Stanovení mastných kyselin ve vzorku doplňku stravy

Stanovení mastných kyselin ve vzorku doplňku stravy
Úkol: Stanovte relativní zastoupení mastných kyselin v předloženém vzorku sojového
lecithinu
Princip metody:
Lecithin je obecný název pro fosfatidylcholin a používá se také jako výraz pro všechny
fosfolipidy, které jsou nedílnou součástí buněčných membrán rostlin a živočichů. Nejvíce
lecithinu najdeme ve vaječném žloutku a semenech rostlin, z nichž se také získává (vaječný
lecithin, lecithin ze sojových bobů, apod.) Lecithin je významným emulgátorem, čehož se
využívá především v potravinářství, kde se používá jako přídatná látka E322 - na potravinách
najdeme označení: lecithin, sojový lecithin či E322. Uplatnění nachází ale také v kosmetice,
v medicíně či farmacii. Má významné vlastnosti i pro lidský organismus - přispívá k udržení
normální hladiny cholesterolu v krvi, pomáhá při metabolismu tuků, je důležitý pro správnou
funkci jater a také urychluje zotavení po náročném výkonu. Proto se často používá také jako
doplněk stravy, mimo jiné i pro sportovce.
Fosfolipidy jsou amfifilní látky - obsahují polární část (tzv. "hlavu"), která je tvořena
glycerolem a fosfátem a nepolární část (tzv. "ocas") tvořený různými mastnými kyselinami.
Pro identifikaci těchto mastných kyselin pomocí plynové chromatografie se provádí jejich
methylace a stanovují se jako methylestery mastných kyselin.
Pomůcky:
• váhy, špachtle, vialky o objemu 2 ml a 40 ml, pipety, odměrné baňky, pH papírky,
zkumavky, termoblok Evaterm
Chemikálie:
• toluen, vzorek doplňku stravy, roztok hydroxidu draselného v bezvodém methanolu
(0,2 mol/l), hexan, chloroform, kyselina octová (1 mol/l), destilovaná voda
Přístroje a experimentální podmínky:
Plynový chromatograf: Agilent HP 6890 s hmotnostním spektrometrem Agilent 5973 N
MSD, řídící a vyhodnocovací softwarové prostředí ChemStation.
Kolona: HP 5, 30 m x 0,25 mm x 0,25 μm.
Nástřik: 1 μl, dávkovací puls 140 kPa, 0,4 min, 280 °C
Nosný plyn: Helium 4.8, průtok 0,9 ml/min
Teplotní program: 50 °C - 2 min – 10 °C/min – 300 °C – 15 min
Pracovní postup:
1. Do 10 ml odměrné baňky navažte 100 mg vzorku a rozpusťte v methanolu.
Do 40 ml vialky odeberte 100 µl a nechte odpařit pod dusíkem do sucha.
2. Odpařený vzorek rozpusťte v 1 ml toluenu. Přidejte 1 ml methanolického roztoku
KOH (0,2 mol/l) a směs inkubujte v termobloku Evaterm 15 min. při 37 °C.
3. Vzorek nechte zchladnout na laboratorní teplotu, přidejte 2 ml směsi
hexan:chloroform (4:1, v/v) a neutralizujte asi 200 µl kyseliny octové (1 mol/l) kontrolujte pomocí indikátorového papírku.
4. Poté přidejte 2 ml destilované vody a extrahujte. Horní organickou fázi odeberte
do 10 ml odměrné baňky.
5. Spodní vodnou fázi reextrahujte ještě dvakrát, pokaždé 2 ml směsi hexan:chloroform
(4:1, v/v). Po každé extrakci odeberte organickou fázi do odměrné baňky.
1
6. Odměrnou baňku doplňte po rysku směsí hexan:chloroform (4:1, v/v) a k analýze
odeberte 1 ml do vialky.
7. Analyzujte pomocí GC/MS. Jako standard použijte methylester kyseliny olejové.
Vyhodnocení výsledků:
Z naměřeného chromatogramu vyhodnoťte metodou vnitřní normalizace poměr
jednotlivých mastných kyselin ve vzorku sojového lecithinu.
Doporučená literatura:
1. Volka K. a kol.: Analytická chemie II, skripta VŠCHT, Praha 1995
(ISBN 80-7080-227-8, 1. vydání).
2. Klouda P.: Moderní analytické metody. Ostrava 2003 (ISBN 80-83369-07-2,
2.vydání).
3. Voet D., Voetová J. G.: Biochemie. Victoria Publishing, Praha 1995.
2