., Peragón, J. et all.: Deprivation of Dietary Nucleotides
Decreases Protein Synthesis in the Liver and Small Intestine in Rats. Gastroenterology, 1996, č. 110, s.
1760 – 1769.
44. Martinez-Augustin, O., Bozza, J. j., Lucena, J. et all.: Dietary nucleotides might influence the
humoral immune response against cowś milk proteins in preterm neonates. Biol Neonate, 1997, 71(4), s.
215 – 223.
45. Mc Garrity, S. T., Stephenson, A. H., Webster, R. O.: Regulation of human neutrophil functions by
adenine nucleotides. J of Immunology , 142(6), 1986.
46. Mc Cluskie, M. J., Davis, H. L. : Oral, intrarectal and intranasal immunizations using CpG and non-CpG
olygodeoxynucleotides as adjuvants. Vacina, 2001, č.19, s. 413 – 422.
47. Nagafuchi, S., Totsuka, M., Hachimura, S. et all.: Dietary Nucleotides Increase the Proportion of a
TCR Subset of Inraepithelial Lymphocytes (IEL) and IL – 7 Production by Intestinal Epithelial Cells
2
(IEC), Implications for Modification of Cellular and Molecular Cross-talk between IEL and IEC by
Dietary Nucleotides. Biotechnol.Biochem, 2000, č. 64(7), s. 1459 – 1465.
48. Ortega, M. A. , Nunéz, M. C., Gil, A. et all.: Dietary Nucleotides Accelerate Intestinal Recovery
after Food Deprivation in Old Rats. J. Nutr., 125,1995, s. 1413 – 1418.
49. Ouellette, A. J.: Paneth Cells and Innate Immunity in the Crypt Microenvironment.
Gastroenterology, 1997, č.113, s. 1779 – 1784.
50. Péréz, M. J., Suaréz, A., Goméz-Cappilla, J. A. et all.:Dietary Nucleotide Supplementation Reduces
Thiocetamide-Induced Liver Fibrosis in Rats. J.Nutr, 2002, č. 132. s. 652 – 657.
51. Pickering, L. K., Granoff, D. M. , Erickson, J. R. et all.: Modulation of the Immune Systém by Human
Milk and Infant Formula Containing Nucleotides. Pediatrics, 101, 1998, č.2, s.242 – 249.
52. Pisetsky, D. S. , Reich, Ch. F.: Inhibition of Murine Macrophage IL – 12 Production by Natural and
Synthetic DNA. Clinical Immunology, 96, 2000, č. 3, s. 198 – 204.
53. Pisetsky, D. S.: Mechanisms of immune stimulation by bacterial DNA. Springer Semin Immunopathol,
č. 22, 2000, s. 21 – 33.
54. Richter, J., Šíma, P., Pelech, L. et all.:Nukleotidy a jejich význam ve výživě, prevenci a imunitě.
Hygiena, 41, 1996, č.6, s. 319 – 323.
55. Rudolph, F. B. Introduction. J. Nutr , 124, 1994, s. 1431 – 1432.
56. Sánchez-Pozo, A., Ramírez, M., Gil, A. et all.: Dietary Nucleotides Enhance Plasma Lecithin
Cholesterol Acyl Transferase Activity and Apolipoprotein A-IV Concentration in Preterm Newborn
Infants. Pediatric Research, 37, 1995, č.37, s. 328 – 333.
57. Stoesser, G., Sterk, P., Tuli, M.A. et all.: The EMBL Nucleotide Sequence Database. Nucleic Acids
Research, 25, 1997, č.1, s. 7 – 13.
58. Sudo, N., Aiba, Y., Takaty, A. et all.: Dietary nucleic acids promote a shift in Th1/Th2 balance
toward Th1-dominant immunity. Clin. And Exp. Allergy, 30, 2000, s. 979 – 987.
59. Sukumar, P., Loo, A., Adolphe, R. et all.:Dietary Nucleotides Augment Dextran Sulfate SodiumInduced Distal Colitis in Rats. J Nutr., 129, 1999, s. 1377 – 1381.
60. Torres-Lopez, M. I., Fernandez, I., Fontana, L. et all.: Influence of dietaray nucleotides on liver
structural recovery and hepatocyte binuclearity in cirrhosis induced by thioacedamide. Gut, 38, 1996, s.
260 – 264.
61. Uauy, R., Quan, R., Gil, A.:Role of Nucleotides in Intestinal Development and Repair: Implications for
Infant Nutrition. J Nutr., 124, 1994, s. 1436 – 1441.
62. Walker, W. A. :Exogenous Nucleotides and Gastrointersticial Immunity. Transplantion Proceedings,
28, č. 5, 1996, 2438 – 2441.
63. Walker, W. A.: Nucleotides and Nutrition : Role as Dietary Supplement. J. Nutr. 124, 1994, s. 121 –
123.
64. Weighardt, H., Feterowski, C., Veit, M. et all.: Increased Resistance Against Acute Polymicrobial
Sepsis in Mice Challenged with Immunostimulatory CpG Oligodeoxynucleotides Is Related to an Enhanced
Innate Effector Cell Response. J. of Immunology, 2000, č. 165, s. 4537 – 4543.
65. Wild, J. S., Sur, S.: CpG Oligonucleotide modulation of allergic inflammation. Allergy, 2001. č. 56, s.
365 – 376.
66. Yamauchi, K., Hales, N. W., Robinson, S. M. et all. : Dietary nucleotides prevent decrease in cellular
immunity in ground-based microgravity analog. J. Appl. Physiol, č. 93, 2002, s. 161 – 166.
67. Yamamoto, S., Wang, M. F., Adjei, A. A. et all.: Role of Nucleotides and nucleotides in the immune
systém, gut reparation after injury, and brain function. Nutrition, 1997, 13(4), s. 372 – 4.
68. Yu VY.: The role of dietary nucleotides in neonatal and infant nutrition. Singapore Med J., 39(4),
1998, s. 45 – 50.
69. Zhao, Q., Temsamani, J., Iadarola, P. L. et all.: Effect of Different Chemically Modified
\oligodeoxynucleotides on Immune Stimulation. Biochemical Pharmatology, 51, 1996, s. 173 – 181.
70. Zello, G. A., Wykes, L. J., Ball, R. O. et all.: Recent Advances in Methods of Assessing Dietay Amino
Acid Requirements for Adult Humans. J Nutr., 125, 1995, s. 2907 – 2915.
71. Zimmermann, H.: Extracellular metabolism of ATP and other nucleotides. Naunyn-Schmiedeberg ś
Arch Pharmacol, 2000, č. 362, s. 299 – 309.
3
Literatura grantu:
1) Šíma, P., Richter, J., Lajčíková, A., Turek, B.: Ochranné nápoje v pracovním lékařství. České pracovní
lékařství 4, 2003, 4, s.182-186.
2) Richter, J., Šíma, P., Turek, B.: Působení nukleotidů a antioxidantů v ochranných nápojích. Sborník
souhrnů XXVII. Kongres pracovního lékařství s mezinárodní účastí, Hradec Králové, 15.-17.10.2003.
3) Turek, B., Šíma, P., Richter, J., Virtová, M.: Význam imunonutrice a suplementace výživy pro zdraví
obyvatelstva v 21.století. 21. Výroční světový kongres na téma Transformace české a slovenské společnosti
na prahu nového milénia a její úloha v současném globálním světě, Plzeň, 24.-30.6.2002.
4) Turek, B., Šíma, P., Richter, J.: Současné možnosti ochrany organizmu výživou. Výroční světový kongres
na téma Transformace české a slovenské společnosti na prahu nového milénia a její úloha v současném
globálním světě, Plzeň, 24.-30.6.2002.
5) Svozil, V., Jirka, Z., Šíma, P., Richter, J., Weigl, E.: Speleoterapie ve XXI.století. Výroční světový
kongres na téma Transformace české a slovenské společnosti na prahu nového milénia a její úloha
v současném globálním světě, Plzeň, 24.-30.6.2002.
6) Šíma, P., Richter, J.: Imunonutrice. Sborník 19.pracovní imunologické konference České imunologické
společnosti „Jak se organismus brání stoupající zátěži cizorodých antigenů“, Velké Karlovice, 25.-27.10.2002,
s.13-20.
7) Šíma, P., Richter, J.: Imunonutrice. XXVIII. Pachnerovy dny pracovního lékařství, Rožnov pod Radhoštěm,
28.5.-30.5.2003.
8) Slížová, D., Šíma, P., Richter, J., Krs, O.: Dietary nucleotide extracts promote growth and regeneration
of ileum epithelia. Abstract – Morphology 2003, Hradec Králové, 15.-16.9.2003.
9) Šíma, P.: Specifické složky stravy ve vztahu k imunitě. Společnost pro výživu – konference Výživa a
potraviny 2003, 11.-13.11.2003, Pardubice.
10) Richter, J., Richterová, S., Šíma, P., Pfeifer, I.: Výsledky výživových intervencí. Sborník konference
Výživa a zdraví, Teplice 2002.
11) Richter, J., Richterová, S., Král, V., Pfeifer, I., Jílek, D., Šíma, P., Drnek, F.: Ovlivnění parametrů salivární
imunity u rómských dětí. Alergie 4, 2002, s. 80.
12) Richter, J., Jílek, D., Král, V., Malý, U., Weigl, E., Svozil, E., Šíma, P., Vorderwinkler, A.: Vliv speleoterapie
na ukazatele salivární imunity. 4th International ISCA Congress, 21.-27.10.2002, Postojna, Slovenia
13) Richter, J., Jílek, D., Král, V., Malý, U., Weigl, E., Svozil, E., Šíma, P., Vorderwinkler, A.: Vliv speleoterapie
na ukazatele salivární imunity. Alergie 4, 2002, s. 80-81.
14) Richter, J., Richterová, S., Král, V., Pfeifer, I., Jílek, D., Šíma, P., Drnek, F: Salivární imunita u rómských
dětí. Alergie 4, 2002, s. 80-81.
15) Richter, J., Richterová, S., Šíma, P., Pfeifer, I., Turek, B.: Imunita a výživa. IX. Interdisciplinární
konference s mezinárodní účastí „Optimální působení tělesné zátěže a výživy“, 5.-7.9.2002, Hradec Králové.
16) Richter, J., Šíma, P., Richterová, S., Pfeifer, I., Turek, B.: Imunologické metody ke zjišťování výživového
stavu. Sborník konference Výživa a zdraví, Teplice 2002.
17) Richter, J., Richterová, S., Šíma, P., Pfeifer, I., Turek, B.: Patologie výživy a její odraz v imunitě.
Sborník konference Výživa a zdraví, Teplice 2002.
18) Richter, J., Richterová, S., Šíma, P., Pfeifer, I.: Výsledky výživových intervencí. Sborník konference
Výživa a zdraví, Teplice 2002.
19) Richter, J., Šíma, P., Richterová, S., Turek, B.: Nové přístupy ve výživě – funkční strava. IX.
Interdisciplinární konference s mezinárodní účastí „Optimální působení tělesné zátěže a výživy“, 5.-7.9.2002,
Hradec Králové.
20) Šíma, P., Turek, B., Richter, J.: Nové přístupy ve výživě obyvatelstva v 21. století: imunonutrice,
ekonutrice a ekoimunonutrice. Výživa a potraviny (v tisku)
21) Richter, J., Holajová, K., Jílek, D., Král, V., Pohořská, J.: Mohou virové infekce ovlivnit výskyt
alergických onemocnění? (v tisku)
3
22) Richter, J., Šíma, P., Pfeifer, I., Turek, B., Cikrt, M.: Nukleotidy a jejich význam ve zdraví a nemoci. (v
tisku)
23) Richter, J.: Naše praktické zkušenosti s IMUNOREM® (v tisku)
24) Richter, J., Richterová, S., Šíma, P., Pfeifer, I., Turek, B.: Patologie výživy a její odraz v imunitě (v
tisku)
25) Šíma, P., Richter, J.: Imunonutrice. Imunologický zpravodaj 18, 2003, 1, s.9-13.
26) Richter, J., Šíma, P., Richterová, S., Pfeifer, I., Turek, B.: Imunologické metody ke zjišťování
výživového stavu ( v tisku)
27) Richter, J., Pfeifer, I., Stiborová, I.: Mapování nového problému – prevalence infekce Helicobacter
pylori v dětské populaci (v tisku – Hygiena 1/2004)
28) Richter, J., Stiborová, I., Král, V., Jílek, D.: Přímý průkaz antigenu Helicobacter pylori ve stolici.
Praktický lékař 82, 2002, 4, s. 205-207.
29) Šíma, P.: Ekoimunonutrice jako prevence onemocnění. Univerzita 3.věku, Vysoká škola v Plzni, 20.11.2003,
Plzeň. (přednáška)
30) Šíma, P.: Imunita ve vztahu k výživě a globalizaci. Sdružení praktických lékařů ČR, Karlovy Vary,
9.12.2003 (přednáška)
31) Šíma, P.: Novinky v mikrobiologii. Český rozhlas 2, pořad Káva o čtvrté, 13.2.2003 rozhlasové vysílání).
32) Šíma, P.: Prevence recidivy chřipky. Rádio Impuls, 13.3.2003 (rozhlasové vysílání).
33) Šíma, P.: Prevence infekčních nemocí. Český rozhlas 2, Praha, 13.3.2003 (rozhlasové vysílání)
34) Šíma, P., Turek, B.: Význam imunonutrice. Český rozhlas 2, pořad Káva o čtvrté, 17.4.2003 (rozhlasové
vysílání).
35) Šíma, P.: Prevence infekčních nemocí. Český rozhlas 2, pořad Dobré ráno, 16.10.2003 (rozhlasové
vysílání).
36) Šíma, P., Turek, B.: Poradna zdraví. Český rozhlas 2, pořad Káva o čtvrté, 4.11.2003 (rozhlasové vysílání).
37) Šíma, P.: Úloha výživy v prevenci infekčních onemocnění. Český rozhlas 2, pořad Dobré ráno (rozhlasové
vysílání)
38) Šíma, P., Turek, B., Richter, J., Nove přístupy ve výživě obyvatelstva v 21. století: imunonutrice,
ekonutrice a ekoimunonutrice. Výživa a potraviny, (in press).
3