ECSFG 2013 alias Evropský koncensus

ECFS 2012 – 2013
(European Consensus Finding Study,
Autoantibodies in Rheumatic Diseases)
alias Evropský konsenzus
kolektiv autorů
XVII. ČASOMIL
Český A Slovenský Odborný Meeting Imunologických Laboratoří
12. – 14. 6. 2013 v Kutné Hoře
Serum No. 1
Test
Result
FP1
ANA (IIFT)
3
b2
Centromere (IIFT)
0
FP2
FP3
Conjugate
Final Result
IgG
3
0
Fluorescence pattern not listed in the pull-down menu
ELISA
Test
Result
FARR-assay
IU
Result
Crith.
IU
IIFT
ds-DNA
Other Method
Method
Result
Final Result
IU
2
2
Other method
Test
ELISA
ELISAc
IB
ID
CIE
ALBIA
Method
SS-A/Ro
Result
natural /
recombin
antigen
Final Result
Fibrillarin
- SS-A/Ro 52
Coilin p80
Cardiolipin IgG
- SS-A/Ro 60
Th/To (RNase P)
Cardiolipin IgM
SS-B/La
U1-snRNP
- U1-70K
Ratio: specific
result/cut-off value
assay
NOR-90
Cardiolipin IgA
RNA polymerases
β2-Glycoprotein IgG
Ku
β2-Glycoprotein IgM
- U1-A
- Ku 70
Phospathidylserin IgG
- U1-C
- Ku 80
Phospathidylserin IgM
Sm
Mi-2
Prothrombin IgG
- Sm B'B
His-tRNA synthetase (Jo1)
- SmD
Prothrombin IgM
Ala-tRNA synthetase (PL12)
Ribosomes P0, P1, P2
PCNA
SL/Ki
C1q
Histones
Nucleosomes
CENP A
Ileu-tRNA synthetase (OJ)
Thr-tRNA synthetase (PL7)
Gly-tRNA synthetase (EJ)
Tryp-tRNA synthetase
Asp-tRNA synthetase
Signal recognition particle
C-ANCA
CENP B
CENP C
Scl-70/Topo I
PM/Scl
- PM/Scl-75
- PM/Scl-100
Annexin IgG
Annexin IgM
Citrulline (ACPA)
RF-IgM
RF-IgG
RF-IgA
RF non-isotype
P-ANCA
RA-33
atypical ANCA
Mitochondria type M2
PR3-ANCA
Nuclear pore complex gp210
MPO-ANCA
Sp 100
GBM
Other antigens
Použité metody a diagnostické soupravy
•
ANA IgG IFA
–
•
Euroimmun (test 2. generace)
Euroimmun (Granulocyty fixace EtOH,
CHOH, HEp-2, opičí játra)
ANCA IgG ELISA
–
•
Inova (C. luciliae)
ANCA IgG IFA
–
•
Euroimmun
Anti-Nukleozómy IgG ELISA
–
•
Euroimmun (ANA 3b)
Innogenetics (INNO-LIA ANA)
Anti-dsDNA IgG IFA (CLIA)
–
•
–
Euroimmun (HEp-2)
Myositis IgG IB
–
•
APLA IgG, IgM ELISA
ANA IgG IB
–
–
•
•
OrgenTec (MPO, PR3, Cathepsin G,
Elastáza, Lactoferin, BPI, Lysozym)
Anti-GBM IgG IFA
–
Euroimmun (krysí játra)
•
Anti-CCP IgG (test 3. generace)
–
•
Euroimmun
AIFA IgG ELISA
–
•
Bio-Rad (L/K/S – krysí)
Liver antigens IB
–
•
Siemens
AMA IgG IFA
–
•
Abbott (Ag – Eurodiagnostica)
RF IgGAM INf
–
•
OrgenTec (ACLA, b-2-GPI,
fosfatidylserin, fosfatidylinositol,
protrombin, annexin V)
Euroimmun
APCA IgG ELISA
–
Euroimmun
Membranous nuclear patterns
a1
Smooth membranous
a2
Punctate membranous
Nucleoplasmic patterns
b1
Homogeneous/positive nucleoli
b2
Homogeneous/negative nucleoli
b3
Large speckled (nuclear matrix)
b4
Coarse speckled
b5
Fine speckled
b6
Grainy Scl-70-like
b7
Pleomorphic speckled (PCNA)
b8
Centromere
b9
Multiple nuclear dots (NSp-I)
b10
Coiled body
Nucleolar patterns
c1
Homogeneous nucleolar
c2
Clumpy nucleolar
c3
Punctate nucleolar
Spindle apparatus patterns
d1
Centriole
d2
Spindle pole (NuMa)
d3
Spindle fibre
d4
Midbody (MSA-2)
d5
CENP-F (NSp-II, MSA-3)
Cytoplasmic fluorescence patterns
e1
Fine speckled cytoplasmic
e2
Diffuse cytoplasmic
e3
Mitochondrial-like
e4
Lysosomal-like
e5
Golgi-like
e6
Actin-like
e7
Vimentin-like
f1
g1
Negative
Unknown
Anti-GBM disease
Antiphospholipid Syndrome, primary
Antiphospholipid Syndrome, secondary
Anti-Synthetase Syndrome
Churg-Strauss Syndrome
Dermatomyositis
Drug induced lupus
Granulomatosis with polyangiitis (former Wegener granulomatosis)
Inflammatory bowel disease
Microscopic polyangiitis
Mixed connective tissue disease
Polymyositis
Primary biliary cirrhosis
Rheumatoid arthritis
Scleroderma, diffuse
Scleroderma, limited
Scleroderma /Myositis overlap
Similar to limited scleroderma
Sjögren Syndrome, primary
Sjögren Syndrome, secondary
Subacute cutanous lupus erythematosus
Systemic lupus erythematosus
Vasculitis, systemic
Vzorek 1
SLE/PM - overlap
*
*
CLIA - 2
Homogenní, neg. jadérka - 3
*
*
Jo-1 – 3, Ro52 - 2
*
*
*
SmB – 2, ANuA - 0
Vzorek 1
ECFS
ZU UL
1:80
ZU UL
1:10
Vzorek 1 v KČS
skvrnitá
25 (73,5%)
nukleolární homogenní
17 (50%)
1 (2,9%)
Ku-like
SCL70-like
5 (14,7%)
2 (5,9%)
Vzkazy:
•obrázok chabej kvality
•Vzkaz pro přátele: vím, že jsou tam zatím hlouposti, prosím, zatím vydržte.
Vzorek 2
SLE
*
Homogenní,
poz. jadérka
– clumpy – 4
*
*
Ro52 – 3, SS-A – 3, SS-B – 3
*
CLIA – 2
*
RF – 0
Histony – 1, ANuA – 3
*
Vzorek 2
ECFS
ZU UL
1:10
ZU UL
1:80
Vzorek 2 v KČS
skvrnitá
homogenní
nukleolární
SCL70-like
10 (29,4%)
15 (44,1%)
24 (70,5%)
6 (17,6%)
Vzkazy:
•Hook effect?
•jiný vz?
•titre nie sú z tej istej vzorky, fluorescenčné obrazy sú rozdielne
•zámena séra pri riedení
Vzorek 3
SLE
**
*
*
Homogenní, neg. jadérka – 4,
hrubá zrnitá
*
PCNA – 1, histony – 3, ANuA – 4
*
*
CLIA – 2
*
ACL-M – 1, b2GPI-M – 1, ACLG/b2GPIG – 0
Vzorek 3
ZU UL
1:10
ECFS
ZU UL
1:80
Vzorek 3 v KČS
Jemná skvrnitá
Hrubá skvrnitá
(jaderná matrix)
homogenní
18 (52,9%)
16 (47,1%)
2 (5,9%)
Vzkazy:
•chromatínová platnička v metafáze sa mi javí pozit.
•poškodený preparát
•stlačený substrát
Vzorek 4
SjS
*
Zrnitá, Scl70-like – 2
*
*
Ro52 – 3, SS-A – 3, SS-B – 3
*
*
CLIA – 0
Histony – 0, ANuA – 1, RF – 0
Vzorek 4
ZU UL
1:10
ECFS
ZU UL
1:80
Vzorek 4 v KČS
skvrnitá
homogenní
Ku-like
SCL70-like
negativní
20 (58,8%)
5 (14,7%)
1 (2,9%)
1 (2,9%)
4 (11,8%)
Vzkazy:
•nevidím tam buňky v metafázi
•chýba bunka v mitóze
•nezachytená mitóza
Vzorek 5
SLE
*
*
*
Homogenní, neg. jadérka – 4
*
Histony – 0, ANuA – 4
*
CLIA – 2
RF screen – 2
Vzorek 5
ZU UL
1:10
ECFS
ZU UL
1:80
Vzorek 5 v KČS
Jemná skvrnitá
Hrubá skvrnitá
(jaderná matrix)
Nukleolární
Homogenní
Ku-like
SCL70-like
20 (58,8%)
8 (23,5%)
18 (52,9%)
1 (2,9%)
5 (14,7%)
2 (5,9%)
Vzkazy:
•obrázok chabej kvality
•Vzkaz pro přátele: vím, že jsou tam zatím hlouposti, prosím, zatím vydržte.
Vzorek 6
PM
*
*
Difúzní cytoplazma – 1
SRP – 4
Vzorek 6
ECFS
ZU UL
1:10
ZU
ZUUL
UL
1:80
1:80
Vzorek 6 v KČS
negativní
cytoplazmatická
Jaderná membrána
Neznámý typ
24 (70,6%)
7 (20,6%)
1 (2,9%)
1 (2,9%)
Vzkazy:
•potrebný nižší titer riedenia
•treba pozrieť v nižšom riedení
•zlý kontakt so sérom zaschnuté
Vzorek 7
Chronická atrof.
gastritida
*
*
*
Difúzní cytoplazma – 4
ALE:
Scl70 – 0, ACPA – 0
UL: APCA – 3, H+/K+ ATPase – 3
Vzorek 7
ECFS
ZU UL
1:10
ZU UL
1:80
Vzorek 7 v KČS
Skvrnitá/
jemná
skvrnitá
Hrubá
skvrnitá
(jaderná
matrix)
Nukleolární
Homogenní
Ku-like
SCL70-like
17 (50%)
8 (23,5%)
16 (47,1%)
1 (2,9%)
5 (14,7%)
2 (5,9%)
Vzkazy:
•obrázok chabej kvality
•Vzkaz pro přátele: vím, že jsou tam zatím hlouposti, prosím, zatím vydržte.
Vzorek 8
PM
*
*
PL-7 – 3, Ro52 – 2
Difúzní cytoplazma – 2
*
*
APLA – 0
*
Vzorek 8
ZU UL
1:10
ECFS
ZU UL
1:80
Vzorek 8 v KČS
Jemně zrnitá
cytoplazma
Difúzní
cytoplazma
Cytoplazma SRP-like
Golgi-like
Negativní
14 (41,2%)
6 (17,6%)
5 (14,7%)
1 (2,9%)
5 (14,7%)
Vzkazy:
•obtížně hodnotitelné, nestejnoměrně - fading od předchozího readera. Opakovat.
•doplniť mozaiku tkanív
• chýba mitóza a hepar
•obrázok chabej kvality
Vzorek 9
PBC, SjS
*
Sp100 – 3
*
Multiple nuclear dots – 1
*
*
Ro52 – 3, SS-A – 3, SS-B – 3
Vzorek 9
ECFS
ZU UL
1:10
ZU UL
1:80
Vzorek 9 v KČS
Ojedinělé
jaderné
tečky
Četné
jaderné
tečky
Jaderné
tečky
(atyp.,
nedef.)
14
7
4
Negativní
6
Lysozómy
1
Vzkazy:
•negatívne celkovo ide asi o nekvalitné (konkurenčné) sklíčka alebo robené
amatérom
Vzorek 10
Sklerodermie, difúzní, CREST
*
*
*
*
Centroméra – 3,
tečkovaná jaderná membrána
CenpB – 3
Vzorek 10
ECFS
ZU UL
1:10
ZU UL
1:80
Vzorek 10 v KČS
Pleomorfní
3 (8,8%) 2 (5,9%)
Mitotický aparát
Centroméra
1 (2,9%)
Jaderná
membrána
Nukleolární
Hrubá skvrnitá
(jaderná matrix)
Jemná skvrnitá
15 (44,1%) 13 (38,2%)
1 (2,9%)
1 (2,9%)
Vzkazy:
•k posouzení chybí více b. v mitose
•vprostriedku stlačené; celkovo ide asi o nekvalitné (konkurenčné) sklíčka alebo robe…
Poučení?
• I zdánlivě nevýznamná fluorescence může
být rozhodující pro stanovení/potvrzení
diagnózy
• Osobní:
Pro fotodokumentaci mikroskopických
preparátů si vždy udělám dostatek času,
nejlépe si přizvu na pomoc kolegu (nikdy
nevím, pro co budou obrázky použity…)
Děkuji za pozornost