Metody přímého nástřiku v kombinaci s hmotnostní

3.10.2014
UNIVERISTY HOSPITAL
OLOMOUC
Metody přímého nástřiku v kombinaci s hmotnostní
spektrometrií pro analýzu malých molekul
D. Friedecký, R. Karlíková, J. Široká, L. Najdekr, A. Kalivodová, K. Mičová,
M. Hrdá, J. Jáčová, J. Václavík, I. Vrobel, H. Janečková, K. Hron, T. Adam
Laboratory of Metabolomics
Institute of Molecular and Translational Medicine
Medical Faculty, Palacký University in Olomouc
Laboratory for Inherited Metabolic Disorders
Department of Clinical Biochemistry
University Hospital Olomouc
Inborn Errors of Metabolism
- purines a pyrimidines (LC/MS Dionex/AB Sciex)
- newborn screening
samples/year
500
30.000
TDM (Dionex Ultimate 3000 RS / AB Sciex API 4000)
- immunosuppressants
- antihypertensives
- tyrosine kinase inhibitors
- methotrexate
4000
500
500
100
Metabolomics
Flow injection analysis / MS
Drug Metabolisation
1
3.10.2014
Aplikace FIA-MS
1, Národní program novorozeneckého screeningu DMP
2, Monitorování hladin
- tyrosinkinásové inhibitory u pacientů s CML
- imunosupresiva u pacientů po transplantaci
3, Online SPE/FIA MS – RapidFire
4, Turbulent flow chromatography
Sample preparation
- Removal proteins / salts / phospholipids
- ESI => Matrix effects / Ions suppression
- Elimination:
- Precipitation (MeOH, AcCN, ZnSO4, TCA…)
- SPE (C18, modifications, zirconium)
- online/offline
=> price
- LLE (ether, hexane, ethylacetate)
- Isotope dilution (deuterated internal standards)
- Long term stability of the methods and instrument
- Analytical parameters of the method
- Time consuming!
2
3.10.2014
Národní program novorozeneckého screeningu DMP
Věstník č. 6, 2009, str. 7-14
METODICKÝ NÁVOD K ZAJIŠTĚNÍ CELOPLOŠNÉHO NOVOROZENECKÉHO
LABORATORNÍHO SCREENINGU A NÁSLEDNÉ PÉČE
Endokrinní onemocnění (EO):
a) kongenitální hypotyreoza (CH)
b) kongenitální adrenální hyperplázie (CAH)
Dědičné poruchy metabolismu (DMP):
c) fenylketonurie (PKU) a hyperfenylalaninemie (HPA)
d) leucinoza (nemoc javorového sirupu, MSUD)
e) deficit acyl-CoA dehydrogenázy mastných kyselin se středně dlouhým řetězcem (MCAD)
f) deficit 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenázy mastných kyselin s dlouhým řetězcem (LCHAD)
g) deficit acyl-CoA dehydrogenázy mastných kyselin s velmi dlouhým řetězcem (VLCAD)
h) deficit karnitinpalmitoyltransferázy I (CPT I)
i) deficit karnitinpalmitoyltransferázy II (CPT II)
j) deficit karnitinacylkarnitintranslokázy (CACT)
k) glutarová acidurie typ I (GA I)
l) izovalerová acidurie (IVA)
Jiná onemocnění:
m) cystická fibroza (CF)
Laboratorní vyšetření NS DMP
Administrativa a logistika příjmu materiálu
- 31 nemocnic s novorozeneckými odděleními
- příjem 100 - 300 vz. denně v pracovní dny (9 h)
- kontrola číselné řady odběrů u každé nemocnice
- vytvoření denní číselné řady a zápis do INS
Příprava vzorku
- terčík (3 mm) z KS => 96ti jamkové pláty
- extrakce organickým rozpouštědlem (IS)
- centrifugace
3
3.10.2014
Stanovení AC&AMK (FIA-MS/MS)
(5AMK + 20AC) x 2 (IS)
KS - terčík (3 mm) => 96 well plates , extrakce (MeOH +IS), centrifugace
MF: MeOH + FA, 300/30 µl/min, 80/10 bar; celkový čas analýzy: 43 s
MS: ESI+, 4500 V, 300 °C, 5-100 ms; LOD: AMK 0.9-2.9 µM, AC 0.02-1.07 µM
3.2e5
3.0e5
2.8e5
2.6e5
2.4e5
In t e n s ity , c p s
2.2e5
2.0e5
1.8e5
1.6e5
1.4e5
1.2e5
1.0e5
8.0e4
6.0e4
4.0e4
2.0e4
0.0
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
Time, min
0.30
0.35
0.40
0.45
Id
ALA
ALA-D4
LEU
LEU-D3
PHE
PHE-D5
TYR
TYR-D4
VAL
VAL-D8
Car
Car-D9
C5
C5-D9
C5DC
C5DC-D6
C8
C8-D3
C10
C10-D3
C14
C14-D3
C16
C16-D3
0.50
C18
C18-D3
Q1
90,2
94,1
132,0
135,1
166,0
171,1
182,1
186,1
118,1
126,1
162,1
171,1
246,1
255,2
276,1
282,3
288,2
291,1
316,2
319,2
372,2
375,3
400,3
403,3
428,3
431,3
Q3
44,1
48,2
86,1
89,1
120,1
125,2
136
140,1
72
80,1
85
85,1
85,1
85
85,1
84,9
85
85,1
84,9
85
85
85
85
84,9
85,1
85,2
DP
46
41
51
46
51
51
56
51
46
56
61
51
46
66
46
66
56
66
71
81
81
81
76
91
111
91
CE
17
17
15
15
19
19
19
19
15
17
27
29
31
29
33
33
31
35
35
39
45
47
47
49
59
55
Laboratorní vyšetření NS DMP
rozhodovací limity - Chemoview 2.0 (AB Sciex)
D:\Analyst Data\Projects\NBS\Samples\Data\2010-05-03.wiff
PKU, HPA
No.
Result
Lower Decision Limit
Upper Decision Limit
Level1
Level2
Level1
Level2
3
4
5
6
7
8
9
10
GA I
VLCAD
C8/C2 C8/C10 C10 C10:1
0
0,0 0,00 0,00
0,05
3,0 0,40 0,20
0,01
0,8 0,42 0,03
0,019
0,9 1,85 0,03
0,011
1,0 0,45 0,04
0,02
1,0 1,78 0,04
0,001
0,7 0,09 0,03
0,002
0,8 0,12 0,07
0,002
0,7 0,13 0,06
0,002
0,9 0,06 0,04
0,001
0,6 0,06 0,03
0,002
0,7 0,12 0,07
0,001
0,7 0,08 0,06
0,004
0,7 0,10 0,05
LCHAD
C14 C14:1 C14:1/C16 C16OH
0,00 0,00
0
0
0,50 0,30
0,15
0,07
0,38 0,03
0,009
0,007
1,69 0,06
0,006
0,008
0,39 0,05
0,011
0,007
1,61 0,05
0,005
0,012
0,26 0,15
0,038
0,025
0,19 0,07
0,02
0,012
0,30 0,23
0,058
0,019
0,14 0,06
0,027
0,011
0,19 0,12
0,031
0,012
0,23 0,15
0,04
0,021
0,18 0,07
0,023
0,016
0,14 0,11
0,053
0,022
CPT I, CPT II, CACT
C18OH C18:1OH C0 C16 C18 C18:1
0
0
5,0 0,3 0,2 0,2
0,05
0,05
40,0 8,0 2,0 3,0
0,004
0,022
53,7 4,3 2,1 1,2
0,008
0,018
88,0 9,9 5,9 0,5
0,008
0,02
56,7 4,5 2,2 1,0
0,006
0,01
88,8 9,8 6,0 0,5
0,014
0,019
20,1 3,9 1,0 1,6
0,01
0,018
24,8 3,6 0,8 1,7
0,015
0,019
22,2 3,9 0,8 1,7
0,007
0,007
11,9 2,4 0,6 1,0
0,019
0,014
12,1 3,8 1,0 1,5
0,013
0,014
15,8 3,6 0,9 1,3
0,006
0,016
15,3 3,1 0,6 1,3
0,009
0,015
6,0 2,1 0,5 0,8
0
25
8
6
8
6
4
6
5
4
3
3
4
2
(C1 6+ C1
8 :1 )/ C 2
C8
0,00
0,50
0,42
1,66
0,46
1,69
0,06
0,09
0,09
0,05
0,04
0,09
0,05
0,07
IVA
C 0/ (C1 6+
C 18 )
MCAD
C6
0,00
0,20
0,51
1,77
0,46
1,77
0,07
0,06
0,05
0,02
0,04
0,07
0,05
0,04
MSUD
Phe Phe/Tyr Xle Xle/Ala Xle/Phe Val C5 C5/C2 C5/C8 C5DC C5DC/C8 C5DC/C16
0
0,00
0
0,00
0,00
0 0,00
0
0,0 0,00
0,0
0,00
120 1,80 300 1,30
5,50 250 0,60 0,2 11,0 0,35
4,6
0,40
156 0,76 304 0,90
2,10 237 0,79 0,015 1,3 0,21
,5
0,06
495 1,11 562 0,78
1,14 440 1,76 0,021 1,1 1,20
0,7
0,12
149 0,79 294 0,69
2,08 243 0,69 0,017 1,5 0,25
0,5
0,06
488 1,08 542 0,76
1,11 437 1,69 0,02 1,0 1,13
0,7
0,12
71
0,61 123 0,57
1,72 117 0,12 0,003 2,0 0,10
1,7
0,03
45
1,16
97
0,50
2,14
79 0,11 0,002 1,1 0,08
0,9
0,02
72
0,89 197 0,84
2,75 158 0,17 0,003 2,0 0,17
1,9
0,04
51
0,53
93
0,57
1,83
82 0,08 0,004 1,7 0,10
2,0
0,04
75
0,95 137 0,67
1,82 125 0,11 0,003 2,9 0,09
2,2
0,02
77
0,92 131 0,57
1,70 111 0,10 0,003 1,2 0,21
2,5
0,06
48
1,17
76
0,37
1,59
63 0,09 0,002 1,7 0,07
1,3
0,02
70
0,83 173 0,66
2,45 162 0,05 0,003 0,7 0,12
1,7
0,06
0,00
0,45
0,14
0,12
0,14
0,12
0,12
0,11
0,11
0,16
0,15
0,14
0,10
0,15
TI
30000
90413
113202
105849
112076
100402
101502
92471
100702
95591
94144
96969
92491
4
3.10.2014
Záchyt dětí s DMP v novorozeneckém screeningu
Onemocnění
Počet
zachycených Prevalence FPR (%)
pacientů
v roce 2012 2012
v roce 2012
Kumulativní počet
zachycených
Prevalence
pacientů od r.
(kumulativní)
2010
PKU
MSUD
MCADD
LCHADD
VLCADD
CPT I
20
0
6
1
0
0
1 : 5338
1 : 17 792
1 : 106 751
-
0,042
0,004
0,005
0,001
0,006
0
77
1
26
8
3
0
1 : 5 729
1 : 441 163
1: 16 968
1: 55 145
1 : 147 054
-
CPT II / CACT 0
-
0,001
0
-
GA I
IVA
CF
1 : 5931
0,003
0,010
0,045
3
2
68
1 : 147 054
1 : 220 582
1 : 6 488
0
0
18
Analýza 87 met+IS pro selektivní screening 50ti DMP
ALA
ALA-D4
GLU
GLU-D5
LEU
LEU-D3
MET
MET-D3
PHE
PHE-D5
TYR
TYR-D4
VAL
VAL-D8
ARG
ARG-D7
CIT
CIT-D2
GLY
GLY-C2N
ORN
ORN-D6
TRP
THR
ARGSUCC
HIS
LYS
PRO
Car
Car-D9
C2
C2-D3
C3
C3-D3
C4
C4-D3
C5
C5-D9
C5DC
C5DC-D6
C6
C6-D3
C8
C8-D3
C10
C10-D3
C12
C12-D3
C14
C14-D3
C16
C16-D3
C18
C18-D3
C3DC,C4OH
C5-1
C4DC,C5OH
C6DC, C7OH
C8-1
C10-1
C12-1
C14-2
C14-1
C14OH
C16-1
C16-1OH
C16OH
C18-1
C18-2
C18-2OH
C18-1OH
C18OH
C10-2
C4-1
CIT-NH3
CIT-D2-NH3
PazPC
lipid PC 01
PC 16-0-6
PC 16-0-8
lipid PC 02
PAPC
PGPC
PoxnoPC
lipid PC 03
lipid PC 04
lipid PC 05
5
3.10.2014
Tyrosinkinasové inhibitory
Léčba chronické myeloidní leukémie
=> inaktivní konformace proteinu
=> inhibice fosforylace Tyr
=> blokace signálních drah
=> inhibice proliferace, apoptóza
Tyrosinkinasové inhibitory – LC/TMS
N
O
H3C
N
HO
N
N
N
N
CH3
N
H3C
N
H
N
H
N
S
N
N
N
H
CH3
O
Cl
H
H
F
N
F
F
N
Vzorek:
plasma + ZnSO4/MeOH/H2O => vortex, centrifugace
Interní standard:
50 ng/mL IMA-D8 / DAS-D8 / NIL-D6 / LAP-D4 v MeOH
Kalibrace, IQC:
Chromsystems; 3+1 kal / 2 qc
Instrumentace:
UHPLC Dionex Ultimate 3000 RS + TMS ABSciex API 4000
Kolona:
Acquity BEH C18 (Waters) 1.7 µm, 2.1 x 50 mm + 2.1 x 5.0 mm
Gadient:
A) 4mM NH4COOH, pH 3.2 => B) MeOH
Podmínky:
0.5 ml/min (< 450 bar); 40 °C; 2 µL; ESI+, MRM, 50 ms
94.0 Da ID: IMA from Sample 4 (c 2) of 2012-02-09.wiff (Turbo Spray)
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
Time, min
02.1 Da ID: DAS from Sample 4 (c 2) of 2012-02-09.wiff (Turbo Spray)
CH3
N
N
N
N
N
H
O
H3C
N
Max. 4.2e5 cps.
1.56
ID
IMA
IMA-d8
DAS
DAS-d8
NIL
NIL-d6
1.4
1.6
1.8
2.0
Q1 Mass
494.4
502.4
489.1
497.2
531.2
536.2
Q3 Mass
394.0
394.0
402.1
407.0
290.0
295.0
CE
40
40
45
40
40
40
2.2
Max. 5120.0 cps.
1.60
6
3.10.2014
Tyrosinkinasové inhibitory – DI-ID/TMS
Vzorek:
plasma + MeOH => vortex, zmrazení, centrifugace
Interní standard:
IMA-D8 / DAS-D8 / NIL-D6 / LAP-D4
Instrumentace:
UHPLC Dionex Ultimate 3000 RS + TMS AB Sciex 5500 Qtrap
Podmínky:
AcCN+H2O+FA, 300/30 uL/min; 0.5 µL; ESI+, MRM, 50 ms
LOD: 1.3 – 1.6 ng/ml (Das: 45 ng/ml)
Dasatinib – MRM3
c = 315/100 ng/ml; LOD: 0.29 / 45 ng/ml
DP = 50 V
CE = 41 V
LIT:
fill time = dynamic, <250 ms
excitation = 25 ms, 0.13 V
mass window = 0.5 Da
7
3.10.2014
Srovnání LC/MSMS vs. FIA/MSMS
Intraindividuální variabilita
5000
966 /650 vzorků
400mg/den
5000
c (ng/ml)
4500
4500
4000
4000
3500
3500
3000
3000
2500
2500
2000
2000
1500
1500
1000
1000
500
500
0
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
• „Patient compliance“
čas (h)
8
3.10.2014
Změna terapie
• Managment terapie
špatná CR/MR & nízká hladina IM & dobrá snášenlivost léčby
dobrá CR/MR & vysoká hladina IM & adverzní reakce
Multiple FIA
1.20e6
XIC of +MRM (2 pairs): 494.021/394.100 Da ID: IMA1 from Sample 8 (IMA-multiple pokus1) of 2011-08-29.wiff (Turbo Spray)
6.0e5
6.00e5
3.0e5
0.0
0.0
0.00
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0 8.0
Time, min
9.0
10.0 11.0
12.0 13.0 14.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6 1.8
Time, min
2.0
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
3.2
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6 1.8
Time, min
2.0
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
3.2
XIC of +MRM (2 pairs): 502.000/394.100 Da ID: D8IM1 from Sample 8 (IMA-multiple pokus1) of 2011-08-29.wiff (Turbo Spray)
4000
1.00e6
2000
5.00e5
0.00
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
8.0
Time, min
9.0
10.0 11.0
12.0 13.0 14.0
0
0.0
9
3.10.2014
Imunosupresiva
O
H
H
N
O
O
O
OH
O
H
HO
O
O
O
O
O
O
N
O
N
N
H
O
O
O
O
NH
O
OH
O
O
N
N
HO
H
NH
OH
O
O
O
OH
O
H
O
O
N
HO
O
O
O
O
O
OH
O
O
H
OH
HN
N
O
O
O
O
OH
O
O
O
N
NH
N
O
O
Vzorek:
plná krev + ZnSO4/MeOH/H2O => vortex, centrifugace
Interní standard:
10/100 ng/mL CYA-d4, TAC-d2, SIR-d3, EVE-d4 v MeOH
Kalibrace, IQC:
Chromsystems; 6+1 kal / 3 qc
Instrumentace:
UHPLC Dionex Ultimate 3000 RS + TMS ABSciex API 4000
Kolona:
Acquity BEH C18 (Waters) 1.7 µm, 2.1 x 50 mm + 2.1 x 5.0 mm
Gadient:
A) 25mM NH4COOH, pH 3.0 => B) MeOH
Podmínky:
0.4 ml/min (< 350 bar); 50 °C; 5 µL; ESI+, MRM, 50ms
NH3 from Sample 2 (iqc 3) of 2012-02-20.wiff (Turbo Spray)
Max. 1.5e6 cps.
ID
CYA-NH3
CYA-NH3-d4
TAC-NH3
TAC-NH3-d2
SIR-NH3
SIR-NH3-d3
EVE-NH3
EVE-NH3-d4
1.72
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
1.1
Time, min
H3 from Sample 2 (iqc 3) of 2012-02-20.wiff (Turbo Spray)
1.2
1.3
1.4
1.5
1.6
1.7
1.8
Q1 Mass
1219.8
1223.8
821.4
824.4
931.5
934.5
975.5
979.5
Q3 Mass
1202.7
1206.7
768.5
771.5
864.4
864.4
908.4
912.4
CE
23
23
29
29
23
23
25
25
1.9
Max. 5.6e4 cps.
1.61
Imunosupresiva FIA-MS/MS
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
Time, min
1.1
Plná krev - deproteinace (MeOH+IS+NH4FA), vortex, zamražení, centrifugace
1.2
1.3
1.4
1.5
1.6
1.7
1.8
1.9
MF: MeOH + FA, 200 µl/min, 30 bar; celkový čas analýzy: 50 s
MS: ESI+, 4500 V, 300 °C, 200 ms; LOD: 1.6 ng/ml
0.22
1.00e5
Cal3 = 297 ng/ml
CyA
Bland-Altman
100
80
60
40
20
0
-20 0
-40
-60
-80
-100
-120
5.00e4
D4-CyA
0.00
0.00
0.20
Time, min
0.40
100
200
300
500
600
700
800
500
600
700
800
0.60
1400
LC x FIA
800
y = 1.1245x - 21.339
R² = 0.9868
1200
400
700
1000
600
800
500
600
400
400
300
200
200
100
0
0
200
400
600
800
1000
1200
0
0
100
200
300
400
10
3.10.2014
Online SPE/FIA MS
RapidFire
11
3.10.2014
Vlastnosti
• Matrix effects: 0,33 (Cocaine metabolite in urine,
same for IS – compensation)
• Linear range: 25-5000 ng/ml (amphetamines in
urine)
• 1-100 ng/ml (antiepileptics in serum)
• Carry over: not significant (or inject blank after
high-conc. Sample)
• Accuracies: <10%
• Stability for >2000 injections (cartridges, precision
<3%)
12
3.10.2014
Projects done
• Benzodiazepines in urine (app. note)
• Antiepileptics in serum (app. note)
• Amphetamines in urine (app. note)
• Tricyclic antidepressants in serum (app. note)
• Voriconazol (antimycotic) in serum
• Metabolites of cocaine and midazolam in urine
(app. note)
• Tacrolimus in whole blood
13
3.10.2014
TKI – Online SPE/FIA MS
XIC of +MRM (16 pairs): 494.000/394.000 Da ID: Ima from Sample 1 (sequence1) of batch0929143.wiff (Turbo Spray)
Max. 1.6e6 cps.
5.5e4
5.0e4
XIC of +MRM (16 pairs): 494.000/394.000 Da ID: Ima from Sample 1 (sequence1) of batch0929143.wiff (Turbo Spray)
Max. 1.6e6 cps.
4.5e4
5.07
4.0e4
In te n s ity , c p s
1.6e6
1.5e6
1.4e6
3.5e4
3.0e4
8.21
2.5e4
1.3e6
2.0e4
1.92
1.2e6
1.5e4
In te n s ity , c p s
1.1e6
1.0e4
1.0e6
5000.0
9.0e5
0.0
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
8.0e5
1.6
Time, min
1.8
2.0
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
7.0e5
6.0e5
4.82
7.96
5.0e5
14.90
15.63 15.87
1.65
4.0e5
3.0e5
4.57
2.0e5
7.69
1.40
1.0e5
0.0
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
8.0
9.0
Time, min
10.0
11.0
12.0
13.0
14.0
15.0
16.0
17.0
TKI – Online SPE/FIA MS
XIC of +MRM (16 pairs): 488.900/401.000 Da ID: das1 from Sample 1 (sequence1) of batch0929143.wiff (Turbo Spray)
Max. 5.0e4 cps.
2000
1900
1800
XIC of +MRM (16 pairs): 488.900/401.000 Da ID: das1 from Sample 1 (sequence1) of batch0929143.wiff (Turbo
Spray)
Max. 5.0e4 cps.
1700
1600
8.20
5.0e4
1500
1400
In te n s ity , c p s
4.8e4
4.6e4
4.4e4
5.06
4.2e4
1300
1200
1100
1000
900
800
4.0e4
700
600
3.8e4
500
400
3.6e4
In te n s ity , c p s
300
1.91
3.4e4
200
100
3.2e4
0
0.0
3.0e4
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
Time, min
1.8
2.0
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
7.95
2.8e4
2.6e4
1.66
2.4e4
2.2e4
2.0e4
4.81
1.8e4
1.6e4
1.4e4
1.2e4
1.0e4
4.55
8000.0
6000.0
15.13
7.70
15.62
15.86
1.41
4000.0
7.45
2000.0
0.0
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
8.0
9.0
Time, min
10.0
11.0
12.0
13.0
14.0
15.0
16.0
17.0
14
3.10.2014
TKI – Online SPE/FIA MS
Imatinib
Dasatinib
100
1000
1
0.01
0.1
1
10
Response (Ax/Ais)
100
y = 23.272x
R² = 0.9948
10
1
0.1
0.001
0.01
0.1
1
10
0.1
0.01
Concentration (Cx/Cis)
Concentration (Cx/Cis)
Nilotinib
10
y = 0.8814x
R² = 0.99991
0.01
0.1
Response (Ax/Ais)
Response (Ax/Ais)
10
y = 1.2352x
R² = 0.9997
1
10
0.1
0.01
0.001
Concentration (Cx/Cis)
Turboflow chromatography
-
Optimized turbulent flow – high flow rates
-
Size exclusion/inclusion
-
RP chromatography
15
3.10.2014
Turboflow chromatography
TEAM
T. Adam (Head of the group)
D. Friedecký (MET, TDM, NBS, IEM)
K. Hron (statistics)
J. Široká (postdoc)
PhD:
J. Jáčová, A. Kalivodová, R. Karlíková, K. Mičová, L. Najdekr,
J. Václavík, I. Vrobel
Students: H. Rezková, M. Machálková, M. Galoczová, M. Ludvová, S. Pavlíková
Staff:
V. Bekárek, E. Hlídková, H. Janečková
Lab staff: J. Ševčíková, L. Kittlová, V. Růžičková, M. Kapustová, T. Semeniuk, A. Zábranská
Infrastructural part of this project (Institute of Molecular and Translational Medicine) was supported from the Operational programme Research
and Development for Innovations (project CZ.1.05/2.1.00/01.0030).
16