HAV Card

Rapid-VIDITEST
HAV Card
(Jednokrokový kazetový test pro detekci Hepatitidy A viru ze vzorku stolice )
Návod k použití soupravy
Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č.365, Vestec u Prahy, 252 42 Jesenice, Česká republika,
tel: +420 261 090 565, fax +420 261 090 566, web: www.vidia.cz, e-mail: [email protected]
POUŽITÍ:
Rapid-VIDITEST HAV Card je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní
detekci antigenů Hepatitidy A ve vzorcích stolice, který může být užitečný pro diagnózu HAV
infekce.
ÚVOD:
Virus Hepatitidy A je onemocnění způsobené spletením jedné RNA patřící viru do skupiny
Pikornavirů. Většina akutních HAV infekcí je subklinická. Příznaky jsou mírné a nespecifické.
Nejčastěji mezi příznaky patří horečka, malátnost, únava a střevní potíže. Mohou se také
projevit tmavou močí, světlou stolicí či žloutenkou. Závažnost akutní infekce HAV je úměrná
věku pacienta, u mladších pacientů bývá onemocnění mírnější, než u seniorů. HAV se šíří
fekální kontaminací jídla, nebo pitné vody. Přestože je virus přítomen v krvi, omezené
množství cirkulujícího viru a krátké trvání virémie, je přenos tohoto viru velmi neobvyklý.
Výkaly infikovaných osob obvykle obsahují tento virus 2 týdny před prvním projevem
onemocnění, po dobu nejméně 2 týdnů až 3 měsíců. Akutní Hepatitida A je jednou z dobře
známých nemocí, která se dá předcházet očkováním aktivního viru hepatitidy typu A viru
(HAV), očkování se doporučuje zejména u rizikových skupin pacientů.
PRINCIP TESTU:
Rapid-VIDITEST HAV Card je kazetový kvalitativní imunochromatografický test pro
stanovení Hepatitidy A viru ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány
monoklonální protilátky proti antigenům heptitidy A.
V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný antivirem protilátek hepatitidy A na testovací proužek. Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru
po membráně kazety. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen
specifickými protilátkami, což se ve „výsledkové zóně“ projeví jako barevná linka. Směs pak
vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v „kontrolní zóně“, kde se vždy na
konci testu objeví zelená linka.
Přítomnost této zelené linky, je ověření, že byl přidán dostatečný objem k získání dostatečné
kontroly činidel.
1
OBSAH SOUPRAVY:
-
testovací kazety
odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky
návod k použití
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU
-
nádoba na sběr vzorků
jednorázové rukavice
stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ:
Odeberte dostatečné množství stolice (1-2 g nebo ml kapalného vzorku).Vzorky odebírejte do
čistých odběrových nádob (žádné konzervační nebo dopravní média).Vzorky mohou být
uchovány v chladničce (2-4°C/36-40°F) po dobu 1-2 dny. V případě delšího skladování,musí
být vzorek uchováván ve zmrazeném stavu při teplotě –20°C/4°F. Před použitím nechte vzorky
vytemperovat na laboratorní teplotu a důkladně promíchejte.
Příprava vzorků
a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1).
b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku
stolice (cca 150mg) (2). Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační
tyčinku do ředicího roztoku.
c) Důkladně promíchejte zkumavku za účelem dobré homogenizace vzorku (3).
2
PRACOVNÍ POSTUP:
Před testováním nechte kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní
teplotu (+15 až +30°C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test.
1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace
vzorku. Uřízněte nebo odstřihněte konec špičky zkumavky (obr. 4).
2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST HAV Card z obalové folie a položte
ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro
aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku
a kazetu.
3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky (100 μl)
naředěného vzorku (obr. 5). Vyvarujte se aplikace pevných částic stolice.
V případě, že test neproběhl kvůli přítomnosti pevných částic v aplikačním okénku,
promíchejte vzorek v okénku anebo přidejte kapku extrakčního pufru a vyčkejte až uvidíte
vzlínání kapaliny do testovací zóny.
4. Po 10 minutách odečtěte výsledek.
3
INTERPRETACE VÝSLEDKU:
Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample – vzorek), výsledky se odečítají
v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna).
Zelená
Červená
Negativní
Červená
Pozitivní
Neplatný
Neplatný
Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane
čistá.
Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové
zóně T. To může znamenat infekci způsobenou HAV.
Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na
přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu
jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií.
Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají,
kontaktujte svého dodavatele.
Poznámka k interpretaci výsledku:
Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku.
Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu
onemocnění.
PLATNOST TESTU:
V testu je použit interní standard. Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně
objeví zelená linka. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu.
Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu.
4
OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY:
Závažnost akutní infekce HAV je úměrná věku pacienta, u mladších pacientů bývá onemocnění
mírnější, než u seniorů. V skutečnosti, celková úmrtnost je jenom 0,1% ve všeobecní populace
oproti 1-2% u starších pacientů.
OMEZENÍ TESTU:
1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety.
2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé
linky).
3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky.
4. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu akutní infekci HAV. Potvrzení diagnózy může
provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu.
ÚČINNOST TESTU:
Citlivost a Specifita:
Byly otestovány vzorky stolice od pacientů se stejnými symptomy.
Všechny pozitivní vzorky byly testovány Rapid-VIDITEST HAV Card a porovnány s výsledky
získanými při kultivaci. Výsledky vykazovaly > 99% shodu v citlivosti i specifitě.
Použití myší monoklonální protilátky v Rapid-VIDITEST HAV Card zaručuje vysoký stupeň
specificity pro detekci těchto bakterií. Protilátky použité k vyhodnocení tohoto testu rozpoznají
epitopy přítomné v antigenu, který se nalézá ve vzorku stolice pacienta, stejně dobře jako
z bakteriálních kultur in vitro.
Křížová reaktivita:
Ke stanovení křížové reaktivity byl použit Rapid-VIDITEST HAV Card. Nebyla nalezena
žádná křížová reaktivita s běžnými střevními patogeny, dalšími organismy a někdy přítomnými
látkami ve stolici ( Rotavirus, Adenovirus,Astrovirus,Enterovirus).
SKLADOVÁNÍ A STABILITA:
Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30°C. Test je stabilní do data expirace
uvedeného na obalu. Nezmrazujte.
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ:
-
pouze pro in vitro diagnostiku
nepoužívejte po uplynutí expirační doby
se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem
odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy
5
REFERENCE:
1.
2.
3.
4.
1. 1 MINUK, G.Y. et al.: “Viral hepatitis and surgeon”. HPB, 2005; 7: 56-64.
BRUGUERA, M. et al.: “Prevención de las hepatitis virales”. Enferm Infecc Microbiol
Clin. 2006;24:649-56.
COULEPIS, A. et al.: “Detection of Hepatitis A Virus and Antibody by Solid-Phase
Radioimmunoassay and Enzyme-Linked Immunosorbent Assay with Monoclonal
Antibodies.” Journal of Clinical Microbiology, July 1985, Vol. 22, No. 1, p. 119-124.
BOROVEC, S. et al.: “Synthesis and Assembly of Hepatitis A Virus-Specific Proteins
in BS-C-1Cells.” Journal of Virology. June 1993, Vol. 67, No. 6,
p. 3095-3102.
POUŽITÉ SYMBOLY:
Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Datum expirace
Výrobce
Poslední revize tohoto návodu: 11/2010
6