AIA-PACK RBC FOLATE

EU rev. RBC-010510
Pozor: Tento návod k použití je v souladu se směrnicí IVD 98/79/ES a je určen pro zákazníky
z členských států Evropské unie.
který se váže na zrna, je nepřímo úměrné koncentraci folátu v testovaném vzorku. Je vynesena
standardní křivka a neznámé koncentrace vzorků jsou vypočítány pomocí této křivky.
DODÁVANÝ MATERIÁL
Kat. č.
AIA-PACK RBC FOLATE
Pro kvantitativní měření folát v červených krvinkách (RBC folát) ve vzorku plné krve (heparin nebo
EDTA).
NÁZEV A ÚČEL POUŽITÍ
AIA-PACK RBC FOLATE je učený pouze pro diagnostické použití in vitro pro kvantitativní měření folátu
v červených krvinkách (RBC folát) ve vzorku plné krve (heparin nebo EDTA) na analyzátorech systému
TOSOH AIA.
SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ TESTU
Folát a kyselina listová (pteroylglutamová kyselina) jsou generické názvy pro skupinu složek a
koenzymů, které dodávají jednouhlíkové jednotky v intermediárním metabolismu vedoucímu k
biosyntéze DNA.
Folát je esenciální látka ve výživě a je možné ho nalézt ve formě polyglutamátu v různých listnatých
rostlinách a tkáních orgánů u živočichů. Folát se přeměňuje na monoglutamáty a je vstřebáván ve
sliznici jejuna v tenkém střevě. Po konverzi v enterocytu je kyselina listová uvolňována do portální
cirkulace. Většina kyseliny listové cirkuluje primárně v lidském séru jako N5-methyltetrahydrofolát.
N5-methyltetrahydrofolát je závislý na vitamínu B12 minimálně ve dvou biochemických cestách.
Vzhledem k této závislosti je důležité stanovení sérových hladin folátu i vitamínu B12, aby bylo možné
určit příčinu jakéhokoliv klinického stavu souvisejícího s deficitem.
Deficit folátu nebo vitamínu B12 může způsobit megaloblastickou anémii a neuropatii. Deficit folátu
může vzniknout v důsledku mnoha faktorů, které zahrnují neadekvátní dietní příjem, střevní
malabsorbci, těhotenství, alkoholismus a různé léky, které zahrnují perorální antikoncepci a
antikonvulziva (1-4, 6, 8, and 10).
Přestože sérová hladina folátu je spolehlivým testem, kolísá v důsledku dietních změn. Folát
v erytrocytech nebo folát v červených krvinkách se nevyčerpává tak rychle jako v séru a je
koncentrovanější než v séru. Koncentrace folátu v erytrocytech korelují dobře s jinými indexy nedostatku
folátu, jako například morfologie buněk v kostní dřeni a hematologické změny. Z tohoto důvodu je
koncentrace folátu v erytrocytu považována za spolehlivý indikátor stavu folátu (5, 7, d 9).
PRINCIP STANOVENÍ
AIA-PACK RBC FOLATE je kompetitivní enzymatická imunoanalýza prováděná po hemolýze a
předošetření vzorku zcela v testovacích kelímcích AIA-PACK RBC FOLATE. Nejprve se proveden
hemolýza vzorku, aby bylo dosaženo úplné hemolýzy erytrocytů a dekonjugace na monoglutamát ve
vzorku plné krve pomocí hemolyzačních činidel vzorku (obsahujících kyselinu askorbovou). Po
hemolýze vzorku se provede předošetření, aby se uvolnil folát z endogenních vazebných proteinů
v hemolyzovaném vzorku pomocí činidel pro předošetření (obsahujících hydroxid sodný a dithiothreitol).
Folát přítomný v předošetřeném testovaném vzorku soutěží s folátem značeným enzymem o omezený
počet vazebných míst na fluoresceinem značeném vazebném proteinu pro hovězí folát, který se pak
váže na protilátku anti-FITC (fluorescein isothiokyanát) imobilizovanou na magnetická zrna. Magnetická
zrna jsou promytím zbavena nenavázaného enzymem značeného folátu a pak jsou inkubována s
fluorogenním substrátem 4-methylumbeliferylfosfátem (4MUP). Množství enzymem značeného folátu,
1 - 15
0020214
Plastové testovací kelímky obsahující dvanáct lyofilizovaných magnetických zrn
potažených myší monoklonální protilátkou anti-FITC a fluoresceinem značený
vazebný protein pro hovězí folát a 100 µl folátu konjugovaného s hovězí alkalickou
fosfatázou s azidem sodným jako konzervační látkou.
MATERIÁL POTŘEBNÝ, NEDODÁVANÝ
Následující materiály jsou vyžadovány, ale nejsou dodávány, k provedení analýzy folátu pomocí
AIA-PACK RBC FOLATE (Kat. č. 0020214) na analyzátorech systému TOSOH AIA. Následující
materiály společnost TOSOH dodává samostatně.
Materiály
Kat. č.
AIA Nex•IA nebo AIA-21
0018539
AIA Nex•IA nebo AIA-21 LA
0018540
AIA-1800 ST
0019836
AIA-1800 LA
0019837
AIA-2000 ST
0022100
AIA-2000 LA
0022101
AIA-600 II
0019014
AIA-600 II BCR
0019328
AIA-PACK SUBSTRATE SET II
0020968
AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II/AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR SET
0020314
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (1)
0
ng/ml
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (2)
3,25
ng/ml (přibližně)
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (3)
6,50
ng/ml (přibližně)
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (4)
13,5
ng/ml (přibližně)
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (5)
25,0
ng/ml (přibližně)
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (6)
44,0
ng/ml (přibližně)
AIA-PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION
0020514
AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET
0020710
AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT-1
AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT-2
AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT-3
AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT SET
0020711
AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-1
AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-2
AIA-PACK WASH CONCENTRATE
0020955
AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE
0020956
KELÍMKY NA VZORKY
0018581
AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP
0020970
AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP
0020971
Další požadavky pouze pro AIA Nex•IA /AIA-21:
PIPETOVACÍ ŠPIČKY
0018552
PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY
0018583
2 - 15
Další požadavky pro AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000:
PIPETOVACÍ ŠPIČKY
STOJAN PRO PIPETOVACÍ ŠPIČKY
PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY
1–30 °C:
AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP
AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP
0019215
0019216
0022103
Používejte pouze materiály dodané společností TOSOH. Nepoužívejte materiály získané z jiných zdrojů,
protože výkonnost testu je charakterizována přísně na základě materiálů společnosti TOSOH.
-
VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ
1. AIA-PACK RBC FOLATE je určen pouze pro diagnostické použití in vitro.
2. V rámci jednoho zásobníku nemíchejte testovací kelímky různých šarží nebo různých testů.
3. AIA-PACK RBC FOLATE, AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (1), AIA-PACK RBC FOLATE
SAMPLE DILUTING SOLUTION a AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-2 obsahují
konzervační látku - azid sodný, který může reagovat s olověným nebo měděným potrubím za vzniku
potenciálně výbušných azidů kovu. Při likvidaci těchto činidel do kanalizace je vždy spláchněte
velkým množstvím vody, aby nedocházelo k hromadění azidu.
4. Při přípravě tohoto výrobku není používáno lidské krve. Protože však pro přípravu vzorků budou
používány lidské vzorky a další výrobky pro kontrolu kvality v laboratoři mohou být deriváty lidského
séra, dodržujte prosím při manipulaci se všemi vzorky a kontrolními vzorky standardní laboratorní
bezpečnostní opatření.
5. Nepoužívejte po uplynutí data exspirace.
6. AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET používaný spolu s testem AIA-PACK RBC
FOLATE obsahuje hydroxid sodný. Vyvarujte se styku s očima, kůží nebo oděvem. Po manipulaci
důkladně opláchněte.
7. Poraďte se s místním odborníkem ohledně likvidace materiálu v AIA-PACK RBC FOLATE
PRETREATMENT SET. Zajistěte, že je likvidace v souladu s místními, státními a národními
předpisy. Při likvidaci do výpusti propláchněte velkým množstvím vody.
8. Koncentrace folátu (hodnota vytištěná jako výsledek testu na analyzátorech systému Tosoh AIA) v
kalibračním roztoku a hemolyzovaném vzorku se zobrazuje v jednotkách “ng/ml” nebo “ng folátu/ml”.
“ng/ml” se rovná “ng folátu/ml”. Koncentrace folátu v červených krvinkách musí být přepočtena
pomocí faktoru ředění a hodnotou hematokritu navíc k hodnotě folátu v hemolyzovaných vzorcích.
Proto se koncentrace folátu v červených krvinkách zobrazuje pomocí „ng RBC folát/ml“ namísto „ng
folátu/ml".
SKLADOVÁNÍ A STABILITA
Veškeré neotevřené materiály jsou stabilní do data exspirace uvedeného na štítku, jsou-li uchovávány
při specifikované teplotě.
Materiály
2–8 °C:
AIA-PACK RBC FOLATE
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR SET
AIA-PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION
AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET
AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT SET
AIA-PACK SUBSTRATE SET II
AIA-PACK WASH CONCENTRATE
AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE
-
Kat. č.
0020214
0020314
0020514
0020710
0020711
0020968
0020955
0020956
-
-
0020970
0020971
Testovací kelímky AIA-PACK RBC FOLATE mohou být skladovány až 1 den při teplotě 18–25 °C.
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR SET musí být vždy těsně uzavřený a skladovaný při teplotě
2 – 8 °C. Po otevření se doporučuje kalibrační roztoky použít do jednoho dne.
AIA-PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION musí být vždy těsně uzavřený a
skladovaný při teplotě 2 – 8 °C. Roztok na ředění vzorků může být používán po dobu až 90 dnů,
pokud lahvičky jsou vždy bezprostředně po použití těsně uzavřeny a uloženy v chladničce.
Doporučujeme použít otevřený AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET použít do jednoho
dne, pokud byl skladován při teplotě 18-25 ºC.
Doporučujeme použít otevřený AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-1 použít do
jednoho dne, pokud byl skladován při teplotě 18-25 ºC. AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING
REAGENT-2 bude stabilní 30 dnů při teplotě 2-8 ºC. Měly by být použité po dosažení teploty
18–25°C za přibližně 30 minut.
Rekonstituovaný roztok substrátu je stabilní 3 dny při teplotě 18–25 °C nebo 7 dnů při teplotě 2–8°C.
Pracovní ředicí roztok a promývací roztoky jsou stabilní po dobu 30 dnů při 18–25 °C. Jestliže se
činidla zakalí nebo změní barvu, nepoužívejte je.
ODBĚR VZORKŮ A MANIPULACE S NIMI
1. Vzorky je třeba odebírat od jednotlivců nalačno, protože by nedávný příjem potravu mohl významně
zvýšit hladinu folátu.
2. K analýze je nutná plná krev (heparin nebo EDTA). Sérum nebo plazma SE NESMÍ POUŽÍVAT.
3. URČETE A ZAZNAMENEJTE HEMATOKRIT (%), aby se přeložil výsledek v plné krvi do výsledků
folátu v červených krvinkách.
4. Během sériového sledování jednotlivého pacienta nestřídejte druhy vzorků. U určitých pacientů se
mohou koncentrace naměřené v různých druzích vzorků poněkud lišit.
5. Před provedením analýzy mohou být vzorky uloženy při teplotě 2–8 °C po dobu maximálně 24 hodin.
Nelze-li analýzu provést do 24 hodin, musí být vzorek uchován zmražený při teplotě -20 °C nebo
nižší po dobu maximálně 60 dnů.
6. Před analýzou pomocí AIA-PACK RBC FOLATE je nutné vzorky plné krve a kontrol hemolyzovat a
předošetřit. Proces hemolýzy se prování manuálně. Hemolyzované vzorky musí být předošetřeny
během 5 hodin při teplotě 18-25 ºC po dokončení procesu hemolýzy. Nelze-li analýzu provést do 5
hodin po procesu hemolýzy, musí být hemolyzovaný vzorek uchováván zmražený při teplotě -20°C
nebo nižší po dobu maximálně 60 dnů. AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR SET nevyžaduje
hemolýzu.
7. Předošetření všech vzorků (hemolyzát, kontroly a kalibrační roztoky) se provádí automaticky na AIA
Nex•IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000.
8. Pro přípravu hemolyzátu je nutný vzorek plné krve o objemu 50 µl.
9. Objem vyžadovaný pro analýzu RBC folátu je 160 µl.
POSTUP
Podrobné pokyny pro AIA Nex•IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000 naleznete v uživatelském
manuálu.
3 - 15
4 - 15
I.
pretreatment-1. Na AIA-600 II je pretreatment-3 umístěn do pozice určené jako pro
pretreatment-2.
Příprava činidla
A. Substrátový roztok
Před přípravou pracovního činidla ponechte všechna činidla, aby dosáhla teploty 18–25 °C.
Přidejte celý obsah AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II (100 ml) k AIA-PACK
SUBSTRATE REAGENT II (lyofilizovaný) a důkladně promíchejte, aby se pevný materiál
rozpustil.
B. Promývací roztok
Přidejte celý obsah AIA-PACK WASH CONCENTRATE (100 ml) k přibližně 2,0 l vody
reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS, dobře promíchejte a upravte konečný objem
na 2,5 l.
C. Ředicí roztok
Přidejte celý obsah AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE (100 ml) k přibližně 4,0 l vody
reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS, dobře promíchejte a upravte konečný objem
na 5,0 l.
II. Hemolýza
Hemolýza je nutná k získání hemolyzátu pro AIA-PACK RBC FOLATE. PROCES HEMOLÝZY SE
AUTOMATICKY NEPROVÁDÍ NA VŠECH ANALYZÁTORECH SYSTÉMU TOSOH AIA.
Postupujte dle níže uvedených pokynů pro manuální postup.
IV. Postup kalibrace
A. Kalibrační křivka
Kalibrační roztoky pro použití s AIA-PACK RBC FOLATE byly porovnány s WHO IS 03/178.
Průměrná výtěžnost tohoto IS 03/178 v rozsahu testu je 144 %.
Kalibrační křivka pro AIA-PACK RBC FOLATE bude stabilní až 90 dnů. Stabilita kalibrace je
sledována prováděním kontroly kvality a závisí na správné manipulace s činidlem a na řádné
údržbě systému TOSOH AIA podle pokynů výrobce.
Pokud se změnilo číslo šarže AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT SET, je třeba
provést novou kalibraci. Opětovná kalibrace může být nutná častěji, když jsou kontroly mimo
nastavené rozmezí pro tento test nebo když jsou prováděny určité servisní postupy (např.
nastavení teploty, změny mechanismu odběru vzorků, údržba promývací sondy nebo
nastavení či výměna žárovky detektoru). Další informace o provozu přístroje naleznete v
uživatelském manuálu systému TOSOH AIA.
Kalibrační křivka vzorku z AIA-1800 sleduje a znázorňuje algoritmus použitý při výpočtu
výsledků.
A. Příprava hemolyzačního činidla
Umožněte, aby všechny hemolyzační činidla dosáhla teplotu 18-25 ºC. Pomocí volumetrické
pipety rekonstituujte lyofilizovaný AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-1
doplněním vodou reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu 1 NCCLS přesně na objem 5,0 ml.
Lyofilizovaný materiál ponechte zcela rozpustit. Rekonstituovaný činidlo-1 by se měl
spotřebovat do 1 dne.
B. Postup hemolýzy
1. Pipetujte 500 µl rekonstituovaného hemolyzačního činidla-1 do zkumavky.
2. Pipetujte 50 µl vzorku plné krve do rekonstituovaného hemolyzačního činidla-1. Dobře
promíchejte pomocí vířivkového mixéru (směs-1).
3. Chraňte směs-1 před světlem a ponechte směs-1 stát 30 minut při teplotě 18-25 ºC.
4. Pipetujte 550 µl AIA-PACK RBC FOLATE HEMOLYZING REAGENT-2 do směsi-1. Dobře
promíchejte pomocí vířivkového mixéru (směs-2). Tato směs-2 musí být nedošetřena
během 5 hodin po přidání hemolyzačního činidla-2.
5. Směs-2 bude připravena po předošetření pro analýzu pomocí AIA-PACK RBC FOLATE.
III. Předošetření
B. Postup kalibrace
A. Postup předošetření
Všechny vzorky (hemolyzát, kalibrační a kontrolní roztoky) vyžadují předošetření. Na AIA Nex•IA /
AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000 se předošetření provádí automaticky pomocí parametrů
definovaných v testovém souboru.
1. Nechejte všechna předošetřená činidla a vzorky dosáhnout teplotu 18 až 25 °C.
2. Pomocí volumetrické pipety rekonstituujte lyofilizovaný AIA-PACK RBC FOLATE
PRETREATMENT-1 přesně na objem 5,0 ml s AIA-PACK RBC FOLATE
PRETREATMENT-2. Ponechte lyofilizovaný materiál, aby se zcela rozpustil.
3. Na AIA Nex•IA / AIA-21 umístěte rekonstituovaný pretreatment-1 do středové pozice kazety
s činidly (čárový kód pro lahvičku pretreatment-1 musí směřovat do středu karuselu se
vzorky). AIA-PACK RBC FOLATE PRETREATMENT-3 umístěte do pozice vlevo v kazetě s
činidly. Na AIA-1800 a AIA-2000 umístěte pretreatment-3 do další pozice rekonstituovaného
5 - 15
1.
2.
3.
4.
Pokyny o postupu naleznete v příslušném uživatelském manuál systému TOSOH AIA.
Ověřte, že kalibrační šarže a čísla koncentrací byly správně zadány do softwaru.
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (1) je dodáván připravený k použití.
AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (2)-(6) jsou lyofilizované. Všechny hodnoty by měly
být rekonstituovány s 1,0 ml vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS.
Společnost TOSOH doporučuje, aby všechny kalibrační roztoky byly spuštěny trojmo.
5. Ověřte, že rekonstituovaný pretreatment-1 a pretreatment-3 byly umístěny do kazety na
činidla tak, jak bylo definováno v REGISTRACI ČINIDLA. Podrobné pokyny o postupu
REGISTRACE ČINIDLA naleznete v uživatelském manuálu systému TOSOH AIA.
C. Kritéria přijatelnosti kalibrace
1. Průměrná rychlost pro AIA-PACK RBC FOLATE CALIBRATOR (1) nesmí přesáhnout
42 nmol/(L•s).
6 - 15
2. Vzhledem k tomu, že existuje nepřímý vztah mezi koncentrací a rychlostí, musí rychlost
klesat s narůstající koncentrací.
3. Hodnoty replikátů musí být v rozmezí 10 %.
4.
D. Kontrola kalibrace a přijetí
1. Pečlivě zkontrolujte křivku kalibrace s použitím výše uvedených kritérií.
2. Je-li to nutné, editujte kalibraci a potom kalibraci akceptujte.
5.
Další informace o kalibraci naleznete v uživatelském manuálu systému TOSOH AIA.
musí být vzorek plné krve naředěn. Doporučované ředění pro vzorky obsahující koncentraci větší
než 24,0 ng folátu/ml je 5násobné ředění. Je žádoucí naředit vzorky tak, aby byl naředěný vzorek
odečten v rozsahu 0,5 až 24,0 ng folátu/ml.
V analyzátorech systémů TOSOH AIA mohou být současně uloženy dvě různé kalibrační křivky pro
každý analyt. Tak mohou být v rámci téhož cyklu použity dvě různé šarže testovacích kelímků
AIA-PACK RBC FOLATE.
Nejsou-li pro tento test specifikace analýzy připraveny v softwaru systému, musí být specifikace
zadány pod kódem testu 016.
VÝPOČET VÝSLEDKŮ
V. Postup kontroly kvality
A. Komerčně dostupné kontroly
Komerčně dostupné kontroly by měly být spuštěny nejméně jednou denně. Doporučuje se, aby
byly použity nejméně dva stupně kontrol, normální a abnormální. Metoda laboratoře pro tento
určitý test specifikuje následující:
Kontrolní materiál: _____________________
Frekvence:
_____________________
Číslo šarže kontrolního materiálu, přijatelné limity a nápravná opatření v případě, že kontroly
nesplní laboratorní kritéria, můžete nalézt ve zvláštním dokumentu o kontrole kvality, který je
v laboratoři.
B. Postup kontroly kvality
1. Proveďte analýzu vzorků kontroly kvality dle pokynů specifického uživatelského manuálu
pro váš analyzátor. Podrobné pokyny o definici a editaci souborů naleznete v uživatelském
manuálu systému TOSOH AIA.
2. Materiál kontroly kvality, který má projít tímto testem, je specifikovaný individuální metodou
laboratoře.
VI. Zpracování vzorků
Analyzátory systémů TOSOH AIA odečítají míru fluorescence generovanou reakcí a automaticky ji
převádějí na míru koncentrace folátu (ne RBC folátu) v ng/ml.
Vynásobte výsledek pro folát v hemolyzátu číslem 22 (ředění 1:21 bylo provedeno při přípravě RBC
hemolyzátu). Tato hodnota představuje koncentraci folátu v plné krvi v ng RBC folátu/ml. Vydělte tento
výsledek hematokritem a vynásobte 100, abyste upravili hematokrit, který je procentem.
RBC folát = (hodnota folátu v hemolyzátu (ng/ml)) x 22 x 100
Hematokrit (%)
*Ve většině případů jsou hodnoty folátu v séru velmi nízké v porovnání s hodnotami folátu v červených
krvinkách. Avšak v některých případech mohou být hodnoty folátu v séru vysoké, zatímco hodnoty
folátu v červených krvinkách jsou nízké. V těchto případech musí být vypočtená korigovaná hodnota
pomocí následující rovnice.
Korigovaný RBC folát = RBC folát – folát v séru
(pomocí AIA-PACK FOLATE)
A. Příprava
Podle specifických pokynů v uživatelském manuálu analyzátoru umístěte příslušným
způsobem vzorky do přístroje. Primární zkumavky a také kelímky na vzorky jsou kódovány
čárovým kódem a mohou být použité v AIA Nex•IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000.
Vývojový diagram postupu testu je následující:
B. Postup analýzy
1. Poskytněte dostatečné množství testovacích kelímků AIA-PACK RBC FOLATE pro počet
vzorků, které mají být analyzovány.
2. Vložte vzorky pacienta podle pokynů v uživatelském manuálu a pokračujte v analýze.
Poznámka: Kelímky AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP budou v případě použití vestavěných
ředění vyžadovány systémem AIA Nex•IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000.
POZNÁMKY K POSTUPU
1.
2.
3.
Lyofilizovaný substrát musí být zcela rozpuštěn.
Ligandové testy prováděné analyzátory systému TOSOH AIA vyžadují, aby laboratoř používala
vodu označenou Společností amerických patologů třídou I nebo podle NCCLS typem I. Voda musí
být testována nejméně jednou měsíčně a neměla by osahovat částicovou hmotu včetně bakterií. pH
vody by mělo být také rutinně testováno. Další informace naleznete v dokumentu NCCLS “Příprava
a testování reagenční vody v klinické laboratoři“, dokument NCCLS C3-A3, svazek 11, č. 13,
původně odsouhlaseném jako směrnice NCCLS v říjnu 1997.
Pokud je hodnota hemolyzovaného folátu vyšší než horní hranice rozsahu testu, 24,0 ng folátu/ml,
musí se vzorek naředit AIA-PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION a opětovně
analyzovat podle postupu testu v příbalové informaci AIA-PACK RBC FOLATE. Před hemolýzou
7 - 15
8 - 15
5násobné ředění
PŘÍKLADY VÝPOČTŮ:
Příklad 1:
1. Hodnota folátu v hemolyzátu se vypočítá automaticky analyzátory systému TOSOH AIA pomocí
kalibrační křivky.
Roztok pro ředění vzorků
Vzorek nebo kontrola
(plná krev)
Hodnota folátu v hemolyzátu = 5,05 ng/ml
(Hodnota vytištěná na analyzátorech systému TOSOH AIA)
Hemolyzační činidlo
22násobné ředění
2.
Hemolyzát (manuální
provoz)
Hodnota hematokritu
(jinou metodou)
Hodnota hematokritu (%) = 45,1 %
3. Hodnota RBC folátu se vypočítá manuálně následujícím způsobem.
(1) Vynásobte hodnotu folátu v hemolyzátu (5,05 ng/ml) číslem 22. (Tato hodnota vznikne při přípravě
hemolyzátu).
(2) Tento výsledek vydělte hodnotou hematokritu (%) (45,1 / 100), abyste získaly RBC folát.
Kalibrační roztok
Testovací kelímek
Ředící
roztok
Ošetřovací kelímek pro vzorek
Hodnota RBC folátu = 5,05 x 22 x 100 = 246 ng RBC folátu/ml
45.1
Činidlo
předošetření
Ředění
2,5násobné
Imunitní reakce
Vázaná/volná separace
Enzymatická reakce
Vynásobte 2,5krát
Automatický výpočet
(ng folátu/ml)
Vynásobte 22
Příklad 2:
1. Pokud je hodnota folátu v hemolyzátu větší než horní hranice rozsahu testu, bude zobrazený
výsledek na analyzátorech systému TOSOH AIA “>H” nebo “DO”.
Předošetření
Promývací roztok
Hodnota folátu v hemolyzátu = “>H” nebo “DO”
(Hodnota vytištěná na analyzátorech systému TOSOH AIA)
Roztok substrátu
2. Vzorek musí být před provedením hemolýzy naředěn 5krát (1:4) pomocí AIA-PACK RBC FOLATE
SAMPLE DILUTING SOLUTION. Naředěný vzorek analyzujte jako běžný vzorek.
Automatický provoz
(analyzátory system AIA)
3. Pokud je výsledek naředěného vzorku 10,5 ng/ml, hodnota RBC folátu se vypočítá manuálně
následujícím způsobem:
Pokud je vzorek větší než limita
linearity testu
Hodnota folátu v hemolyzátu = 10,5 ng/ml
(Hodnota vytištěná na analyzátorech systému TOSOH AIA)
(x faktor ředění pomocí Sample Diluting Solution)
Hodnota hematokritu (%) = 55,1 %
Manuální výpočet
(ng folátu/ml)
Vydělte
Hodnota hematokritu se musí měřit před analýzou jinou metodou.
(1) Vynásobte hodnotu folátu v hemolyzátu číslem 5. (Tato hodnota je faktor ředění).
(2) Vynásobte hodnotu folátu v hemolyzátu číslem 22. (Tato hodnota je faktor ředění při přípravě
hemolyzátu).
(3) Tento výsledek vydělte hodnotou hematokritu (%) (55,1/100), abyste získaly RBC folát.
(hematokrit % /100)
Manuální výpočet
(ng RBC folátu/ml)
Hodnota RBC folátu = 10,5 x 22 x 100 = 2 096 ng RBC folátu/ml
55.1
U vzorků vyžadujících ředění provedou systémy AIA Nex•IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000
automaticky ředění a vypočtou výsledky, pokud byly faktory ředění zadány do softwaru. Faktory ředění
9 - 15
10 - 15
faktory mohou být zadány do testového souboru nebo mohou být při zpracování vzorku zvoleny předem
definované faktory ředění.
VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ
Kontrola kvality
Za účelem sledování a vyhodnocení přesnosti analytické výkonnosti se doporučuje v souladu
s místními nařízeními analyzovat komerčně dostupné kontrolní vzorky.
Minimální doporučená frekvence zpracování interního kontrolního materiálu je:
Po kalibraci je spuštěna třístupňová analýza interních kontrolních vzorků, aby byla akceptována
kalibrační křivka.
Tři stupně kontrol jsou opakovány, když jsou provedeny určité servisní postupy (např. nastavení
teploty, změna mechanismu pro odběr vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna
žárovky detektoru).
K ověření celkového výkonnosti analyzátorů systému TOSOH AIA by měly být po denní údržbě
provedeny nejméně dva stupně kontroly.
Pokud se objeví jedna nebo více hodnot kontrolního vzorku mimo přípustné rozmezí, je třeba před
ohlášením výsledků pacienta prověřit validitu kalibrační křivky.
Je nutno dodržovat standardní laboratorní postupy podle přísného zákonného orgánu, který na
provoz laboratoře dohlíží.
OMEZENÍ POSTUPU
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Pro diagnostické účely je nutné využívat výsledky tohoto testu společně s dalšími údaji (např.
symptomy, výsledky dalších testů, klinickými dojmy, léčbou atd.).
Při používání soupravy AIA-PACK RBC FOLATE je nejvyšší měřitelná koncentrace folátu ve
vzorcích bez ředění 24,0 ng folátu/ml a nejnižší měřitelná koncentrace je 0,5 ng folátu/ml (citlivost
testu).
Přestože přibližná hodnota koncentrace nejvyššího kalibračního roztoku je 44,0 ng/ml, přesná
koncentrace se může poněkud lišit. Specifikaci testu ASSAY RANGE HIGH (VYSOKÝ ROZSAH
TESTU) je nutno definovat jako horní hranici rozsahu testu, a to 24,0 ng folátu/ml.
Lipémie má na test nevýznamný vliv, kromě případu silné lipémie, kdy může dojít k prostorové
interferenci.
Vzorky pacientů, kteří užívají léky anebo u kterých probíhá léčba, mohou vykazovat chybné
výsledky.
Vzorky od pacientů, kterým byly podány přípravky myších monoklonálních protilátek k diagnostice
nebo terapii, mohou obsahovat lidské protilátky proti myším protilátkám (HAMA). Takové vzorky
mohou dávat falešně zvýšené hodnoty, pokud jsou testovány na RBC folát.
Vzorky pacientů, kteří dostali injekci fluoresceinu, který se používá v fluresceinové angiografii fundu,
mohou způsobit falešně zvýšené výsledky.
Pro úplné pochopení omezení tohoto postupu, si laskavě přečtěte kapitoly ODBĚR A MANIPULACE
SE VZORKY, VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ, SKLADOVÁNÍ A STABILITA a
POZNÁMKY K POSTUPU této příbalové informace.
PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY
Každá laboratoř si musí stanovit svůj vlastní referenční interval, který odpovídá charakteristikám
testované populace. Podobně jako u všech diagnostických postupů musí být klinické výsledky
interpretovány s ohledem na léky v současnosti podávané pacientovi.
11 - 15
I.
Referenční rozmezí
Zde uvedený interval byl stanoven ve vzorcích plné krve (EDTA) od 122 zjevně zdravých Asiatů.
Referenční rozmezí studie bylo stanoveno na základě pokynů Ústavu pro klinické a laboratorní
standardy (CLSI) v protokolu C28-A2.
n
=
122
2,5. percentil
=
148,3 ng RBC folátu/ml
97,5. percentil
=
531,1 ng RBC folátu/ml
II. Konverzní faktory
Koncentrace RBC folátu v této aplikaci jsou vyjádřeny v jednotkách ng RBC folátu/ml. Konverze na
jednotky SI soustavy nmol/l může být provedena s použitím následující rovnice:
nmol/l = ng RBC folátu/ml x 2,265
VÝKONNOSTNÍ CHARAKTERISTIKY
PŘESNOST
a. Výtěžnost: Tři vzorky plné krve (EDTA) byly označeny třemi rozdílnými hladinami RBC folátu a
testovány před a po označení.
Vzorek
Původní
hodnota
(ng RBC folátu/ml)
Vzorek A1
239,0
Hematokrit 239,0
45,0%
239,0
Vzorek B1
96,7
Hematokrit 96,7
45,0%
96,7
Vzorek C1
263,9
Hematokrit 263,9
45,0%
263,9
Přidaný
folát
(ng/ml)
5,1
10,1
20,3
5,3
10,5
21,0
5,3
10,5
21,0
Předpokládaná
hodnota
(ng RBC folátu/ml)
487,0
735,0
1230,9
353,6
610,5
1124,2
520,7
777,6
1291,4
Naměřená
hodnota
(ng RBC folátu/ml)
500,1
744,4
1205,0
352,8
601,7
1095,4
521,6
743,0
1216,1
Procento
výtěžnosti
(%)
102,7
101,3
97,9
99,8
98,6
97,4
100,2
95,5
94,2
b. Ředění: Tři vzorky plné krve (EDTA) obsahující vysoké koncentrace folátu byly sériově
naředěny pomocí AIA--PACK RBC FOLATE SAMPLE DILUTING SOLUTION a analyzovány.
Vzorek
Faktor
ředění
Vzorek A2
Hematokrit
45,0%
žádný
7,5/10
5,0/10
2,5/10
1,0/10
žádný
7,5/10
5,0/10
2,5/10
1,0/10
Vzorek B2
Hematokrit
45,0%
Předpokládaná
Naměřená
hodnota
hodnota
(ng RBC folátu/ml) (ng RBC folátu/ml)
1583,7
1583,7
1187,7
1242,9
791,8
844,2
395,9
419,1
158,4
158,4
1098,8
1098,8
824,1
840,2
549,4
566,4
274,7
315,2
109,9
124,3
Procento
výtěžnosti
(%)
100,0
104,6
106,6
105,9
100,0
100,0
102,0
103,1
114,7
113,1
12 - 15
Vzorek C2
Hematokrit
37,9%
žádný
7,5/10
5,0/10
2,5/10
1,0/10
444,5
333,4
222,3
111,1
44,5
444,5
348,0
238,3
125,1
45,8
100,0
104,4
107,2
112,5
103,0
Vzorek
Kontrola 1
Kontrola 2
Kontrola 3
Vzorek A3
c. Linearita: Linearita pro AIA-PACK RBC FOLATE byla stanovena na základě pokynů CLSI
protokolu EP6-A. Linearita byla měřena přístrojem AIA-1800 a byla demonstrována linearita od
0,5 do 40,0 ng s rozdílem +/- 10 % tohoto intervalu. Potvrzená linearita je 0,5 až 24,0 ng
folátu/ml.
Vzorek
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Schéma
ředění
Vysoké:nízké
Nízký neředěný
9:1
8:2
7:3
6:4
5:5
4:6
3:7
2:8
1:9
Vysoký neředěný
Předpokládané
hodnota
(ng folátu/ml)
0,43
4,72
8,68
12,83
17,24
21,83
25,91
30,08
34,51
38,58
42,98
Naměřená
hodnota
(ng folátu/ml)
0,43
4,60
9,10
12,77
17,11
22,10
25,88
30,49
35,63
39,17
42,37
Směrnice
Průsečík s osou y
Korelační koeficient
Počet vzorků
0,84
0,783
0,86
-22,32 ng RBC folátu/ml
102
0,963
-8,131
0,991
56
SPECIFICITA
Zkřížená reaktivita byla testována u následujících látek. Zkřížená reaktivita (%) je procento látky, které
bude identifikováno jako RBC folát.
a. Přesnost v rámci jednoho cyklu byla stanovena pomocí tří komerčně dostupných kontrolních
vzorků séra a jednoho kontrolního vzorku plné krve (EDTA) v celkem 20 cyklech. V rámci
jednoho cyklu byla provedena analýza jedné sady dvou paralelních vzorků na jeden kontrolní
vzorek. Průměrná hodnota každých dvou paralelních vzorků byla použita k získání sdružené
směrodatné odchylky (SO), která pak byla použita k výpočtu variačního koeficientu (KV).
Kontrola 1
Kontrola 2
Kontrola 3
Vzorek A3
a. Korelace mezi AIA-PACK RBC FOLATE a alternativní metodou byla provedena pomocí 120
vzorků pacientů podle protokolu EP9-A2 CLSI.
b. Korelace mezi plnou krví (EDTA) (x) a plnou krví (heparin) (y) v ST AIA-PACK RBC FOLATE
byla provedena s použitím 56 pacientských vzorků.
Přesnost pro AIA-PACK RBC FOLATE byla stanovena na základě pokynů CLSI protokolu EP5-A2.
Střední hodnota
(ng RBC folátu/ml)
92,8
338,2
1140,5
300,4
Sdružená směrodatná odchylka KV
(ng RBC folátu/ml)
(%)
7,579
8,2
15,507
4,6
37,192
3,3
12,532
4,2
KORELACE
Směrnice
Průsečík s osou y
Korelační koeficient
Rozmezí vzorků
Počet vzorků
Procento
výtěžnosti
(%)
100,0
97,5
104,8
99,5
99,2
101,2
99,9
101,4
103,2
101,5
98,6
PŘESNOST
Vzorek
Střední hodnota
(ng RBC folátu/ml)
92,8
338,2
1140,5
300,4
Sdružená směrodatná odchylka KV
(ng RBC folátu/ml)
(%)
5,474
5,9
11,366
3,4
24,863
2,2
6,481
2,2
b. Celková přesnost byla stanovena paralelním stanovením tří komerčně dostupných kontrolních
vzorků séra a jedno kontrolní vzorku plné krve (EDTA) ve 20 samostatných cyklech.
Průměrné hodnoty každého cyklu byly použity k výpočtu sdružené směrodatné odchylky (SD) a
variačního koeficientu (KV).
13 - 15
Látka
Amethopterin
Leukovorin
Koncentrace
2,518 ng/ml
5,231 ng/ml
Zkřížená reaktivita (%)
0,66
0,34
SENZITIVITA
Mez detekce: Mez detekce pro AIA-PACK RBC FOLATE byla stanovena dle CLSI pokynu EP17-A.
Slepý vzorek byl měřen v 60 replikátech. Šest vzorků s nízkou hladinou bylo změřeno každý v 10
replikátech. Mez detekce pro AIA-PACK RBC FOLATE byla stanovena 0,44 ng folátu/ml.
INTERFERENCE
Interference je v rámci této studie definována jako výtěžnost přesahující 10 % známé koncentrace
vzorku po přidání následujících látek k lidským vzorkům.
● Hemoglobin (až do 470 mg/dl), konjugovaný bilirubin (do 19 mg/dl) a volný bilirubin (do 18 mg/dl)
neinterferují s testem.
● Lipémie vyjádřená koncentrací triglyceridu (do 1600 mg/dl) neinterferuje s testem.
● Kyselina askorbová (do 20 mg/dl) neinterferuje s testem.
● Bílkoviny určené koncentrací lidského albuminu (až do 50 mg/ml) neinterferují s testem.
● Heparin (do 100 U/ml) neinterferuje s testem.
● EDTA•2K (až do 10 mg/ml) neinterferuje s tímto testem.
14 - 15
REFERENCE
1) R. E. Davis, D. J. Nicol, Folic Acid, Int. J. Biochem. 20:2; 133-139(1988).
2) J. M. Scott, et al., Folic Acid Metabolism and Mechanisms of Neural Tube Defects. Ciba Fdn.
Symp. (Netherlands), 180-191(1994).
3) J. Grinblat, et al., Folate and Vitamin B12 Levels in an Urban Elderly Population With Chronic
Diseases. Assessment of Two Laboratory Folate Assays: Microbiologic and Radio assay. J. Am.
Geriatr. Soc. 34:9; 627-632(1986).
4) F. M. Huennekens, et al., Folic Acid Metabolism and Its Disruption by Pharmacologic Agents. NCI
Monogr. 5; 1-8(1987).
5) E. L. McGown, C. M. Lewis, M. H. Dong, H. E. Sauberiich, Results with Commercial Radioassay Kits
Compared with Microbiological Assay of Folate in Serum and Whole-Blood. Clin Chem 24;
2186-2191(1978).
6) S. Levine, Analytical inaccuracy for folic acid with a popular commercial vitamin B12/folate kit. Clin
Chem 39; 2209-2210(1993).
7) S. Manzella, A. Gronowski, J. Ladenson, M. G. Scott, Limited Linear Range of the Abbott AxSYM
Serum and Erythrocyte Folate Methods. Clin Chem 45; 582-583(1999).
8) G. Thame, E. M. Guerra-Shinohara, A. F. Moron, Serum Folate by Two Methods in Pregnant
Women Carrying Fetuses with Neural Tube Defects. Clin Chem 48; 1094-1095(2002).
9) W. E. Owen, W. L. Roberts, Comparison of Five Automated Serum and Whole Blood Folate Assays.
Am J Clin Pathol 120; 121-126(2003).
10) A. J. Clifford, E. M. Noceti, A. Block-Joy, T. Block, G. Block, Erythrocyte Folate and Its Response to
Folic Acid Supplementation Is Assay Dependent in Women. J Nutr. 135(1); 137-143(2005).
TOSOH CORPORATION
3-8-2, Shiba-Koen, Minato-ku
TOKYO 105-8623 (JAPONSKO)
Tel.: +81 (0)3 5427 5181 Fax: +81 (0)3 5427 5220
TOSOH EUROPE N.V.
Transportstraat 4
B-3980 TESSENDERLO BELGIE
Tel.: +32 (0)13 66 88 30 Fax: +32 (0)13 66 47 49
TOSOH BIOSCIENCE, INC.
6000 Shoreline Court, Suite 101
South San Francisco, CA 94080, USA
Telefon: +1 650 615 49 70
Objem netto (po rekonstituci pro
lyofilizovaný materiál)
15 - 15