vz05_pz07-08-web - Průběžná zpráva za rok 2007-8

MSM 0021620820
PERIODICKÁ ZPRÁVA
o řešení výzkumného záměru zahájeného 1. ledna 2005
za období 1. 1. 2007 – 31. 12. 2008
Pracovní skupina č.6
2. PERSONÁLNÍ ZABEZPEČENÍ
2. 1. Celková pracovní kapacita
Porovnání (fyzického) počtu osob a přepočteného počtu osob na začátku a na konci
sledovaného období (přepočtený počet osob uveďte desetinným číslem ve sloupci celkový
pracovní úvazek):
Stav k 31. 12. 2006
Celkový pracovní
Počet osob
úvazek
Kategorie
D.1
D.2
D.3
Stav k 31. 12. 2008
Celkový pracovní
Počet osob
úvazek
10
14
2. 2. Personální změny u zaměstnanců podílejících se na řešení výzkumného
záměru (tzv. kategorie D.1)
Příjmení a tituly
Jméno
Selke-Krulichová
Mgr, PhD
Iva
Kubová
Doc MUDr
Zuzana
Příjmení a
tituly
Jméno
Rok
narození
1970
Stěžejní činnosti
Hodnocení výsledků.
Statistická analyza,
Modelování.
Výzkum zrakových
evokovaných
potenciálů
Pracovní
úvazek
0.5
0.5
Datum
změny
Rizikové
těhotentsví
1.9.2007
ukončení
31.3.2008
ukončení
Rok
narození
Stěžejní činnosti
Pracovní
úvazek
Datum
změny
Hodnocení výsledků.
Statistická analyza.
Modelování.
Výzkum zrakových
evokovaných
potenciálů
.0.5
1.9.2007
přijetí
0.5
1.4.2008
přijetí
Záhora
Mgr, PhD
Jiří
1964
Kremláček
Doc Ing.
Jan
1967
Komentář
Odchod Mgr Selke-Krulichové pro rizikového těhotentsví a mateřskou dovolenou
Odchod doc Kubové - pro déletrvající onemocnění převzal výzkumnou aktivitu blízký
spolupracovník doc Kremláček, kterému paní docentka jako uznání významného posunu
v řešení výzkumného úkolu přenechala svou pozici v D1
Verze VZ05.2
1
MSM 0021620820
Kvalifikační růst pracovníků:
Ing Jaroslav Chládek, PhD byl jmenován docentem počínaje prosincem 2007.
Zároveň byl spolupříjemcem ceny Výboru České společnosti pro experimentální a klinickou
farmakologii (ČSEKFT) za učebnici kolektivu autorů: Farmakologie pro studenty
zdravotnických oborů
V nejbližší době předloží habilitační disertaci dr Mičuda.
V obou případech přispěl VZ významou měrou ke splnění požadavků pro zahájení
habilitačního řízení.
3. ŘEŠENÍ VÝZKUMNÉHO ZÁMĚRU
3. 1. Opatření přijatá na základě výsledků průběžného hodnocení
Především byl kladen důraz
1. na integraci v plnění anotovaných úkolů v rámci VZ, tj, na společný vývoj metod a na
využití stávající kapacity přístrojové vybavení i personálního obsazení. V tomto jsou velmi
přínosné Vědecké konference na začátku kalenářního roku (a Sborník astrakt pro ty, kteří se
nemohou osobně zúčastnit). Pro PGS jsou velmi přínosné semináře ve 2. roku studia.
Integrace se konkrétně uskutečnila
skupina dr Mičudy se
- skupinou 7 (ved. prof.Mokrý). Ustav histologie poskytl servis v detekci poškození orgánů na
úrovni jater a sleziny a nabídl spolupráci ve studiu funkce kmenových buněk
- skupinou 5 (ved. doc. Holeček) v detekci aminokyselin v podmínkách patologického stavu
navozeného extrahepatální cholestázou a intrahepatální cholestázou (model sepse),
- skupinou 3 (ved. prof.Červinková)- práce na úrovni metody využívající hepatocyty,
- skupinou 9 (ved.dr Tomšík) využití metody stanovující permeabilitu biomembrán GIT.
Pracovní skupina dr Mičudy recipročně poskytuje metody vyšetření na molekulární úrovni.
skupina doc Chládka s
pracovníky UKIA (dr Krčmová) a plicní klinika (dr oblížek, dr. Sedlák) v klinických studiích
s využitím detekce NO,
-se skupinou 2 (vedoucí prof červinky) pilotní experiment sledování nitračního a oxidačního
stresu na modelu buněčných kultur
- konzultace v oblasti farmakokinetiky a statistického hodnocení experimentů
Prof. Martínková i ostatní velice oceňují spolupráci s pracovištěm doc Živné. Excelentní
přístup a samostatné inciativní provedení laboratorních prací (pracovníky D2) přispívá ke
kvantitě i kvalitě výstupů
2. na publikační aktivitu, která se zvýšila zároveň s tím, jak se podařilo vypracovat a
validovat metody a také nabídnout metodické zázemí dalším pracovištím VZ.
3. Ustav farmakologie přijímá plynule nové PGS (v současnosti jich pracuje na ústavě 10),
jejichž výchově a práci se příslušní pracovníci-školitelé odpovědně věnují. O tom svědčí i
poměrně častá aktivní účast PGS na zahraničních kongresech, kde úspěšně své výsledky
prezentují. V jednom případě byla získána první cena za kvalitu posteru.
4. Skupina 6 se cíleně zabývá úkoly, které vycházejí z potřeb praxe a mají rovněž v praxi
své poměrně rychlé uplatnění. Sepjetí eperimentální a klinické vědecké práce vede k hlubšímu
poznaní: pozoruhodné výsledky kliniko-farmakologické vybízejí k prověření cestou
experimentální, např. modelováním patofyziologických podmínek a naopak poznatky
z experimentu v laboratorních podmínkách upozorňují na možná úskalí či benefit
farmakoterapie. Týká se to např. i lékové závislosti. Konkrétně pracovníci skupiny 6 úzce
spolupracují s klinikou dětskou, kožní, ortopedickou, neurologickou a psychiatrickou.
Verze VZ05.2
2
MSM 0021620820
3. 2. Průběh řešení ve sledovaném období
Úvod: Cíle jsou definovány pro obor lékařská farmakologie, a to jak pro klinickou tak experimentální
součást. Dílčí řešení vycházejí ze dvou zdrojů: ze vstupní anotace a také z recentních výsledků
dosažených v rámci VZ. Klinickou a experimentální-preklinickou část nelze organizačně striktně
oddělit, protože pozoruhodné výsledky klinicko-farmakologické inspirují k jejich prověření a k hlubšímu
studiu metodami farmakologie experimentální, kde je možno s výhodou pokusné podmínky předem
nastavit a definovat a naopak experimentální výstupy je možno porovnat a konsultovat s praxí.
Ve studiích zabývajících se se biomarkery zánětu, nitračního a oxidačního stresu v dýchacích
cestách byla na preklinické úrovni provedena studie vlivu intratracheálního podání
bakteriálního lipopolysacharidu na dostupnost oxidu dusnatého a parametry oxidačního a
nitračního stresu v dýchacích cestách potkana SPF. Ve spolupráci s pracovnicemi vivária LF
byl zaveden chov potkana Brown-Norway, který je přirozeně citlivý k navození Th2- buněčné
imunitní odpovědi a probíhaly práce na modelu ovalbuminem vyvolaného alergického zánětu
dýchacích cest. V klinicko-farmakologické studii byla zavedena a v pilotní studii ověřena
metoda detekce exhalovaného oxidu dusnatého (NO) při klidovém dýchání. Ve spolupráci
s ÚKIA (Dr. Krčmová) byla provedena klinická studie vlivu specifické nazální alergenové
provokace na koncentrace exhalovaného a nazálního NO. Dále byla technika detekce NO při
jednom výdechu kontrolovanou rychlostí rozšířena o další výdechové rychlosti (celkem 5),
což je důležité pro oddělenou kvantifikaci alveolárního a bronchiálního příspěvku
k vydechovanému množství NO.
Dalším biomarkerem, které sk.6 studuje, je reakce pupily predikující genetický
polymorfismus CYP2D6. Bylo prokázáno, že homozygotní extenzivní metabolizátoři
vykazují téměř trojnásobně mohutnější miózu nežli metabolizátoři pomalí. Studie využívá
jako modelové léčivo analgetikum tramadol, ale zmíněný farmakodynamický biomarker
(mióza- reakce pupily) bude využitelný k predikci účinku a bezpečnosti všech léčiv, jejichž
biodegradace nebo bioaktivace je CYP2D6 katalyzována. V roce 2008 navazovala klinická
studie ke stanovení fenotypu CYP2D6 z jednorázového odběru moči u 75 zdravých
dobrovolníků při použití modelového léčiva tramadolu. Ze vzorku moči byla stereoselektivní
metodou GC-MS stanovena koncentrace (+) – tramadolu,
(-)-tramadolu, (+)-Odemetyltramadou a (-)-O-demetyltramadolu, ze kterých byl určen metabolický poměr Odemetyltramadolu/tramadolu pro každý enantiomer i racemickou směs. Všechny uvedené
analyty byly stanovovány také po dekonjugaci a výsledky použity pro výpočet matabolických
poměrů. Průměrné (SD) hodnoty metabolického poměru pro + enantiomery byly 0,86(1,09)
v nekonjugované formě a 1,00(1,24) v celkové konjugované i nekonjugované formě.
Odpovídající hodnoty metabolického poměru pro – enantiomery byly 0,73 (0,74) a 1,53
(1,59) a pro racemickou směs 0,79 (0,89) a 1,26 (1,40). Vysoká variabilita výsledků
metabolického poměru byla způsobena přítomností pomalých, intermediárních i středních
metabolizátorů v souboru. Na genotypu CYP2D6 byla závislá zejména eliminace (+)-Odemetyltramadolu a proto i metabolický poměr založený na koncentracích (+)-enantiomerů
analýz byl senzitivnějším biomarkerem pro aktivitu jaterního CYP2D6
Sk. 6 je také soustředěna na biomarkery funkce CNS, které by predikovaly průběh
onemocnění (Alzheimerova choroba), hodnotily účinnost a bezpečnost léčby (paklitaxel) nebo
lékového abusu (nadužívání –modelem metamfetamin). Jako validní se jeví hodnocení
intraindividuálního vývoje evokovaných potenciálů a zpracování zrakové informace. Pomocí
psychologických a elektrofyziologických testů –ERP- během šestiměsíčního sledování
pacientů bylo zjištěno, že léčivo Ebixa zpomaluje obvyklou progresi Alzheimerovy choroby a
že její účinek lze hodnotit pomocí ERP. U jedinců dlouhodobě užívajících metamfetamin bylo
zjištěno zpomalení a zmenšení neurálních reakcí na zrakové podněty. Byla navržena metodika
Verze VZ05.2
3
MSM 0021620820
a popsány vztahy umožňující objektivní sledování únavy a habituace prostřednictvím
elektrofyziologických vyšetření.
V preklinickém experimentálním výzkumu byly ukončeny in vivo práce na hodnocení
potenciálního příznivého vlivu resveratrolu a pravastatinu na chronické cholestatické
poškození u potkanů. Byl zaveden a verifikován model hodnocení permeability
hematobiliární bariéry s demonstrací její výrazné poruchy u akutní cholestázy navozené
podvazem žlučovodu u potkanů (spolupráce se skupinou MUDr. Tomšíka). Byly dokončeny
experimenty hodnotící uvolňování metotrexátu z kostního cementu. Podařilo se prokázat
závislost mezi rychlostí uvolňování metotrexátu a jeho lékovou formou použitou pro přípravu
cementu. Současně byl prokázán výrazný inhibiční účinek této látky na proliferaci
kmenových buněk s jejich kumulací v S a G2 fázi buněčného cyklu (spolupráce se skupinou
Prof. Mokrého). Podařilo se finalizovat hodnocení potenciálně závažné interakce mezi
amiodaronem a metotrexátem v in vivo studii u potkanů. Zjistili jsme poruchu v biliární
exkreci metotrexátu podmíněnou současně podaným amiodaronem. Současně se podařilo
identifikovat lokalizaci této interakce na vstupu látek do hepatocytů.
3. 3. Zhodnocení plnění cílů a harmonogramu řešení
Cíle jsou definovány pro obor lékařská farmakologie, a to jak pro klinickou, tak
experimentální část. Dílčí cíle řešení vycházejí ze dvou zdrojů: ze vstupní anotace a
z recentních výstupů dosažených v rámci VZ. Anotace je průběžně plněna, a spěje k
hlubšímu poznání fyziologických a patologických dějů a jejich mechanismů. Harmonogram,
jak je každoročně upřesňován při zahájení nové etapy. V dalším období bude třeba se
věnovat kovariátě - nutrici, která může významě ovlivnit děje dosud charakterizované
z pohledu kinetiky dynamiky za patologického stavu.
Verze VZ05.2
4
MSM 0021620820
4. VÝSLEDKY
4. 1. Dosažené výsledky
Výsledky byly zpracovány formou manuskript a nabídnuty edičním radám odborných
časopisů impaktivaných i neimpaktovaných recenzovaných.
Články v recenzovaných impaktovaných časopisech
Uplatněné
Fuksa L, Brcakova E, Cermanova J, Hroch M, Chladek J, Kolouchova G, Malakova J,
Martinkova J, Staud F, Micuda S. Amiodarone modulates pharmacokinetics of low-dose
methotrexate in rats. Biopharm Drug Dispos. 2008 Jul;29(5):289-99. (IF = 1,238)
Tomsik P, Sispera L, Rezacova M, Niang M, Stoklasova A, Cerman J, Knizek J, Brcakova E,
Cermanova J, Micuda S. Increased melibiose/rhamnose ratio in bile of rats with acute
cholestasis. J Gastroenterol Hepatol. 2008 Dec;23(12):1934-40. (IF = 1,673)
KREMLACEK, J. – KUBA, M. – KUBOVA, Z. – LANGROVA, J. – VIT, F. – SZANYI, J.
Within-session reproducibility of motion-onset VEPs: effect of adaptation/habituation or
fatigue on N2 peak amplitude and latency. Doc Ophthalmol, Sep 2007, vol. 115, no. 2, s. 95103. IF 0.938
KREMLACEK, J. – HOSAK, L. – KUBA, M. – LIBIGER, J. – CIZEK, J. Visual information
processing in recently abstaining methamphetamine-dependent individuals: evoked potentials
study. Doc Ophthalmol, Jun 19 2008, vol. 117, no. 3, s. 245-55. IF 0.938
Slanar O, Nobilis M, Kvetina J, Mikoviny R, Zima T, Idle JR, Perlik F. Miotic action of
tramadol is determined by CYP2D6 genotype. Physiol. Res. 56: 129-136, 2007
Chládková J, Havlínová Z, Chyba T, Krcmová I, Chládek J. Analysis of single-breath profiles
of exhaled nitric oxide in children with allergy and asthma: guideline-derived plateau
concentrations compared to results of automatic evaluation by two analyzers. J Asthma.
2008;4:820-6. IF 1,324
HOSAK, L. – KREMLACEK, J. – KUBA, M. – LIBIGER, J. – CIZEK, J. Mismatch Negativity
in Methamphetamine Dependence: A Pilot Study. Acta Neurobiologiae Experimentalis, 2008,
vol. 68, no. 1, s. 97-102.
IF 1.207
Chládek J, Simková M, Vanecková J, Hroch M, Chládkova J, Martínková J, Vávrová J,
Beránek M. The effect of folic acid supplementation on the pharmacokinetics and
pharmacodynamics of oral methotrexate during the remission-induction period of treatment
for moderate-to-severe plaque psoriasis. Eur J Clin Pharmacol. 2008;64:347-55. IF 2,177
Verze VZ05.2
5
MSM 0021620820
Uplatnění zahájeno:
Prochazka E, Soukup T, Hroch M, Fuksa L, Brcakova E, Cermanova J, Kolouchova G,
Urban K, Mokry J, Micuda S. MTX released in vitro from bone cement inhibits human stem
cell proliferation in S/G2 phase. International Orthopaedics, 2008 (přijato k publikaci, IF =
0,903).
Články v recenzovaných neimpaktovaných časopisech
Uplatněné:
Jiřina Chládková, Jaroslav Chládek. Přínos měření oxidu dusnatého ve vydechovaném
vzduchu pro farmakoterapii průduškového astmatu u dětí. Alergie 2007, č. 2, s. 177-181
Slanař O., Dražďáková M., Babiárová K., Pechandová K., Buzková H., Perlík F., Zima T.
Genotypizace cytochromu P450 2D6 a 2C19. Čas.Lék.čes. 2007,146, s 708-711
Chládková J., Havlínová Z., Krčmová I., Chyba T., Chládek J. Metodická hlediska vyšetření
vydechovaného oxidu dusnatého u dětí. Alergie 2008, 10 (4): 197-203.
Články ve sbornících
Uplatněné:
Sborníky abstrakt:
Zuzana Havlínová, Jaroslav Chládek, Stanislav Mičuda, Jiřina Martínková, Jana
Prokopová Arginine metabolism in a rat model of bronchial asthma. Biomedical Papers, 151,
2007, 29-31
Jaroslav Chládek, Jaroslava Vaněčková, Marie Šimková, Miloš Hroch, Jiřina Martínková,
Jiří Grim. A randomized study of folic acid supplementation during the initial phase of
psoriasis treatment with methotrexate. Biomedical Papers, 151, 2007, 35-36
Cermanova J, Micuda S, Brcakova E, Fuksa L, Hroch M, Chladek J, Hajková J, Lotkova
H, Martinkova J, Cervinkova Z, Staud F. Influence of azithromycin on hepatobiliary and
renal excretion of methotrexate in rats. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech
Repub 2007, 151 (Supplement 1): 14-16.
Verze VZ05.2
6
MSM 0021620820
4. 2. Zhodnocení dosažených výsledků
Pracovní skupina 6 má své charakteristické rysy.
Dosažené výsledky byly průběžně publikovány v českých recenzovaných nebo zahraničních
impaktovaných časopisech. Jedná se o originální poznatky, které jsou postaveny na
farmakologické analýze za použití široké škály metod - od molekulární úrovně, in vitro až po
in vivo techniky zaměřené jak systémově, tak na jednotlivé orgány. Poznatky vycházejí jak
z metod farmakodynamiky, tak farmakokinetiky. Ve specifických případech jsou vypracovány
metody molekulární farmakologie, které umožní hledat mechanismy jevů a jejich změn od
úrovně mRNA, proteinů až k celému organickému systému. Pracovní skupina 6 vládne také
metodami farmakogenetiky, které umožnují analyzu genotypu i fenotypu, zaměřenou na
identifikaci nemocných ohrožených rizikem subterapeutických plazmatických koncentrací
nebo naopak toxicitou léčiv. V posledním roce se dokonce podařila detekce analgetika
tramadolu a jeho stereoizomerů, což je ukázka špičkové analytiky.
Široký záběr metod postupně vypracovaných se v průběhu řešení stal nedocenitelným
základem pro úzkou spolupráci mezi pracovními podskupinami sk.6, tak vyhledávaným
zájmem pro spolupráci s ostatními skupinami VZ.
V oblasti klinicko-farmakologického výzkumu je třeba podtrhnout vývoj techniky detekce
oxidu dusnatého při jednom výdechu kontrolovanou rychlostí rozšířenou o další výdechové
rychlosti (celkem 5), což je důležité pro oddělenou kvantifikaci alveolárního a bronchiálního
příspěvku k vydechovanému množství oxidu dusnatého.
V klinické části zabývající genetickým polymorfismem, se podařilo prokázat jako originální
výsledek potvrzující, že reakce pupily predikuje genetický polymorfismus CYP2D6 v kinetice
tramadolu. Následně během dalšího roku řešení byla zavedena vysoce selektivní metoda
detekce tramadolu a jeho hlavních metabolitů včetně stereoizomerie, která byla dále využita
ke stanovování fenotypu.
Studium biomarkerů změn funkcí CNS poskytlo zcela originální poznatky, když potvrdilo
význam elektrofyziologického vyšetření k objektivizaci změn a jejich vývoje, dosud
neobjasněných.
V preklinické části úvodní cíl spočívající v hodnocení změn kinetiky léčiv během
modelových situací reflektujících klinicky závažné stavy (inhibice jaterní eliminace léčiv
nebo jaterní onemocnění) se daří plnit dle stanoveného harmonogramu. Změny proti
původnímu plánu spočívají v rozšíření experimentů o buněčné modely (kmenové buňky a
izolované potkaní hepatocyty), které umožňují zkvalitnit dosahované výsledky a snížit
spotřebu laboratorních zvířat.
Vynaložené prostředky byly zhodnoceny přijetím manuskript k publikaci do impaktovaných
mezinárodních odborných časopisů a do neimpaktovaných recenzovaných časopisů.
Verze VZ05.2
7