Monoclonal Mouse Anti-Human COX-2 Clone CX-294 Kód

Monoclonal Mouse
Anti-Human COX-2
Clone CX-294
Kód M3617
Použití
K diagnostice in vitro.
Tato protilátka je určena pro laboratorní použití ke kvalitativní identifikaci buněk exprimujících COX-2 světelnou mikroskopií v normálních a
neoplastických tkáních pomocí imunohistochemických (IHC) testovacích metod. Klinická interpretace každého pozitivního barvení nebo jeho
nepřítomnost by měla být doplněna morfologickými a histologickými vyšetřeními včetně patřičných kontrol. Interpretaci musí provádět
kvalifikovaný patolog v souvislosti s anamnézou pacienta a jinými diagnostickými vyšetřeními.
Synonymum
Cyklooxygenáza-2
Souhrn a vysvětlení
Enzymy cyklooxygenázy (COX), COX-1 a COX-2, jsou nezbytné pro biosyntézu prostaglandinů z kyseliny arachidonové. Lidský protein
COX-1 je konstitutivně exprimován ve většině tkání a slouží k udržování tkáňové hemostázy. Nesteroidní protizánětlivé léky (NSAIDs)
účinně snižují zánětlivou reakci tím, že blokují oba enzymy COX. COX-2 je 70 kD indukovatelný enzym, který zodpovídá za syntézu
prostaglandinů v oblasti zánětu.3 Exprese COX-2 byla také spojována s karcinogenezí a bylo prokázáno, že specifické inhibitory COX-2 mají
protinádorové účinky.4,5
Exprese COX-2 byla prostřednictvím imunohistochemie zjištěna v mnoha normálních a neoplastických tkáních. Co se týče neoplastických
tkání, v kolorektálním adenokarcinomu byla prokázána heterogenní cytoplazmatická exprese COX-2, zatímco přilehlá tkáň vykazovala slabé
zabarvení a normální střevo bylo negativní.6,7 Bylo zjištěno, že docházelo k expresi proteinu COX-2 u subsetu adenokarcinomů prsu a
přilehlého duktálního karcinomu in situ. Při reakci RT-PCR vykazovala mRNA COX-2 z nádorů prsu zvýšení exprese mRNA v párových
normálních vzorcích.8 Zvýšená exprese COX-2 byla pozorována u adenokarcinomů plic ve srovnání s expresí normální bronchiální
epiteliální buňky.9,10 Většina karcinomů skvamózních buněk jícnu a skvamózních adenokarcinomů vykazovala heterogenní cytoplazmatickou
expresi COX-2, zatímco v normálním skvamózním epitelu jícnu byla zjištěna slabá exprese a u Barrettova jícnu nebyla zjištěna žádná
exprese.11 Exprese proteinu COX-2 byla zjištěna u normálních neuronů i astrocytických gliomů.12 U většiny primárních maligních melanomů
byla zjištěna exprese COX-2, zatímco benigní névy a přilehlý normální epitel byly negativní.13 COX-2 byla prokázána také v těchto nádorech:
adenokarcinom žaludku,14 karcinom skvamózních buněk hlavy a krku,15 karcinom pankreatu,16,17 maligní feochromocytom,18 karcinom
varlat,19 a karcinom skvamózních buněk močového měchýře.20 COX-2 byla rovněž prokázána u subsetů těchto nádorů: karcinom
vaječníků,21 karcinom prostaty,22 invazivní karcinom urotelu močového měchýře,23 karcinom ledvin24 a hepatocelulární karcinom.25
V kapitolách Obecné pokyny pro imunohistochemické barvení společnosti Dako nebo v návodu k detekčnímu systému pro IHC metody
naleznete tyto části: (1) Princip metody, (2) Potřebné materiály, které nejsou součástí dodávky, (3) Skladování, (4) Příprava vzorků,
(5) Postup barvení, (6) Kontrola kvality, (7) Řešení problémů, (8) Interpretace zabarvení, (9) Obecná omezení.
Dodávané reagenty
Monoklonální myší protilátka se dodává v kapalné podobě jako supernatant tkáňových kultur v 0,05 mol/L Tris/HCl, pH 7,2 a 0,015 mol/L
azidu sodného. Tento produkt obsahuje stabilizující protein.
Klon: CX-2941,2
Izotyp: IgG1, kappa
Koncentrace myšího lgG v mg/L: Viz štítek na lahvičce.
M3617 lze používat v roztoku 1:100 při provádění IHC pomocí detekčního systému EnVision+™. Toto jsou pouze obecné pokyny. Optimální
koncentrace protilátek mohou záviset na vzorku a způsobu přípravy a měly by být v každé laboratoři stanovovány samostatně.
Imunogen
Syntetický peptid odpovídající lidské COX-2 sekvencí aminokyselin 580-5981,2
Specifičnost
Klon CX-294 je specifický pro peptid používaný pro imunizaci. Při experimentech s využitím metody Western blotting a imunoprecipitace bylo
prokázáno, že CX-294 identifikuje indukovatelnou lidskou COX-2 pomocí IL-1α nebo PMA stimulované endotelové buňky vény lidského
pupečníku (HUVEC); blokování peptidu protilátky s imunogenem COX-2 eliminovalo veškerou reaktivitu.1,2
Potřebné materiály, které se však nedodávají
Další informace naleznete v Obecných pokynech pro imunohistochemické barvení společnosti Dako nebo návodu k detekčnímu systému.
Doporučené ředicí roztoky pro IHC procedury:
Antibody Diluent (kód S0809)
Pro IHC procedury je doporučena následující negativní kontrola:
Mouse IgG1 (kód X0931)
(109213-003)
305834CZ_001 str. 1/3
Bezpečnostní opatření
1. Určeno pro profesionální uživatele.
2. Tento výrobek obsahuje azid sodný (NaN3), který je v čisté formě vysoce toxický. Přestože koncentrace azidu sodného ve výrobku se
neklasifikuje jako nebezpečná, může usazenina NaN3 reagovat s olovem a mědí v odpadním potrubí a vytvářet vysoce explozivní azidy
kovů. Při likvidaci splachujte dostatečným množství vody, aby nedocházelo k usazování azidů kovů v potrubí.
3. Jako u každého výrobku biologického původu je nutno dodržovat řádná bezpečnostní opatření.
4. Používejte osobní ochranné prostředky, aby nedošlo k zasažení očí nebo pokožky.
5. Nespotřebovaná činidla je nutno likvidovat v souladu s místními a celostátními předpisy.
Skladování
Skladujte při 2–8 °C. Nepoužívejte po datu expirace uvedeném na lahvičce. Pokud se činidla skladují za jakýchkoli jiných než uvedených
podmínek, musí uživatel tyto podmínky ověřit. Neexistují žádné známky toho, že by tyto produkty byly nestabilní. Proto je nutno provádět
pozitivní a negativní kontroly současně s pacientovými vzorky. Pokud zpozorujete neočekávané zabarvení, které nelze vysvětlit změnami
laboratorních postupů a máte podezření, že se jedná o problém s protilátkou, obraťte se na technickou podporu společnosti Dako.
Příprava vzorků
Parafinové řezy
Anti-COX-2 lze používat pro řezy tkání fixované ve formalínu a uložené v parafínu. Předchozí zpracování tkání proteolytickými enzymy se
nedoporučuje.
Řezy tkání zbavené parafínu je nutno před IHC barvením tepelně zpracovat. Při tepelně indukovaném vyhledávání epitopu (HIER) se řezy
tkáně ponořují do předehřátého pufrového roztoku a ve vodní lázni nebo v páře se udržuje vysoká teplota (95–99ºC). Pro test HIER
prováděný při teplotě 95–99ºC použijte 20minutový protokol ohřevu; po tepelném zpracování nechejte nádobu s pufrem a podložními sklíčky
chladnout 20 minut při pokojové teplotě. Důkladně vypláchněte pufrem nebo deionizovanou vodou. Z důvodu vyšší přilnavosti řezů tkání k
podložním sklíčkům se doporučuje používat Silanized Slides (Silanizovaná podložní sklíčka, kód S3003). Doporučuje se Target Retrieval
Solution (Cílový vyhledávací roztok) pH 9,0 (kód S2367, koncentrovaný 10x).
Kryostatické řezy a buněčné nátěry
Anti-COX-2 lze používat ke značení kryostatických řezů fixovaných v acetonu nebo fixovaných buněčných nátěrů.
Postup barvení
Dodržujte doporučený postup pro vybraný detekční systém.
Interpretace zabarvení
Buněčný barvicí vzor pro anti-COX-2 je cytoplazmatický.
Charakteristiky účinnosti
Normální tkáně 26
Typ tkáně (testovaný počet)
Nadledvina (3)
Kostní dřeň (3)
Mozek, malý mozek (3)
Mozek, velký mozek (3)
Prs (3)
Děložní hrdlo (3)
Tlusté střevo (2)
Děložní sliznice (3)
Jícen (3)
Srdce (3)
Ledvina (3)
Játra (3)
Plíce (3)
Mezoteliální buňky (3)
Nervy, periferní (3)
Vaječníky (3)
Slinivka břišní (3)
Příštitná tělíska (3)
Hypofýza (3)
Prostata (3)
Slinná žláza (3)
Kosterní sval (3)
Kůže (3)
Tenké střevo (3)
Slezina (3)
(109213-003)
Pozitivně zabarvené prvky tkání
3/3 cytoplazma buněk kůry nadledvin
1/3 cytoplazma prekurzorů granulocytů
0/3
3/3 mírné cytoplazmatické zabarvení neuronů
3/3 cytoplazma prsních epiteliálních buněk
0/3
1/2 cytoplazma vzácných glandulárních buněk
3/3 cytoplazma glandulárních epiteliálních buněk děložní
sliznice
3/3 cytoplazma kosterního svalu
3/3 mírné cytoplazmatické zabarvení myocytů
3/3 cytoplazma buněk ledvinného kanálku
2/3 mírné zabarvení glomerulárního mezangia
1/3 mírné cytoplazmatické zabarvení glomerulů
3/3 cytoplazma hepatocytů a epiteliálních buněk žlučovodu
1/3 cytoplazma Kupfferových buněk
3/3 membrána a cytoplazma intraalveolární membrány
2/3 cytoplazma bronchiálních epiteliálních buněk
0/3
0/3
1/3 cytoplazma buněk inkluzních cyst
3/3 cytoplazma sekrečních buněk a kanálků
2/3 cytoplazma buněk ostrůvků
3/3 cytoplazma hlavních buněk
3/3 cytoplazma pituicitů v adenohypofýze
3/3 cytoplazma a některé membrány glandulárních epiteliálních
buněk prostaty
3/3 cytoplazma a některé membrány epiteliálních buněk kanálku
2/3 cytoplazma ancinů
1/3 cytoplazma obalu svalových vláken
3/3 cytoplazma mazové žlázy
0/3
0/3
305834CZ_001 str. 2/3
Žaludek (3)
Varlata (3)
Brzlík (3)
Štítná žláza (3)
Tonzila (3)
3/3 cytoplazma hlavních a parietálních buněk
0/3
3/3 cytoplazma epiteliálních buněk
1/3 cytoplazma folikulárních epiteliálních buněk
0/3
Reference
1. Creminon C, Habib A, Maclouf J, Pradelles P, Grassi J, Frobert Y. Differential measurement of constitutive (COX-1) and inducible
(COX-2) cyclooxygenase expression in human umbilical vein endothelial cells using specific immunometric enzyme immunoassays.
Biochim Biophys Acta 1995;1254(3):341-8
2. Habib A, Creminon C, Frobert Y, Grassi J, Pradelles P, Maclouf J. Demonstration of an inducible cyclooxygenase in human endothelial
cells using antibodies raised against the carboxyl-terminal region of the cyclooxygenase-2. J Biol Chem 1993;268(31):23448-54
3. Hla T, Neilson K. Human cyclooxygenase-2 cDNA. Proc Natl Acad Sci USA 1992;89(16):7384-8
4. Stratton MS, Alberts DS. Current application of selective COX-2 inhibitors in cancer prevention and treatment. Oncology (Williston
Park). 2002;16(5 Suppl 4):37-51
5. Masferrer JL, Leahy KM, Koki AT, Zweifel BS, Settle SL, Woerner BM, Edwards DA, Flickinger AG, Moore RJ, Seibert K.
Antiangiogenic and antitumor activities of cyclooxygenase-2 inhibitors. Cancer Res 2000;60(5):1306-11
6. Sano H, Kawahito Y, Wilder RL, Hashiramoto A, Mukai S, Asai K, Kimura S, Kato H, Kondo M, Hla T. Expression of cyclooxygenase-1
and -2 in human colorectal cancer. Cancer Res 1995;55(17):3785-9
7. Sheehan KM, Sheahan K, O'Donoghue DP, MacSweeney F, Conroy RM, Fitzgerald DJ, Murray FE. The relationship between
cyclooxygenase-2 expression and colorectal cancer. JAMA 1999;282(13):1254-7
8. Half E, Tang XM, Gwyn K, Sahin A, Wathen K, Sinicrope FA. Cyclooxygenase-2 expression in human breast cancers and adjacent
ductal carcinoma in situ. Cancer Res 2002;62(6):1676-81
9. Achiwa H, Yatabe Y, Hida T, Kuroishi T, Kozaki K, Nakamura S, Ogawa M, Sugiura T, Mitsudomi T, Takahashi T. Prognostic
significance of elevated cyclooxygenase 2 expression in primary, resected lung adenocarcinomas. Clin Cancer Res 1999
May;5(5):1001-5
10. Hosomi Y, Yokose T, Hirose Y, Nakajima R, Nagai K, Nishiwaki Y, Ochiai A. Increased cyclooxygenase 2 (COX-2) expression occurs
frequently in precursor lesions of human adenocarcinoma of the lung. Lung Cancer 2000 Nov;30(2):73-81
11. Zimmermann KC, Sarbia M, Weber AA, Borchard F, Gabbert HE, Schror K. Cyclooxygenase-2 expression in human esophageal
carcinoma. Cancer Res 1999;59(1):198-204
12. Shono T, Tofilon PJ, Bruner JM, Owolabi O, Lang FF. Cyclooxygenase-2 expression in human gliomas: prognostic significance and
molecular correlations. Cancer Res 2001;61(11):4375-81
13. Denkert C, Kobel M, Berger S, Siegert A, Leclere A, Trefzer U, Hauptmann S. Expression of cyclooxygenase 2 in human malignant
melanoma. Cancer Res 2001;61(1):303-8
14. Lim HY, Joo HJ, Choi JH, Yi JW, Yang MS, Cho DY, Kim HS, Nam DK, Lee KB, Kim HC. Increased expression of cyclooxygenase-2
protein in human gastric carcinoma. Clin Cancer Res 2000;6(2):519-25
15. Chan G, Boyle JO, Yang EK, Zhang F, Sacks PG, Shah JP, Edelstein D, Soslow RA, Koki AT, Woerner BM, Masferrer JL, Dannenberg
AJ. Cyclooxygenase-2 expression is up-regulated in squamous cell carcinoma of the head and neck. Cancer Res 1999;59(5):991-4
16. Okami J, Yamamoto H, Fujiwara Y, Tsujie M, Kondo M, Noura S, Oshima S, Nagano H, Dono K, Umeshita K, Ishikawa O, Sakon M,
Matsuura N, Nakamori S, Monden M. Overexpression of cyclooxygenase-2 in carcinoma of the pancreas. Clin Cancer Res
1999;5(8):2018-24
17. Tucker ON, Dannenberg AJ, Yang EK, Zhang F, Teng L, Daly JM, Soslow RA, Masferrer JL, Woerner BM, Koki AT, Fahey TJ 3rd.
Cyclooxygenase-2 expression is up-regulated in human pancreatic cancer. Cancer Res 1999;59(5):987-90
18. Salmenkivi K, Haglund C, Ristimaki A, Arola J, Heikkila P. Increased expression of cyclooxygenase-2 in malignant
pheochromocytomas. J Clin Endocrinol Metab 2001;86(11):5615-9
19. Hase T, Yoshimura R, Matsuyama M, Kawahito Y, Wada S, Tsuchida K, Sano H, Nakatani T. Cyclooxygenase-1 and -2 in human
testicular tumours. Eur J Cancer 2003;39(14):2043-9
20. Shirahama T, Sakakura C. Overexpression of cyclooxygenase-2 in squamous cell carcinoma of the urinary bladder. Clin Cancer Res
2001;7(3):558-61
21. Denkert C, Kobel M, Pest S, Koch I, Berger S, Schwabe M, Siegert A, Reles A, Klosterhalfen B, Hauptmann S. Expression of
cyclooxygenase 2 is an independent prognostic factor in human ovarian carcinoma. Am J Pathol 2002;160(3):893-903
22. Kirschenbaum A, Klausner AP, Lee R, Unger P, Yao S, Liu XH, Levine AC. Expression of cyclooxygenase-1 and cyclooxygenase-2 in
the human prostate. Urology 2000;56(4):671-6
23. Mohammed SI, Knapp DW, Bostwick DG, Foster RS, Khan KN, Masferrer JL, Woerner BM, Snyder PW, Koki AT. Expression of
cyclooxygenase-2 (COX-2) in human invasive transitional cell carcinoma (TCC) of the urinary bladder. Cancer Res 1999;59(22):564750
24. Miyata Y, Koga S, Kanda S, Nishikido M, Hayashi T, Kanetake H. Expression of cyclooxygenase-2 in renal cell carcinoma: correlation
with tumor cell proliferation, apoptosis, angiogenesis, expression of matrix metalloproteinase-2, and survival. Clin Cancer Res
2003;9(5):1741-9
25. Bae SH, Jung ES, Park YM, Kim BS, Kim BK, Kim DG, Ryu WS. Expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) in hepatocellular carcinoma
and growth inhibition of hepatoma cell lines by a COX-2 inhibitor, NS-398. Clin Cancer Res 2001;7(5):1410-8
26. IHC003 Report On File
Edition 06/07
(109213-003)
305834CZ_001 str. 3/3