docKompletní zpráva - Institute of Experimental Medicine AS CR, v. v. i.
download 
Stížnost Transkript
Kompletní zpráva - Institute of Experimental Medicine AS CR, v. v. i.
Í>rava_ 1M0538_ 20 11_ 1_00-Tisk-ePROJEKTY file:/ I /F:/Document__grants/runninglcentrum_2005/20 11 /zprava/20 ll .. r TITULNÍ LIST ZÁVĚREČNÉ ZPRÁVY 2011 PROJEKTU 1M0538 Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy 1M0538 CENTRUM BUNĚČNÉ TERAPIE A TKÁŇOVÝCH NÁHRAD ková, DrSc. Verze zprávy: 1 >f84 Zpracováno dne: 1.2.. 2012 6.2.2012 15:55 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2. SKUTEČNOST ZA UPLYNULÉ OBDOBÍ - 2011 2.1. PROJEKTOVÝ TÝM A ŘEŠITELSKÉ TÝMY 2.1.1. PROJEKTOVÝ TÝM IČ organizace 00216208 Obchodní jméno - název Univerzita Karlova v Praze zastoupený/á/é Zkratka názvu UK Role organizace příjemce Vazba na organizaci Druh organizace Veřejná nebo státní vysoká škola (zákon č. 111/1998 Sb., o vysokých školách a o změně a doplnění dalších zákonů (o vysokých školách) Adresa sídla, spojení na organizaci - ulice, čp./č.or. Ovocný trh 5/ - PSČ, obec 11636 Praha 1 - stát Česká republika - telefon 224491312 - http:// www.cuni.cz Bankovní spojení -DIČ CZ00216208 - banka kód, název 0100 - Komerční banka, a.s. - číslo účtu, sp.symbol 3064490217, 0538 Statutární zástupce - titul před, jméno, příjmení, titul Prof. RNDr. Václav Hampl DrSc. za - 7. pád jména a příjmení Prof. RNDr. DrSc. - funkce rektor - 7. pád funkce - telefon 224491312 - mobil - fax - email [email protected] 2 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 3 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... IČ organizace 61389013 Obchodní jméno - název Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. zastoupený/á/é Zkratka názvu ÚMCH AVČR, v.v.i. Role organizace spolupříjemce Vazba na organizaci Druh organizace Státní příspěvková organizace (zákon č. 219/2000 Sb.) Adresa sídla, spojení na organizaci - ulice, čp./č.or. Heyrovského nám. 2/ - PSČ, obec 16206 Praha 6 - stát Česká republika - telefon 296 809 111 - http:// www.imc.cas.cz/ Bankovní spojení -DIČ CZ61389013 - banka kód, název 0710 - ČNB - číslo účtu, sp.symbol 11135-031, Statutární zástupce - titul před, jméno, příjmení, titul RNDr. František Rypáček DrSc. za - 7. pád jména a příjmení RNDr. DrSc. - funkce ředitel - 7. pád funkce - telefon +420-296 809 111 - mobil - fax +420-296 809 410 - email [email protected] 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 4 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... IČ organizace 00023736 Obchodní jméno - název Ústav hematologie a krevní transfuze zastoupený/á/é Zkratka názvu ÚHKT Role organizace spolupříjemce Vazba na organizaci Druh organizace Státní příspěvková organizace (zákon č. 219/2000 Sb.) Adresa sídla, spojení na organizaci - ulice, čp./č.or. U Nemocnice 1/ - PSČ, obec 12820 Praha 2 - stát Česká republika - telefon 21977111 - http:// www.uhkt.cz/ Bankovní spojení -DIČ CZ00023736 - banka kód, název 0100 - Komerční banka, a.s. - číslo účtu, sp.symbol 31438021, Statutární zástupce - titul před, jméno, příjmení, titul Prof. MUDr. Marek Trněný C.Sc. za - 7. pád jména a příjmení Prof. MUDr. C.Sc. - funkce ředitel - 7. pád funkce - telefon 21977111 - mobil - fax 224 913 728 - email [email protected] 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 5 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... IČ organizace 67985904 Obchodní jméno - název Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. zastoupený/á/é Zkratka názvu ÚŽFG AVČR, v.v.i. Role organizace spolupříjemce Vazba na organizaci Druh organizace Státní příspěvková organizace (zákon č. 219/2000 Sb.) Adresa sídla, spojení na organizaci - ulice, čp./č.or. Rumburská 89/ - PSČ, obec 27721 Liběchov - stát Česká republika - telefon 315 639 511 - http:// www.iapg.cas.cz/ Bankovní spojení -DIČ CZ67985904 - banka kód, název 0100 - Komerční banka, a.s. - číslo účtu, sp.symbol 19-8264720227, Statutární zástupce - titul před, jméno, příjmení, titul Ing. Jan Kopečný DrSc. za - 7. pád jména a příjmení Ing. DrSc. - funkce ředitel - 7. pád funkce - telefon 315 639 511 - mobil - fax 315 639 510 - email [email protected] 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... IČ organizace 00023001 Obchodní jméno - název Institut klinické a experimentální mediciny zastoupený/á/é Zkratka názvu IKEM Role organizace spolupříjemce Vazba na organizaci Druh organizace Státní příspěvková organizace (zákon č. 219/2000 Sb.) Adresa sídla, spojení na organizaci - ulice, čp./č.or. Videňská 1958/ 9 - PSČ, obec 14021 Praha 4 - stát Česká republika - telefon 26136 4000 - http:// www.medicon.cz Bankovní spojení -DIČ - banka kód, název 0300 - ČSOB, a.s. - číslo účtu, sp.symbol 1260050, 0300 Statutární zástupce - titul před, jméno, příjmení, titul MUDr. Aleš Herman Ph.D. za - 7. pád jména a příjmení MUDr. Ph.D. - funkce ředitel - 7. pád funkce - telefon 26136 4000 - mobil - fax - email [email protected] 6 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 7 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... IČ organizace 68378041 Obchodní jméno - název Ústav experimentální mediciny AV ČR, v.v.i. zastoupený/á/é Zkratka názvu ÚEM AVČR, v.v.i. Role organizace spolupříjemce Vazba na organizaci Druh organizace Veřejná výzkumná instituce (zákon č. 341/2005 Sb., o veřejných výzkumných institucích) Adresa sídla, spojení na organizaci - ulice, čp./č.or. Vídeňská 1083/ - PSČ, obec 14220 Praha 4 - stát Česká republika - telefon 296442230 - http:// uemweb.biomed.cas.cz Bankovní spojení -DIČ CZ68378041 - banka kód, název 0100 - Komerční banka a.s. - číslo účtu, sp.symbol 19-2795070297, Statutární zástupce - titul před, jméno, příjmení, titul Prof. MUDr. Eva Syková DrSc. za - 7. pád jména a příjmení Prof. MUDr. DrSc. - funkce ředitelka - 7. pád funkce - telefon 296442230 - mobil - fax - email [email protected] 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 8 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.1.2. ŘEŠITELSKÝ TÝM Celé jméno, RČ Amemori Takashi DVM Ph.D. 550108 JP Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav experimentální mediciny AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Anděrová Miroslava Ing. CSc. 585404 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav experimentální mediciny AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 40 Celé jméno, RČ Babič Michal Ing. 810116 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci student Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. speciálních polymerů/polymerní částice pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 odd. bioanalogických a Celé jméno, RČ Barnetová Irena Mgr. 835712 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Bažant Petr Ing. CSc. 480801 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 Celé jméno, RČ Beneš Jiří MUDr. 820727 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 40 Celé jméno, RČ Berková Zuzana Mgr. 795513 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu VÚŽV Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 70 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 9 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 10 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Bieberová Lucie MUDr. 825902 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 40 Celé jméno, RČ Brynda Eduard RNDr. CSc. 450206 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % klíčová osoba (1K) Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 20 Celé jméno, RČ Burian Martin Mgr. 720309 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 Celé jméno, RČ Chánová Eliška Ing. 786202 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci člen řešitelského týmu odd. polymerních membrán Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. odd. bioanalogických a speciálních polymerů/ bioaktivní a degradovatelné polymery pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 Celé jméno, RČ Chvátal Alexandr Doc. RNDr. DrSc. 620526 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % spoluřešitel [email protected] Ústav experimentální mediciny AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 55 Celé jméno, RČ Cicanič Michal MUDr. 840726 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci student Oddělení neurobiologie Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Univerzita Karlova v Praze 2. lékařská fakulta tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 Celé jméno, RČ Deylová Irena Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Centrum buněčné terapie a 810615 CZ Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 10 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 11 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Dezortová Monika Mgr. Ph.D. 705831 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 Celé jméno, RČ Dmytrenko Lesia Mgr. 825523 UA Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % student Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 Celé jméno, RČ Dovolilová Eva Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 40 Celé jméno, RČ Dutt James Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 100 Celé jméno, RČ Dvořák Petr Doc. Ing. CSc. 560108 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % klíčová osoba (1K) 605925 CZ 501107 US Ústav experimentální mediciny AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 40 odd. molekulární embryologie Celé jméno, RČ Dvořánková Barbora RNDr. 555727 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 40 Celé jméno, RČ Fales Ivan MUDr. 680325 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 12 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Forostyak Serhiy MUDr. 820414 UA Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % student Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 100 Celé jméno, RČ Fulka, Jr. Josef Ing. DrSc. 510117 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % klíčová osoba (1K) Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Fulková Helena RNDr. Ph.D. 805821 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 Celé jméno, RČ Girman Petr MUDr. 750101 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 45 Celé jméno, RČ Grim Miloš Prof. MUDr. DrSc. 410118 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % klíčová osoba (1K) VÚŽV VÚŽV Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Hájek Milan Ing. DrSc. 471122 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % spoluřešitel [email protected] Institut klinické a experimentální mediciny pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Hampl Aleš MVDr. CSc. 620424 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % klíčová osoba (1K) Ústav experimentální mediciny AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 40 ZRIR odd. molekulární embryologie 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 13 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Herynek Vít Mgr. Ph.D. 670405 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 Celé jméno, RČ Hlučilová Jana MVDr. 795701 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 60 Celé jméno, RČ Hobzová Radka Ing. 791111 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci člen řešitelského týmu Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. technické aplikace pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 Celé jméno, RČ Homola Aleš MUDr. Ph.D. 720328 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 70 Celé jméno, RČ Honsa Pavel Mgr. 840321 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % student Ústav experimentální mediciny AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 31 Celé jméno, RČ Horák Daniel Ing. CSc. 520609 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci klíčová osoba (1K) Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. speciálních polymerů/polymerní částice kmenový pracovník organizace 30 Celé jméno, RČ Hronová Hana Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu odd. hydrogelů pro lékařské a odd. bioanalogických a 775311 CZ Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 14 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Hrubá Alena RNDr. CSc. 316107 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Hruška Marian Mgr. 840511 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % student Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 80 Celé jméno, RČ Jarkovská Karla Mgr. 836124 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % student Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 70 Celé jméno, RČ Jaroš Josef Ing. Ph.D. 790719 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 100 Celé jméno, RČ Jaroš Josef Ing. 790719 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav experimentální mediciny AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace Celé jméno, RČ Jendelová Pavla RNDr. Ph.D. 655831 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % klíčová osoba (1K) Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 Celé jméno, RČ Jirák Daniel Ing. Ph.D. 740114 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci člen řešitelského týmu Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Univerzita Karlova v Praze 2. lékařská fakulta tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Centrum buněčné terapie a 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 15 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Káclová Jana Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu 776204 CZ Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 100 Celé jméno, RČ Kaňka Jiří RNDr. CSc. 520831 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 20 Celé jméno, RČ Kapcalová Miroslava Mgr. 805205 SK Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci student Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Univerzita Karlova v Praze 2. lékařská fakulta tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 Centrum buněčné terapie a Celé jméno, RČ Kepková Kateřina Mgr. 775614 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 60 Celé jméno, RČ Klíma Jiří Mgr. CSc. 741213 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 51 Celé jméno, RČ Koblas Tomáš Mgr. 780329 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 60 Celé jméno, RČ Koblihová Eva MUDr. 786001 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 16 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Kobylka Petr MUDr. CSc. 490205 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci spoluřešitel [email protected] Ústav hematologie a krevní transfuze Oddělení zpracování krvetvorné tkáně a kryokonzervace pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Celé jméno, RČ Kohoutová Lenka Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu 666215 CZ Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 100 Celé jméno, RČ Kott Tomáš Ing. 760808 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Kovářová Hana RNDr. CSc. 495719 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 20 Celé jméno, RČ Krumbholcová Eva Ing. 765118 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci člen řešitelského týmu Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. technické aplikace kmenový pracovník organizace 51 Celé jméno, RČ Kubies Dana Mgr. CSc. 705727 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 30 Celé jméno, RČ Lacina Lukáš MUDr. 791118 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu VÚŽV odd. hydrogelů pro lékařské a Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 17 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Lacková Monika Mgr. 826023 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 70 Celé jméno, RČ Langkramer Konrádová Šimona MUDr. 645625 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav hematologie a krevní transfuze kmenový pracovník organizace 51 Celé jméno, RČ Lásziková Eva MUDr. 715121 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 20 Celé jméno, RČ Lesný Petr MUDr. 721212 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Celé jméno, RČ Machová Luďka Mgr. 505107 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 30 Celé jméno, RČ Macková Hana Ing. 780611 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci člen řešitelského týmu Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. speciálních polymerů/polymerní částice pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 Celé jméno, RČ Mareková Dana Mgr. 805728 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu odd. bioanalogických a Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 18 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Michálek Jiří Ing. CSc. 601204 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci klíčová osoba (1K) Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. technické aplikace kmenový pracovník organizace 40 odd. hydrogelů pro lékařské a Celé jméno, RČ Motlík Jan Prof. MVDr. DrSc. 461116 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % spoluřešitel [email protected] Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 20 Celé jméno, RČ Němcová Lucie Ing. 675602 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 51 Celé jméno, RČ Nováková Zora RNDr. Ph.D. 795430 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 30 Celé jméno, RČ Pantoflíček Tomáš MUDr. 730620 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 20 Celé jméno, RČ Pivoňková Helena MUDr. 795507 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % student Ústav experimentální mediciny AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 100 Celé jméno, RČ Popelka Štěpán Mgr Ph.D. 730403 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu VÚŽV Oddělení neurobiologie Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 20 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 19 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Přádný Martin Ing. CSc. 540928 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci klíčová osoba (1K) Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. technické aplikace kmenový pracovník organizace 40 odd. hydrogelů pro lékařské a Celé jméno, RČ Procházka Radek MVDr. CSc. 570625 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 20 Celé jméno, RČ Proks Vladimír Mgr. 740506 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci člen řešitelského týmu Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. odd. bioanalogických a speciálních polymerů/ bioaktivní a degradovatelné polymery kmenový pracovník organizace 51 Celé jméno, RČ Rahmatová Šárka MUDr. 695502 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Riedl Tomáš Ing. 815712 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 Celé jméno, RČ Říhová Hana Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 30 Celé jméno, RČ Romanyuk Nataliya Mgr. Ph.D. 775206 UA Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu odd. polymerních membrán 750326 CZ Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 20 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Rypáček František RNDr. CSc. 470115 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % spoluřešitel [email protected] Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. odd. bioanalogických a speciálních polymerů/ bioaktivní a degradovatelné polymery kmenový pracovník organizace 5 Celé jméno, RČ Ryska Miroslav Prof. MUDr. CSc. 530108 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % klíčová osoba (1K) Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 10 Celé jméno, RČ Saudek František DOC. MUDr. DrSc. 550621 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % klíčová osoba (1K) Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 60 Celé jméno, RČ Sedlačík Tomáš Ing. 820602 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci student Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. odd. bioanalogických a speciálních polymerů/ bioaktivní a degradovatelné polymery pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 Celé jméno, RČ Sedmera David doc. MUDr. D.Sc. 710814 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 20 Celé jméno, RČ Širc Jakub Mgr. 770817 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci člen řešitelského týmu Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. technické aplikace pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 Celé jméno, RČ Šlouf Miroslav RNDr. Ph.D. 730303 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci člen řešitelského týmu Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie materiálů/morfologie polymerů kmenový pracovník organizace 20 AV ČR, odd. hydrogelů pro lékařské a v.v.i. odd. polymerních 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 21 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 22 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Smetana Karel Prof. MUDr. DrSc. 580506 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % klíčová osoba (1K) Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Šolc Petr Mgr. 810115 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 60 Celé jméno, RČ Spoljaričová Ivana Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Staňková Lubica RNDr. Ph.D. 805613 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad UK pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 Celé jméno, RČ Svobodová Jana Ing. 825313 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci student 665305 CZ Pracovní poměr Pracovní kapacita v % Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. odd. bioanalogických a speciálních polymerů/ bioaktivní a degradovatelné polymery pracovník přijatý na dobu řešení projektu 51 Celé jméno, RČ Syková Eva Prof. MUDr. DrSc. 445724 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % řešitel [email protected] Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad kmenový pracovník organizace 40 Celé jméno, RČ Szabo Pavol Mgr. 830216 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % student Univerzita Karlova v Praze 2. lékařská fakulta pracovník přijatý na dobu řešení projektu 90 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 23 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Tenkrátová Jana Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu 585708 CZ Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Turnovcová Karolína MUDr. 785811 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % student Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 100 Celé jméno, RČ Vacková Irena Ing. CSc. 635903 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % klíčová osoba (1K) Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. pracovník přijatý na dobu řešení projektu 30 Celé jméno, RČ Vacková Svatava Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad kmenový pracovník organizace 51 Celé jméno, RČ Vaněček Václav Mgr. 831221 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % student Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 50 Celé jméno, RČ Vargová Lýdia MUDr. Ph.D. 695215 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad kmenový pracovník organizace 50 Celé jméno, RČ Veselá Alena Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu VÚŽV 565526 CZ 575318 CZ Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 100 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 24 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Celé jméno, RČ Vodička Petr Mgr. 751110 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. kmenový pracovník organizace 51 Celé jméno, RČ Zacharovová Klára Mgr. 796112 CZ Role osoby při řešení projektu Spojení Příslušnost k organizaci Pracovní poměr Pracovní kapacita v % člen řešitelského týmu Univerzita Karlova v Praze Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad pracovník přijatý na dobu řešení projektu 100 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.1.3. ZMĚNY V PROJEKTOVÉM A ŘEŠITELSKÝCH TÝMECH - rok 2011 Pč. Typ Popis * 25 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 26 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.2. ČASOVÝ POSTUP PRACÍ Komentář k metodice a časovému postupu prací a průběhu aktivit za uplynulé období Práce na projektu v r. 2011 pokračovaly v původně navržené metodice ve všech třech oblastech výzkumu, t.j. v oblasti buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie, v oblasti výzkumu a využití biomateriálů a v oblasti klinických studií a klinicky orientovaných experimentálních modelů. Všechny plánované aktivity v rámci dílčích cílů se v r. 2011 podařilo uskutečnit podle navrženého plánu. 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.2.0. PŘEHLED DÍLČÍCH CÍLŮ SCHVÁLENÉ- SKUTEČNOST 2011 Číslo Dílčí cíl podrobně Datum plnění Dílčí cíl Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie Indikátory dosažení - výsledky dílčího cíle 01 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Prostředky ověření - Forma zpracování a předání výsledku dílčího cíle 1.1.2010 - 31.12.2010 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Kritické předpoklady dosažení dílčího cíle Dílčí cíl Výzkum a využití biomateriálů Indikátory dosažení - výsledky dílčího cíle 02 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Prostředky ověření - Forma zpracování a předání výsledku dílčího cíle 1.1.2010 - 31.12.2010 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Kritické předpoklady dosažení dílčího cíle Dílčí cíl Klinické studie a klinicky orientované experimentální modely Indikátory dosažení - výsledky dílčího cíle 03 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Prostředky ověření - Forma zpracování a předání výsledku dílčího cíle 1.1.2010 - 31.12.2010 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Kritické předpoklady dosažení dílčího cíle Dílčí cíl Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie Indikátory dosažení - výsledky dílčího cíle 04 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Prostředky ověření - Forma zpracování a předání výsledku dílčího cíle 1.1.2011 - 31.12.2011 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Kritické předpoklady dosažení dílčího cíle Dílčí cíl Výzkum a využití biomateriálů Indikátory dosažení - výsledky dílčího cíle 05 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Prostředky ověření - Forma zpracování a předání výsledku dílčího cíle 1.1.2011 - 31.12.2011 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Kritické předpoklady dosažení dílčího cíle Dílčí cíl Klinické studie a klinicky orientované experimentální modely Indikátory dosažení - výsledky dílčího cíle 06 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Prostředky ověření - Forma zpracování a předání výsledku dílčího cíle 1.1.2011 - 31.12.2011 Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Kritické předpoklady dosažení dílčího cíle 27 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.2.1. AKTIVITY USKUTEČNĚNÉ v roce 2011 Číslo aktivity 21 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Hodnocení kombinované terapie chronického míšního poranění Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Testovali jsme vliv implantace hydrogelu na bázi HPMA-RGD osázený kmenovými buňkami kostní dřeně v modelu akutního a chronického míšního poranění u laboratorního potkana. Modelem poranění byla hemisekce a balónková kompresní míšní léze. Oproti publikovaným výsledkům jsme použili HPMA hydrogely připravené jinou technologií (jako porogen byly použity částice frakcionovaného NaCl a na povrch byly navázány RGD sekvence odvozené z mamininu – HPMA-porézní-RGD). Připravené hydrogely jsme oseli mesenchymovými kmenovými buňkami a porovnali v modelu míšní hemisekce s již dříve připraveným HPMA-RGD, kde byla použita metoda srážecí polymerace. Po jednom měsící byly u všech hydrogelů buňky přítomny v gelu. Menšina buněk pak vycestovala do nejbližšího okolí míšní tkáně těsně adorující k hydrogelu. U žádného z hydrogelů nebyly MSCs patrny v odlehlejších částech míšní tkáně. Všechny 4 typy hydrogelů přemostily míšní lézi, jejich okraje dobře adherovaly k okrajům míšní léze. Nejvíce cév vrůstalo do obou hydrogelů na bázi HPMA s RGD sekvencí (HPMA-porézní-RGD a HPMA-RGD). Nejvíce nervových vláken pak vrůstalo do hydrogelu HPMA-porous-RGD. Hydrogel HPMA-porous-RGD se z námi testovaných hydrogelů na bázi metakrylátu jeví jako nejslibnější biomateriál v experimentální léčbě míšního poranění. V současnosti proto probíhá experimentální studie vlivu implantace hydrogelu HPMA-porous-RGD u chronické míšní léze laboratorního potkana. Hydrogel je implantován do balónkové kompresní léze 5 týdnů po poranění. Kontrolní skupinu tvoří laboratorní potkani se samotnou balónkovou kompresní lézí. Šest měsíců po SCI budou vyhodnoceny jednotlivé skupiny. V průběhu experimentu provádíme u vybraných potkanů vyšetření magnetickou rezonancí a zvířata jsou testována sadou behaviorálních testů. Po usmrcení budeme hodnotit infiltraci gelů cévami, axony, Schwannovými buňkami i astrocyty. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 22 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Studium lidských buněk tukové tkáně a jejich využití v léčbě míšního poranění. Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Vzhledem k tomu, že se nám nepodařilo navázat spolupráci s ORL klinikou v Motole a tudíž jsme nemohli z nekropsie získat lidské olfaktorické glie, studovali jsme v letošním roce alternativní zdroj buněk a to buňky tukové tkáně a jejich využití v léčbě míšního poranění. Kmenové buňky izolované z tukové tkáně jsme v kultuře předdiferencovali do 28 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... neurálního fenotypu (pASC) a srovnali jejich účinek s nediferencovanými buňkami (ASC). V kultuře se nám podařilo získat neurální prekursory, které byly positivní na nestin, NCAM, bIII tubulin, NG2 a GFAP a vykazovaly tak multipotenci neurálních kmenových buněk. Po transplantaci jsme však nepozorovali žádnou diferenciaci do zralejších forem neurálního fenotypu. Naopak, našli jsme transplantované buňky pozitivní na CD31 (endoteliální fenotyp) a NG2 (oligodendrocytární prekurzor). Transplantované buňky obalily zbylá neurofilamenta a oligodendrocyty a vytvořily tak provazce buněk procházejících lézí. Nic z toho jsme nepozorovali po transplantaci nedifirencovaných ASC. Funkční zlepšení motoriky zadních končetin bylo ale srovnatelné po transplantaci obou typů buněk. Z našich výsledků vyplývá, že transplantace kmenových buněk izolovaných z tukové tkáně má pozitivní vliv na motoriku potkanů s míšním poraněním hlavně díky parakrinnímu efektu a ischemické prostředí míšní léze podporuje vice vascularizaci než diferenciaci do neurálního fenotypu. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 23 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Studium neurogenese na experimentálním modelu iktu. Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Dokončili jsme studii, ve ktré jsme sledovali vliv transplantovaných indukovaných pluripotentních buněk (iPS) na reparaci a neurogenezi mozkové tkáně po iktu. iPS buňky byly transplantované potkanům do striata 7 dní po vyvolání iktu. Neurální prekurzory, derivované z iPS buněk se během 4 měsíců po transplantaci diferencovaly do striatálních interneuronů (GABA ergních, tj DARPP32 pozitivních a calretinin pozitivních), které projektovaly své axony do globu pallidus a do substantia nigra (SN). Transplantovaná zvířata vykazovala menší neurologický deficit a menší atrofii SN. Ke zlepšení neurologického deficitu došlo dříve, než k rekonstrukci mozkové tkáně, z čehož vyplývá, že iPS buňky se nejen podílejí na regeneraci striatální tkáně, ale také vylučují aktivní látky (růstové faktory), které se podílejí na snížení neurologického deficitu ještě před histologickými změnami. Z našich výsledků vyplývá, že neurální prekurzory derivované z iPS buněk mohou přispět k léčbě iktu 2 mechanismy, a to jak parakrinním, tak reparačním. Zvířata byla po transplantaci sledována na magnetické rezonanci, z T2W obrazů byla rovněž odečítána atrofie SN. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 24 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Produkce iPS a geneticky „čistých“ iPS buněk u dalších modelových druhů, testování možnosti jejich diferenciace Zahájení aktivity 1.1.2011 29 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 30 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Provedli jsme detailní charakterizaci buněčných linií derivovaných z prasečích blastocyst. Využívali jsme několika metodologických přístupů zahrnujících morfologická pozorování, cytogenetickou analýzu, stanovení alkalické fosfatázy a detekci exprese specifických markerů na proteinové a mRNA úrovni. U námi ustanovených linií jsme sledovali nejen markery pluripotence, ale i markery diferenciace. Ve většině publikovaných prací byly prasečí embryonální kmenové buňky charakterizovány především na základě jejich morfologických vlastností, případně pomocí několika málo znaků pluripotence. Podle našeho zjištění je nezbytně nutné linie domnělých embryonálních kmenových buněk charakterizovat nejen pomocí markerů pluripotence, ale musí u nich být vyloučena exprese markerů diferenciace. Experimenty s reprogramací somatických buněk na indukované pluripotentní kmenové buňky (iPS) ukazují, že reprogramace není tak efektivní a přímočará jako reprogramace jádra pomocí techniky přenosu somatických jader do enukleovaného oocytu. Je otázkou, jestli a do jaké míry jsou tyto dva způsoby reprogramace shodné (z hlediska mechanizmu reprogramace). Na základě množství publikovaných studií o možném zefektivnění in vitro reprogramačního protokolu přidáváním různých dalších transkripčních faktorů nebo proteinů k původním 4 faktorům (Oct3/4, Sox2, Klf4 a c-Myc) je zřejmé, že tento původní protokol není definitivní. Tento postup je možné modifikovat s cílem vyšší efektivity a nižší biologické nebezpečnosti (inzerční mutageneze, používání onkogenů). S myšlenkou propojit informace dostupné pro reprogramační možnosti oocytů a in vitro reprogramačního protokolu jsme vytipovali několik proteinů oocytu s možným efektem na reprogramaci. Kontrolní transdukce somatických buněk ukázaly, že připravené vektory jsou schopné přenést informaci do buněk s vysokou efektivitou a jsou schopné navodit správnou expresi daných transgenů. Takto připravené lentivirové vektory, nesoucí informace pro námi vytipované proteiny oocytu, testujeme začleněním do původního reprogramačního protokolu. Nově jsme se zabývali výzkumem „adult“ SC – kmenových buněk získaných z dospělého jedince. Zaměřili jsme se na studium mezenchymálních kmenových buněk (MSC) získaných z matrixu pupeční šňůry koní. Cílem této části projektu bylo testování různých izolačních a kultivačních postupů pro získání maximálního možného množství MSC z tkáně pupečníku při současném zachování jejich viability, proliferačního potenciálu a pluripotence. Izolační experimenty potvrdily rozdíly výnosu buněk mezi jednotlivými izolačními a kultivačními postupy. Kultivované buňky na 3.-5. pasáži byly použity k diferenciačním experimentům a byla u nich potvrzena schopnost diferencovat do buněk adipocytů, chondrocytů a osteocytů. Sledovali jsme i možnost kontaminace kultivovaných buněk pupečníku buňkami matky. Tato kontaminace by po případné transplantaci mohla vést k nemoci GVHD (graft vs. host disease). Tato kontaminace nebyla v našich buňkách potvrzena. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 25 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Vývoj strategií pro diferenciaci lidských embryonálních kmenových buněk do medicínsky relevantních linií Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Studovali jsme trojrozměrným struktur na diferenciaci buněk. Tyto eperimenty navazovaly na experimenty na síťovaném/nesíťovaném kolagenu v kombinaci s hyaluronovou kyselinou v několika různých variantách koncentrací kolagenu, hyaluronanu a stupně síťování. Cílem byla analýza proliferace a neuronální diferenciace NPC s ohledem na 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 31 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... fyzikálně-mechanické vlastnosti materiálů. Pro analýzy vlivu materiálů byly diferencovány neurální progenitorové buňky z lidských embryonálních kmenových buněk. Buňky byly v materiálech kultivovány po dobu 1-4 týdnů a analyzovány pomocí fluorescenční, konfokální a elektronové mikroskopie. Neurální progenitorové buňky nejlépe proliferovaly v materiálech, které nebyly síťovány, ačkoliv ty nejsou vhodné pro dlouhodobou kultivaci, jelikož po cca 2 týdnech dochází k jejich rozkladu vlivem hydrolýzy a působením enzymů. Pozitivní vliv na proliferaci v síťovaných materiálech měla přítomnost vyšší koncentrace hyaluronové kyseliny. Při kultivaci buněk na materiálech v diferenciačním médiu byla výrazně inhibována proliferace NPC v planárních i 3D strukturách. Byl však ověřen podpůrný vliv 3D prostředí na udržení nediferencovaného stavu neurálních progenitorových buněk v nediferenciačním médiu a jeho využití pro výraznou expanzi buněk.V současnosti jsou analyzovány fyzikálně-mechanické vlastnosti použitých materiálů a naměřené parametry (porozita, elasticita, etc.) budou korelovány s reakcí neurálních progenitorových buněk. Dále jsme studovali hydrogely z poly(N,N-diethylakrylamidu) (PDEAAm) a studiem růstu lidských embryonálních kmenových buněk (hESC). Imobilizace peptidu YIGSR do materiálu výrazně zlepšilo adhezi a proliferaci hESC ve srovnání s nemodifikovaným materiálem. Bylo prokázáno, že porozita je zásadním faktorem, jelikož během krátkodobé (2-denní) kultivace hES buňky vytvářely kolonie na porézních materiálech narozdíl od růstu v neporézních strukturách. Při dlouhodobé kultivaci (2 týdny) bylo ukázáno, že vlivem 3D prostředí dochází k indukci spontánní diferenciace hES buněk, kterou lze potlačit zvýšením koncentrace růstového faktoru FGF2. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 26 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Analýza genetické stability linií získaných diferenciací lidských embryonálních kmenových buněk Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Zabývali jsme se studiem mechanismů, které se uplatňují při regulaci buněčného cyklu a odpovědi na poškození DNA (DDR) u lidských embryonálních kmenových (hES) buněk. V odpovědi na poškození DNA somatických buněk hraje důležitou roli tumor supresorem p53 způsobená transaktivace proteinu p21, který reguluje zastavení buněčného cyklu v G1/S přechodu. Mechanismus regulace G1/S přechodu v hES buňkách ještě není detailně pochopen. U hES buněk byla popsána neschopnost tumor supresoru p53 aktivovat své cílové geny. Navzdory zvýšení hladiny mRNA proteinu p21 po UVC ozáření hES buněk však není protein p21 detekovatelný. Prokázali jsme, že exprese proteinu p21 je přímo řízena microRNA drahou ve standardních kultivačních podmínkách i po poškození DNA. DDR v hES buňkách vede ke zvýšené regulaci desítek typů microRNA, včetně rodin miR-302, miR-371-372, či C19MC microRNA cluster, které jsou specifické pro lidské embryonální kmenové buňky. Ukázali jsme, že rodiny miR-302 (MIR-302A, Mir-302B, Mir-302C, a Mir-302d) se přímo podílí na regulaci exprese p21 v hESCs, a tím demonstrujeme nové funkce miR -302s v hESC. Popsaný mechanismus objasňuje roli microRNA při regulaci významné molekulární dráhy řídící kontrolní bod v G1 / S přechodu před i po poškození DNA. Tyto výsledky jsou silně relevantní pro pochopení molekulárních mechanismů, které se uplatňují při udržení genomové stability lidských embryonálních kmenových buněk během propagace nediferencovaných hES buněk a během diferenciace do specializovaných buněčných typů. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 32 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Číslo aktivity 27 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Modifikace podmínek pro in vitro přípravu tkáňových kmenových buněk Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Potvrdili jsme naši hypotézu že mikroprostředí lidských nádorů vytváří vhodné podmínky pro získání či udržení fenotypu kmenových buněk. Určili jsme spektrum cytokinů produkovaných nádorově asociovanými fibroblasty v lidském bazaliomu, které jsou odpovědné za konverzi fibroblastů do podoby mesenchymových kmenových buněk, včetně jejich diferenciační plasticity. Domníváme se, že tím byl nastíněna cesta, která by umožnila zefektivnění manipulace s tkáňovými kmenovými buňkami in vitro. Pokračovalo proteomické testování produkce cytokinů a chemokinů nádorově asociovanými fibroblasty. Dále jsme potvrdili loňský nález, že existuje silná shoda mezi expresí endogenního lektinu galektinu-1 v nádorovém stromatu a v hojícím se poranění. Prokázali jsme, že galektin-1 stimuluje konverzi normálních fibrobalstů do biologicky vysoce aktivních myofibrobastů a podporuje produkci 3-D sití nanovláken extracelulární matrix vhodných pro buněčné kultivace a tkaňové inženýrství. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 28 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Využití prasečích preimplantačních embryí vytvořených v podmínkách in vitro pro tvorbu jedinečných buněčných linií Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Původně byly realizovány dva oddělené výzkumné směry, ale cesta k vytvoření robustních metodik, které povedou k vytvoření indukovaných pluripotentních buněk u miniprasat musí vycházet z obou buněčných zdrojů, jak z preimplantačních embryí, tak z nervových kmenových buněk. V průběhu řešení výzkumných úkolů Centra jsme se systematicky věnovali především nervovým kmenovým buňkám miniprasat. Byly vypracovány spolehlivé postupy pro jejich izolaci, propagaci v podmínkách in vitro, stejně jako pro jejich cílenou diferenciaci. Nejnovější výzkumy v oblasti indukovaných pluripotentních buněk (iPS cells) nás vedli k zahájení intenzivních experimentů i v této oblasti. V roce 2011 jsme intenzivně testovali metodiky cílené diferenciace pluripotentních buněk miniprasat. Pozornost byla soustředěna především na diferenciaci do linií ektodermálních buněk. Protože první klony iPS buněk byly vytvořeny transfekcí různých kombinací všech čtyřech, klíčových transkripčních faktorů, soustředili jsme se v tomto roce na nový přístup zaměřený na použití specifických transpozomů k indukci pluripotence u nervových kmenových buněk. Protože jsme byli v tomto roce úspěšní také při přípravě nervových kmenových buněk, které nesou mutovanou alelu pro lidský huntingtin, naše experimenty jsou zaměřeny na přímé srovnání zdravých a huntingtonových iPS buněk. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 33 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 29 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Sledování osteogenní diferenciace prasečích mezenchymálních kmenových buněk Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Cílem pokusů bylo charakterizovat diferenciaci prasečích mezenchymových buněk do osteoblastů na kultivačním plastiku (2D prostředí) nebo ve dvou typech nosičů (3D prostředí). Osteogenní diferenciaci v 2D prostředí jsme se také snažili podpořit pomocí molekul extracelulární matrix (ECM), vitronektinu a kolagenu typu I. Mezenchymové buňky miniaturních prasat na třetí pasáži byly charakterizovány pomocí průtokové cytometrie (CD29, CD44, CD45, CD90, CD105 a CD147), vysazeny na kultivační plastik (potažený nebo nepotažený molekulami ECM) nebo do dvou typů nosičů (plazma-alginátový a plazma nosič) a kultivovány v osteogenním nebo kontrolním médiu. Morfologie a konfluence MSCs na kultivačním plastiku byla hodnocena pomocí IncuCyteTM zobrazovacího systému. Charakterizaci proteinových markerů osteogenní diferenciace MSCs – osteopontinu, osteokalcinu a osteonektinu jsme uskutečnili imunofluorescenčně nebo pomocí Western blotu. Aktivita alkalické fosfatázy v kultivovaných nebo diferencovaných MSCs byla detekována kvantitativně. Po třech týdnech osteogenní diferenciace jsme zjistili změnu tvaru MSCs z vřetenovitého na kuboidální. Mimo jiné na kultivačním plastiku potaženém molekulami ECM dosáhly MSCs mnohem dříve 98% konfluenci (57 hodin po vysazení) než buňky bez molekul ECM (89 hodin po vysazení). Ze stanovení DNA v těchto monolayerech vyplývá, že rozdíl v konfluencích byl způsoben spíše odlišnou adherencí a tvarem buněk (více polygonální tvar buněk) na potaženém povrchu než lepší adherencí a proliferací. První depozita kalcia jsme pozorovali přibližně po týdnu osteogenní diferenciace. Hlavní nevýhodou plazma a plazma-alginát nosičů bylo, že MSCs zalité v centru těchto nosičů byly neaktivní a nevytvářely vlastní ECM. V 2D i 3D prostředí jsme zjistili snížení exprese osteopontinu v průběhu osteogenní diferenciace. Kulminace signálu osteonektinu v 2D prostředí byla závislá na potažení kultivačního plastiku vitronektinem a kolagenem typu I. Nejvyšší aktivitu alkalické fosfatázy a imunofluorescenční signál osteokalcinu jsme detekovali ve třech týdnech osteogenní diferenciace (bez vlivu prostředí nebo molekul ECM). Potažení kultivačního plastiku molekulami ECM urychlilo osteogenní diferenciaci prasečích MSCs, přičemž diferenciace v 2D a 3D prostředí probíhala podobně. Závěrem můžeme říci, že výsledky naší studie navrhují jako optimální čas transplantace in vitro diferencovaných prasečích MSCs do uměle vytvořených experimentálních kostních defektů prasat mezi 10. a 21. dnem diferenciace. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 30 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Použití retrovirových vektorů pro vytváření transgenních buněčných linií a transgenních miniaturních prasat pro 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 34 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... mutovaný huntingtin. Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Pokračovali jsme v embryotransferech po mikroinjekci lentivirových vektorů nesoucích informaci pro celou molekulu mutovaného lidského huntigtinu (HIV1-HD-full lenght-145Q). V tomto roce se narodilo více než 60 selat po přenosu, která byla soustavně genotypizována. V současné době máme dostatečné důkazy na úrovni genomické DNA i na úrovni mRNA, že prasnička Agáta je transgenní. Věříme, že bude tuto informaci přenášet i na své potomstvo. Dále jsme soustavně testovali reprodukční parametry F1 generace transgenních miniprasat pro N-terminální lidský mutovaný huntingtin. Jak in vivo, tak in vitro testy potvrzují, že u kanců Bruna Baba, kteří vykazovaly normální reprodukční parametry po dosažení pohlavní zralosti, dochází od stáří 14 měsíců k postupnému snižování produkce spermií a také k výraznému snížení hodnot in vitro penetračního testu. Tyto výsledky nás vedou k přesvědčení, že jsme u obou kanců postihli první známky fenotypu Huntingtonovy choroby. V roce 2011 se také narodilo více než 70 selat F2 generace transgenních miniprasat. Zásadním zjištěním je fakt, že v každém vrhu jsou přibližně stejným počtem zastoupena zdravá a transgenní selata. To znamená, že původní zjištění, že sekvence pro N-terminální část mutovaného lidského huntingtinu je lokalizována na prvním chromozomu pouze v jedné kopii je správné. Tato informace zcela sleduje v F2 generaci Mendelistickou dědičnost. Tento fakt nám dává do budoucna jedinečnou možnost sledovat všechny parametry vývoje Huntingtonovy choroby na sourozencích s naprosto identickým genetickým pozadím. Tento jedinečný model Huntingtonovy choroby je velkým příslibem do budoucnosti jak pro základní, tak aplikovaný výzkum. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 31 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Proteinové studie cytoplazmatických agregátů mutovaného huntingtinu. Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity V roce 2011 se narodilo více než 70 selat F2 generace transgenních miniprasat. Zásadním zjištěním je fakt, že v každém vrhu jsou přibližně stejným počtem zastoupena zdravá a transgenní selata. To znamená, že původní zjištění, že sekvence pro N-terminální část mutovaného lidského huntingtinu je lokalizována na prvním chromozomu pouze v jedné kopii je správné. Tato informace zcela sleduje v F2 generaci Mendelistickou dědičnost. Tento fakt nám dává do budoucna jedinečnou možnost sledovat všechny parametry vývoje Huntingtonovy choroby na sourozencích s naprosto identickým genetickým pozadím. Tento jedinečný model Huntingtonovy choroby je velkým příslibem do budoucnosti jak pro základní (High Q Foundation), tak aplikovaný (TAČR, Centrum PIGMOD) výzkum. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Číslo aktivity 32 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 04 - Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie ... Název (cíl)aktivity Modulace osudu buněk srdeční neurální lišty Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Buňky neurální lišty se podílejí na vývoji řady orgánu. V srdci byla popsána jejich diferenciace do fibroblastů, hladkých svalových buněk, neuronů a u nižších obratlovců i do kardiomyocytů část zřejmě zůstává nediferencována. Charakterizovali jsme buňky srdeční neurální lišty z hlediska diferenciace do specifických tkáňových linií pomocí imunohistochemických technik. S využitím buněk transgenní myší linie Wnt1-Cre/R26R, kde jsou buňky neurální lišty označeny beta galaktosidázou, jsme potvrdili jejich potenciál vytvářet různé srdeční tkáně. V budoucnu se budeme věnovat praktické využitelnosti těchto buněk pro tkáňové inženýrství (tvorba biologických srdečních náhrad). V roce 2011 jsme se dále věnovali studiu vlivu interakce gentických a epigeneticých faktorů na růst a diferenciaci vyvíjejícího se srdce. Analýza embryí generovaných v předchozím roce ukázala, že endotelinová signalizace v tomto případě je parakrinního charakteru, neboť tkáňově specifická delece genu pro endotelin omozená na populace s aktivním promotorem Wnt1 (tj. i buňky neurální lišty) neukázala změny v jejich diferenciaci. Rovněž nebyly prokázány funkční následky pro převodní systém srdeční, což ukazuje na spíše pasivní úlohy této buněčné populace. V budoucnu budeme navazovat studiemi na jejich vlastnosti in vitro, kterými potvrdíme naše poznatky in vivo. Na modelu transgeních myší s defekty výtokového traktu srdce (delece genu ECE1 nebo TBX1) jsme studovali vliv suplementace kyselinou listovou, která snižuje expresivitu defektů neurální trubice, na kardiovaskulární system. Podařilo se nasbírat dostatečné množství experimentálních a kontrolních embryí na příslušných vývojových stádiích (12. a 14. den vývoje) a provádíme jejich podrobnou fenotypovou analýzu. Předběžná data jsou nadějná v tom smyslu, že dieta se zvýšeným množstvím kyseliny listové zvýšila přežívání mutantních embryí oproti kontrolám. Tyto poznatky ukazují na dosud nepoznanou možnost využití kyseliny listové i pro prevenci vrozených srdečních vad. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 33 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 05 - Výzkum a využití biomateriálů ... Název (cíl)aktivity Využití 3D biokompatibilních nanovlákenných nosičů k přenosu buněk do míšní léze Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Implantace 3D nanovlákenných nosičů k přenosu buněk do míšní léze nebyla ze strukturálního hlediska materiálu zcela optimální pro proces regenerace nervové tkáně. Využití nanovlákenných vrstev bylo studováno pro jiné aplikace, zejména jako kožní kryty a nosiče pro řízené uvolňování léčiv. V návaznosti na předchozí rok řešení pracoviště ÚEM dále pokračovalo ve studiu nanovláken jako krytů ran v experimentálním modelu kožního poranění u 35 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 36 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... potkana. Využitelnost nanovláken jako krytů ran byla prokázána pro nanovlákna připravená ze želatiny. Ve srovnání s kontrolním krytem (gáza) nanovlákna želatiny významně urychlovala průběh hojení u experimentálního modelu kožního poranění laboratorního potkana. Naopak, kožní kryt připravený z nanovláken z poly-L-kaprolaktonu průběh hojení experimentálního kožního poranění neurychloval a nebyl zde nalezen žádný výrazný rozdíl v parametrech hojení vzhledem ke kontrole. Dále jsme prostudovali přípravu nových typů polymerních nosičů (scaffold) pro regeneraci tkání na bázi syntetických poly(aminokyselin), zejména kopolymerů odvozených od kyseliny glutamové. Zvlákňováním z roztoku kopolymerů g-benzyl glutamátu a g-trichlorethyl-glutamátu byla připravena vlákna, která byla následně zpracována na 3D-nosiče. Prostudovali jsme modifikaci povrchu polymerních vláken jak neutrálními hydrofilními skupinami tak zavedení reaktivních skupin pro vazbu biomimetických peptidů pomocí aminolýzy alkylaminy. V předběžných experimentech jsme otestovali vliv modifikace povrchu scaffoldu na adhezi a růst mesenchymových buněk. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 34 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 05 - Výzkum a využití biomateriálů ... Název (cíl)aktivity Studium odezvy tkáně na přítomnost transplantovaných buněk v těle experimentálního zvířete v MR obrazech a spektrech in vivo, využití hybridních nanočástic pro kombinovanou detekci transplantovaných buněk in vivo. Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Metody vizualizace transplantovaných buněk vyvinuté v posledních letech umožňují spolehlivou detekci buněk pomocí MRI, nicméně samotná vizualizace neposkytuje dostatečnou informaci o změnách v tkáni a funkčním zapojení implantátu. Pro posouzení změn v tkáni po transplantaci buněk in vivo lze úspěšně využít jako jednu z mála neinvazivních metod MR spektroskopii. Meetoda byla odladěna a aplikována pro sledování metabolických změn v mozku potkanů s lokální ischemií léčených neurálními prekurzory. Neurální prekurzory odvozené z lidských indukovaných pluripotentních buněk (IPS-NP) by mohly být slibným nástrojem při léčbě cévní mozkové příhody a obnově neurologické funkce. Proto jsme se zaměřili na sledování metabolických změn pomocí protonové MR spektroskopie (1H MRS) ve striatální oblasti mozku potkana s lokální ischémií během čtyř měsíců po transplantaci IPS-NP. IPS-NP byly implantovány do potkanů Sprague-Dawley 7 dní po dočasné okluzi a. cerebri medial (MCAO). Zvířata byla měřena na experimentálním 4.7T Bruker spektrometru. Metabolické profily byly sledovány v striatální tkáni (z léze a z kontralaterální hemisféry) pomocí PRESS sekvence s potlačením signálu vody. 1H spektra byla vyhodnocena pomocí LCModelu. Čtyři měsíce po MCAO se absolutní koncentrace metabolitů (glutamát + glutamin , N-acetylaspartát, (Fosfo) kreatin, taurin, cholin a inositol) u transplantovaných zvířat s malou lézí vrátily téměř na hodnoty naměřené u intaktních zvířat. U zvířat s velkou lézí byly koncentrace metabolitů měřené z oblasti léze nižší než u kontrolních zvířat. Histologie potvrdila přítomnost IPS-NP v oblasti léze. Některé buňky se diferencovaly na zralé a tkáňově více specifické neurony. Během celého experimentu nebyly detekovány žádné nádory. Výsledky naznačují, že IPS-NP se po transplantaci dále diferencují a integrují do striatální tkáně. Částečné zlepšení během funkčního testování podpořilo hypotézu, že transplantace IPS-NP může sloužit jako efektivní terapeutický nástroj. Přestože v minulých letech byla syntetizována celá řada nových kontrastních látek na bázi nanočástic pro značení buněk, které umožní jejich detekci po transplantaci in vivo, specificita značení stále představuje značný problém. V roce 2011 byly syntetizovány nanočástice na bázi oxidů železa, jejichž obal tvořený hyaluronovou kyselinou lze dále funkcionalizovat a tím docílit vyšší specificity značení. Konjugace určitého množství dopaminu v obalu navíc výrazně 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 37 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... zvyšuje prostup nanočástic přes membránu a lze tak docílit vyšší efektivity značení. Buněčné značky pro MR zobrazování byly také vybaveny fluoresceinem, který umožňuje i detekci pomocí fluorescenční mikroskopie. Účinnost detekce transplantovaných buněk lze zvýšit metodou dvojího kontrastu, která aplikací standardní gadoliniové kontrastí látky zvyšuje kontrast mezi původní tkání a transplantovanými buňkami značenými nanočásticemi na bázi železa. Metoda byla úspěšně aplikována při detekci a monitorování Langerhansových ostrůvků transplantovaných do jater experimentálních diabetických potkanů. Po intravenózní aplikaci Gd-BOPTA došlo k významnému zvýšení kontrastu v MR obrazu, zejména v oblastech postižených efektem částečného objemu. Metoda dvojího kontrastu významně zpřesnila kvantifikaci transplantovaných ostrůvků v MR obrazu a zpřesnila tak sledování odhojování transplantovaných ostrůvků v čase. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 35 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 05 - Výzkum a využití biomateriálů ... Název (cíl)aktivity Modifikace povrchů polymerních biomateriálů bioaktivními strukturami. Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity V roce 2011 byla provedena podrobná charakterizace fyzikálně-chemických vlastností vrstev technologie „Click&Seed” určená k biomimetické funkcionalizaci povrchů pro stimulaci růstu kmenových buněk. Modifikace povrchů rozdílných materiálů byla provedena pomocí polydopaminu a polyethylen oxidu (PEO). Na povrchu PEO vrstvy byla v 98 % eliminována sorpce proteinů z krevní plazmy a séra. Ve stejném rozsahu byly pozorovány repulzivní vlastnosti PEO povrchu také vůči adhezi buněk. Následná modifikace této neadherentní vrstvy byla provedena pomocí sekvence aminokyselin fibronektinu – RGDS a biologicky nefunkční varianty RDGS. Pro testování vlastností povrchů byly využity lidské embryonální karcinomové buňky 2102Ep a myší fetální fibroblasty MFF. K vyhodnocení analýz distribuce a rozprostření buněk na modifikovaném povrchu bylo rozšířeno stávající programové vybavení o vyhodnocení obrazu ve více barevných kanálech pro vyhodnocení počtu buněk, rozprostření buněk a proliferace. K tomu byly využity fluorescenční značky DAPI (jádra), Phalloidin-Rhodamin (cytoskelet) a protilátky proti Ki67, jaderný protein asociovaný s proliferací buněk. Byla vyvinuta metodika pro stanovení přesné koncentrace imobilizovaných aminokyselinových sekvencí. Zmiňované oligopeptidy fibronektinu byly značeny radioaktivním jódem 125I, což umožňovalo změřit přesnou koncentraci peptidů na každém analyzovaném vzorku. Povrchy byly modifikovány v pěti koncentracích (1.10-15 mol/cm2 až 1.10-11 mol/cm2). Imobilizací ligandu RGDS ve vysoké koncentraci 10-11 – 10-13 mol/cm2 byl vytvořen substrát umožňující adhezi stejného počtu a rozprostření MFF ve srovnání s vrstvou polydopaminu, na kterém dochází také k sorpci protenů a adhezi buněk. Snížením koncentrace RGDS pod 10-13 mol/cm2 klesal počet adherovaných MFF s logaritmickou závislostí. Na oligopeptidy s přehozenou sekvencí RDGS adherovalo 50 % MFF ve vysoké koncentraci. Významné rozdíly byly pozorovány také u exprese proteinu Ki-67, který bezprostředně souvisí s proliferaci buněk. Na nízkých koncentracích ligandů vázaných k povrchu byla jeho exprese výrazně nižší, čímž je prokázána přímá souvislost mezi adhezí buněk a jejich proliferací.Výsledky experimentů tak poukazují na funkční závislost adheze a proliferace buněk na koncentraci ligandů. Následující experimenty budou zaměřeny na syntézu biomimetických molekul proteinů extracelulární matrix a mezibuněčných spojů. (e.g. laminin, vitronectin, kadherin). Díky této technologii je tak k dispozici nástroj pro precizní stimulaci chování buněk pomocí ligandů s následným uplatněním poznatků v úpravě materiálů v tkáňovém inženýrství. Nově jsme vyvinuli vysoce superporézní hydrogely modifikací poly(2-hydroxyethyl-methakrylátu) (PHEMA) cholesterolem, 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... který podporuje interakce buněk s povrchem hydrogely jsou určené jako permisivní podložky při léčbě poranění míchy. Do hydrogelů jsme zavedli veliké póry, jejichž velikost lze regulovat v rozmezí desítek až stovek mikrometrů. Vysoce superporézní cholesterolem modifikované PHEMA podložky byly připraveny radikálovou kopolymerizací 2-hydroxyethyl-methakrylátu (HEMA), cholesterol-methakrylátu (CHLMA) a ethylen-dimethakrylátu (EDMA síťovadlo) v bloku za přítomnosti krystalů šťavelanu amonného, který v podložce vytvářel spojité póry. Do polymerizační násady byl navíc přidáván 2-[(methoxykarbonyl)methoxy]ethyl-methakrylát (MCMEMA), který po následné hydrolýze poskytl karboxylové skupiny umožňující regulaci botnání a měkkosti hydrogelu. Hydrogely podporovaly in vitro adhezi a proliferaci potkaních mesenchymových kmenových buněk. Při in vivo studii akutního poranění míchy potkana byly hydrogely implantovány, aby přemostily dutinu v hemisekci míchy. Histologické řezy provedené za 4 týdny po implantaci prokázaly dobré vhojení implantovaných hydrogelů do okolní tkáně, postupující infiltraci pojivové tkáně a vrůst neurofilament, Schwanových buněk a cév do pórů hydrogelu. Výsledky ukazují, že vysoce superporézní cholesterolem modifikované PHEMA hydrogely vykazují bioadhesivní vlastnosti a jsou schopné přemostit míšní lézi. Vypracovali jsme alternativní postupy tvorby non-fouling povrchů s využitím postupů řízené radikálové polymerizace (ARP a RAFT) hydrofilních monomerů (grafting-from). Porovnali jsme vhodnost jednotlivých postupů pro různé typy povrchů a různé chemické struktury hydrofilních polymerů tvořících polymerní „brush“. Využitím kombinace fyzikálních metod jsme analyzovali kinetiku tvorby polymerních filmů, stanovili tloušťku, hustotu řetězců a fyzikální vlastnosti získaných povrchů. Připravili jsme enzymaticky degradovatelné hydrofilní homopolymery 5-(2-hydroxyethyl)-glutaminu, HEG, a kopolymery HEG s L-Lysinem a L- alaninem a jejich deriváty s methakrylovými skupinami v bočních řetězcích. Na bázi těchto polyaminokyselin jsme připravili hydrofilní gely radikálovou kopolymerizací. Prostudovali jsme enzymatickou degradaci připravených lineárních kopolymerů a z nich vytvořených gelů elastázou - enzymem specifickým pro degradaci složek pojivové tkáně a extracelulární matrix. prokázali jsme vliv složení kopolymeru- specificky přítomnost aminokyseliny alaninu – na rychlost degradace polymerů i gelů tímto enzymem. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 36 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 06 - Klinické studie a klinicky orientované experimentální modely ... Název (cíl)aktivity Zpracování odebrané autologní kostní dřeně/kostní krve pacientů za podmínek SOP pro maniulaci s hemopoetickou tkání pro klinické použití. Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Bylo zjištěno, že velmi dobrým zdrojem MSC je výplach ze setů na odběr kostní dřeně po jejich použití na přípravu štěpu pro transplantace krvetvorných buněk. Chladným solným roztokem byly opláchnuty stěny vaku a zabudované filtry a ve výsledné buněčné suspenzi byla alespoň desetinásobná koncentrace buněk schopných tvořit kolonie fibroblastoidních buněk. Byly hledány optimální zdroje růstových faktorů a proteinů pro kultivaci MSC v Alpha MEM médiu.. Testováno bylo fetální telecí sérum, lidské sérum a plasma, plasma z pupečníkové krve, plasma z dřeňové krve, destičkový lyzát z trombocytů pupečníkové krve a destičkový lyzát trombocytů dospělých dárců. Nejlepší výsledky růstu MSC byly pozorovány u kultivací v médiu s destičkovým lyzátem vyrobeným z transfuzního přípravku trombocytární koncentrát. Lyzát byl používán v koncentraci 10% v médiu a tvorba fibrinu byla inhibována přítomností 5 IU heparinu na ml média Výtěžek MSC je obvykle vyšší než milion na jednu kultivační láhev 75 cm2 v prvních třech pasážích. 38 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 39 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 37 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 06 - Klinické studie a klinicky orientované experimentální modely ... Název (cíl)aktivity Studium vlivu kmenových buněk v léčbě experimentálního akutního selhání jater Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity DReverzibilní model akutního selhání jater na velkém a malém laboratorním zvířeti byl testován k transplantaci hepatocytů. Během roku bylo prováděny pokusy k MR sledování distribuce izolovaných hepatocytů označených nanočásticemi a transplantovaných malému laboratornímu zvířeti. Dalším cílem byla kultivaci porcinních hepatocytů v experimentu s bioreaktorem s nanovláknovou technologií, další práce na bioreaktoru Oliver RanD. Pokračovali jsme v měření nitrolebních laboratorních biochemických parametrů pomocí mikrodialýzy s možností hlouběji poznat patofyziologické procesy spojené s akutním selháním jater, především možnost terapeutického ovlivnění. Sledovali jsme vliv eliminačních metod a transplantovaných hepatocytů v léčbě akutního selhání jater. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 38 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 06 - Klinické studie a klinicky orientované experimentální modely ... Název (cíl)aktivity Studium možností malého bioreaktoru jaterních buněk Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Metodika použití bioreaktoru: U 10 miniprasat byl proveden chirurgický model Akutního jaterního selhání (ASJ) technikou devaskularizace (portokavální anastomóza, ligace hepatické tepny). Tato zvířata jsme následně léčili pomocí bioreaktoru BAL (Bioartificial Liver). Průběh ASJ jsme monitorovali prostřednictvím laboratorních a hemodynamických parametrů včetně intrakraniálního tlaku. Výsledky jsme porovnali s kontrolní skupinou miniprasat s ASJ bez léčby. Výsledky: Při srovnání léčené a neléčené skupiny jsme pozorovali rozdíl pouze v sérových koncentracích bilirubinu. Rozdíl hodnot v 6. a 9. hodině je statisticky významný (p< 0,01) ve prospěch skupiny BAL (20,86 vs. 10,60, 22.29 vs. 11,75), rozdíl hodnot ve 12. hodině je též statisticky významný (37,4 vs. 12,88) při p<0,01. Hodnoty intrakraniálního tlaku (ICP) ve skupině léčené BAL a ve skupině kontrolní se v průběhu experimentu statisticky významně nelišily. Závěr: Prokázali jsme funkčnost zapojení bioeliminační metody (BAL) u námi vytvořeného chirurgického modelu ASJ. Dosáhli jsme iniciální 85% viability čerstvých izolovaných prasečích 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 40 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... hepatocytů a jejich přežívání po celou dobu, kdy byl bioreaktor použit k léčbě. Vyjma koncentrace bilirubinu naše výsledky neprokázaly signifikantní změny hodnot laboratorních ukazatelů ASJ. Naměřené hodnoty nitrolebního tlaku se statisticky významně nelišily ve skupině s léčbou akutního selhání jater napojením na BAL a v kontrolní skupině. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity 39 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 06 - Klinické studie a klinicky orientované experimentální modely ... Název (cíl)aktivity Rozvoj klinických a experimentálních metod léčby diabetu transplantací inzulín produkující tkáně Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Program transplantační léčby diabetu podporovaný grantovými prostředky v roce 2011 intenzivně pokračoval, takže bylo provedeno celkem 31 orgánových transplantací pankreatu a 14 klinických transplantací izolovaných Langerhansových ostrůvků. Těmito počty se ČR řadí mezi nejaktivnější světová centra, která se experimentálním a klinickým vývojem v této oblasti zabývají.S výjimkou 2 osob, u kterých nevedla transplantace ostrůvků k dlouhodobé endogenní produkci C-peptidu, podařilo se u všech ostatních příjemců s diabetem 1. typu odstanit závažné epizody hypoglykémií, kteřé představovaly hlavní indikaci k provedení ostrůvkové transplantace. Úplné nezávislosti na exogenním inzulínu se dosud podařilo ostrůvkovou transplantací dosáhnou u 4 osob. Novými prvky bylo zdokonalení enzymatické digesce exokrinní tkáně pankreatu a modifikovaná separace ostrůvků pomocí buněčného separátoru v densitním gradientu. Byla ukončena pilotní klinická studie, při níž byly využity vyvinuté experimentální metody pro in vitro značení ostrůvků nanočásticemi železa pro následnou detekci pomocí magnetické rezonance. U pacientů nově podstupujících transplantaci ostrůvků jsme zahájili studium změn textury jaterní tkáně v souvislosti s transplantačním výkonem sledovanou pomocí magnetické resonance.V experimentu jsme testovali nově připravené pozitivní kontrastní látky na bazi chelátů gadolinia a manganu a získali výsledky při použití metody využívající možnosti dvojího kontrastu přo lepší identifikaci a lokalizaci transplantovaných ostrůvků (negativní značení nanočásticemi železa a pozitivní zobrazení jaterní tkáně cheláty gadolinia). Histologickými a ultrastrukturálními metodami jsme rovněž objasnili intercelulární transport železitých kontrastních látek po transplantaci značených ostrůvkových buněk pod ledvinnou kapsulu a do portálního řečiště a tím přispěli k porozumění významu pozitivní detekce těchto nanočástic při toleranci a při rejekci. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity X19/11 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 06 - Klinické studie a klinicky orientované experimentální modely ... Název (cíl)aktivity Klinická studie "Autologní kmenové buňky kostní dřeně v léčbě poranění míchy" Zahájení aktivity 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 41 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity V roce 2011 jsme do klinické studie "Autologní kmenové buňky kostní dřeně v léčbě poranění míchy" zařadili další 4 pacienty, kterým jsme suspenzi kmenových buněk kostní dřeně aplikovali intraarteriálně - cestou katetrizace vertebrální arterie. Pokračovali jsme v neurologickém sledování již transplantovaných pacientů za účelem hodnocení účinnosti a bezpečnosti této terapie. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Číslo aktivity X20/11 Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje 06 - Klinické studie a klinicky orientované experimentální modely ... Název (cíl)aktivity Klinická studie "Autologní mesenchymální kmenové buňky kostní dřeně v léčbě amyotrofické laterální sklerózy" Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Popis aktivity Dále jsme připravili klinickou studii "Autologní mesenchymální kmenové buňky kostní dřeně v léčbě amyotrofické laterální sklerózy". V této studii budeme u 30 pacientů s tímto neurodegenerativním onemocněním aplikovat kultivované autologní mesenchymální kmenové buňky kostní dřeně intrathekálně. Cílem studie je ověřit bezpečnost a účinnost této terapie. Protokol studie, informace o produktu a informace pro zkoušející byly předloženy ke schválení Etické komisi FN Motol a Státnímu ústavu pro kontrolu léčiv. V letošním roce, pokud bude klinická studie schválena, začne nábor prvních pacientů do studie. Skutečné Indikátory dosažení - výsledky aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. Skutečné prostředky ověření - forma zpracování a předání výsledku aktivity Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech. 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 42 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.2.2. AKTIVITY NEUSKUTEČNĚNÉ v roce 2011 Číslo aktivity Ke kterému dílčímu cíli se aktivita vztahuje Název (cíl)aktivity Zahájení aktivity Ukončení aktivity Popis aktivity Důvody, proč se aktivitu nepodařilo uskutečnit 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 43 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.3.NÁKLADY PROJEKTU - 2011 2.3.1. NÁKLADOVÉ TABULKY ZA JEDNOTLIVÉ SUBJEKTY Projekt - Rok - Typ 1M0538 - 2011 - skutečné Organizace Univerzita Karlova v Praze Role organizace příjemce - koordinátor POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1. - Osobní náklady nebo výdaje na zaměstnance, kteří se podílejí na řešení projektu a jim odpovídající povinné zákonné odvody a případné příděly do FKSP Náklady skutečně vynaložené tis. Kč z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 9605 9605 Schváleno: 9605 tis. Kč Schváleno: 9605 tis. Kč F2. - Náklady nebo výdaje na pořízení hmotného a nehmotného majetku (investice, kapitálové) 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F3. - Náklady nebo výdaje na provoz a údržbu hmotného majetku používaného při řešení projektu 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F4. - Další provozní náklady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu 5694 5694 Schváleno: 6488 tis. Kč Schváleno: 5851 tis. Kč F5. - Náklady nebo výdaje na služby využívané v přímé souvislosti s řešením projektu 3311 1244 Schváleno: 2299 tis. Kč Schváleno: 869 tis. Kč F6. - Náklady nebo výdaje na zveřejnění výsledků projektu včetně nákladů nebo výdajů na zajištění práv k výsledkům výzkumu F7. - Cestovní náhrady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu F8. - Doplňkové (režijní) náklady nebo výdaje vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu, např. administrativní náklady, náklady na pomocný personál a infrastrukturu, enegii a služby neuvedené výše F9. CELKEM 27 27 Schváleno: 50 tis. Kč Schváleno: 50 tis. Kč 201 201 Schváleno: 396 tis. Kč Schváleno: 396 tis. Kč 500 500 Schváleno: 500 tis. Kč Schváleno: 500 tis. Kč Suma (F1 až F8)=19338 Suma (F1 až F8)=17271 19338 17271 Schváleno: 19338 tis. Kč Schváleno: 17271 tis. Kč PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 0 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 44 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Projekt - Rok - Typ 1M0538 - 2011 - skutečné Organizace Institut klinické a experimentální mediciny Role organizace spolupříjemce POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1. - Osobní náklady nebo výdaje na zaměstnance, kteří se podílejí na řešení projektu a jim odpovídající povinné zákonné odvody a případné příděly do FKSP Náklady skutečně vynaložené tis. Kč z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F2. - Náklady nebo výdaje na pořízení hmotného a nehmotného majetku (investice, kapitálové) 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F3. - Náklady nebo výdaje na provoz a údržbu hmotného majetku používaného při řešení projektu 226 226 Schváleno: 222 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F4. - Další provozní náklady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu 1845 1628 Schváleno: 1851 tis. Kč Schváleno: 1850 tis. Kč F5. - Náklady nebo výdaje na služby využívané v přímé souvislosti s řešením projektu 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F6. - Náklady nebo výdaje na zveřejnění výsledků projektu včetně nákladů nebo výdajů na zajištění práv k výsledkům výzkumu F7. - Cestovní náhrady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu F8. - Doplňkové (režijní) náklady nebo výdaje vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu, např. administrativní náklady, náklady na pomocný personál a infrastrukturu, enegii a služby neuvedené výše F9. CELKEM 3 3 Schváleno: 7 tis. Kč Schváleno: 7 tis. Kč 6 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč 150 150 Schváleno: 150 tis. Kč Schváleno: 150 tis. Kč Suma (F1 až F8)=2230 Suma (F1 až F8)=2007 2230 2007 Schváleno: 2230 tis. Kč Schváleno: 2007 tis. Kč PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 0 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 45 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Projekt - Rok - Typ 1M0538 - 2011 - skutečné Organizace Ústav hematologie a krevní transfuze Role organizace spolupříjemce POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1. - Osobní náklady nebo výdaje na zaměstnance, kteří se podílejí na řešení projektu a jim odpovídající povinné zákonné odvody a případné příděly do FKSP Náklady skutečně vynaložené tis. Kč z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F2. - Náklady nebo výdaje na pořízení hmotného a nehmotného majetku (investice, kapitálové) 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F3. - Náklady nebo výdaje na provoz a údržbu hmotného majetku používaného při řešení projektu 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F4. - Další provozní náklady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu 839 750 Schváleno: 839 tis. Kč Schváleno: 750 tis. Kč F5. - Náklady nebo výdaje na služby využívané v přímé souvislosti s řešením projektu 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F6. - Náklady nebo výdaje na zveřejnění výsledků projektu včetně nákladů nebo výdajů na zajištění práv k výsledkům výzkumu F7. - Cestovní náhrady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu F8. - Doplňkové (režijní) náklady nebo výdaje vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu, např. administrativní náklady, náklady na pomocný personál a infrastrukturu, enegii a služby neuvedené výše F9. CELKEM 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč 50 50 Schváleno: 50 tis. Kč Schváleno: 50 tis. Kč Suma (F1 až F8)=889 Suma (F1 až F8)=800 889 800 Schváleno: 889 tis. Kč Schváleno: 800 tis. Kč PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 0 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 46 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Projekt - Rok - Typ 1M0538 - 2011 - skutečné Organizace Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. Role organizace spolupříjemce POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1. - Osobní náklady nebo výdaje na zaměstnance, kteří se podílejí na řešení projektu a jim odpovídající povinné zákonné odvody a případné příděly do FKSP Náklady skutečně vynaložené tis. Kč z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 2463 2463 Schváleno: 2463 tis. Kč Schváleno: 2463 tis. Kč F2. - Náklady nebo výdaje na pořízení hmotného a nehmotného majetku (investice, kapitálové) 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F3. - Náklady nebo výdaje na provoz a údržbu hmotného majetku používaného při řešení projektu 0 0 Schváleno: 176 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F4. - Další provozní náklady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu 807 667 Schváleno: 622 tis. Kč Schváleno: 622 tis. Kč F5. - Náklady nebo výdaje na služby využívané v přímé souvislosti s řešením projektu 47 47 Schváleno: 155 tis. Kč Schváleno: 92 tis. Kč F6. - Náklady nebo výdaje na zveřejnění výsledků projektu včetně nákladů nebo výdajů na zajištění práv k výsledkům výzkumu F7. - Cestovní náhrady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu F8. - Doplňkové (režijní) náklady nebo výdaje vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu, např. administrativní náklady, náklady na pomocný personál a infrastrukturu, enegii a služby neuvedené výše F9. CELKEM 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč 403 143 Schváleno: 304 tis. Kč Schváleno: 143 tis. Kč 280 280 Schváleno: 280 tis. Kč Schváleno: 280 tis. Kč Suma (F1 až F8)=4000 Suma (F1 až F8)=3600 4000 3600 Schváleno: 4000 tis. Kč Schváleno: 3600 tis. Kč PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 0 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 47 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Projekt - Rok - Typ 1M0538 - 2011 - skutečné Organizace Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. Role organizace spolupříjemce POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1. - Osobní náklady nebo výdaje na zaměstnance, kteří se podílejí na řešení projektu a jim odpovídající povinné zákonné odvody a případné příděly do FKSP Náklady skutečně vynaložené tis. Kč z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 3350 3350 Schváleno: 3350 tis. Kč Schváleno: 3350 tis. Kč F2. - Náklady nebo výdaje na pořízení hmotného a nehmotného majetku (investice, kapitálové) 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F3. - Náklady nebo výdaje na provoz a údržbu hmotného majetku používaného při řešení projektu 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F4. - Další provozní náklady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu 1940 1370 Schváleno: 1654 tis. Kč Schváleno: 1084 tis. Kč F5. - Náklady nebo výdaje na služby využívané v přímé souvislosti s řešením projektu 157 157 Schváleno: 207 tis. Kč Schváleno: 207 tis. Kč F6. - Náklady nebo výdaje na zveřejnění výsledků projektu včetně nákladů nebo výdajů na zajištění práv k výsledkům výzkumu F7. - Cestovní náhrady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu F8. - Doplňkové (režijní) náklady nebo výdaje vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu, např. administrativní náklady, náklady na pomocný personál a infrastrukturu, enegii a služby neuvedené výše F9. CELKEM 0 0 Schváleno: 50 tis. Kč Schváleno: 50 tis. Kč 153 153 Schváleno: 339 tis. Kč Schváleno: 339 tis. Kč 100 100 Schváleno: 100 tis. Kč Schváleno: 100 tis. Kč Suma (F1 až F8)=5700 Suma (F1 až F8)=5130 5700 5130 Schváleno: 5700 tis. Kč Schváleno: 5130 tis. Kč PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 0 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 48 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Projekt - Rok - Typ 1M0538 - 2011 - skutečné Organizace Ústav experimentální mediciny AV ČR, v.v.i. Role organizace spolupříjemce POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1. - Osobní náklady nebo výdaje na zaměstnance, kteří se podílejí na řešení projektu a jim odpovídající povinné zákonné odvody a případné příděly do FKSP Náklady skutečně vynaložené tis. Kč z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 1504 1503 Schváleno: 1504 tis. Kč Schváleno: 1504 tis. Kč F2. - Náklady nebo výdaje na pořízení hmotného a nehmotného majetku (investice, kapitálové) 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F3. - Náklady nebo výdaje na provoz a údržbu hmotného majetku používaného při řešení projektu 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F4. - Další provozní náklady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu 1941 1543 Schváleno: 1900 tis. Kč Schváleno: 1505 tis. Kč F5. - Náklady nebo výdaje na služby využívané v přímé souvislosti s řešením projektu 650 578 Schváleno: 578 tis. Kč Schváleno: 503 tis. Kč F6. - Náklady nebo výdaje na zveřejnění výsledků projektu včetně nákladů nebo výdajů na zajištění práv k výsledkům výzkumu F7. - Cestovní náhrady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu F8. - Doplňkové (režijní) náklady nebo výdaje vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu, např. administrativní náklady, náklady na pomocný personál a infrastrukturu, enegii a služby neuvedené výše F9. CELKEM 35 35 Schváleno: 5 tis. Kč Schváleno: 5 tis. Kč 57 57 Schváleno: 100 tis. Kč Schváleno: 100 tis. Kč 613 613 Schváleno: 613 tis. Kč Schváleno: 613 tis. Kč Suma (F1 až F8)=4800 Suma (F1 až F8)=4329 4800 4329 Schváleno: 4700 tis. Kč Schváleno: 4230 tis. Kč PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 100 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 49 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 50 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.3.2. NÁKLADOVÁ TABULKA ZA PROJEKT Projekt - Rok - Typ 1M0538 - 2011 - skutečné PROJEKT 1M0538 - CELKEM POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ tis. Kč F1. - Osobní náklady nebo výdaje na zaměstnance, kteří se podílejí na řešení projektu a jim odpovídající povinné zákonné odvody a případné příděly do FKSP Náklady skutečně vynaložené tis. Kč z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 16922 16921 Schváleno: 16922 tis. Kč Schváleno: 16922 tis. Kč F2. - Náklady nebo výdaje na pořízení hmotného a nehmotného majetku (investice, kapitálové) 0 0 Schváleno: 0 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F3. - Náklady nebo výdaje na provoz a údržbu hmotného majetku používaného při řešení projektu 226 226 Schváleno: 398 tis. Kč Schváleno: 0 tis. Kč F4. - Další provozní náklady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu 13066 11652 Schváleno: 13354 tis. Kč Schváleno: 11662 tis. Kč F5. - Náklady nebo výdaje na služby využívané v přímé souvislosti s řešením projektu 4165 2026 Schváleno: 3239 tis. Kč Schváleno: 1671 tis. Kč F6. - Náklady nebo výdaje na zveřejnění výsledků projektu včetně nákladů nebo výdajů na zajištění práv k výsledkům výzkumu F7. - Cestovní náhrady vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu F8. - Doplňkové (režijní) náklady nebo výdaje vzniklé v přímé souvislosti s řešením projektu, např. administrativní náklady, náklady na pomocný personál a infrastrukturu, enegii a služby neuvedené výše F9. CELKEM 65 65 Schváleno: 112 tis. Kč Schváleno: 112 tis. Kč 820 554 Schváleno: 1139 tis. Kč Schváleno: 978 tis. Kč 1693 1693 Schváleno: 1693 tis. Kč Schváleno: 1693 tis. Kč Suma (F1 až F8)=36957 Suma (F1 až F8)=33137 36957 33137 Schváleno: 36857 tis. Kč Schváleno: 33038 tis. Kč PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 100 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 51 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.3.3. ZDŮVODNĚNÍ ZMĚN V ČERPÁNÍ V r. 2011 byly navíc čerpány věcné prostředky ve výši 100 tis Kč, které byly v r. 2010 převedeny do FÚUP (ÚEM AVČR). V r. 2011 byly v ÚEM AVČR nedočerpány prostředky ve výši 1 tis. Kč na povinné odvody, proto byly vráceny zpět poskytovateli. 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 52 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.3.4. NEVYUŽITÉ FINANČNÍ PROSTŘEDKY K řešení projektu byly použity všechny přidělené prostředky. 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.3.5. SEZNAM HMOTNÉHO A NEHMOTNÉHO MAJETKU - 2011 53 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.4. ZPRÁVA O POSTUPU ŘEŠENÍ PROJEKTU 2011 2.4.1. DOSAŽENÉ VÝSLEDKY 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/00/2011 Název výsledku Transplantation of predifferentiated adipose-derived stromal cells for the treatment of spinal cord injury. Abstrakt Adipose-derived stromal cells (ASCs) are an alternative source of stem cells for cell-based therapies of neurological disorders such as spinal cord injury (SCI). In the present study, we predifferentiated ASCs (pASCs) and compared their behavior with naïve ASCs in vitro and after transplantation into rats with a balloon-induced compression lesion. ASCs were predifferentiated into spheres before transplantation, then pASCs or ASCs were injected intraspinally 1 week after SCI. The cells´ fate and the rats´ functional outcome were assessed using behavioral, histological, and electrophysiological methods. Immunohistological analysis of pASCs in vitro revealed the expression of NCAM, NG2, S100, and p75. Quantitative RT-PCR at different intervals after neural induction showed the up-regulated expression of the glial markers NG2 and p75 and the neural precursor markers NCAM and Nestin. Patch clamp analysis of pASCs revealed three different types of membrane currents however, none were fast activating Na(+) currents indicating a mature neuronal phenotype. Significant improvement in both the pASC and ASC transplanted groups was observed in the BBB motor test. In vivo, pASCs survived better than ASCs did and interacted closely with the host tissue, wrapping host axons and oligodendrocytes. Some transplanted cells were NG2- or CD31-positive, but no neuronal markers were detected. The predifferentiation of ASCs plays a beneficial role in SCI repair by promoting the protection of denuded axons however, functional improvements were comparable in both the groups, indicating that repair was induced mainly through paracrine mechanisms. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 54 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Arboleda, D., Forostyak, S., Jendelová, P., Mareková, D., Amemori, T., Pivoňková, H., Mašínová, K., Syková, E.: (2011) Transplantation of predifferentiated adiposederived stromal cells for the treatment of spinal cord injury. Cell. Mol. Neurobiol. 31(7): 1113-1122. IF 2,423 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/01/2011 Název výsledku Dynamics of epigenetic remodeling in interspecies porcine zygotes. Abstrakt The process of active paternal chromatin demethylation after fertilization in the pig is not fully understood and very inconsistent data have been published by different research groups. We have applied the interspecies intracytoplasmic sperm injection (iICSI) to evaluate remodeling capabilities of porcine oocytes in more details. We injected mouse frozen-thawed sperm heads into porcine in vitro matured or ovulated oocytes, respectively. Embryos produced by intracytoplasmic sperm injection (ICSI) of boar spermatozoa into porcine ovulated oocytes (intraspecies) served as controls. Zygotes with 2-pronuclei were labeled with antibodies against certain epigenetic modifications (5-methylcytosine, 5-MeC heterochromatin protein 1, HP1 trimethylation of H3/K4, H3/K4-me3 and dimethylation of H3/K9, H3/K9-me2). The labeling patterns were not different between zygotes produced from in vitro matured and ovulated oocytes. Both pronuclei were symmetrically labeled with 5-MeC, HP1, and H3/K4-me3 antibodies. Asymmetrical labeling was observed only with H3/K9-me2 antibody. The labeling of interspecies zygotes was similar to intraspecies zygotes. Moreover, the DNA demethylation was observed neither in control zygotes (intraspecies). The only difference observed between zygotes produced from in vitro matured and ovulated oocytes was in their ability to be activated. Intraspecies zygotes produced from ovulated oocytes were able to form the paternal pronucleus without additional activation the zygotes produced from in vitro matured oocytes formed the paternal pronucleus only after additional activation with electric pulses. Our results show that the remodeling abilities of in vitro matured and ovulated oocytes are essentially similar. Moreover, it seems that reasons of inconsistent data reporting the active demethylation in the pig are more complicated and they are not associated exclusively with the oocyte quality. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 55 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Barnetova, I., Vackova, I., Firla, P. (in press) Dynamics of epigenetic remodeling in interspecies porcine zygotes. Czech J Anim Sci IF 1, 19 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/02/2011 Název výsledku Myocardial Morphological Characteristics and Proarrhythmic Substrate in the Rat Model of Heart Failure Due to Chronic Volume Overload Abstrakt Chronic volume overload leads to cardiac hypertrophy and later to heart failure (HF), which are both associated with increased risk of cardiac arrhythmias. The goal of this study was to describe changes in myocardial morphology and to characterize arrhythmogenic substrate in rat model of developing HF due to volume overload. An arteriovenous fistula (AVF) was created in male Wistar rats between the inferior vena cava and abdominal aorta using needle technique. Myocardial morphology, tissue fibrosis, and connexin43 distribution, localization and phosphorylation were examined using confocal microscopy and Western blotting in the stage of compensated hypertrophy (11 weeks), and decompensated HF (21 weeks). Heart to body weight (BW) ratio was 89% and 133% higher in AVF rats at 11 and 21 weeks, respectively. At 21 weeks but not 11 weeks, AVF rats had pulmonary congestion (increased lung to BW ratio) indicating presence of decompensated HF. The myocytes in left ventricular midmyocardium were significantly thicker (+8% and +45%) and longer (+88% and +97%). Despite extensive hypertrophy, there was no excessive fibrosis in the AVF ventricles. Distribution and localization of connexin43 were similar between groups, but its phosphorylation was significantly lower in AVF hearts at 21st week, but not 11th week, suggesting that HF, rather than hypertrophy contributes to the connexin43 hypophosphorylation. In conclusion, volume overload leads to extensive eccentric hypertrophy, but not to myocardial fibrosis. Increased vulnerability to arrhythmia in this HF model is possibly related to gap junction remodeling with hypophosphorylation of connexin43. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 56 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Benes, J., Jr., Melenovsky, V., Skaroupkova, P., Pospisilova, J., Petrak, J., Cervenka, L., a Sedmera, D. (2011) Myocardial Morphological Characteristics and Proarrhythmic Substrate in the Rat Model of Heart Failure Due to Chronic Volume Overload. Anat Rec (Hoboken) 294:102-111. IF 1,490 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/03/2011 Název výsledku Fluorescent magnetic nanoparticles for biomedical applications Abstrakt The simultaneous combination of optical and magnetic resonance imaging (MRI) would greatly benefit in vivo disease diagnosis as well as in situ monitoring of living cells. In order to design dual detection of cells involving simultaneous imaging by fluorescent microscopy and MRI, nanoparticles with two reporters, a fluorescent dye and a superparamagnetic core, included in one particle were synthesized and characterized. The g-Fe2O3 nanoparticles obtained by coprecipitation and oxidation were coated with silica (SiO2) or carboxymethyl chitosan (CMCS) and labeled with fluorescein isothiocyanate (FITC). The fluorescent label was covalently bound to the nanoparticles and was not quenched by the iron oxide core. The nanoparticles successfully labeled rat mesenchymal stem cells (rMSCs) in vitro. Relaxation time measurements found large amounts of iron inside the cells with FITC-labeled gFe2O3–SiO2-AP nanoparticles. Both MR and fluorescent imaging of a rat brain with implanted rMSCs labeled with FITC-labeled CMCS-modified silica-coated g-Fe2O3 nanoparticles were performed. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 57 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Chekina, N., Horák, D., Jendelová, P., Trchová, M., Beneš, M. J., Hrubý, M., Herynek, V., Turnovcová, K., Syková, E.: (2011) Fluorescent magnetic nanoparticles for biomedical applications. J. Mater. Chem. 21: 7630-7639. IF 4,795 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/04/2011 Název výsledku Human galectins induce conversion of dermal fibroblasts into myofibroblasts and production of extracellular matrix: potential application in tissue engineering Abstrakt Members of the galectin family of endogenous lectins are potent adhesion/growth-regulatory effectors. Their multifunctionality opens possibilities for their use in bioapplications. We studied whether human galectins induce the conversion of human dermal fibroblasts into myofibroblasts (MFBs) and the production of a bioactive extracellular matrix scaffold is suitable for cell culture. Testing a panel of galectins of all three subgroups, including natural and engineered variants, we detected activity for the proto-type galectin-1 and galectin-7, the chimera-type galectin-3 and the tandem-repeat-type galectin-4. The activity of galectin-1 required the integrity of the carbohydrate recognition domain. It was independent of the presence of TGF- , but it yielded an additive effect. The resulting MFBs, relevant, for example, for tumor progression, generated a matrix scaffold rich in fibronectin and galectin-1 that supported keratinocyte culture without feeder cells. Of note, keratinocytes cultured on this substratum presented a stem-like cell phenotype with small size and keratin-19 expression. In vivo in rats, galectin-1 had a positive effect on skin wound closure 21 days after surgery. In conclusion, we describe the differential potential of certain human galectins to induce the conversion of dermal fibroblasts into MFBs and the generation of a bioactive cell culture substratum. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 58 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Dvořánková, B.Szabo, P., Gál., P., Uhrová, J., Zima, T., Kaltner, H., André, S., Gabius, H.-J. a Smetana, Jr., K. (2011) Human galectins induce conversion of dermal fibroblasts into myofibroblasts and production of extracellular matrix: potential application in tissue engineering and wound repair. Cells Tissues Organs 194, 469-480. IF 2,302 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/05/2011 Název výsledku Mesenchymal stromal cells prolong the lifespan in a rat model of amyotrophic lateral sclerosis. Abstrakt BACKGROUND AIMS: Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a progressive neurodegenerative disorder characterized by the loss of brain and spinal cord motor neurons (MN). The intraspinal and systemic grafting of mesenchymal stromal cells (MSC) was used to treat symptomatic transgenic rats overexpressing human superoxide dismutase 1 (SOD1) in order to alleviate the disease course and prolong the animals´ lifespan. METHODS: At the age of 16 weeks (disease onset) the rats received two grafts of MSC expressing green fluorescent protein (GFP(+) MSC) on the same day, intraspinally (10(5) cells) and intravenously (2 × 10(6) cells). Sham-treated animals were injected with phosphate-buffered saline (PBS). Motor activity, grip strength and body weight were tested, followed by immunohistochemical analysis. RESULTS: The combined grafting of MSC into symptomatic rats had a significant effect on motor activity and grip strength starting 4 weeks after transplantation. The lifespan of animals in the treated group was 190 ± 3.33 days compared with 179 ± 3.6 days in the control group of animals. Treated rats had a larger number of MN at the thoracic and lumbar levels these MN were of larger size, and the intensity of terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP-biotin nick-end labeling (TUNEL) staining in the somas of apoptotic MN at the thoracic level was much lower than in sham-treated animals. Transplanted GFP(+) MSC survived in the spinal cord until the end stage of the disease and migrated both rostrally and caudally from the injection site. CONCLUSIONS: Intraspinal and intravenous transplantation of MSC has a beneficial and possibly synergistic effect on the lifespan of ALS animals. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 59 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Forostyak, S., Jendelová, P., Kapcalová, M., Arboleda, D., Syková, E.: (2011) Mesenchymal stromal cells prolong the lifespan in a rat model of amyotrophic lateral sclerosis. Cytotherapy 13(9): 1036-1046. IF 2,925 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/06/2011 Název výsledku Production of mouse embryonic stem cell lines from maturing oocytes by direct conversion of meiosis into mitosis Abstrakt ABSTRACT. ESCs are most commonly derived from embryos originating from oocytes that reached metaphase II. We describe here a novel approach where ESCs with all pluripotency parameters were established from oocytes in which metaphase I was converted, from the cell cycle perspective, directly into metaphase II-like stage without the intervening anaphase to telophase I transition. The resulting embryos initiate development and reach the blastocyst stage from which the ESC lines are then established. Thus, our approach could represent an ethically acceptable method that can exploit oocytes that are typically discarded in in vitro fertilization clinics. Moreover, our results also indicate that the meiotic cell cycle can be converted into mitosis by modulating chromosomal contacts that are typical for meiosis with subsequent licensing of chromatin for DNA replication. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 60 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Fulková, H., Hirose, M., Inoue, K., Ogonuki, N., Wakisaka, N., Matoba, S., Ogura, A., Mosko, T., Kott, T., Fulka, Jr., J. (2011) Production of mouse embryonic stem cell lines from maturing oocytes by direct conversion of meiosis into mitosis. Stem Cells 29, 517-527. IF 7, 871 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/07/2011 Název výsledku Open wound healing in vivo: monitoring, binding and presence of adhesion/growth-regulatory galectins in rat skin during the course of complete re-epithelializat Abstrakt Galectins are a family of carbohydrate-binding proteins that modulate inflammation and immunity. This functional versatility prompted us to perform a histochemical study of their occurrence during wound healing using rat skin as an in vivo model. Wound healing is a dynamic process that exhibits three basic phases: inflammation, proliferation, and maturation. In this study antibodies against keratins-10 and -14, wide-spectrum cytokeratin, vimentin, and fibronectin, and non-cross-reactive antibodies to galectins-1, -2, and -3 were applied to frozen sections of skin specimens two days (inflammatory phase), seven days (proliferation phase), and twenty-one days (maturation phase) after wounding. The presence of binding sites for galectins-1, -2, -3, and -7 as a measure for assessing changes in reactivity was determined using labeled proteins as probes. Our study detected a series of alterations in galectin parameters during the different phases of wound healing. Presence of galectin-1, for example, increased during the early phase of healing, whereas galectin-3 rapidly decreased in newly formed granulation tissue. In addition, nuclear reactivity of epidermal cells for galectin-2 occurred seven days post-trauma. The dynamic regulation of galectins during re-epithelialization intimates a role of these proteins in skin wound healing, most notably for galectin-1 increasing during the early phases and galectin-3 then slightly increasing during later phases of healing. Such changes may identify a potential target for the development of novel drugs to aid in wound repair and patients´ care. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 61 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Gál, P., Vasilenko, T., Kostelníková, M., Jakubco, J., Kovác, I., Sabol, F., André, S., Kaltner, H., Gabius, H.-J. a Smetana, Jr., K. (2011) Open wound healing in vivo: monitoring, binding and presence of adhesion/growthregulatory galectins in rat skin during the course of complete re-epithelialization. Acta Histochem Cytochem 44, 191–199. IF 1,00 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/08/2011 Název výsledku Improved detection of pancreatic islets in vivo using double contrast. Abstrakt The transplantation of pancreatic islets containing β-cells, which produce insulin, is an alternative approach to the treatment of type 1 diabetes mellitus. The non-invasive visualization of transplanted islets can be performed using MRI however, this requires labeling of the islets with a suitable contrast agent prior to transplantation. The detection of islets labeled by iron oxide-based contrast agents and transplanted into the liver tissue can be significantly improved using the intravenous administration of a suitable gadolinium contrast agent prior to MRI. The applied contrast agent not only improves the contrast-to-noise ratio, but also eliminates artifacts that may lead to an overestimation of the number of hypointense spots and their area thus it improves the accuracy of automated and semi-automated procedures used for transplanted islet segmentation and quantification. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 62 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Herynek V, Berková Z, Dovolilová E, Jirák D, Kříž J, Girman P, Saudek F, Hájek M. Improved detection of pancreatic islets in vivo using double contrast. Contrast Media Mol. Imaging 2011, 6, 308–313, DOI:10.1002/cmmi.432 IF 4,02 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/09/2011 Název výsledku Pentapeptide-modified poly(N,N-diethylacrylamide) hydrogel scaffolds for tissue engineering Abstrakt Poly(N,N-diethylacrylamide) (PDEAAm) hydrogel scaffolds were prepared by radical copolymerization of N,N-diethylacrylamide (DEAAm), N,N´-methylenebisacrylamide and methacrylic acid in the presence of (NH₄)₂SO₄ or NaCl. The hydrogels were characterized by low-vacuum scanning electron microscopy in the water-swollen state, water and cyclohexane regain, and by mercury porosimetry. The pentapeptide, YIGSR-NH₂, was immobilized on the hydrogel. Human embryonic stem cells (hESCs) were cultured with the hydrogels to test their biocompatibility. The results suggest that the PDEAAm hydrogel scaffolds are nontoxic and support hESC attachment and proliferation, and that interconnected pores of the scaffolds are important for hESC cultivation. Immobilization of YIGSR-NH₂ pentapeptide on the PDEAAm surface improved both adhesion and growth of hESCs compared with the unmodified hydrogel. The YIGSR-NH₂-modified PDEAAm hydrogels may be a useful tool for tissue-engineering purposes. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 63 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Horák, D., Matulka, K., Hlídková, H. Lapčíková, M., Beneš, M.J., Jaroš, J., Hampl, A., Dvořák, P., (2011) Pentapeptide-modified poly(N,N-diethylacrylamide) hydrogel scaffolds for tissue engineering. Journal of Biomedical Materials Research, Part B: Applied Biomaterials. 98B,1, 54-67. IF 2,2 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/10/2011 Název výsledku Osteogenic differentiation of miniature pig mesenchymal stem cells in 2D and 3D environment Abstrakt Mesenchymal stem cells (MSCs) have been repeatedly shown to be able to repair bone defects. The aim of this study was to characterize the osteogenic differentiation of miniature pig MSCs and markers of this differentiation in vitro. Flow-cytometrically characterized MSCs were seeded on cultivation plastic (collagen I and vitronectin coated/uncoated) or plasma clot (PC)/plasma-alginate clot (PAC) scaffolds and differentiated in osteogenic medium. During three weeks of differentiation, the formation of nodules and deposition of calcium were visualized by Alizarin Red Staining. In addition, the production of alkaline phosphatase (ALP) activity was quantitatively detected by fluorescence. The expression of osteopontin, osteonectin and osteocalcin were assayed by immunohistochemistry and Western Blot analysis. We revealed a decrease of osteopontin expression in 2D and 3D environment during differentiation. The weak initial osteonectin signal, culminating on 7(th) or 14(th) day of differentiation, depends on collagen I and vitronectin coating in 2D system. The highest activity of ALP was detected on 21(th) day of osteogenic differentiation. The PC scaffolds provided better conditions for osteogenic differentiation of MSCs than PAC scaffolds in vitro. We also observed expected effects of collagen I and vitronectin on the acceleration of osteogenic differentiation of miniature pig MSC. Our results indicate similar ability of miniature pig MSCs osteogenic differentiation in 2D and 3D environment, but the expression of osteogenic markers in scaffolds and ECM coated monolayers started earlier than in the monolayers without ECM. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 64 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Juhásová, J., Juhás, S., Klíma, J., Strnádel, J., Holubová, M., Motlík, J. (2011) Osteogenic differentiation of miniature pig mesenchymal stem cells in 2D and 3D environment. Physiological Research. 60(3):559-71. Epub 2011 Mar 14. IF 1.646 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/11/2011 Název výsledku Comparative analysis of nuclear presence of adhesion/growth-regulatory galectins and reactivity in nuclei of interphasic and mitotic cells. Abstrakt Nuclear galectins participate in splicing of pre-mRNA. In this study we detected galectins-1, -2, -3 and -7 and their glycoligands in three types of cells: fibroblasts, cancer epithelial cells and melanoma cells. The results demonstrated that the nuclear expression of distinct types of galectins and their ligands in interphasic nuclei is dependent on the cell type. The extensive binding of labelled galectins-1 and -2 to mitotic cells (around chromosomes, in mitotic spindle and in bridge connecting both daughter cells) suggests their role during the cell division. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 65 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Kodet, O., Dvořánková, B. Lacina, L., André, S., Kaltner, H., Gabius, H.-J. a Smetana, Jr., K. (2011) Comparative analysis of nuclear presence of adhesion/growthregulatory galectins and reactivity in nuclei of interphasic and mitotic cells. Folia Biol 57, 125-132. IF 0,729 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/12/2011 Název výsledku Highly superporous cholesterol-modified poly(2-hydroxyethyl methacrylate) scaffolds for spinal cord injury repair Abstrakt Modifications of poly(2-hydroxyethyl methacrylate) (PHEMA) with cholesterol and the introduction of large pores have been developed to create highly superporous hydrogels that promote cell-surface interactions and that can serve as a permissive scaffold for spinal cord injury (SCI) treatment. Highly superporous cholesterol-modified PHEMA scaffolds have been prepared by the bulk radical copolymerization of 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA), cholesterol methacrylate (CHLMA), and ethylene dimethacrylate (EDMA) cross-linking agent in the presence of ammonium oxalate crystals to establish interconnected pores in the scaffold. Moreover, 2-[(methoxycarbonyl)methoxy]ethyl methacrylate (MCMEMA) was incorporated in the polymerization recipe and hydrolyzed, thus introducing carboxyl groups in the hydrogel to control its swelling and softness. The hydrogels supported the in vitro adhesion and proliferation of rat mesenchymal stem cells. In an in vivo study of acute rat SCI, hydrogels were implanted to bridge a hemisection cavity. Histological evaluation was done 4 weeks after implantation and revealed the good incorporation of the implanted hydrogels into the surrounding tissue, the progressive infiltration of connective tissue and the ingrowth of neurofilaments, Schwann cells, and blood vessels into the hydrogel pores. The results show that highly superporous cholesterol-modified PHEMA hydrogels have bioadhesive properties and are able to bridge a spinal cord lesion. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 66 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Kubinová, Š, Horák, D., Hejčl, A., Plichta, Z., Kotek, J., Syková, E.: (2011) Highly superporous cholesterolmodified poly(2-hydroxyethyl methacrylate) scaffolds for spinal cord injury repair. J. Biomed. Mater. Res. A.. IF 3,044 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 67 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/13/2011 Název výsledku Chronic spinal compression model in minipigs: a systematic behavioral and qualitative and quantitative neuropathological study. Abstrakt Abstract The goal of the present study was to develop a porcine spinal cord injury (SCI) model, and to describe the neurological outcome and characterize the corresponding quantitative and qualitative histological changes at 4-9 months after injury. Adult Gottingen-Minnesota minipigs were anesthetized and placed in a spine immobilization frame. The exposed T12 spinal segment was compressed in a dorso-ventral direction using a 5-mm-diameter circular bar with a progressively increasing peak force (1.5, 2.0, or 2.5 kg) at a velocity of 3 cm/sec. During recovery, motor and sensory function were periodically monitored. After survival, the animals were perfusion fixed and the extent of local SCI was analyzed by (1) post-mortem MRI analysis of dissected spinal cords, (2) qualitative and quantitative analysis of axonal survival at the epicenter of injury, and (3) defining the presence of local inflammatory changes, astrocytosis, and schwannosis. Following 2.5-kg spinal cord compression the animals demonstrated a near complete loss of motor and sensory function with no recovery over the next 4-9 months. Those that underwent spinal cord compression with 2 kg force developed an incomplete injury with progressive partial neurological recovery characterized by a restricted ability to stand and walk. Animals injured with a spinal compression force of 1.5 kg showed near normal ambulation 10 days after injury. In fully paralyzed animals (2.5 kg), MRI analysis demonstrated a loss of spinal white matter integrity and extensive septal cavitations. A significant correlation between the magnitude of loss of small and medium-sized myelinated axons in the ventral funiculus and neurological deficits was identified. These data, demonstrating stable neurological deficits in severely injured animals, similarities of spinal pathology to humans, and relatively good post-injury tolerance of this strain of minipigs to spinal trauma, suggest that this model can successfully be used to study therapeutic interventions targeting both acute and chronic stages of SCI. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Navarro, R., Juhás, S., Keshavarzi, S., Juhásova, J., Motlík, J., Johe, K., Marsala, S., Scadeng, M., Lazar, P., Tomori, Z., Schulteis, G., Beattie, M.S., Ciacci, J.D., Marsala, M. Chronic spinal compression model in minipigs: a systematic behavioral and qualitative and quantitative neuropathological study. Journal of Neurotrauma. 2011 Oct 26. IF 3.426 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 68 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/14/2011 Název výsledku ER-α agonist induces conversion of fibroblasts into myofibroblasts, while ER-β agonist increases ECM production and wound tensile strength of healing sk Abstrakt Oestrogen deprivation is one of the major factors responsible for many age-related processes, including poor wound healing in women. Previously, it has been shown that oestrogens have a modulatory effect in different woundhealing models. Therefore, in this study, the effect of selective oestrogen receptor (ER) agonists (PPT - ER-α agonist, DPN - ER-β agonist) on excisional and incisional wound-healing models was compared in ovariectomised rats in vivo as well as on human dermal fibroblasts (HDF) and human umbilical endothelial cells (HUVEC) in vitro. In the in vivo study, 4 months after either ovariectomy or sham ovariectomy, Sprague-Dawley rats were randomly divided into four groups and subjected to two incisional and excisional wounds: (i) control - sham operated, vehicletreated (ii) ovariectomised, vehicle-treated (iii) ovariectomised, PPT treated (iv) ovariectomised, DPN treated. In the in vitro study, HDFs and HUVECs were used. After treatment with ER agonists, cells were processed for immunocytochemistry and gelatin zymography. Our study shows that stimulation of ER-α leads to the differentiation of fibroblasts into myofibroblasts both in vivo and in vitro. On the other hand, the formation of extracellular matrix was more prominent, and wound tensile strength (TS) was increased when ER-β was stimulated. In contrast, stimulation of ER-α led to a more prominent increase in the expression of MMP-2 and decrease in wound TS. New information is presented in this investigation concerning oestrogen replacement therapy (ERT) in different woundhealing models. This study demonstrates that the ERT should be both wound and receptor-type specific. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 69 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Novotný, M., Vasilenko, T., Varinská, L., Smetana, K., Jr., Szabo, P., Šarišský, M., Dvořánková, B., Mojžíš, J., Bobrov, N., Toporcerová, S., Sabol, F., Matthews, B.J.O. a Gál, P. (2011) ER-α agonist induces conversion of fibroblasts into myofibroblasts, while ER-β agonist increases ECM production and wound tensile strength of healing skin wounds in ovarectomised rats. Exp Dermatol 20, 703-708. IF 4,159 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/15/2011 Název výsledku S–adenosylmethionine does not reduce ischaemia-reperfusion injury to a marginal liver graft in an in-vivo experiment. Abstrakt Background/Aims: There are a limited number of appropriate cadaver liver donors. One possible solution is the use of marginal liver grafts from cadaver donors for liver transplantation. Methodology: Rats with liver steatosis were divided into four containing seven animals each: I-a: steatotic liver grafts +S-adenosylmethionine I-b: steatotic liver grafts were transplanted no S-adenosylmethionine II-a: normal liver grafts, +S-adenosylmethionine II-b: normal liver grafts. Blood samples were taken at days -1, 3 and 14. Results: ALT values at day 14: 1.75±1.10µkat/L (in group I-a), 1.91±1.41µkat/L (in group I-b), 2.13±1.85µkat/L (in group II-a) and 2.08±1.35µkat/L (in group II-b). There were no significant differences between these values. GSH values at day 14 post-transplantation were: 44.90±8.61µM/mg (in group I-a), 43.82±8.58µM/mg (in group I-b), 41.65±4.87µM/mg (in group II-a) and 42.71±4.17µM/mg (in control group II-b). Conclusions: Our study did not demonstrate the positive effect of S-adenosylmethionine on ischaemia-reperfusion injury during liver transplantation in rats. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 70 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Pantoflicek, T. - Koblihová, E. - Ryska, M. (2012) S–adenosylmethionine does not reduce ischaemiareperfusion injury to a marginal liver graft in an in-vivo experiment. Hepatogastroenterology. Jan-Feb59(113):216-8. doi: 10.5754/hge11239., IF 0.677 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/16/2011 Název výsledku Proteomic and transcriptomic analysis of heart failure due to volume overload in a rat aorto-caval fistula model provides support for new potential therapeutic Abstrakt BACKGROUND: Chronic hemodynamic overloading leads to heart failure (HF) due to incompletely understood mechanisms. To gain deeper insight into the molecular pathophysiology of volume overload-induced HF and to identify potential markers and targets for novel therapies, we performed proteomic and mRNA expression analysis comparing myocardium from Wistar rats with HF induced by a chronic aorto-caval fistula (ACF) and sham-operated rats harvested at the advanced, decompensated stage of HF. METHODS: We analyzed control and failing myocardium employing iTRAQ labeling, two-dimensional peptide separation combining peptide IEF and nano-HPLC with MALDI-MS/MS. For the transcriptomic analysis we employed Illumina RatRef-12v1 Expression BeadChip. RESULTS: In the proteomic analysis we identified 2030 myocardial proteins, of which 66 proteins were differentially expressed. The mRNA expression analysis identified 851 differentially expressed mRNAs. CONCLUSIONS: The differentially expressed proteins confirm a switch in the substrate preference from fatty acids to other sources in the failing heart. Failing hearts showed downregulation of the major calcium transporters SERCA2 and ryanodine receptor 2 and altered expression of creatine kinases. Decreased expression of two NADPH producing proteins suggests a decreased redox reserve. Overexpression of annexins supports their possible potential as HF biomarkers. Most importantly, among the most up-regulated proteins in ACF hearts were monoamine oxidase A and transglutaminase 2 that are both potential attractive targets of low molecular weight inhibitors in future HF therapy Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 71 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Petrak J, Pospisilova J, Sedinova M, Jedelsky P, Lorkova L, Vit O, Kolar M, Strnad H, Benes J, Sedmera D, Cervenka L, Melenovsky V. (2011). Proteomic and transcriptomic analysis of heart failure due to volume overload in a rat aorto-caval fistula model provides support for new potential therapeutic targets monomaine oxidase A and transglutaminase 2. Proteome Sci 9,69. IF 2,488 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 72 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/17/2011 Název výsledku “Click & Seed” Approach to the Biomimetic Modification of Material Surfaces. Abstrakt V roce 2011 byla provedena podrobná charakterizace fyzikálně-chemických vlastností vrstev technologie „Click&Seed” (Dr. Proks, ÚMCH) určená k biomimetické funkcionalizaci povrchů pro stimulaci růstu kmenových buněk. Modifikace povrchů rozdílných materiálů byla provedena pomocí polydopaminu a polyethylen oxidu (PEO). Na povrchu PEO vrstvy byla v 98 % eliminována sorpce proteinů z krevní plazmy a séra. Ve stejném rozsahu byly pozorovány repulzivní vlastnosti PEO povrchu také vůči adhezi buněk. Následná modifikace této neadherentní vrstvy byla provedena pomocí sekvence aminokyselin fibronektinu – RGDS a biologicky nefunkční varianty RDGS. Pro testování vlastností povrchů byly využity lidské embryonální karcinomové buňky 2102Ep a myší fetální fibroblasty MFF. K vyhodnocení analýz distribuce a rozprostření buněk na modifikovaném povrchu bylo rozšířeno stávající programové vybavení (Dr. Jaroš) o vyhodnocení obrazu ve více barevných kanálech pro vyhodnocení počtu buněk, rozprostření buněk a proliferace. K tomu byly využity fluorescenční značky DAPI (jádra), Phalloidin-Rhodamin (cytoskelet) a protilátky proti Ki67, jaderný protein asociovaný s proliferací buněk. Byla vyvinuta metodika pro stanovení přesné koncentrace imobilizovaných aminokyselinových sekvencí. Zmiňované oligopeptidy fibronektinu byly značeny radioaktivním jódem 125I, což umožňovalo změřit přesnou koncentraci peptidů na každém analyzovaném vzorku. Povrchy byly modifikovány v pěti koncentracích (1.10-15 mol/cm2 až 1.10-11 mol/cm2). Imobilizací ligandu RGDS ve vysoké koncentraci 10-11 – 10-13 mol/cm2 byl vytvořen substrát umožňující adhezi stejného počtu a rozprostření MFF ve srovnání s vrstvou polydopaminu, na kterém dochází také k sorpci protenů a adhezi buněk. Snížením koncentrace RGDS pod 10-13 mol/cm2 klesal počet adherovaných MFF s logaritmickou závislostí. Na oligopeptidy s přehozenou sekvencí RDGS adherovalo 50 % MFF ve vysoké koncentraci. Významné rozdíly byly pozorovány také u exprese proteinu Ki-67, který bezprostředně souvisí s proliferaci buněk. Na nízkých koncentracích ligandů vázaných k povrchu byla jeho exprese výrazně nižší, čímž je prokázána přímá souvislost mezi adhezí buněk a jejich proliferací. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Proks, V.,Jaroš, J.,Pop-Georgievski, O.,Kučka, J.,Popelka, Š.,Dvořák, P.,Hampl, A.,Rypáček, F. (submitted 2011) “Click & Seed” Approach to the Biomimetic Modification of Material Surfaces. Journal of Biomedical Materials Research, Part A. IF 3,044 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 73 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/18/2011 Název výsledku Enzymatic degradation of the hydrogels based on synthetic poly(.alpha.-amino acid)s Abstrakt Biodegradable hydrogels are studied as potential scaffolds for soft tissue regeneration. In this work biodegradable hydrogels were prepared from synthetic poly(α-amino acid)s, poly(AA)s. The covalently crosslinked gels were formed by radical copolymerization of methacryloylated poly(AA)s, e.g. poly[N (5)-(2-hydroxy-ethyl)-L-glutamineran-L-alanine-ran-N (6)-methacryloyl-L-lysine], as a multifunctional macro-monomer with a low-molecular-weight methacrylic monofunctional monomer, e.g. 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA). Methacryloylated copolypeptides were synthesized by polymerization of N-carboxyanhydrides of respective amino acids and subsequent side-chain modification. Due to their polypeptide backbone, synthetic poly(AA)s are cleavable in biological environment by enzyme-catalyzed hydrolysis. The feasibility of enzymatic degradation of poly(AA)s alone and the hydrogels made from them was studied using elastase, a matrix proteinase involved in tissue healing processes, as a model enzyme. Specificity of elastase for cleavage of polypeptide chains behind the L-alanine residues was reflected in faster degradation of L-alanine-containing copolymers as well as of hydrogels composed of them. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 74 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Sedlačík, T.,Studenovská, H.,Rypáček, F. (2011), Enzymatic degradation of the hydrogels based on synthetic poly(.alpha.-amino acid)s. Journal of Materials Science-Materials in Medicine. Roč. 22, č. 4, s. 781-788, 2011. IF 2.325 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/19/2011 Název výsledku Polyglutamate copolymers as a tissue-engineering platform: polymer scaffold modification through aminolysis of poly(.gamma.-benzyl-L-glutamate-co-2,2,2-.gamma.Abstrakt In this study, we propose substrate-independent modification for creating a protein-repellent surface based on dopamine-melanin anchoring layer used for subsequent binding of poly(ethylene oxide) (PEO) from melt. We verified that the dopamine-melanin layer can be formed on literally any substrate and could serve as the anchoring layer for subsequent grafting of PEO chains. Grafting of PEO from melt in a temperature range 70-110 °C produces densely packed PEO layers showing exceptionally low protein adsorption when exposed to the whole blood serum or plasma. The PEO layers prepared from melt at 110 °C retained the protein repellent properties for as long as 10 days after their exposure to physiological-like conditions. The PEO-dopamine-melanin modification represents a simple and universal surface modification method for the preparation of protein repellent surfaces that could serve as a nonfouling background in various applications, such as optical biosensors and tissue engineering. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 75 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Svobodová, J.,Rypáček, F. (2012) Polyglutamate copolymers as a tissue-engineering platform: polymer scaffold modification through aminolysis of poly(.gamma.-benzyl-L-glutamateco-2,2,2-.gamma.-trichlorethyl-L-glutamate). European Polymer Journal. Roč. 48, č. 1, s. 183-190, 2012, IF 2.517 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/20/2011 Název výsledku Magnetic resonance imaging of stem cell migration Abstrakt Noninvasive cellular imaging allows the real-time tracking of grafted cells as well as the monitoring of their migration. In this review, we will focus on cell tracking using MRI, since MRI is noninvasive, clinically transferable, and displays good resolution, ranging from 50 μm in animal experiments up to 300 μm using whole body clinical scanners. In addition to information about grafted cells, MRI provides information about the surrounding tissue (i.e., lesion size, edema, inflammation), which may negatively affect graft survival or the functional recovery of the tissue. Transplanted cells are labeled with MR contrast agents in vitro prior to transplantation in order to visualize them in the host tissue. The chapter will focus on the use of superparamagnetic iron oxide nanoparticles (SPIO), because they have strong effects on T2 relaxation yet do not affect cell viability, and will provide an overview of different modifications of SPIO and their use in MR tracking in living organisms. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 76 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Syková E, Jendelová P, Herynek V. Magnetic resonance imaging of stem cell migration. Methods Mol Biol. 2011750:79-90. IF 13,9 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/21/2011 Název výsledku Mouse 3T3 fibroblasts under the influence of fibroblasts isolated from stroma of human basal cell carcinoma acquire properties of multipotent stem cells. Abstrakt BACKGROUND INFORMATION: Multipotent mesenchymal stem cells can participate in the formation of a microenvironment stimulating the aggressive behaviour of cancer cells. Moreover, cells exhibiting pluripotent ESC (embryonic stem cell) markers (Nanog and Oct4) have been observed in many tumours. Here, we investigate the role of cancer-associated fibroblasts in the formation of stem cell supporting properties of tumour stroma. We test the influence of fibroblasts isolated from basal cell carcinoma on mouse 3T3 fibroblasts, focusing on the expression of stem cell markers and plasticity in vitro by means of microarrays, qRT-PCR (quantitative real-time PCR) and immunohistochemistry. RESULTS: We demonstrate the biological activity of the cancer stromal fibroblasts by influencing the 3T3 fibroblasts to express markers such as Oct4, Nanog and Sox2 and to show differentiation potential similar to mesenchymal stem cells. The role of growth factors such as IGF2 (insulin-like growth factor 2), FGF7 (fibroblast growth factor 7), LEP (leptin), NGF (nerve growth factor) and TGFβ (transforming growth factor β), produced by the stromal fibroblasts, is established to participate in their bioactivity. Uninduced 3T3 do not express the stem cell markers and show minimal differentiation potential. CONCLUSIONS: Our observations indicate the pro-stem cell activity of cancer-associated fibroblasts and underline the role of epithelial-mesenchymal interaction in tumour biology. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 77 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Szabo, P., Kolář, M., Dvořánková, B., Lacina, L., Štork, J., Vlček, Č., Strnad, H., Tvrdek, M., Smetana, Jr. K.(2011) Mouse 3T3 fibroblasts under the influence of fibroblasts isolated from stroma of human basal cell carcinoma acquire properties of multipotent stem cells. Biol Cell 103, 233-248. IF 4.898 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/22/2011 Název výsledku The Use of Oligoperoxide-Coated Magnetic Nanoparticles to Label Stem Cells Abstrakt Iron oxide nanoparticles obtained by the coprecipitation of Fe(II) and Fe(III) salts and oxidation were coated with a novel poly(vinyl acetate-co-5-tert-(butylperoxy)-5-methylhex-1-en-3-yne-co-butyl acrylate-co-maleic anhydride) (PVBM) oligomer to ensure colloidal stability. The magnetic nanoparticles were thoroughly characterized by a range of physico-chemical methods, which proved the presence of the coating on the particles. Experiments with rat mesenchymal stem cells (rMSCs) confirmed that PVBM-coated gamma-Fe2O3 nanoparticles were not cytotoxic and that the average efficiency of stem cell labeling was good and comparable to that obtained with commercial agents. The cells labeled with PVBM-coated gamma-Fe2O3 nanoparticles displayed excellent contrast on magnetic resonance (MR) images. Such particles are thus promising for in vivo MR imaging of transplanted cells. Moreover, PVBM offers the possibility of additional modification by grafting compounds that reduce non-specific protein adsorption. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 78 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Šponarova, D., Horák, D., Trchová, M. Jendelová, P., Mitina, N., Zaichenko, A., Stoika, R., Lesný, P., Syková, E.: (2011) The Use of Oligoperoxide-Coated Magnetic Nanoparticles to Label Stem Cells. J. Biomed. Nanotechnol. 7(3): 384-394. IF 2,626 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 79 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/23/2011 Název výsledku Analysis of dosing regimen and reproducibility of intraspinal grafting of human spinal stem cells in immunosuppressed minipigs. Abstrakt In recent studies using a rat aortic balloon occlusion model, we have demonstrated that spinal grafting of rat or human neuronal precursors or human postmitotic hNT neurons leads to progressive amelioration of spasticity and rigidity and corresponding improvement in ambulatory function. In the present study, we characterized the optimal dosing regimen and safety profile of human spinal stem cells (HSSC) when grafted into the lumbar spinal cord segments of naive immunosuppressed minipigs. Gottingen-Minnesota minipigs (18-23 kg) were anesthetized with halothane, mounted into a spine-immobilization apparatus, and received five bilateral injections of HSSC delivered in 2, 4, 6, 8, or 10 μl of media targeted into L2-L5 central gray matter (lamina VII). The total number of delivered cells ranged between 2,500 and 100,000 per injection. Animals were immunosuppressed with Prograf® for the duration of study. After cell grafting, ambulatory function was monitored daily using a Tarlov´s score. Sensory functions were assessed by mechanically evoked skin twitch test. Animals survived for 6-7 weeks. Three days before sacrifice animals received daily injections of bromodeoxyuridine (100 mg/kg IV) and were then transcardially perfused with 4% paraformaldehyde. Th12-L6 spinal column was then dissected the spinal cord was removed and scanned with MRI. Lumbar transverse spinal cord sections were then cut and stained with a combination of human-specific (hNUMA, hMOC, hNSE, hSYN) or nonspecific (DCX, MAP2, GABA, CHAT) antibodies. The total number of surviving cells was estimated using stereological quantification. During the first 12-24 h after cell grafting, a modest motor weakness was observed in three of eight animals but was no longer present at 4 days to 7 weeks. No sensory dysfunction was seen at any time point. Postmortem MRI scans revealed the presence of the individual grafts in the targeted spinal cord areas. Histological examination of spinal cord sections revealed the presence of hNUMAimmunoreactive grafted cells distributed between the base of the dorsal horn and the ventral horn. In all grafts intense hMOC, DCX, and hSYN immunoreactivity in grafted cells was seen. In addition, a rich axodendritic network of DCX-positive processes was identified extending 300-700 μm from the grafts. On average, 45% of hNUMApositive neurons were GABA immunoreactive. Stereological analysis of hNUMA-positive cells showed an average of 2.5- to 3-fold increase in number of surviving cells compared with the number of injected cells. Analysis of spinal structural morphology showed that in animals injected with more than 50,000 cells/injection or volumes of injectate higher than 6 μl/injection there was tissue expansion and disruption of the local axodendritic network. Based on these data the safe total number of injected cells and volume of injectate were determined to be 30,000 cells delivered in μl of media. These data demonstrate that highly reproducible delivery of a potential cell therapeutic candidate into spinal parenchyma can be achieved across a wide range of cell doses by direct intraspinal injections. The resulting grafts uniformly showed robust cell survival and progressive neuronal maturation. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 80 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Usvald, D., Vodička, P., Hlučilová, J., Procházka, R., Motlík, J., Kuchorová, K., Johe, K., Marsala, S., Scadeng, M., Kakinohana, O., Navarro, R., Santa, M., Hefferan, M.P., Yaksh, T.L., Marsala, M. (2010) Analysis of dosing regimen and reproducibility of intraspinal grafting of human spinal stem cells in immunosuppressed minipigs. Cell Transplantation. 19:1103-22. Epub 2010 Apr 21. IF 6.204 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/24/2011 Název výsledku Flt3 ligand synergizes with granulocyte–colony-stimulating factor in bone marrow mobilization to improve functional outcome after spinal cord injury in the rat. Abstrakt The effect of granulocyte-colony-stimulating factor (G-CSF) and/or the cytokine fms-like thyrosin kinase 3 (Flt3) ligand on functional outcome and tissue regeneration was studied in a rat model of spinal cord injury (SCI). METHODS: Rats with a balloon-induced compression lesion were injected with G-CSF and/or Flt3 ligand to mobilize bone marrow cells. Behavioral tests (Basso-Beattie-Bresnahan and plantar test), blood counts, morphometric evaluation of the white and gray matter, and histology were performed 5 weeks after SCI. RESULTS: The mobilization of bone marrow cells by G-CSF, Flt3 ligand and their combination improved the motor and sensory performance of rats with SCI, reduced glial scarring, increased axonal sprouting and spared white and gray matter in the lesion. The best results were obtained with a combination of G-CSF and Flt3. G-CSF alone or in combination with Flt3 ligand significantly increased the number of white blood cells, but not red blood cells or hemoglobin content, during and after the time-course of bone marrow stimulation. The combination of factors led to infiltration of the lesion by CD11b(+) cells. CONCLUSIONS: The observed improvement in behavioral and morphologic parameters and tissue regeneration in animals with SCI treated with a combination of both factors could be associated with a prolonged time-course of mobilization of bone marrow cells. The intravenous administration of G-CSF and/or Flt3 ligand represents a safe and effective treatment modality for SCI. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 81 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Urdziková, L., Likavčanová-Mašínová, K., Vaněček, V., Růžička, J., Šedý, J., Syková, E., Jendelová, P.: (2011) Flt3 ligand synergizes with granulocyte–colonystimulating factor in bone marrow mobilization to improve functional outcome after spinal cord injury in the rat. Cytotherapy 13(9): 1090-1104. IF 2,825 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/25/2011 Název výsledku Analysis of marker expression in porcine cell lines derived from blastocysts produced in vitro and in vivo Abstrakt The present study was designed to extensively characterize cell lines derived from porcine blastocysts by several methodical approaches, including morphological observation, cytogenetic analysis, estimation of alkaline phosphatase activity and detection of specific marker expression at the mRNA/protein level. A comparison was made between the properties of cell lines isolated from in vivo- and in vitro-obtained blastocysts. Our results showed that 57.1% of the in vivo-obtained blastocysts attached to the feeder layer and that 33.3% of them started to grow in a monolayer. The percentage of attached in vitro-produced blastocysts was lower (24.6%), and only 6.9% of them started to grow. Outgrowths from the in vitro-produced blastocysts formed mainly trophectoderm or epithelial-like monolayer, whereas the in vivo-obtained blastocysts formed heterogeneous outgrowths that also contained cells with embryonic stem (ES)-like morphology. Detailed analyses showed that the primary outgrowths with ES-like morphology expressed the pluripotency markers OCT-4 and NANOG and revealed intensive alkaline phosphatase staining, while they did not express markers of differentiation. The majority of passaged cells, including those with ES-like morphology, lacked OCT-4 protein and revealed expression of specific differentiation markers (cytokeratin 18, lamins A/C, transferrin, α-fetoprotein and GATA-4), although they still expressed NANOG and exhibited weak alkaline phosphatase activity. Moreover, these cells spontaneously differentiated into neural, fibroblast or epithelial-like cells, even in the presence of leukaemia inhibitory factor. Our results show that complex analysis of markers of pluripotency as well as differentiation markers is necessary for proper interpretation of data in porcine embryonic stem cell studies. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 82 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Vackova, I., Novakova, Z., Krylov, V., Okada, K., Kott, T., Fulka, H., Motlik, J. (2011) Analysis of marker expression in porcine cell lines derived from blastocysts produced in vitro and in vivo. J Reprod Dev 57, 594-603. IF 1,637 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/26/2011 Název výsledku New type of irreversibly reductively biodegradable hydrogel. Abstrakt We have developed a radiolabeling strategy for synthetic polymers based on the formation of azo dye usable for both covalent and chelating labeling modalities under mild conditions. Poly[N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide] and poly(N-isopropyl acrylamide) were used as model polymers. N-methacryloyl tyrosinamide was introduced into the polymers and the phenolic moiety was then reacted with diazotized chelator precursors. The conjugates were radiolabeled with both the covalently bound (iodine-125) and chelated (indium-111) radionuclides in high yields and sufficient in vitro stability of the labels was proven. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 83 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Vetrík M., Hrubý M., Přádný M., Michálek J., (2011) New type of irreversibly reductively biodegradable hydrogel. Polym. Degrad. Stabil., 96(5), 892-897, IF 2.594 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/27/2011 Název výsledku Hydrazone-based hydrogel hydrolytically degradable in acidic environment. Abstrakt The structural properties of microfiber meshes made from poly(2-hydroxyethyl methacrylate) (PHEMA) were found to significantly depend on the chemical composition and subsequent cross-linking and nebulization processes. PHEMA microfibres showed promise as scaffolds for chondrocyte seeding and proliferation. Moreover, the peak liposome adhesion to PHEMA microfiber scaffolds observed in our study resulted in the development of a simple drug anchoring system. Attached foetal bovine serum-loaded liposomes significantly improved both chondrocyte adhesion and proliferation. In conclusion, fibrous scaffolds from PHEMA are promising materials for tissue engineering and, in combination with liposomes, can serve as a simple drug delivery tool. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 84 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Vetrík M., Přádný M., Hrubý M., Michálek J., (2011)Hydrazone-based hydrogel hydrolytically degradable in acidic environment. Polym. Degrad. Stabil., 96(5), 756-759 IF 2.594 J – článek v odborném periodiku (časopise) (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/28/2011 Název výsledku Způsob přípravy regulovaných vrstev fibrinu na pevných površích Abstrakt Způsob přípravy regulovaných vrstev fibrinu na pevných površích pro pěstování buněk spočívající v tom, že se v prvním kroku na pevný povrch adsorpcí z roztoku fibrinogenu adsorbuje fibrinogen, s výhodou o koncentraci 2 až 200 .mi.g/ml, na takto upravený povrch se v druhém kroku působí roztokem trombinu, s výhodou o aktivitě 0,1 až 10 U/ml, načež se v třetím kroku na povrch působí roztokem obsahujícím fibrinogen, s výhodou o koncentraci 200 .mi.g/ml nebo vyšší, a inhibitor trombinu antitrombin nebo antitrombin v kombinaci s heparinem, nebo heparinizovanou krevní plazmou, přičemž fáze působení roztokem trombinu a následné působení roztokem obsahujícím fibrinogen a antitrombin se může provádět opakovaně. Jako roztok fibrinogenu v prvním kroku je možné použít antikoagulovanou krevní plazmu. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 85 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Brynda, E., Houska, M., Syková, E., Jendelová, P., Dyr, J., Filová, E., Riedel, T., Chlupáč, J., Lesný, P., Bačáková, L.: Způsob přípravy regulovaných vrstev fibrinu na pevných površích. PV 2006-821 Uděleno: 12.9.2008 č. 299 687 P – patent (RIV 2009) CES 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/29/2011 Název výsledku Superparamagnetické nanočásticové sondy na bázi oxidů železa s modifikovaným povrchem, způsob jejich přípravy a použití. Abstrakt Superparamagnetické nanočásticové sondy na bázi oxidů železa, s výhodou magnetitu nebo maghemitu, s modifikovaným povrchem, pokryté mono-, di- nebo polysacharidy ze skupiny zahrnující D-arabinosu, D-glukosu, D-galaktosu, D-manosu, laktosu, maltosu, dextrany a dextriny nebo aminokyselinami nebo poly(aminokyselinami) ze skupiny zahrnující alanin, glycin, glutamin, asparagin, histidin, arginin, L-lysin, kyselinu asparagovou a glutamovou, které tvoří koloid sestávající z částic s úzkou distribucí velikostí o indexu polydisperzity menším než 1,3, jejichž střední velikost je od 0,5 do 30 nm, s výhodou 1 až 10 nm, obsah oxidu železa tvoří 70 až 99,9 hmotn. %, s výhodou 90 hmotn. %, obsah modifikačního činidla tvoří 0,1 až 30 hmotn. %, s výhodou 10 hmotn. %. Jejich použití pro označení buněk, za účelem jejich sledování. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 86 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Horák, D., Syková, E., Babič, M., Jendelová, P., Hájek, M.: Superparamagnetické nanočásticové sondy na bázi oxidů železa s modifikovaným povrchem, způsob jejich přípravy a použití. PV 2006-120 Uděleno: 17.9.2009 č. 301 067 P – patent (RIV 2009) CES 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/30/2011 Název výsledku Biomateriál na bázi nanovlákenných vrstev a způsob jeho přípravy Abstrakt Biomateriál na bázi nanovlákenných vrstev sestává alespoň ze dvou nanovlákenných vrstev, porostlých na obou stranách souvisle živými buňkami, přičemž tyto vrstvy jsou vzájemně propojeny prorůstáním buněk. Nanovlákenné vrstvy jsou netkané a jsou tvořeny syntetickými polymery nebo kopolymery monomerů vybraných ze skupiny zahrnující estery kyseliny methakrylové, amidy kyseliny methakrylové, urethany, vinylalkohol a monomery odvozené od kyseliny mléčné a jejích derivátů, a způsobu jeho přípravy. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 87 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Lesný, P., Syková, E., Michálek, J., Přádný, M., Jirsák, O.: Biomateriál na bázi nanovlákenných vrstev a způsob jeho přípravy. PV 2007-54 Uděleno: 2.7.2009 č. 300 805 P – patent (RIV 2009) CES 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/31/2011 Název výsledku Biomateriál na bázi nanovlákenné vrstvy a způsob jeho přípravy Abstrakt Řešení se týká biomateriálu na bázi nanovlákenné vrstvy sestávajícího z nanovlákenné vrstvy porostlé na jedné straně živými buňkami, které jsou funkčně polarizované, přičemž nanovlákenná vrstva je tvořena syntetickými polymery nebo kopolymery monomerů vybraných ze skupiny zahrnující estery kyseliny methakarylové, amidy kyseliny methakrylové, urethany vinylalkohol a monomery odvozené od kyseliny mléčné a jejich derivátů dále je popsán způsob jeho přípravy. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 88 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Lesný, P., Syková, E., Michálek, J., Přádný, M., Jirsák, O., Martínková, L.: Biomateriál na bázi nanovlákenné vrstvy a způsob jeho přípravy. PS 2009-252 Uděleno: 27.08.2009 č. 301 002 P – patent (RIV 2009) CES 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 89 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/32/2011 Název výsledku Methods of preparation of superparamagnetic nanoparticles based on iron oxides with modified surface and superparamagnetic nanoparticles obtained by such a meth Abstrakt The subject of the invention is superparamagnetic nanoparticle probes based on iron oxides, to advantage magnetite or maghemite, with modified surface, coated with mono-, di- or polysaccharides from the group including D-arabinose, D-glucose, D-galactose, D-mannose, lactose, maltose, dextrans and dextrins, or with amino acids or poly(amino acid)s from the group including alanine, glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine, L-lysine, aspartic and glutamic acid or with synthetic polymers based on (meth)acrylic acid and their derivatives selected from the group containing poly(N,N-dimethylacrylamide), poly(N,N-dimethylmethacrylamide), poly(N,N-diethylacrylamide), poly(N,N-diethylmethacrylamide), poly(N-isopropylacrylamide), poly(N-isopropylmethacrylamide), which form a colloid consisting of particles with narrow distribution with polydispersity index smaller than 1.3, the average size of which amounts to 0.5-30 nm, to advantage 1-10 nm, the iron content is 70-99.9 wt. %, to advantage 90 wt. %, the modification agent content 0.1-30 wt. %, to advantage 10 wt. %. The particles of size smaller than 2 nm with polydispersity index smaller than 1.1 can be obtained by a modified method of preparation. Superparamagnetic nanoparticle probes according to the invention are prepared by pre-precipitation of colloidal Fe(OH)3 by the treatment of aqueous 0.1-0.2M solution of Fe(III) salt, to advantage FeCl3, with less than an equimolar amount of NH4OH, at 21 DEG C., under sonication, to which a solution of a Fe(II) salt, to advantage FeCl2, is added in the mole ratio Fe(III)/Fe(II)=2 under sonication and the mixture is poured into five- to tenfold, to advantage eightfold, molar excess of 0.5M NH4OH. The mixture is left aging for 0-30 min, to advantage 15 min, and then the precipitate is repeatedly, to advantage 7-10 times, magnetically separated and washed with deionized water. Then 1-3 fold amount, to advantage 1.5 fold amount, relative to the amount of magnetite, of 0.1 M aqueous solution of sodium citrate is added and then, dropwise, 1-3 fold amount, to advantage 1.5 fold amount, relative to the amount of magnetite, of 0.7 M aqueous solution of sodium hypochlorite. The precipitate is repeatedly, to advantage 7-10 times, washed with deionized water under the formation of colloidal maghemite to which, after dilution, is added dropwise, to advantage under 5-min sonication, an aqueous solution of a modification agent, in the weight ratio modification agent/iron oxide=0.1-10, to advantage 0.2 for amino acids and poly(amino acid)s and 5 for saccharides. The particles smaller than 2 nm with polydispersity index smaller than 1.1 are prepared by mixing at 21 DEG C. 1 volume part of 10-60 wt. %, to advantage 50 wt. %, of an aqueous solution of a saccharide, disaccharide or polysaccharide, such as D-arabinose, D-glucose, D-galactose, D-mannose, lactose, maltose, dextran and dextrins, and 1 volume part of aqueous solution of a Fe(II) and Fe(III) salt, to advantage FeCl2 and FeCl3, where the molar ratio Fe(III)/Fe(II)=2. A 5-15%, to advantage 7.5%, solution of NH4OH is added until pH 12 is attained and the mixture is heated at 60 DEG C. for 15 min. The mixture is then sonicated at 350 W for 5 min and then washed for 24 h by dialysis in water using a membrane with molecular weight cut-off 14,000 until pH 7 is reached. The volume of solution is reduced by evaporation so that the final dry matter content is 50-100 mg/ml, to advantage 80 mg per 1 ml. Superparamagnetic nanoparticle probes according to the invention can be used for labelling cells used in magnetic resonance imaging for monitoring their movement, localization, survival and differentiation especially in detection of pathologies with cell dysfunction and of tissue regeneration and also for labelling and monitoring cells administered for cell therapy purposes, in particular embryonal stem cells, fetal stem cells, stem cells of an adult human including bone marrow stem cells, olfactory glial cells, fat tissue cells, in the recipient organism by magnetic resonance. The preparation of labelled cells proceeds by adding to the complete culture medium 5-20 mul, to advantage 10 mul, of a colloid containing 0.05-45 mg iron oxide per ml, to advantage 1-5 mg iron oxide per ml of the medium, and culturing the cells for a period of 1-7 days, to advantage for 1-3 days, at 37 DEG C. and 5% of CO2. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 90 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Horák, D., Syková, E., Babič, M., Jendelová, P., Hájek, M.: Methods of preparation of superparamagnetic nanoparticles based on iron oxides with modified surface and superparamagnetic nanoparticles obtained by such a method. Uděleno: 08.09.2010 č. EP 1991503 B1 P – patent (RIV 2009) ANG 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/33/2011 Název výsledku Použití galektinů a způsob přípravy myofibroblastů a nanovláken extracelulární matrix Abstrakt Řešení se týká použití in vitro alespoň jednoho savčího rekombinantního galektinu vybraného ze skupiny sestávající z galektinu-1, galektinu-4 a galektinu-7 jako induktoru přechodu dermálních fibroblastů do myofibroblastů a tvorby nanovláken extracelulární matrix, dermálními fibroblasty a z nich derivovanými myofibroblasty. Řešení se dále týká způsobu přípravy myofibroblastů a nanovláken extracelulární matrix, jehož podstata spočívá v tom, že se in vitro kultivují dermální fibroblasty v přítomnosti alespoň jednoho savčího rekombinantního galektinu vybraného ze skupiny sestávající z galektinu-1, galektinu-4 a galektinu-7. Galektiny v kombinaci s bioaktivním faktorem TGF-.beta.1 vykazují synergický efekt. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 91 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Smetana, K., Gabius, H. J., Dvořánková, B., Kaltner, H., Lacina, L., André, S., Szabo, P., Valach, J., Zima, T., Syková, E., Jendelová, P.: Použití galektinů a způsob přípravy myofibroblastů a nanovláken extracelulární matrix. 2010-107 Uděleno: 11.05.2011 č. 302 505 P – patent (RIV 2009) CES 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 92 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/34/2011 Název výsledku Klinická studie "Autologní kmenové buňky kostní dřeně v léčbě poranění míchy" Abstrakt Klinická studie "Autologní kmenové buňky kostní dřeně v léčbě poranění míchy" vznikla v roce 2003 ve spolupráci s Neurologickou klinikou FN Motol a dosud bylo do ní zařazeno celkem 41 pacientů. Jejím cílem je ověřit bezpečnost a účinnost systémového podání autologních kmenových buněk kostní dřeně v léčbě pacientů s poraněnou míchou. Kmenové buňky byly získány od pacientů izolací mononukleárních buněk z kostní krve aspirované z lopaty kosti kyčelní. Způsob aplikace kmenových buněk byl rozdělen na formu intraarteriální a intravenózní. Intraarteriální cestou (katetrizací arteria vertebralis) byly kmenové buňky podány 10 pacientům. Ostatním pacientům byly kmenové buňky aplikovány intravenózně (katetrizací periferní žíly). U skupiny deseti pacientů s intraarteriálním způsobem podání došlo v sedmi případech ke zlepšení motorických nebo senzorických funkcí. Ze skupiny pacientů s intravenózní aplikací jsme neurologické zlepšení zaznamenali u 11 (ze 31) pacientů. Pokud jsme porovnávali výsledky u skupiny pacientů s chronickým (déle než 30 dní po úraze) a subakutním (do 30 dní po úraze) poraněním míchy, buněčná terapie vyzněla lépe ve prospěch časného podávání: z 19 subakutních pacientů jsme částečné klinické zlepšení zaznamenali u 14 z nich. Naopak z 22 chronických pacientů se zlepšilo pouze pět. Z pomocných vyšetření jsme pro sledování našich pacientů využívali elektrofyziologické (motorické a somatosezorické evokované potenciály) a MRI vyšetření. Elektrofyziologické vyšetření dobře korelovalo s případným motorickým nebo senzorickým zlepšením. Naproti tomu kontrolní MRI vyšetření neprokázalo jiné změny v ložisku myelopatie než regresi edému nebo krvácení. Sledování detailních změn v místě poranění míchy však bylo často limitováno artefakty z kovových implantátů, používaných při chirurgické stabilizaci poraněných obratlů. První pacienti prodělali transplantaci kmenových buněk v roce 2003 a doposud jsme u žádného z nich nezaznamenali žádné komplikace, které by vznikly v souvislosti s buněčnou terapií. Rovněž pomocí kontrolních vyšetření MRI míchy jsme vyloučili strukturální léze, které by odpovídali formaci novotvarů. Tato studie potvrdila bezpečnost intraarteriální a intravenózní aplikace autologních kmenových buněk kostní dřeně u pacientů s traumatickou míšní lézí. Vzhledem k faktu, že na zlepšení neurologického deficitu se v akutní fázi poranění míchy může podílet i ústup míšního šoku nebo regrese edému míchy, je nutné provádět hodnocení na co možná největším souboru pacientů. Proto plánujeme do této studie zařadit další pacienty. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Klinická studie "Autologní kmenové buňky kostní dřeně v léčbě poranění míchy" N – certifikované metodiky (RIV 2009) CES 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 93 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 1. ZÁKLADNÍ ÚDAJE Číslo výsledku: 1M0538/35/2011 Název výsledku Klinická studie "Použití dřeňových kmenových buněk v léčbě ischemické choroby dolních končetin u pacientů se syndromem diabetické nohy" Abstrakt Klinická studie „Použití dřeňových kmenových buněk v léčbě ischemické choroby dolních končetin u pacientů se syndromem diabetické nohy“ byla zahájena ve spolupráci ÚEM a Centra diabetologie Institutu klinické a experimentální medicíny. Do studie bylo zařazeno 14 pacientů (11 mužů, 3 ženy, průměrný věk 61,9 ± 9,6 roku, průměrné trvání diabetu 23,5 ± 11,1 roku, průměrný glykovaný hemoglobin 6 ± 1 %). Osm pacientů bylo léčeno buňkami z kostní dřeně, 6 pacientů buňkami z periferní krve po stimulaci filgrastimem. Získaná suspenze kmenových buněk byla pak aplikována do svalů postižené dolní končetiny. Byl hodnocen vzestup hodnot transkutánní tenze kyslíku (TcPO2), subjektivní vnímání bolesti podle Visual Analog Scale (VAS) a hojení defektů. U všech pacientů došlo po intramuskulární implantaci buněk k signifikantnímu vzestupu TcPO2 z 10 ± 8,7 mm Hg před léčbou na 39,4 ± 9,5 mm Hg po 6 měsících (p = 0,0005) od aplikace. Dále byla pozorována signifikantní redukce plochy defektů a snížení bolesti, hodnocené VAS během sledovaného období: medián plochy defektu se snížil ze 4,3 (0,7–31,7) cm2 před léčbou na 0,06 (0–0,5) cm2 po 6 měsících od léčby (p = 0,0078). Snížení klidových bolestí bylo pozorováno u všech pacientů, průměrná hodnota VAS se snížila z 5,3 ± 1,8 před léčbou na 1,1 ± 1,3 po 6 měsících po aplikaci (p = 0,002). Hodnocená inovativní léčba syndromu diabetické nohy pomocí kmenových buněk je dle výsledků studie u pacientů s těžkou ischémií dolních končetin účinnou metodou bez závažných nežádoucích účinků, která zvyšuje transkutánní tenzi kyslíku, zlepšuje hojení defektů a vede ke zmírnění klidových bolestí. Hlavní (1) a další (2-5) obory řešení výsledku (dle číselníku CEP, RIV) 1.- FH, 2.- , 3.- , 4.- , 5.2. INOVAČNÍ ASPEKTY Popis inovačních aspektů daného výsledku 3. PŘÍNOSY Popis konkrétních přínosů daného výsledku pro jeho uživatele 4. KONTAKTNÍ ÚDAJE GARANTA VÝSLEDKU Celé jméno Spojení Organizace 5. DOSTUPNÁ DOKUMENTACE 94 of 122 Číslo Název dokumentu Typ Jazyk 00 Klinická studie "Použití dřeňových kmenových buněk v léčbě ischemické choroby dolních končetin u pacientů se syndromem diabetické nohy" N – certifikované metodiky (RIV 2009) CES 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.4.2. PLNĚNÍ DÍLČÍCH CÍLŮ 2.4.2.1. ZPRÁVA O DOSAŽENÍ DÍLČÍHO CÍLE Číslo dílčího cíle 04 Název dílčího cíle Výzkum buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie Plánované datum dosažení dílčího cíle 31.12.2011 INDIKÁTORY DOSAŽENÍ VÝSTUPU - SKUTEČNĚ DOSAŽENÉ Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech, patenty, certifikované metodiky.. PROSTŘEDKY OVĚŘENÍ VÝSTUPU - SKUTEČNĚ DOSAŽENÉ Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech, patenty, certifikované metodiky. 2.4.2.1. ZPRÁVA O DOSAŽENÍ DÍLČÍHO CÍLE Číslo dílčího cíle 05 Název dílčího cíle Výzkum a využití biomateriálů Plánované datum dosažení dílčího cíle 31.12.2011 INDIKÁTORY DOSAŽENÍ VÝSTUPU - SKUTEČNĚ DOSAŽENÉ Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech, patenty, certifikované metodiky.. PROSTŘEDKY OVĚŘENÍ VÝSTUPU - SKUTEČNĚ DOSAŽENÉ Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech, patenty, certifikované metodiky.. 95 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 96 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 2.4.2.1. ZPRÁVA O DOSAŽENÍ DÍLČÍHO CÍLE Číslo dílčího cíle 06 Název dílčího cíle Klinické studie a klinicky orientované experimentální modely Plánované datum dosažení dílčího cíle 31.12.2011 INDIKÁTORY DOSAŽENÍ VÝSTUPU - SKUTEČNĚ DOSAŽENÉ Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech, patenty, certifikované metodiky.. PROSTŘEDKY OVĚŘENÍ VÝSTUPU - SKUTEČNĚ DOSAŽENÉ Publikace v impaktovaných časopisech, abstrakta sdělení na sympoziích a kongresech, patenty, certifikované metodiky.. 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 97 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3. ZHODNOCENÍ PRŮBĚHU CELÉHO ŘEŠENÍ 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 98 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3.1.NÁKLADY PROJEKTU - CELÉ OBDOBÍ 3.1.1. NÁKLADOVÉ TABULKY ZA JEDNOTLIVÉ SUBJEKTY Rok CELK Typ skutečné Organizace Univerzita Karlova v Praze Role organizace příjemce - koordinátor Náklady skutečně vynaložené tis. Kč POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1,3,4,5,6,7,8. - Běžné položky uznaných nákladů F2. - Investiční položky uznaných nákladů F9. CELKEM z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 112436 100298 5803 5803 118239 106101 PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků ZDROJE FINANCOVÁNÍ CELKEM tis. Kč Z9. 118239 POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 z toho Účelová - z toho Ostatní veřejné - z toho podpora (DOTACE) zdroje zdroje tis. Kč tis. Kč tis. Kč 106101 0 0 Neveřejné 12138 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 99 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Rok CELK Typ skutečné Organizace Institut klinické a experimentální mediciny Role organizace spolupříjemce Náklady skutečně vynaložené tis. Kč POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč F1,3,4,5,6,7,8. - Běžné položky uznaných nákladů 9311 7149 F2. - Investiční položky uznaných nákladů 6900 6900 16211 14049 F9. CELKEM PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků ZDROJE FINANCOVÁNÍ CELKEM tis. Kč Z9. 16211 POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 z toho Účelová - z toho Ostatní veřejné - z toho podpora (DOTACE) zdroje zdroje tis. Kč tis. Kč tis. Kč 14049 0 0 Neveřejné 2162 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 100 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Rok CELK Typ skutečné Organizace Ústav hematologie a krevní transfuze Role organizace spolupříjemce Náklady skutečně vynaložené tis. Kč POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1,3,4,5,6,7,8. - Běžné položky uznaných nákladů 6467 5600 0 0 6467 5600 F2. - Investiční položky uznaných nákladů F9. CELKEM z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků ZDROJE FINANCOVÁNÍ CELKEM tis. Kč Z9. POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 z toho Účelová - z toho Ostatní veřejné - z toho podpora (DOTACE) zdroje zdroje tis. Kč tis. Kč tis. Kč 6467 5600 0 0 Neveřejné 867 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 101 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Rok CELK Typ skutečné Organizace Ústav makromolekulární chemie AV ČR Role organizace spolupříjemce Náklady skutečně vynaložené tis. Kč POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1,3,4,5,6,7,8. - Běžné položky uznaných nákladů F2. - Investiční položky uznaných nákladů F9. CELKEM z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 27650 24850 350 350 28000 25200 PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků ZDROJE FINANCOVÁNÍ CELKEM tis. Kč Z9. 28000 POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 z toho Účelová - z toho Ostatní veřejné - z toho podpora (DOTACE) zdroje zdroje tis. Kč tis. Kč tis. Kč 25200 0 0 Neveřejné 2800 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 102 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Rok CELK Typ skutečné Organizace Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR Role organizace spolupříjemce Náklady skutečně vynaložené tis. Kč POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1,3,4,5,6,7,8. - Běžné položky uznaných nákladů F2. - Investiční položky uznaných nákladů F9. CELKEM z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 38731 34955 1050 1050 39781 36005 PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků ZDROJE FINANCOVÁNÍ CELKEM tis. Kč Z9. 39781 POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 z toho Účelová - z toho Ostatní veřejné - z toho podpora (DOTACE) zdroje zdroje tis. Kč tis. Kč tis. Kč 36005 0 0 Neveřejné 3776 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 103 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... Rok CELK Typ skutečné Organizace Ústav experimentální mediciny AV ČR Role organizace spolupříjemce Náklady skutečně vynaložené tis. Kč POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ F1,3,4,5,6,7,8. - Běžné položky uznaných nákladů F2. - Investiční položky uznaných nákladů F9. CELKEM z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 32593 29196 400 400 32993 29596 PŘEVOD DO fondu tis. Kč F0. - Zúčtování s Fondem účelově určených prostředků ZDROJE FINANCOVÁNÍ CELKEM tis. Kč Z9. 32992 POUŽITÍ Z fondu tis. Kč 0 z toho Účelová - z toho Ostatní veřejné - z toho podpora (DOTACE) zdroje zdroje tis. Kč tis. Kč tis. Kč 29596 0 0 Neveřejné 3396 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 104 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 105 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3.1.2. NÁKLADOVÁ TABULKA ZA PROJEKT Rok CELK Typ skutečné PROJEKT 1M0538 - CELKEM Náklady skutečně vynaložené tis. Kč POLOŽKA UZNANÝCH NÁKLADŮ tis. Kč F1,3,4,5,6,7,8. - Běžné položky uznaných nákladů F2. - Investiční položky uznaných nákladů F9. CELKEM ZDROJE FINANCOVÁNÍ CELKEM tis. Kč Z9. 241690 z toho skutečně hrazené z účelové podpory tis. Kč 227188 202048 14503 14503 241691 216551 z toho Účelová - z toho Ostatní veřejné - z toho podpora (DOTACE) zdroje zdroje tis. Kč tis. Kč tis. Kč 216551 0 Neveřejné 25139 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 106 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3.1.3. ZDŮVODNĚNÍ ZPŮSOBU ČERPÁNÍ ZA CELÉ OBDOBÍ Provozní náklady byly použity na výzkumnou činnost, a sice na nákup pokusných zvířat, běžných chemikálií, protilátek, médii pro úschovu dat, chirurgického spotřebního materiálu, spotřebního kancelářského materiálu, drobných chirurgických nástrojů a laboratorního skla. Náklady na služby byly použity na oprav a údržbu laboratorních přístrojů, telekomunikační poplatky, bankovní poplatky za zahraniční faktury, zvěřincové služby. Náklady na cestovné byly využity na presentaci výsledků na zahraničních sympoziích a kongresech. Osobní náklady byly vyplaceny řešitelům a členům řešitelských týmů za činnost spojenou s plněním výzkumných úkolů grantu. 3.2. SOUHRNNÉ ZHODNOCENÍ ŘEŠENÍ - CELÉ OBDOBÍ 3.2.1. ZHODNOCENÍ ŘEŠENÍ PROJEKTU A ŘEŠITELSKÉHO TÝMU Stručné zhodnocení průběhu celého řešení od zahájení do ukončení řešení Během řešení projektu byla prováděna výzkumná činnost ve všech původně stanovených oblastech Centra: v oblasti buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie, v oblasti výzkumu a využití biomateriálů a v oblasti klinických studií a klinicky orientovaných experimentálních modelů. V souladu se stanovenými cíli bylo dosaženo řady dílčích a konečných výsledků: 176 společnými impaktovanými publikacemi s celkovým IF=572,504, 6 patenty a 2 klinickými studiemi. Na základě výzkumné činnosti Centra vznikly spin-off firmy, jejichž prostřednictvím se získané výsledky budou uplatňovat v lékařské praxi. Stručné zhodnocení řešitelského týmu V průběhu řešení projektu nenastaly žádné podstatné změny v řešitelském kolektivu, které by ohrozily časový harmonogram řešení dílčích úkolů Centra. Pracovní náplně jednotlivých pracovníků Centra přijatých na řešení projektu byly v souladu s původním návrhem. Několik mladších pracovníků v jednotlivých řešitelských týmech Centra odešla a byla proto nahrazena jinými pracovníky. 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3.2.2. Seznam významných výsledků - seznam Pořadí Soubor 299687 1 Patent: Brynda, E., Houska, M., Syková, E., Jendelová, P., Dyr, J., Filová, E., Riedel, T., Chlupáč, J., Lesný, P., Bačáková, L.: Způsob přípravy regulovaných vrstev fibrinu na pevných površích. PV 2006-821 Uděleno: 12.9.2008 č. 299 687 299687.pdf (367 kB ) 301067 2 Patent: Horák, D., Syková, E., Babič, M., Jendelová, P., Hájek, M.: Superparamagnetické nanočásticové sondy na bázi oxidů železa s modifikovaným povrchem, způsob jejich přípravy a použití. PV 2006-120 Uděleno: 17.9.2009 č. 301 067 301067.pdf (910 kB ) 300805 3 Patent: Lesný, P., Syková, E., Michálek, J., Přádný, M., Jirsák, O.: Biomateriál na bázi nanovlákenných vrstev a způsob jeho přípravy. PV 2007-54 Uděleno: 2.7.2009 č. 300 805 300805.pdf (773 kB ) 301002 4 Patent: Lesný, P., Syková, E., Michálek, J., Přádný, M., Jirsák, O., Martínková, L.: Biomateriál na bázi nanovlákenné vrstvy a způsob jeho přípravy. PS 2009-252 Uděleno: 27.08.2009 č. 301 002 301002.pdf (638 kB ) 1991503 Patent: Horák, D., Syková, E., Babič, M., Jendelová, P., Hájek, M.: Methods of preparation of superparamagnetic 5 nanoparticles based on iron oxides with modified surface and superparamagnetic nanoparticles obtained by such a method. Uděleno: 08.09.2010 č. EP 1991503 B1 1991503.pdf (49 kB ) 302505 Patent: Smetana, K., Gabius, H. J., Dvořánková, B., Kaltner, H., Lacina, L., André, S., Szabo, P., Valach, J., Zima, T., Syková, 6 E., Jendelová, P.: Použití galektinů a způsob přípravy myofibroblastů a nanovláken extracelulární matrix. 2010-107 Uděleno: 11.05.2011 č. 302 505 302505.pdf (345 kB ) 107 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3.2.3. PŘÍNOSY PROJEKTU Přínos projektu za celou dobu řešení 2005-2011 Cílem projektu "Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad" v l. 2005-2011 bylo uplatnit ověřené postupy získané v oblasti výzkumu buněčných zdrojů, biokompatibilních hydrogelů a nosičů pro užití v klinické praxi a připravit klinické zkoušky. Výsledky Centra získané v oblasti výzkumu buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie, v oblasti výzkumu a využití biomateriálů, v oblasti klinických studií a klinicky orientovaných experimentálních modelů byly publikovány v časopisech s přísným recenzním řízením, a byly využity při provádění klinických studií a při přenosu poznatků do lékařské praxe. Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad koordinovalo výzkum a vývoj v oblasti buněčné terapie onemocnění CNS, diabetu, jaterního selhání, náhrad chrupavek, kostí a kožních náhrad v ČR. Centrum bylo základnou pro systematickou postgraduální výchovu a místem intenzivní mezinárodní spolupráce. a) Přínos projektu v oblasti výzkumu buněčných zdrojů V rámci Centra byly zavedeny kultivace lidských embryonálních buněk a provedena jejich diferenciace do neurálních prekursorů. Ty je pak transplantovali potkanům s modelem iktu. Získali jsme tak nové poznatky o chování a tumorogenicitě kmenových buněk. Naše výsledky významně přispěly k charakterizaci neurálních prekurzorů z hlediska bezpečné transplantace do živých systémů. Vyvinuli jsme a otestovali nové magnetické nanočástice, vhodné ke značení transplantovaných buněk. Tato metoda umožnila sledování migrace transplantovaných buněk i tvorbu případných tumorů během života experimentálních zvířat. V klinických studiích využívajících buněčnou terapii bude implementace této metody velice důležitá. Dále jsme vyvinuli a otestovali několik polymérních materiálů, které slouží k přemostění chronických míšních lézí i jako nosiče transplantovaných kmenových buněk. Tyto materiály v kombinaci s kmenovými buňkami významně zlepšily neurologický deficit způsobený míšní lézí i po půl roce od transplantace. Otevírá se tak možnost léčit i chronicky poškozenou míchu. Dále jsme vyvinuli novou metodu měření protonové spektroskopie, která ukázala, že transplantace kmenových buněk může ovlivnit i metabolity v opačné, než poškozené hemisféře. Navíc, u zvířat s transplantovanými neurálními prekurzory lze sledovat i nárůst metabolitů typických pro nervové buňky. Společně jsme tedy vyvinuli novou neinvazivní metodu, kterou je možné sledovat osud transplantovaných buněk v mozku. Významným přínosem projektu byl vývoj a realizace několika technologií pro kultivaci a definici molekulárních mechanismů lidských embryonálních kmenových buněk. V rámci funkční a molekulární charakterizace lidských embryonálních kmenových buněk byly nově popsány významné molekulární mechanismy lidských embryonálních kmenových (hES) buněk: i) schopnost aktivovat G1/S kontrolní bod včetně funkčnosti molekul identifikovaných u somatických buněk. Byl také popsán mechanismus objasňující roli microRNA při řízení kontrolního bodu G1/S před a po poškození DNA. ii) dlouhodobou kultivací hES buněk v in vitro podmínkách se snižuje účinnost bázově excizního opravného mechanizmu (BER), což může mít přímý vliv na zvýšenou frekvenci mutací a tím na nestabilitu genomu hES buněk jako celku. iii) centrozomální abnormality zodpovědné za genetickou/chromozomální nestabilitu hES buněk kultivovaných in vitro, přičemž bylo ukázáno, že toto riziko lze snížit zásahem do adheze buněk či do aktivity některých regulátorů (CDK, Aurora A). Byla vytvořena unikátní technologie “Click&Seed” umožňující biomimetickou funkcionalizaci povrchů pro podporu růstu a stimulace chování kmenových buněk. Metoda umožňuje modifikovat povrchy z rozdílných materiálů s přesným řízením koncentrace vázaných ligandů a zároveň zabránit nespecifické sorpci proteinů z okolního prostředí. Technologie je navržena tak, aby bylo možné navázat v podmínkách kterékoliv biochemické laboratoře požadované ligandy (peptidy, fragmenty proteinů). Poznatky z planárního modelu budou využity při analýzách třírozměrných struktur, čímž bude možné definovat molekulární mechanismy vlivu daných ligandů s ohledem na 3D prostředí. Testováním trojrozměrných nosičů na bázi nanovláken a hydrogelů byl vypracován komplexní aparát pro analýzu buněk kultivovaných v 3D biomateriálech. Byly definováno vhodné složení a parametry, které mají podpůrný vliv na udržení nediferencovaného stavu lidských embryonálních kmenových buněk a z nich derivovaných neurálních progenitorů. Tyto poznatky budou využity při aplikaci kmenových buněk v tkáňovém inženýrství a buněčné terapii. V průběhu řešení projektu jsme vypracovali řadu postupů buněčných terapií s ohledem na jejich využití v humánní medicíně. Jednalo se především o terapie oocytů, kde byl hlavní cíl eliminace mutované mtDNA (mitochondriální DNA). Ta se dědí výhradně maternálně a pokud je mutovaná, znamená to zpravidla výskyt devastující choroby u 108 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 109 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... potomka. Bylo navrhnuto několik schémat, které v podstatě představují přenos jaderného materiálu z defektního oocytu do cytoplastu, který je připraven enukleací normálního oocytu získaného od dárce. Uplatnění lze předpokládat i obecně v asistované humánní reprodukci při řešení problémů aneuploidií, nekvalitní cytoplasmy oocytů, atd. Postup derivace ESC konverzí meiosy na mitosu představuje eticky akceptovatelnou cestu produkce linií ESC.Navíc by tento postup využil oocyty, které jsou obecně na klinikách IVF likvidovány. Kmenové buňky získané z prasete mohou sloužit jako vhodný zvířecí model. Jasně definované embryonální kmenové buňky nebyly dosud odvozeny. Problémem se zdá být nevhodný kultivační systém, který je problémem i u iPS prasečích buněk. Naše výzkumy potvrdily, že prasečí ES buňky je třeba charakterizovat nejen na základě jejich morfologických vlastností a potvrzením exprese několika markerů pluripotence, ale je třeba otestovat i panel markerů diferenciace. Je zřejmé, že embryonální kmenové buňky některých živočišních druhů důležitých pro biomedicínský výzkum (např. prasečí) nejsou dosud uspokojivě definovány. A to jak z hlediska jednoznačné identifikace (exprese markerů pluripotence není tak jasně definována jako v případě myších nebo lidských ES buněk), tak hlavně z hlediska technologie izolace a kultivace těchto buněk. Námi popsaný systém pro testování faktorů (exogenních/vliv kultivačního systému a endogenních/exprese vybraných faktorů ) umožňuje efektivní hledání vhodných podmínek pro derivaci a kultivaci zvířecích pluripotentních buněk. Vnášení vytipovaných proteinů oocytu pomocí lentivirových vektorů by mohlo přinést vyšší efektivitu reprogramace doprovázenou nižší biologickou nebezpečností indukovaných pluripotentních buněk. Výzkum je zatím prováděn na lidských buňkách, u kterých byl jasně definován vhodný kultivační systém. Získané informace budou využity i u prasečího modelu. Detailní charakterizace MSC izolovaných z pupečníku přináší hlubší vhled do mechanismů regenerativní medicíny. Používání velkých savců jako modelu pro studium MSC skýtá výhodu z hlediska etických problémů práce s humánním materiálem a poskytuje nadlimitní množství tkáně potřebné pro izolační experimenty. Množství mesenchymálních buněk, které je možné izolovat z tkáně pupečníku, představuje uspokojivé depo materiálu použitelného pro transplantační léčebné postupy na rozdíl od pupečníkové krve, jejíž objem je již při odběru velmi omezený a procento kmenových buněk v ní je velmi nízké. Riziko použití kmenových buněk spočívá především v nutnosti delší kultivace in vitro. Udržování těchto kultur je obtížné a může docházet k poškození buněk neoptimálními kultivačními podmínkami (oxidativní stres), které vyvolávají takzvaný „kultivační stres“. Buňky za těchto podmínek zpravidla ztrácí svůj pluripotentní charakter a mění se v jiný buněčný typ. Proto jsme se zaměřili na stanovení optimálního izolačního postupu, při kterém bude získáno z výchozího materiálu co největší množství žádaných buněk a nebude nutná následná dlouhodobá kultivace in vitro. Možnost správné a detailní charakterizace MSC na molekulární úrovni umožní sledování jejich okamžité reakce na kultivační podmínky a podmíní tak jejich správnou optimalizaci. Pokusili jsme se objasnit důvody rozporuplných výsledků aktivní demetylace paternálního prvojádra pozorovaných u modelového druhu prasete. V průběhu této studie byly prověřeny tři možné faktory - technika produkce embryí, faktory spermie a kvalita oocytů. Během studie se ukázalo, že technika produkce embryí (klasické IVF versus ICSI) zásadním způsobem neovlivňuje výslednou epigenetickou remodelaci paternálního prvojádra. Dále, spermie se zdá být pasivní složka remodelace spermie v oocytech jiného druhu jsou remodelovány způsobem, jaký je typický pro druh, ze kterého je odvozen oocyt. Kvalita oocytu se může podílet na schopnosti oocytu vytvořit paternální prvojádro, nicméně rozdíl ve schopnosti epigenetické remodelace jsme nepozorovali. Výsledky nám umožňují lépe pochopit obecný mechanismus remodelace paternálního prvojádra. Zároveň výsledky potvrzují rozdíl v remodelaci typické pro jednotlivé druhy savců. Poznatky jsou důležité v oblasti biologie reprodukce a také nabízejí potenciální možnost využití mezidruhového iICSI pro analýzu lidských spermií v oblasti asistované reprodukce. Část práce věnující se výskytu RNA polymerázy II v oocytech prasete nám ukazuje změny, které probíhají během vývoje oocytu. Za významný přínos projektu považujeme prioritní zjištění významné molekulární paralely mezi nádorovým stromatem a hojící se ránou včetně mikroprostředí, které stimulačně působí na okolní buňky tak, že se svým fenotypem podobají buňkám kmenovým (epitelová kmenová buňka, mesenchymová kmenová buňka). Jako klíčový element tohoto mikroprostředí byl určen nádorově asociovaný fibroblast, který parakrinním způsobem ovlivňuje buňky ve svém okolí a inhibuje jejich diferenciaci. Mikrochipovou a proteomickou analýzou byly určeny diferencovaně exprimované geny u těchto fibroblastů a byly navrženy kandidátní cytokiny, které se podílejí na tomto procesu. Tyto cytokiny jsou schopné po přidání do kultivačního média významným způsobem ovlivňovat okolní buňky, což přispívá k šíření nádoru. Tato znalost však může být využita i k in vitro expanzi kmenovým buňkám podobných elementů a tím i pro regenerativní medicínu. Jako další vhodná molekula byl vytipován endogenní lektin galektin-1, který je typickou bohatě exprimovanou molekulou nádorového stromatu a granulační tkáně hojící se rány.Tento galektin indukuje spolu 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... s TGF-β vznik myofibroblastů podobných nádorově-asociovaným fibroblastům a buňkám odpovědným za kontrakci rány. Zároveň indukuje produkci 3-D sítě nanovláken extracelulární matrix vhodné pro buněčné kultury a tkáňové inženýrství. Výsledky získané studiem nádorového stromatu byly patentově chráněny. Byl vyvinut jedinečný biomedicínský model miniaturních prasat. V současné době disponujeme F0, F1 a F2 generacemi transgenních miniprasat pro N-terminální část lidského mutovaného huntingtinu. Tento model nám zaručuje širokou mezinárodní spolupráci v oblasti studia patofyziologie Huntingtonovy choroby a současně je příslibem pro testování nových farmak i nových molekulárně genetických přístupů pro budoucí léčení této neurodegenerativní choroby. Největším příslibem pro budoucí základní i aplikovaný výzkum v oblasti neurodegenerativních onemocnění je fakt, že v každém vrhu F2 generace jsou zdravá a transgenní selátka v poměru 1:1. Vývoj fenotypu Huntingtonovy choroby může být srovnáván na naprosto identickém genetickém pozadí. Tento model je prostřednictvím firmy BIOTEST nabízen pro farmakokinetické testování potencionálních léčiv. Na modelu miniprasat jsme vypracovali jedinečné, počítačem řízené zařízení, které umožňuje naprosto opakovatelné, svoji intenzitou odstupňované poškození míchy. O praktické uplatnění této metodiky je zájem jak od farmaceutických firem, tak od laboratoří, které se věnují transplantaci kmenových buněk. Popsali jsme metodu izolace neembryonálních kmenových buněk neurální lišty izolovaných z vlasových folikulu. K jejich identifikaci, analýze a k experimentálním studiím byly použity vlasové folikuly dospělých transgenních myších a jejich vlastnosti byly porovnávány s buňkami neurální lišty izolovanými z myších embryí. V další fázi byla izolace a identifikace těchto buněk ověřena a potvrzena na buňkách získaných z lidských vlasových folikulů. Předností těchto dospělých kmenových buněk je snadná dostupnost v pacientově kůži. Nebudou se proti nim tvořit protilátky a s jejich přípravou nebudou spojeny etické problémy jako je tomu u embryonálních kmenových buněk. Dospělé kmenové buňky neurální lišty proto představují významný potenciální zdroj buněk pro účely výzkumu, pro regenerativní medicínu a buněčnou terapii. V oblasti výzkumu faktorů řídících diferenciaci buněk neurální lišty v srdci jsme prokázali, že endotelinová signalizace v této buněčné populaci nemá vliv na diferenciaci převodního systému. Oproti tomu jsme potvrdili, že se podílí na patogenezi vrozených vývojových vad výtokové části, a pilotní pokusy naznačily možnost terapeutické ovlivnění pomocí suplementace kyselinou listovou. Hlavním dosaženým přínosem, podloženým dvěma publikačními výstupy, je charakterizace modelu srdečního selhání u laboratorního potkana na morfologické a proteomické úrovni. Tento model jednoho z nejpalčivějších problémů současné kardiologie nám do budoucna umožní testovat další nové terapeutické intervence, které mohu přispět ke medicínskému řešení této novodobé epidemie. b) Přínos projektu v oblasti výzkumu a využití biomateriálů Metody vizualizace transplantovaných buněk vyvinuté v posledních letech umožnily detekci buněk pomocí MRI. Vizualizace vyžaduje značení buněk pomocí kontrastních látek. MR vizualizace byla podstatně zlepšena pomocí nově syntetizovaných nanočástic s modifikovaným povrchem, který zvyšuje průnik nanočástic do buněk. Díky tomu lze detekovat podstatně nižší počty buněk v tkáni in vivo. Úspěšně byly testovány a následně využity v experimentální práci nanočástice na bázi oxidů železa s modifikovaným povrchem pomocí poly-L-lysinu, manózy, polydimetylakrylamidu. Byla testována viabilita, účinnost značení a relaxivita suspensí značených buněk. Viabilita buněk nebyla přidáním jednotlivých nanočástic ovlivněna a účinnost značení byla ve všech případech vyšší než při použití komerční látky, i když mechanismus transportu částic do buněk se lišil. Nejlepších výsledků bylo dosaženo s nanočásticemi potaženými PLL. Modifikace nanočástic na bázi oxidů železa hyaluronovou kyselinou umožňuje další funkcionalizaci povrchu a tím lze docílit vyšší specificity značení. Konjugace určitého množství dopaminu v obalu navíc výrazně zvyšuje prostup nanočástic přes membránu a lze tak docílit vyšší efektivity značení. Buněčné značky pro MR zobrazování byly také vybaveny fluoresceinem, který umožňuje i detekci pomocí fluorescenční mikroskopie. Dále byla vyzkoušena možnost zvýšit účinnost detekce transplantovaných buněk metodou dvojího kontrastu, která aplikací standardní gadoliniové kontrastní látky zvyšuje kontrast mezi původní tkání a transplantovanými buňkami značenými nanočásticemi na bázi železa. Metoda byla úspěšně aplikována při detekci a monitorování Langerhansových ostrůvků transplantovaných do jater experimentálních diabetických potkanů. Po intravenózní aplikaci Gd-BOPTA došlo k významnému zvýšení kontrastu v MR obrazu. Metoda dvojího kontrastu významně zpřesnila kvantifikaci transplantovaných ostrůvků v MR obrazu a zpřesnila tak sledování odhojování transplantovaných ostrůvků v čase. Potenciál buněčných transplantací v případě mozkových lézí na experimentálním modelu potkana byl ověřen pomocí in vivo 1H MR spektroskopie. Spektroskopie prokázala, že po podání mesenchymálních buněk dochází k rychlejší adaptaci potkana. Přestože nebyly pozorovány statisticky významné změny v koncentraci 110 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 111 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... klíčových metabolitů v lézi u potkanů s transplantovanými buňkami a u potkanů neléčených, metoda však prokázala, že funkci poškozené hemisféry přebírá kontralaterální hemisféra rychleji po transplantaci mesenchymálních buněk. Transplantované buňky tak významně stimulovaly vlastní regenerační procesy potkana. Metoda 1H MR spektroskopie též prokázala rychlejší regeneraci tkáně v případě lokální ischémie vyvolané okluzí cerebrální artérie po transplantaci neurálních prekurzorů. Neurální prekurzory odvozené z lidských indukovaných pluripotentních buněk by mohly být slibným nástrojem při léčbě cévní mozkové příhody a obnově neurologické funkce. Metabolické profily byly sledovány v striatální tkáni (z léze a z kontralaterální hemisféry). Po čtyřech měsících byla pozorována úplná (u malých lézí) nebo částečná (u velkých lézí) regenerace absolutních koncentrací metabolitů u transplantovaných zvířat. Histologie potvrdila přítomnost neurálních prekurzorů v oblasti léze. Některé buňky se diferencovaly na zralé a tkáňově specifické neurony. Výsledky naznačují, že buňky se po transplantaci dále diferencují a integrují do striatální tkáně. Funkční testování podpořilo hypotézu, že transplantace může sloužit jako efektivní terapeutický nástroj. V průběhu řešení projektu Centra byly vyvinuty nové typy polymerních biomateriálů s vlastnostmi specificky přizpůsobenými účelu jejich použití jako nosičů buněk pro regeneraci tkání a tkáňové inženýrství. Zejména jde tyto nové typy biomateriálů: a) hydrofilní chemicky síťované polymerní gely, tzv. hydrogely, na bázi poly(alkyl methakrylátů) s řízenou porozitou a širokou škálou mechanických vlastností a b) nové biodegradovatelné polymery s různými mechanismy biodegradace, které zahrnují jak prostou spontánní hydrolýzu u polymerů na bázi alifatických polyesterů, tak selektivní degradaci působením určitého faktoru v prostředí, např. změnou pH, přítomností reduktivních sloučenin, až po selektivně degradovatelné polymery na bázi syntetických poly(aminokyselin), jejichž polypeptidický řetězec je selektivně degradován enzymy aktivními v regenerující se tkáni. Dále byly vyvinuty nové postupy pro formování 3D struktury polymerních nosičů – scaffoldů – zahrnující přípravu gelů s trvale přítomnými superpóry ( 60 -150 mm), přípravu polymerních vláken a scaffoldů tvořených jejich slinutím do 3D-struktury vláknité plstě a přípravu nanovláken a jejich formování do membrán a vícevrstvých nosičů tvořených kombinací syntetických nanovláken a přírodních polymerů (např. kolagen, kys. hyaluronová). Byly prostudovány a úspěšně aplikovány nové postupy modifikace povrchů biomateriálů biologicky aktivními molekulami, jako jsou proteiny extracelulární matrix (kolagen, laminin, fibronektin) nebo biomimetickými peptidy odvozenými jako segmenty proteinů ECM lamininu a fibronektinu (RGDS, YIGSR, REDV apod.). V pokusech s buněčnými kulturami byl prostudován vliv biomimetických modifikací na adhezi a proliferaci buněk osídlujících polymerní nosič. Vyvinuly jsme nové responsivní mikročástice a nanočástice jejichž vlastnosti a chování v biologickém prostředí selektivně reagují na vnější stimuly, např. na změnu teploty, nebo magnetické částice citlivé k aplikaci magnetického pole. Biokompatibilní paramagnetické nanočástice s upraveným povrchem zabraňujícím jejich agregaci a podporující jejich průnik do buněk byly úspěšně aplikovány pro značení kmenových buněk. V průběhu spolupráce mezi chemiky a biology byly na půdorysu Centra vytvořeny funkční mezioborové týmy z různých institucí, schopné komplexně řešit mezioborovou problematiku vývoje nových biomateriálů a jejich aplikace v regenerativní medicíně, efektivně využívající jak znalosti makromolekulární chemie a chemického inženýrství tak biologie a medicíny. Vedle nových poznatků, které budou dále rozvíjeny, jsou to právě týmy schopné řešit komplexní problematiku na pomezí lékařských a inženýrských oborů jsou významným pozitivním faktorem pro budoucí přínosy. c) Přínos projektu v oblasti klinických studií a klinicky orientovaných experimentálních modelů Klinická studie "Autologní kmenové buňky kostní dřeně v léčbě poranění míchy" vznikla v roce 2003 ve spolupráci s Neurologickou klinikou FN Motol a dosud bylo do ní zařazeno celkem 41 pacientů. Jejím cílem je ověřit bezpečnost a účinnost systémového podání autologních kmenových buněk kostní dřeně v léčbě pacientů s poraněnou míchou. Kmenové buňky byly získány od pacientů izolací mononukleárních buněk z kostní krve aspirované z lopaty kosti kyčelní. Způsob aplikace kmenových buněk byl rozdělen na formu intraarteriální a intravenózní. Intraarteriální cestou (katetrizací arteria vertebralis) byly kmenové buňky podány 10 pacientům. Ostatním pacientům byly kmenové buňky aplikovány intravenózně (katetrizací periferní žíly). U skupiny deseti pacientů s intraarteriálním způsobem podání došlo v sedmi případech ke zlepšení motorických nebo senzorických funkcí. Ze skupiny pacientů s intravenózní aplikací jsme neurologické zlepšení zaznamenali u 11 (ze 31) pacientů. Pokud jsme porovnávali výsledky u skupiny pacientů s chronickým (déle než 30 dní po úraze) a subakutním (do 30 dní po úraze) poraněním míchy, buněčná terapie vyzněla lépe ve prospěch časného podávání: z 19 subakutních pacientů jsme částečné klinické zlepšení zaznamenali u 14 z nich. Naopak z 22 chronických pacientů se zlepšilo pouze pět. Z pomocných vyšetření jsme pro sledování našich pacientů využívali elektrofyziologické (motorické a somatosezorické evokované potenciály) a MRI 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 112 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... vyšetření. Elektrofyziologické vyšetření dobře korelovalo s případným motorickým nebo senzorickým zlepšením. Naproti tomu kontrolní MRI vyšetření neprokázalo jiné změny v ložisku myelopatie než regresi edému nebo krvácení. Sledování detailních změn v místě poranění míchy však bylo často limitováno artefakty z kovových implantátů, používaných při chirurgické stabilizaci poraněných obratlů. První pacienti prodělali transplantaci kmenových buněk v roce 2003 a doposud jsme u žádného z nich nezaznamenali žádné komplikace, které by vznikly v souvislosti s buněčnou terapií. Rovněž pomocí kontrolních vyšetření MRI míchy jsme vyloučili strukturální léze, které by odpovídali formaci novotvarů. Tato studie potvrdila bezpečnost intraarteriální a intravenózní aplikace autologních kmenových buněk kostní dřeně u pacientů s traumatickou míšní lézí. Vzhledem k faktu, že na zlepšení neurologického deficitu se v akutní fázi poranění míchy může podílet i ústup míšního šoku nebo regrese edému míchy, je nutné provádět hodnocení na co možná největším souboru pacientů. Proto plánujeme do této studie zařadit další pacienty. Klinická studie „Použití dřeňových kmenových buněk v léčbě ischemické choroby dolních končetin u pacientů se syndromem diabetické nohy“ byla zahájena ve spolupráci ÚEM a Centra diabetologie Institutu klinické a experimentální medicíny. Do studie bylo zařazeno 14 pacientů (11 mužů, 3 ženy, průměrný věk 61,9 ± 9,6 roku, průměrné trvání diabetu 23,5 ± 11,1 roku, průměrný glykovaný hemoglobin 6 ± 1 %). Osm pacientů bylo léčeno buňkami z kostní dřeně, 6 pacientů buňkami z periferní krve po stimulaci filgrastimem. Získaná suspenze kmenových buněk byla pak aplikována do svalů postižené dolní končetiny. Byl hodnocen vzestup hodnot transkutánní tenze kyslíku (TcPO2), subjektivní vnímání bolesti podle Visual Analog Scale (VAS) a hojení defektů. U všech pacientů došlo po intramuskulární implantaci buněk k signifikantnímu vzestupu TcPO2 z 10 ± 8,7 mm Hg před léčbou na 39,4 ± 9,5 mm Hg po 6 měsících (p = 0,0005) od aplikace. Dále byla pozorována signifikantní redukce plochy defektů a snížení bolesti, hodnocené VAS během sledovaného období: medián plochy defektu se snížil ze 4,3 (0,7–31,7) cm2 před léčbou na 0,06 (0–0,5) cm2 po 6 měsících od léčby (p = 0,0078). Snížení klidových bolestí bylo pozorováno u všech pacientů, průměrná hodnota VAS se snížila z 5,3 ± 1,8 před léčbou na 1,1 ± 1,3 po 6 měsících po aplikaci (p = 0,002). Hodnocená inovativní léčba syndromu diabetické nohy pomocí kmenových buněk je dle výsledků studie u pacientů s těžkou ischémií dolních končetin účinnou metodou bez závažných nežádoucích účinků, která zvyšuje transkutánní tenzi kyslíku, zlepšuje hojení defektů a vede ke zmírnění klidových bolestí. V oblasti zpracovávání odebrané kostní dřeně přínosem projektu bylo zejména systematické zpracovávání odebrané autologní kostní dřeně/kostní krve pacientů za podmínek SOP pro manipulaci s hemopoetickou tkání pro klinické použití. Systematicky se dařila příprava frakce mononukleárních buněk sedimentační technikou s cílem redukovat erytrocytární kontaminaci pod hranici 5% původního množství za použití uzavřeného/polouzavřeného systému vaků, dále sledování buněčné bilance manipulace a ve finálním produktu zjišťování standardním způsobem buněčnosti a procenta CD34+ progenitorů. Úprava objemu produktu a zkoncentrování na požadovaný objem maximálně 20 ml, případně méně, se rutinně dařila a tudíž jednotlivá podání deponovala do tkáně relevantní množství buněk. Pokud byly buňky podávány i.v. cestou, redukovataný objem odebrané kostní krve snížil množství heparinu v produktu. Zvětšení rozsahu kohorty sledovaných pacientů po autologním podání kmenových buněk umožňuje kvantifikovat regenerační efekt buněčné terapie. Právě dlouhodobé sledování kohorty pacientů umožňuje validní závěry o potenciálním efektu zákroku na proces hojení nervové tkáně. Praktické zkušenosti získané během celého projektu umožňují rozšíření indikací autologního použití buněk kostní dřeně v oblasti regenerace cév u pacientů s chronickou ischemickou chorobou dolních končetin (ICHDK), a u vybraných případů tzv. diabetické nohy. Zhodnotili jsme efektivitu nebiologického eliminačního léčebného postupu u akutního selhání jater v experimentu na resekčním modelu u velkého laboratorního zvířete a posoudit tak použitelnost metody na úrovni ROLE 3. Těžké poranění jater vede v mnoha případech k těžké devastaci jaterní tkáně s následným rozvojem jaterní dysfunkce různého stupně, v nejtěžších případech k akutnímu jaternímu selhání (AJS). Urgentní ošetření někdy vyžaduje provést pro nekontrolovatelné krvácení resekční výkon, který spolu s ischemicko – reperfuzním poškozením může stávající jaterní dysfunkci či počínající AJS ještě prohloubit. Tyto situace vznikají vznikající jak v mírových podmínkách, tak i při válečných konfliktech či teroristických útocích, vedou bez léčby k smrti postiženého v 65 - 80 %. Přínos projektu byl v zmapování možnosti použití eliminační metody, která by – v podobě dialýzy u nemocného s renálním selháním – po určitou dobu nahradila funkci selhaných jater a tím umožnila regeneraci jaterního parenchymu nebo provedení jaterního přenosu. Dále projekt umožnil nácvik úspěšného použití této metody v experimentu a ozřejmil možnosti jejího zavedení do klinické praxe v případech léčby těžkého poranění jater. V oblasti výzkumu transplantace Langerhansových ostrůvků jsme nejprve dokončili přípravné experimentální práce u 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 113 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... zvířat a doplnit přístrojové vybavení a jeho adaptaci. Poté jsme zahájili klinický program transplantace izolovaných Langerhansových ostrůvků u člověka a tím realizovali klinickou aplikaci nové metody tkáňové a buněčné transplantace. Do konce roku 2011 bylo v IKEM provedeno celkem 62 transplantací ostrůvků a to u 39 příjemců. V 15 případech se jednalo o pacienty se syndromem porušeného vnímání hypoglykémie, z nichž 4 podstoupili celkem 3 implantace, 6 podstoupilo 2 implantace a u 5 osob byla provedena implantace jen jedna. Ve 3 případech byla současně transplantována játra a ostrůvky, 5 byla provedena kombinovaná transplantace ledviny a ostrůvků. V 5 případech byla provedena autotransplantace ostrůvků u pacientů, kteří podstoupily totální pankreatektomii a ostrůvky byly izolovány z jejich vlastního pankreatu. Podařilo se tak přiřadit ČR mezi přední světová pracoviště, která se transplantační léčbou diabetu a její inovací zabývají. Originálních výsledků jsme dosáhli v oblasti neinvazivního zobrazování transplantovaných ostrůvků pomocí magnetické resonance. In vitro metoda byla díky interdisciplinární spolupráci v rámci projektu dovedena k vypracovaní vhodné experimentální metody u zvířat až po pilotní zavedení do humánní medicíny. V této oblasti byly principy metody široce přijaty a citovány v literatuře. Podařilo se zavést modely diferenciace a proliferace prekursorových linií buněk pankreatu, které se částečně mění v buňky schopné inzulínové sekrece. Lze tudíž shrnout, že vytvoření Centra buněčné terapie a tkáňových náhrad UK přispělo v rámci ČR k vytvoření zcela unikátních mezioborových týmů pro základní a aplikovaný výzkum v oblasti buněčné terapie s možností uplatnění získaných výsledků pro užití v lékařské praxi. Význam Centra v letech 2005-2011 rovněž spočívá i ve výchově mladých výzkumných pracovníků, a propojení pracovišť, vyjádřené m.j. 176 společnými impaktovanými publikacemi s celkovým IF=572,504, 6 patenty a 2 klinickými studiemi. Téměř všichní mladí pracovníci, vychovaní v Centru, pokračují ve výzkumu v dané oblasti. Na základě výzkumné činnosti Centra vznikly 2 spin-off firmy (Chondros, s.r.o. a CellNova, s.r.o.), jejichž prostřednictvím se získané výsledky budou uplatňovat v lékařské praxi. 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3.2.4. ZHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ - TISKOVÁ ZPRÁVA 3.2.4.1. Zhodnocení výsledků - Tisková zpráva - česky (zpráva musí obsahovat dosažené cíle, resp. výsledky/výstupy řešení projektu; rozsah max. 400 znaků): Během řešení projektu byla prováděna výzkumná činnost ve všech původně stanovených oblastech Centra. Bylo dosaženo řady dílčích a konečných výsledků: 176 společnými impaktovanými publikacemi s celkovým IF=572,504, 6 patenty a 2 klinickými studiemi. Na základě výzkumné činnosti Centra vznikly spin-off firmy, jejichž prostřednictvím se získané výsledky budou uplatňovat v lékařské praxi. 3.2.4.2. Zhodnocení výsledků - Tisková zpráva – anglicky (zpráva musí obsahovat dosažené cíle, resp. výsledky/výstupy řešení projektu; rozsah max. 400 znaků): In concordance with the planned aims, a number of partial and final results were obtained: 176 publications in impacted journals with a total IF=572,504, 6 patents and 2 clinical trials. On the basis of the Center´s research spin-off companies were established, which will introduce obtaned results into a medical practice. 114 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 115 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3.2.5. PLNĚNÍ PODMÍNEK PROGRAMU Všechny podmínky programu byly splněny. Výzkumné centrum se podílelo na uskutečňování doktorských studijních programů a na pracovištích centra byli vzděláváni studenti doktorských studijních programů. Na činnosti centra se rovněž pracovně podíleli studenti magisterských a doktorských studijních programů. Byla splněna podmínka účelové podpory a finančního podílu příjemce podpory. V l. 2005-2011 se podařilo zajistit sponzorské dary zajištěné na řešení projektu ve výši více než 10% celkových uznaných nákladů ročně. Přehled finančních darů na činnost Centra v r. 2011: UK v Praze, 2.LF 500.000 Kč Buněčná terapie, obč. sdružení 400.000 Kč AET, s.r.o. 690.000 Kč Traders, s.r.o. 241.000 Kč UK v Praze, 1.LF 100.000 Kč Česká spol. HPB chirurgie 200.000 Kč BioTech, a.s. 450.000 Kč ITA, s.r.o. 60.000 Kč ÚŽFG, v.v.i. 60.000 Kč Výzkumný ústav živ. výroby 200.000 Kč Maneko, s.r.o. 80.000 Kč Wichterle & Vacík, s.r.o. 120.000 Kč Watrex, s.r.o. 100.000 Kč Medicem, s.r.o. 100.000 Kč Siemens, s.r.o. 240.000 Kč Nadace Karla Pavlíka 300.000 Kč ÚHKT 89.000 Kč CELKEM 3.930.000 Kč 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3.2.6. PLNĚNÍ SMLOUVY O SPOLUPRÁCI Dne 1.12.2004 byla mezi Univerzitou Karlovou v Praze, Ústavem živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i., Ústavem experimentální medicíny AV ČR, v.v.i., Institutem klinické a experimentální medicíny a Ústavem hematologie a krevní transfuze podepsána dohoda o založení Centra buněčné terapie a tkáňových náhrad jako společného pracoviště k řešení projektu MŠMT č. 1M0538. V průběhu celeho období řešení projektu, t.j. v l. 2005-2011, se tato smlouva plnila bez výhrad jakékoliv smluvní strany, pro úspěšné splnění dílčích úkolů byly všem smluvním stranám zajištěny převody finančních prostředků, jak ze zdrojů MŠMT, tak i od jednotlivých sponzorů. Účastníci smlouvy dle smluvních podmínek dodali veškeré podklady pro vypracování průběžné smlouvy. 116 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 3.2.7. SMLOUVA O VYUŽITÍ VÝSLEDKŮ a PLÁN UPLATNĚNÍ Pořadí Soubor Implementační plán CBTTN 1 Implementační plán CBTTN CBTTN_implementacni_plan.pdf (412 kB ) smlouva BioInova 2 smlouva BioInova smlouva_BioInova_UEM.pdf (374 kB ) smlouva ArtiCell 3 smlouva ArtiCell smlouva_ArtiCell_UEM.pdf (355 kB ) smlouva EponaCell 4 smlouva EponaCell smlouva_EponaCell_UEM.pdf (322 kB ) 117 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 4. PŘÍLOHY 4.1. DALŠÍ PŘÍLOHY - rok 2011 4.1.1. Odborné a věcné přílohy zprávy - seznam Pořadí Soubor 1M0538_zprava_2011 1 Zformátovaná zpráva za r. 2011 a celkové shrnutí. 1M0538_zprava_2011.pdf (337 kB ) 118 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 4.1.2. Ostatní - seznam Pořadí Soubor V elektronické podobě soubor nebyl řešitelským týmem poskytnut. 119 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 4.1.3. Zápisy z projednání (oponentní řízení, atd.) - seznam Pořadí Soubor V elektronické podobě soubor nebyl řešitelským týmem poskytnut. 120 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 4.1.4. Zápisy a dokumenty z jednání s administrátory programu poskytovatele - seznam Pořadí Soubor V elektronické podobě soubor nebyl řešitelským týmem poskytnut. 121 of 122 8.2.2012 10:25 Zprava_1M0538_2011_1_00-Tisk-ePROJEKTY 122 of 122 file:///F:/Document_grants/running/centrum_2005/2011/zprava/2011_z... 4.1.5. Zápisy z jednání Rady projektu (Centra) - seznam Pořadí Soubor stanovisko Rady Centra 1 stanovisko Rady Centra stanovisko_rady_2011.pdf (86 kB ) 8.2.2012 10:25 PŘÍLOHY Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy Název projektu : Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad Řešitel: Prof. MUDr. Eva Syková, DrSc. Příjemce: Univerzita Karlova v Praze, 2. lékařská fakulta ID kód projektu: 1M0538 Průběžná zpráva o realizaci projektu za r. 2011 a závěrečné shrnutí 1. Popis průběhu řešení: a) Buněčné zdroje a experimentální modely buněčné terapie Hodnocení kombinované terapie chronického míšního poranění. Testovali jsme vliv implantace hydrogelu na bázi HPMA-RGD osázený kmenovými buňkami kostní dřeně v modelu akutního a chronického míšního poranění u laboratorního potkana. Modelem poranění byla hemisekce a balónková kompresní míšní léze. Oproti publikovaným výsledkům jsme použili HPMA hydrogely připravené jinou technologií (jako porogen byly použity částice frakcionovaného NaCl a na povrch byly navázány RGD sekvence odvozené z mamininu – HPMA-porézní-RGD). Připravené hydrogely jsme oseli mesenchymovými kmenovými buňkami a porovnali v modelu míšní hemisekce s již dříve připraveným HPMA-RGD, kde byla použita metoda srážecí polymerace. Po jednom měsíci byly u všech hydrogelů buňky přítomny v gelu. Menšina buněk pak vycestovala do nejbližšího okolí míšní tkáně těsně adorující k hydrogelu. U žádného z hydrogelů nebyly MSCs patrny v odlehlejších částech míšní tkáně. Všechny 4 typy hydrogelů přemostily míšní lézi, jejich okraje dobře adherovaly k okrajům míšní léze. Nejvíce cév vrůstalo do obou hydrogelů na bázi HPMA s RGD sekvencí (HPMA-porézní-RGD a HPMA-RGD). Nejvíce nervových vláken pak vrůstalo do hydrogelu HPMA-porous-RGD. Hydrogel HPMA-porous-RGD se z námi testovaných hydrogelů na bázi metakrylátu jeví jako nejslibnější biomateriál v experimentální léčbě míšního poranění. Provedli jsme experimentální studii vlivu implantace hydrogelu HPMA-porous-RGD u chronické míšní léze laboratorního potkana. Hydrogel byl implantován do balónkové kompresní léze 5 týdnů po poranění. Kontrolní skupinu tvořili laboratorní potkani se samotnou balónkovou kompresní lézí. Šest měsíců po SCI byly vyhodnoceny jednotlivé skupiny. V průběhu experimentu jsme u vybraných potkanů provedli vyšetření magnetickou rezonancí a zvířata byla testována sadou behaviorálních testů. Po usmrcení jsme vyhodnotili infiltraci gelů cévami, axony, Schwannovými buňkami i astrocyty. (Syková, Jendelová, Michálek, Hájek). Studium lidských buněk tukové tkáně a jejich využití v léčbě míšního poranění. Vzhledem k tomu, že se nám nepodařilo navázat spolupráci s ORL klinikou v Motole a tudíž jsme nemohli z nekropsie získat lidské olfaktorické glie, studovali jsme v letošním roce alternativní zdroj buněk a to buňky tukové tkáně a jejich využití v léčbě míšního poranění. Kmenové buňky izolované z tukové tkáně jsme v kultuře předdiferencovali do neurálního fenotypu (pASC) a srovnali jejich účinek s nediferencovanými buňkami (ASC). V kultuře se nám podařilo získat neurální prekursory, které byly positivní na nestin, NCAM, bIII tubulin, NG2 a GFAP a vykazovaly tak multipotenci neurálních kmenových buněk. Po transplantaci jsme však nepozorovali žádnou diferenciaci do zralejších forem neurálního fenotypu. Naopak, našli jsme transplantované buňky pozitivní na CD31 (endoteliální fenotyp) a NG2 (oligodendrocytární prekurzor). Transplantované buňky obalily zbylá neurofilamenta a oligodendrocyty a vytvořily tak provazce buněk procházejících lézí. Nic z toho jsme nepozorovali po transplantaci nediferencovaných ASC. Funkční zlepšení motoriky zadních končetin bylo ale srovnatelné po transplantaci obou typů buněk. Z našich výsledků vyplývá, že transplantace kmenových buněk izolovaných z tukové tkáně má pozitivní vliv na motoriku potkanů s míšním poraněním hlavně díky parakrinnímu efektu a ischemické prostředí míšní léze podporuje více vaskularizaci než diferenciaci do neurálního fenotypu. (Syková, Jendelová). Studium neurogenese na experimentálním modelu iktu. Dokončili jsme studii, ve které jsme sledovali vliv transplantovaných indukovaných pluripotentních buněk (iPS) na reparaci a 1 neurogenezi mozkové tkáně po iktu. iPS buňky byly transplantované potkanům do striata 7 dní po vyvolání iktu. Neurální prekurzory, derivované z iPS buněk se během 4 měsíců po transplantaci diferencovaly do striatálních interneuronů (GABA ergních, tj DARPP32 pozitivních a calretinin pozitivních), které projektovaly své axony do globu pallidus a do substantia nigra (SN). Transplantovaná zvířata vykazovala menší neurologický deficit a menší atrofii SN. Ke zlepšení neurologického deficitu došlo dříve, než k rekonstrukci mozkové tkáně, z čehož vyplývá, že iPS buňky se nejen podílejí na regeneraci striatální tkáně, ale také vylučují aktivní látky (růstové faktory), které se podílejí na snížení neurologického deficitu ještě před histologickými změnami. Z našich výsledků vyplývá, že neurální prekurzory derivované z iPS buněk mohou přispět k léčbě iktu 2 mechanismy, a to jak parakrinním, tak reparačním. Zvířata byla po transplantaci sledována na magnetické rezonanci, z T2W obrazů byla rovněž odečítána atrofie SN. (Syková, Jendelová, Hájek). Vývoj strategií pro diferenciaci lidských embryonálních kmenových buněk do medicínsky relevantních linií. Studovali jsme trojrozměrným struktur na diferenciaci buněk. Tyto experimenty navazovaly na experimenty na síťovaném/nesíťovaném kolagenu v kombinaci s hyaluronovou kyselinou v několika různých variantách koncentrací kolagenu, hyaluronanu a stupně síťování. Cílem byla analýza proliferace a neuronální diferenciace NPC s ohledem na fyzikálně-mechanické vlastnosti materiálů. Pro analýzy vlivu materiálů byly diferencovány neurální progenitorové buňky z lidských embryonálních kmenových buněk. Buňky byly v materiálech kultivovány po dobu 1-4 týdnů a analyzovány pomocí fluorescenční, konfokální a elektronové mikroskopie. Neurální progenitorové buňky nejlépe proliferovaly v materiálech, které nebyly síťovány, ačkoliv ty nejsou vhodné pro dlouhodobou kultivaci, jelikož po cca 2 týdnech dochází k jejich rozkladu vlivem hydrolýzy a působením enzymů. Pozitivní vliv na proliferaci v síťovaných materiálech měla přítomnost vyšší koncentrace hyaluronové kyseliny. Při kultivaci buněk na materiálech v diferenciačním médiu byla výrazně inhibována proliferace NPC v planárních i 3D strukturách. Byl však ověřen podpůrný vliv 3D prostředí na udržení nediferencovaného stavu neurálních progenitorových buněk v nediferenciačním médiu a jeho využití pro výraznou expanzi buněk. Analyzovali jsme fyzikálně-mechanické vlastnosti použitých materiálů a naměřené parametry (porozita, elasticita, etc.) byly korelovány s reakcí neurálních progenitorových buněk. Dále jsme studovali hydrogely z poly(N,N-diethylakrylamidu) (PDEAAm) a studiem růstu lidských embryonálních kmenových buněk (hESC). Imobilizace peptidu YIGSR do materiálu výrazně zlepšilo adhezi a proliferaci hESC ve srovnání s nemodifikovaným materiálem. Bylo prokázáno, že porozita je zásadním faktorem, jelikož během krátkodobé (2-denní) kultivace hES buňky vytvářely kolonie na porézních materiálech narozdíl od růstu v neporézních strukturách. Při dlouhodobé kultivaci (2 týdny) bylo prokázáno, že vlivem 3D prostředí dochází k indukci spontánní diferenciace hES buněk, kterou lze potlačit zvýšením koncentrace růstového faktoru FGF2. (Hampl, Rypáček) Analýza genetické stability linií získaných diferenciací lidských embryonálních kmenových buněk. Zabývali jsme se studiem mechanismů, které se uplatňují při regulaci buněčného cyklu a odpovědi na poškození DNA (DDR) u lidských embryonálních kmenových (hES) buněk. V odpovědi na poškození DNA somatických buněk hraje důležitou roli tumor supresorem p53 způsobená transaktivace proteinu p21, který reguluje zastavení buněčného cyklu v G1/S přechodu. Mechanismus regulace G1/S přechodu v hES buňkách ještě není detailně pochopen. U hES buněk byla popsána neschopnost tumor supresoru p53 aktivovat své cílové geny. Navzdory zvýšení hladiny mRNA proteinu p21 po UVC ozáření hES buněk však není protein p21 detekovatelný. Prokázali jsme, že exprese proteinu p21 je přímo řízena microRNA drahou ve standardních kultivačních podmínkách i po poškození DNA. DDR v hES buňkách vede ke zvýšené regulaci desítek typů microRNA, včetně rodin miR-302, miR-371-372, či C19MC microRNA cluster, které jsou specifické pro lidské embryonální kmenové buňky. Ukázali jsme, že rodiny miR-302 (MIR302A, Mir-302B, Mir-302C, a Mir-302d) se přímo podílí na regulaci exprese p21 v hESCs, a tím 2 demonstrujeme nové funkce miR -302s v hESC. Popsaný mechanismus objasňuje roli microRNA při regulaci významné molekulární dráhy řídící kontrolní bod v G1 / S přechodu před i po poškození DNA. Tyto výsledky jsou silně relevantní pro pochopení molekulárních mechanismů, které se uplatňují při udržení genomové stability lidských embryonálních kmenových buněk během propagace nediferencovaných hES buněk a během diferenciace do specializovaných buněčných typů. (Hampl) Produkce iPS a geneticky „čistých“ iPS buněk u dalších modelových druhů, testování možnosti jejich diferenciace. Provedli jsme detailní charakterizaci buněčných linií derivovaných z prasečích blastocyst. Využívali jsme několika metodologických přístupů zahrnujících morfologická pozorování, cytogenetickou analýzu, stanovení alkalické fosfatázy a detekci exprese specifických markerů na proteinové a mRNA úrovni. U námi ustanovených linií jsme sledovali nejen markery pluripotence, ale i markery diferenciace. Ve většině publikovaných prací byly prasečí embryonální kmenové buňky charakterizovány především na základě jejich morfologických vlastností, případně pomocí několika málo znaků pluripotence. Podle našeho zjištění je nezbytně nutné linie domnělých embryonálních kmenových buněk charakterizovat nejen pomocí markerů pluripotence, ale musí u nich být vyloučena exprese markerů diferenciace. Experimenty s reprogramací somatických buněk na indukované pluripotentní kmenové buňky (iPS) ukazují, že reprogramace není tak efektivní a přímočará jako reprogramace jádra pomocí techniky přenosu somatických jader do enukleovaného oocytu. Je otázkou, jestli a do jaké míry jsou tyto dva způsoby reprogramace shodné (z hlediska mechanizmu reprogramace). Na základě množství publikovaných studií o možném zefektivnění in vitro reprogramačního protokolu přidáváním různých dalších transkripčních faktorů nebo proteinů k původním 4 faktorům (Oct3/4, Sox2, Klf4 a c-Myc) je zřejmé, že tento původní protokol není definitivní. Tento postup je možné modifikovat s cílem vyšší efektivity a nižší biologické nebezpečnosti (inzerční mutageneze, používání onkogenů). S myšlenkou propojit informace dostupné pro reprogramační možnosti oocytů a in vitro reprogramačního protokolu jsme vytipovali několik proteinů oocytu s možným efektem na reprogramaci. Kontrolní transdukce somatických buněk ukázaly, že připravené vektory jsou schopné přenést informaci do buněk s vysokou efektivitou a jsou schopné navodit správnou expresi daných transgenů. Takto připravené lentivirové vektory, nesoucí informace pro námi vytipované proteiny oocytu, testujeme začleněním do původního reprogramačního protokolu. Nově jsme se zabývali výzkumem „adult“ SC – kmenových buněk získaných z dospělého jedince. Zaměřili jsme se na studium mezenchymálních kmenových buněk (MSC) získaných z matrixu pupeční šňůry koní. Cílem této části projektu bylo testování různých izolačních a kultivačních postupů pro získání maximálního možného množství MSC z tkáně pupečníku při současném zachování jejich viability, proliferačního potenciálu a pluripotence. Izolační experimenty potvrdily rozdíly výnosu buněk mezi jednotlivými izolačními a kultivačními postupy. Kultivované buňky na 3.-5. pasáži byly použity k diferenciačním experimentům a byla u nich potvrzena schopnost diferencovat do buněk adipocytů, chondrocytů a osteocytů. Sledovali jsme i možnost kontaminace kultivovaných buněk pupečníku buňkami matky. Tato kontaminace by po případné transplantaci mohla vést k nemoci GVHD (graft vs. host disease). Tato kontaminace nebyla v našich buňkách potvrzena. (Fulka, Vacková) Využití prasečích preimplantačních embryí vytvořených v podmínkách in vitro pro tvorbu jedinečných buněčných linií. V roce 2011 byly dokončeny práce na novém postupu derivace embryonálních kmenových buněk (ESC) konverzí zrajících oocytů na mitotickou buňku. Tato konverze byla indukována inkubací oocytu v metafázi I v inhibitoru Cdk1 kináz (Butyrolactone I – BLI). Během této inkubace oocyty nepokračují ve zrání a nepostoupí do metafáze II. Po vstupu do anafáze – telofáze dojde k dekondenzaci chromatinu a tvorbě pseudoprvojádra, které replikuje DNA. Po dokončení replikace následuje normální dělení a embrya dosáhnou stádia blastocysty (3040%), z nich pak bylo derivováno několik linií ESC. Tyto linie vykazovaly veškeré parametry typické pro ESC derivované z normálních embryí (Oct4, Nanog, atd.), diferencovaly do tkání všech tří zárodečných vrstev a měly vysoké zastoupení v tkáních chimér. Vzhledem k tomu, že postup 3 používá oocyty, které nedokončily zrání a jsou tak nezpůsobilé k oplození, je postup eticky akceptovatelný i pro humánní oblast. Oocyty v tomto stádiu nejsou na klinikách IVF běžně používány a likvidují se. Postup jsme vyvinuly pro oocyty myši a jeho univerzálnost ověřili na oocytech skotu. Lze tedy předpokládat s vysokou pravděpodobností, že postup bude využitelný i u humánních oocytů. Tuto možnost testujeme v současné době s klinikou IVF. Byly dokončeny experimenty týkající se mezidruhové injekce spermie myši do oocytu prasete. Další část práce se zaměřila na studium výskytu a aktivity RNA polymerázy II v oocytech prasete. Zaznamenali jsme přítomnost fosforylované formy RNA polymerázy v rostoucích oocytech, zatímco v již nerostoucím oocytu (fully grown) se tato forma téměř nevyskytuje. Dále jsem pozorovali, že RNA polymeráza II se v rostoucím oocytu vyskytuje ještě vázaná na DNA, v nerostoucím oocytu je přítomna jen ve volné formě (nevázané na DNA). Výskyt jednotlivých forem RNA polymerázy II souvisí s globálním umlčováním transkripce během vývoje oocytu. Hlavní metody použité pro studium byly nepřímá immunofluorescence a Western Blot. (Fulka, Vacková) Modifikace podmínek pro in vitro přípravu tkáňových kmenových buněk. Potvrdili jsme naši hypotézu že mikroprostředí lidských nádorů vytváří vhodné podmínky pro získání či udržení fenotypu kmenových buněk. Určili jsme spektrum cytokinů produkovaných nádorově asociovanými fibroblasty v lidském bazaliomu, které jsou odpovědné za konverzi fibroblastů do podoby mesenchymových kmenových buněk, včetně jejich diferenciační plasticity. Domníváme se, že tím byl nastíněna cesta, která by umožnila zefektivnění manipulace s tkáňovými kmenovými buňkami in vitro. Pokračovalo proteomické testování produkce cytokinů a chemokinů nádorově asociovanými fibroblasty. Dále jsme potvrdili loňský nález, že existuje silná shoda mezi expresí endogenního lektinu galektinu-1 v nádorovém stromatu a v hojícím se poranění. Prokázali jsme, že galektin-1 stimuluje konverzi normálních fibrobalstů do biologicky vysoce aktivních myofibrobastů a podporuje produkci 3-D sítí nanovláken extracelulární matrix vhodných pro buněčné kultivace a tkáňové inženýrství. (Smetana, Syková) Využití prasečích preimplantačních embryí vytvořených v podmínkách in vitro pro tvorbu jedinečných buněčných linií. Původně byly realizovány dva oddělené výzkumné směry, ale cesta k vytvoření robustních metodik, které povedou k vytvoření indukovaných pluripotentních buněk u miniprasat musí vycházet z obou buněčných zdrojů, jak z preimplantačních embryí, tak z nervových kmenových buněk. V průběhu řešení výzkumných úkolů Centra jsme se systematicky věnovali především nervovým kmenovým buňkám miniprasat. Byly vypracovány spolehlivé postupy pro jejich izolaci, propagaci v podmínkách in vitro, stejně jako pro jejich cílenou diferenciaci. Nejnovější výzkumy v oblasti indukovaných pluripotentních buněk (iPS cells) nás vedli k zahájení intenzivních experimentů i v této oblasti. V roce 2011 jsme intenzivně testovali metodiky cílené diferenciace pluripotentních buněk miniprasat. Pozornost byla soustředěna především na diferenciaci do linií ektodermálních buněk. Protože první klony iPS buněk byly vytvořeny transfekcí různých kombinací všech čtyřech, klíčových transkripčních faktorů, soustředili jsme se v tomto roce na nový přístup zaměřený na použití specifických transpozomů k indukci pluripotence u nervových kmenových buněk. Protože jsme byli úspěšní také při přípravě nervových kmenových buněk, které nesou mutovanou alelu pro lidský huntingtin, byly naše experimenty rovněž zaměřeny na přímé srovnání zdravých a huntingtonových iPS buněk. (Motlík) Sledování osteogenní diferenciace prasečích mezenchymálních kmenových buněk. Cílem pokusů bylo charakterizovat diferenciaci prasečích mezenchymových buněk do osteoblastů na kultivačním plastiku (2D prostředí) nebo ve dvou typech nosičů (3D prostředí). Osteogenní diferenciaci v 2D prostředí jsme se také snažili podpořit pomocí molekul extracelulární matrix (ECM), vitronektinu a kolagenu typu I. Mezenchymové buňky miniaturních prasat na třetí pasáži byly charakterizovány pomocí průtokové cytometrie (CD29, CD44, CD45, CD90, CD105 a CD147), vysazeny na kultivační plastik (potažený nebo nepotažený molekulami ECM) nebo do dvou typů nosičů (plazma-alginátový a plazma nosič) a kultivovány v osteogenním nebo kontrolním médiu. Morfologie a konfluence MSCs na kultivačním plastiku byla hodnocena pomocí 4 IncuCyteTM zobrazovacího systému. Charakterizaci proteinových markerů osteogenní diferenciace MSCs – osteopontinu, osteokalcinu a osteonektinu jsme uskutečnili imunofluorescenčně nebo pomocí Western blotu. Aktivita alkalické fosfatázy v kultivovaných nebo diferencovaných MSCs byla detekována kvantitativně. Po třech týdnech osteogenní diferenciace jsme zjistili změnu tvaru MSCs z vřetenovitého na kuboidální. Mimo jiné na kultivačním plastiku potaženém molekulami ECM dosáhly MSCs mnohem dříve 98% konfluenci (57 hodin po vysazení) než buňky bez molekul ECM (89 hodin po vysazení). Ze stanovení DNA v těchto monolayerech vyplývá, že rozdíl v konfluencích byl způsoben spíše odlišnou adherencí a tvarem buněk (více polygonální tvar buněk) na potaženém povrchu než lepší adherencí a proliferací. První depozita kalcia jsme pozorovali přibližně po týdnu osteogenní diferenciace. Hlavní nevýhodou plazma a plazma-alginát nosičů bylo, že MSCs zalité v centru těchto nosičů byly neaktivní a nevytvářely vlastní ECM. V 2D i 3D prostředí jsme zjistili snížení exprese osteopontinu v průběhu osteogenní diferenciace. Kulminace signálu osteonektinu v 2D prostředí byla závislá na potažení kultivačního plastiku vitronektinem a kolagenem typu I. Nejvyšší aktivitu alkalické fosfatázy a imunofluorescenční signál osteokalcinu jsme detekovali ve třech týdnech osteogenní diferenciace (bez vlivu prostředí nebo molekul ECM). Potažení kultivačního plastiku molekulami ECM urychlilo osteogenní diferenciaci prasečích MSCs, přičemž diferenciace v 2D a 3D prostředí probíhala podobně. Závěrem můžeme říci, že výsledky naší studie navrhují jako optimální čas transplantace in vitro diferencovaných prasečích MSCs do uměle vytvořených experimentálních kostních defektů prasat mezi 10. a 21. dnem diferenciace. (Motlík) Použití retrovirových vektorů pro vytváření transgenních buněčných linií a transgenních miniaturních prasat pro mutovaný huntingtin. Pokračovali jsme v embryotransferech po mikroinjekci lentivirových vektorů nesoucích informaci pro celou molekulu mutovaného lidského huntigtinu (HIV1-HD-full lenght-145Q). V tomto roce se narodilo více než 60 selat po přenosu, která byla soustavně genotypizována. V současné době máme dostatečné důkazy na úrovni genomické DNA i na úrovni mRNA, že prasnička Agáta je transgenní. Věříme, že bude tuto informaci přenášet i na své potomstvo. Dále jsme soustavně testovali reprodukční parametry F1 generace transgenních miniprasat pro N-terminální lidský mutovaný huntingtin. Jak in vivo, tak in vitro testy potvrzují, že u kanců Bruna Baba, kteří vykazovaly normální reprodukční parametry po dosažení pohlavní zralosti, dochází od stáří 14 měsíců k postupnému snižování produkce spermií a také k výraznému snížení hodnot in vitro penetračního testu. Tyto výsledky nás vedou k přesvědčení, že jsme u obou kanců postihli první známky fenotypu Huntingtonovy choroby. V roce 2011 se také narodilo více než 70 selat F2 generace transgenních miniprasat. Zásadním zjištěním je fakt, že v každém vrhu jsou přibližně stejným počtem zastoupena zdravá a transgenní selata. To znamená, že původní zjištění, že sekvence pro N-terminální část mutovaného lidského huntingtinu je lokalizována na prvním chromozomu pouze v jedné kopii je správné. Tato informace zcela sleduje v F2 generaci Mendelistickou dědičnost. Tento fakt nám dává do budoucna jedinečnou možnost sledovat všechny parametry vývoje Huntingtonovy choroby na sourozencích s naprosto identickým genetickým pozadím. Tento jedinečný model Huntingtonovy choroby je velkým příslibem do budoucnosti jak pro základní, tak aplikovaný výzkum. (Motlík) Modulace osudu buněk srdeční neurální lišty. Buňky neurální lišty se podílejí na vývoji řady orgánu. V srdci byla popsána jejich diferenciace do fibroblastů, hladkých svalových buněk, neuronů a u nižších obratlovců i do kardiomyocytů; část zřejmě zůstává nediferencována. Charakterizovali jsme buňky srdeční neurální lišty z hlediska diferenciace do specifických tkáňových linií pomocí imunohistochemických technik. S využitím buněk transgenní myší linie Wnt1-Cre/R26R, kde jsou buňky neurální lišty označeny beta galaktosidázou, jsme potvrdili jejich potenciál vytvářet různé srdeční tkáně. V budoucnu se budeme věnovat praktické využitelnosti těchto buněk pro tkáňové inženýrství (tvorba biologických srdečních náhrad). V roce 2011 jsme se dále věnovali studiu vlivu interakce genetických a epigenetických faktorů na růst a diferenciaci vyvíjejícího se srdce. Analýza embryí generovaných v předchozím roce ukázala, že endotelinová signalizace v tomto případě je 5 parakrinního charakteru, neboť tkáňově specifická delece genu pro endotelin omezená na populace s aktivním promotorem Wnt1 (tj. i buňky neurální lišty) neukázala změny v jejich diferenciaci. Rovněž nebyly prokázány funkční následky pro převodní systém srdeční, což ukazuje na spíše pasivní úlohy této buněčné populace. V budoucnu budeme navazovat studiemi na jejich vlastnosti in vitro, kterými potvrdíme naše poznatky in vivo. Na modelu transgenních myší s defekty výtokového traktu srdce (delece genu ECE1 nebo TBX1) jsme studovali vliv suplementace kyselinou listovou, která snižuje expresivitu defektů neurální trubice, na kardiovaskulární systém. Podařilo se nasbírat dostatečné množství experimentálních a kontrolních embryí na příslušných vývojových stádiích (12. a 14. den vývoje) a provádíme jejich podrobnou fenotypovou analýzu. Předběžná data jsou nadějná v tom smyslu, že dieta se zvýšeným množstvím kyseliny listové zvýšila přežívání mutantních embryí oproti kontrolám. Tyto poznatky ukazují na dosud nepoznanou možnost využití kyseliny listové i pro prevenci vrozených srdečních vad. (Grim) b) Výzkum a využití biomateriálů Studium odezvy tkáně na přítomnost transplantovaných buněk v těle experimentálního zvířete v MR obrazech a spektrech in vivo, využití hybridních nanočástic pro kombinovanou detekci transplantovaných buněk in vivo. Metody vizualizace transplantovaných buněk vyvinuté v posledních letech umožňují spolehlivou detekci buněk pomocí MRI, nicméně samotná vizualizace neposkytuje dostatečnou informaci o změnách v tkáni a funkčním zapojení implantátu. Pro posouzení změn v tkáni po transplantaci buněk in vivo lze úspěšně využít jako jednu z mála neinvazivních metod MR spektroskopii. Metoda byla odladěna a aplikována pro sledování metabolických změn v mozku potkanů s lokální ischémií léčených neurálními prekurzory. Neurální prekurzory odvozené z lidských indukovaných pluripotentních buněk (IPS-NP) by mohly být slibným nástrojem při léčbě cévní mozkové příhody a obnově neurologické funkce. Proto jsme se zaměřili na sledování metabolických změn pomocí protonové MR spektroskopie (1H MRS) ve striatální oblasti mozku potkana s lokální ischémií během čtyř měsíců po transplantaci IPS-NP. IPSNP byly implantovány do potkanů Sprague-Dawley 7 dní po dočasné okluzi a. cerebri medial (MCAO). Zvířata byla měřena na experimentálním 4.7T Bruker spektrometru. Metabolické profily byly sledovány v striatální tkáni (z léze a z kontralaterální hemisféry) pomocí PRESS sekvence s potlačením signálu vody. 1H spektra byla vyhodnocena pomocí LCModelu. Čtyři měsíce po MCAO se absolutní koncentrace metabolitů (glutamát + glutamin, N-acetylaspartát, (Fosfo) kreatin, taurin, cholin a inositol) u transplantovaných zvířat s malou lézí vrátily téměř na hodnoty naměřené u intaktních zvířat. U zvířat s velkou lézí byly koncentrace metabolitů měřené z oblasti léze nižší než u kontrolních zvířat. Histologie potvrdila přítomnost IPS-NP v oblasti léze. Některé buňky se diferencovaly na zralé a tkáňově více specifické neurony. Během celého experimentu nebyly detekovány žádné nádory. Výsledky naznačují, že IPS-NP se po transplantaci dále diferencují a integrují do striatální tkáně. Částečné zlepšení během funkčního testování podpořilo hypotézu, že transplantace IPS-NP může sloužit jako efektivní terapeutický nástroj. Přestože v minulých letech byla syntetizována celá řada nových kontrastních látek na bázi nanočástic pro značení buněk, které umožní jejich detekci po transplantaci in vivo, specificita značení stále představuje značný problém. V roce 2011 byly syntetizovány nanočástice na bázi oxidů železa, jejichž obal tvořený hyaluronovou kyselinou lze dále funkcionalizovat a tím docílit vyšší specificity značení. Konjugace určitého množství dopaminu v obalu navíc výrazně zvyšuje prostup nanočástic přes membránu a lze tak docílit vyšší efektivity značení. Buněčné značky pro MR zobrazování byly také vybaveny fluoresceinem, který umožňuje i detekci pomocí fluorescenční mikroskopie. Účinnost detekce transplantovaných buněk lze zvýšit metodou dvojího kontrastu, která aplikací standardní gadoliniové kontrastní látky zvyšuje kontrast mezi původní tkání a transplantovanými buňkami značenými nanočásticemi na bázi železa. Metoda byla úspěšně aplikována při detekci a monitorování Langerhansových ostrůvků transplantovaných do jater experimentálních diabetických 6 potkanů. Po intravenózní aplikaci Gd-BOPTA došlo k významnému zvýšení kontrastu v MR obrazu, zejména v oblastech postižených efektem částečného objemu. Metoda dvojího kontrastu významně zpřesnila kvantifikaci transplantovaných ostrůvků v MR obrazu a zpřesnila tak sledování odhojování transplantovaných ostrůvků v čase. (Hájek, Rypáček, Syková, Jendelová). Využití 3D biokompatibilních nanovlákenných nosičů k přenosu buněk do míšní léze. Implantace 3D nanovlákenných nosičů k přenosu buněk do míšní léze nebyla ze strukturálního hlediska materiálu zcela optimální pro proces regenerace nervové tkáně. Využití nanovlákenných vrstev bylo studováno pro jiné aplikace, zejména jako kožní kryty a nosiče pro řízené uvolňování léčiv. V návaznosti na předchozí rok řešení pracoviště ÚEM dále pokračovalo ve studiu nanovláken jako krytů ran v experimentálním modelu kožního poranění u potkana. Využitelnost nanovláken jako krytů ran byla prokázána pro nanovlákna připravená ze želatiny. Ve srovnání s kontrolním krytem (gáza) nanovlákna želatiny významně urychlovala průběh hojení u experimentálního modelu kožního poranění laboratorního potkana. Naopak, kožní kryt připravený z nanovláken z poly-L-kaprolaktonu průběh hojení experimentálního kožního poranění neurychloval a nebyl zde nalezen žádný výrazný rozdíl v parametrech hojení vzhledem ke kontrole. Dále jsme prostudovali přípravu nových typů polymerních nosičů (scaffold) pro regeneraci tkání na bázi syntetických poly(aminokyselin), zejména kopolymerů odvozených od kyseliny glutamové. Zvlákňováním z roztoku kopolymerů -benzyl glutamátu a -trichlorethyl-glutamátu byla připravena vlákna, která byla následně zpracována na 3D-nosiče. Prostudovali jsme modifikaci povrchu polymerních vláken jak neutrálními hydrofilními skupinami tak zavedení reaktivních skupin pro vazbu biomimetických peptidů pomocí aminolýzy alkylaminy. V předběžných experimentech jsme otestovali vliv modifikace povrchu scaffoldu na adhezi a růst mesenchymových buněk. (Syková, Jendelová, Motlík, Přádný) Modifikace povrchů polymerních biomateriálů bioaktivními strukturami. V roce 2011 byla provedena podrobná charakterizace fyzikálně-chemických vlastností vrstev technologie „Click&Seed” určená k biomimetické funkcionalizaci povrchů pro stimulaci růstu kmenových buněk. Modifikace povrchů rozdílných materiálů byla provedena pomocí polydopaminu a polyethylen oxidu (PEO). Na povrchu PEO vrstvy byla v 98 % eliminována sorpce proteinů z krevní plazmy a séra. Ve stejném rozsahu byly pozorovány repulzivní vlastnosti PEO povrchu také vůči adhezi buněk. Následná modifikace této neadherentní vrstvy byla provedena pomocí sekvence aminokyselin fibronektinu – RGDS a biologicky nefunkční varianty RDGS. Pro testování vlastností povrchů byly využity lidské embryonální karcinomové buňky 2102Ep a myší fetální fibroblasty MFF. K vyhodnocení analýz distribuce a rozprostření buněk na modifikovaném povrchu bylo rozšířeno stávající programové vybavení o vyhodnocení obrazu ve více barevných kanálech pro vyhodnocení počtu buněk, rozprostření buněk a proliferace. K tomu byly využity fluorescenční značky DAPI (jádra), Phalloidin-Rhodamin (cytoskelet) a protilátky proti Ki67, jaderný protein asociovaný s proliferací buněk. Byla vyvinuta metodika pro stanovení přesné koncentrace imobilizovaných aminokyselinových sekvencí. Zmiňované oligopeptidy fibronektinu byly značeny radioaktivním jódem 125I, což umožňovalo změřit přesnou koncentraci peptidů na každém analyzovaném vzorku. Povrchy byly modifikovány v pěti koncentracích (1.10-15 mol/cm2 až 1.1011 mol/cm2). Imobilizací ligandu RGDS ve vysoké koncentraci 10-11 – 10-13 mol/cm2 byl vytvořen substrát umožňující adhezi stejného počtu a rozprostření MFF ve srovnání s vrstvou polydopaminu, na kterém dochází také k sorpci protenů a adhezi buněk. Snížením koncentrace RGDS pod 10-13 mol/cm2 klesal počet adherovaných MFF s logaritmickou závislostí. Na oligopeptidy s přehozenou sekvencí RDGS adherovalo 50 % MFF ve vysoké koncentraci. Významné rozdíly byly pozorovány také u exprese proteinu Ki-67, který bezprostředně souvisí s proliferaci buněk. Na nízkých koncentracích ligandů vázaných k povrchu byla jeho exprese výrazně nižší, čímž je prokázána přímá souvislost mezi adhezí buněk a jejich proliferací.Výsledky experimentů tak poukazují na funkční závislost adheze a proliferace buněk na koncentraci ligandů. Následující experimenty budou zaměřeny na syntézu biomimetických molekul proteinů 7 extracelulární matrix a mezibuněčných spojů. (e.g. laminin, vitronectin, kadherin). Díky této technologii je tak k dispozici nástroj pro precizní stimulaci chování buněk pomocí ligandů s následným uplatněním poznatků v úpravě materiálů v tkáňovém inženýrství. Nově jsme vyvinuli vysoce superporézní hydrogely modifikací poly(2-hydroxyethyl-methakrylátu) (PHEMA) cholesterolem, který podporuje interakce buněk s povrchem hydrogely jsou určené jako permisivní podložky při léčbě poranění míchy. Do hydrogelů jsme zavedli veliké póry, jejichž velikost lze regulovat v rozmezí desítek až stovek mikrometrů. Vysoce superporézní cholesterolem modifikované PHEMA podložky byly připraveny radikálovou kopolymerizací 2-hydroxyethylmethakrylátu (HEMA), cholesterol-methakrylátu (CHLMA) a ethylen-dimethakrylátu (EDMA síťovadlo) v bloku za přítomnosti krystalů šťavelanu amonného, který v podložce vytvářel spojité póry. Do polymerizační násady byl navíc přidáván 2-[(methoxykarbonyl)methoxy]ethylmethakrylát (MCMEMA), který po následné hydrolýze poskytl karboxylové skupiny umožňující regulaci bobtnání a měkkosti hydrogelu. Hydrogely podporovaly in vitro adhezi a proliferaci potkaních mesenchymových kmenových buněk. Při in vivo studii akutního poranění míchy potkana byly hydrogely implantovány, aby přemostily dutinu v hemisekci míchy. Histologické řezy provedené za 4 týdny po implantaci prokázaly dobré vhojení implantovaných hydrogelů do okolní tkáně, postupující infiltraci pojivové tkáně a vrůst neurofilament, Schwanových buněk a cév do pórů hydrogelu. Výsledky ukazují, že vysoce superporézní cholesterolem modifikované PHEMA hydrogely vykazují bioadhesivní vlastnosti a jsou schopné přemostit míšní lézi. Vypracovali jsme alternativní postupy tvorby non-fouling povrchů s využitím postupů řízené radikálové polymerizace (ARP a RAFT) hydrofilních monomerů (grafting-from). Porovnali jsme vhodnost jednotlivých postupů pro různé typy povrchů a různé chemické struktury hydrofilních polymerů tvořících polymerní „brush“. Využitím kombinace fyzikálních metod jsme analyzovali kinetiku tvorby polymerních filmů, stanovili tloušťku, hustotu řetězců a fyzikální vlastnosti získaných povrchů. Připravili jsme enzymaticky degradovatelné hydrofilní homopolymery 5-(2-hydroxyethyl)glutaminu, HEG, a kopolymery HEG s L-Lysinem a L- alaninem a jejich deriváty s methakrylovými skupinami v bočních řetězcích. Na bázi těchto polyaminokyselin jsme připravili hydrofilní gely radikálovou kopolymerizací. Prostudovali jsme enzymatickou degradaci připravených lineárních kopolymerů a z nich vytvořených gelů elastázou - enzymem specifickým pro degradaci složek pojivové tkáně a extracelulární matrix. prokázali jsme vliv složení kopolymeru- specificky přítomnost aminokyseliny alaninu – na rychlost degradace polymerů i gelů tímto enzymem. (Rypáček, Hampl, Syková) c) Klinické studie a klinicky orientované experimentální modely V roce 2011 jsme do klinické studie "Autologní kmenové buňky kostní dřeně v léčbě poranění míchy" zařadili další 4 pacienty, kterým jsme suspenzi kmenových buněk kostní dřeně aplikovali intraarteriálně - cestou katetrizace vertebrální arterie. Pokračovali jsme v neurologickém sledování již transplantovaných pacientů za účelem hodnocení účinnosti a bezpečnosti této terapie. Dále jsme připravili klinickou studii "Autologní mesenchymální kmenové buňky kostní dřeně v léčbě amyotrofické laterální sklerózy". V této studii budeme u 30 pacientů s tímto neurodegenerativním onemocněním aplikovat kultivované autologní mesenchymální kmenové buňky kostní dřeně intrathekálně. Cílem studie je ověřit bezpečnost a účinnost této terapie. Protokol studie, informace o produktu a informace pro zkoušející byly předloženy ke schválení Etické komisi FN Motol a Státnímu ústavu pro kontrolu léčiv. V letošním roce, pokud bude klinická studie schválena, začne nábor prvních pacientů do studie. (Syková) Rozvoj klinických a experimentálních metod léčby diabetu transplantací inzulín produkující tkáně. Program transplantační léčby diabetu podporovaný grantovými prostředky v roce 2011 intenzivně pokračoval, takže bylo provedeno celkem 31 orgánových transplantací pankreatu a 14 klinických transplantací izolovaných Langerhansových ostrůvků. Těmito počty se 8 ČR řadí mezi nejaktivnější světová centra, která se experimentálním a klinickým vývojem v této oblasti zabývají.S výjimkou 2 osob, u kterých nevedla transplantace ostrůvků k dlouhodobé endogenní produkci C-peptidu, podařilo se u všech ostatních příjemců s diabetem 1. typu odstranit závažné epizody hypoglykémií, které představovaly hlavní indikaci k provedení ostrůvkové transplantace. Úplné nezávislosti na exogenním inzulínu se dosud podařilo ostrůvkovou transplantací dosáhnou u 4 osob. Novými prvky bylo zdokonalení enzymatické digesce exokrinní tkáně pankreatu a modifikovaná separace ostrůvků pomocí buněčného separátoru v densitním gradientu. Byla ukončena pilotní klinická studie, při níž byly využity vyvinuté experimentální metody pro in vitro značení ostrůvků nanočásticemi železa pro následnou detekci pomocí magnetické rezonance. U pacientů nově podstupujících transplantaci ostrůvků jsme zahájili studium změn textury jaterní tkáně v souvislosti s transplantačním výkonem sledovanou pomocí magnetické resonance.V experimentu jsme testovali nově připravené pozitivní kontrastní látky na bázi chelátů gadolinia a manganu a získali výsledky při použití metody využívající možnosti dvojího kontrastu pro lepší identifikaci a lokalizaci transplantovaných ostrůvků (negativní značení nanočásticemi železa a pozitivní zobrazení jaterní tkáně cheláty gadolinia). Histologickými a ultrastrukturálními metodami jsme rovněž objasnili intercelulární transport železitých kontrastních látek po transplantaci značených ostrůvkových buněk pod ledvinnou kapsulu a do portálního řečiště a tím přispěli k porozumění významu pozitivní detekce těchto nanočástic při toleranci a při rejekci. (Saudek, Hájek) Zpracování odebrané autologní kostní dřeně/kostní krve pacientů za podmínek SOP pro manipulaci s hemopoetickou tkání pro klinické použití. Bylo zjištěno, že velmi dobrým zdrojem MSC je výplach ze setů na odběr kostní dřeně po jejich použití na přípravu štěpu pro transplantace krvetvorných buněk. Chladným solným roztokem byly opláchnuty stěny vaku a zabudované filtry a ve výsledné buněčné suspenzi byla alespoň desetinásobná koncentrace buněk schopných tvořit kolonie fibroblastoidních buněk. Byly hledány optimální zdroje růstových faktorů a proteinů pro kultivaci MSC v Alpha MEM médiu.. Testováno bylo fetální telecí sérum, lidské sérum a plasma, plasma z pupečníkové krve, plasma z dřeňové krve, destičkový lyzát z trombocytů pupečníkové krve a destičkový lyzát trombocytů dospělých dárců. Nejlepší výsledky růstu MSC byly pozorovány u kultivací v médiu s destičkovým lyzátem vyrobeným z transfúzního přípravku trombocytární koncentrát. Lyzát byl používán v koncentraci 10% v médiu a tvorba fibrinu byla inhibována přítomností 5 IU heparinu na ml média Výtěžek MSC je obvykle vyšší než milion na jednu kultivační láhev 75 cm2 v prvních třech pasážích. (Kobylka) Studium vlivu kmenových buněk v léčbě experimentálního akutního selhání jater. Reverzibilní model akutního selhání jater na velkém a malém laboratorním zvířeti byl testován k transplantaci hepatocytů. Během roku bylo prováděny pokusy k MR sledování distribuce izolovaných hepatocytů označených nanočásticemi a transplantovaných malému laboratornímu zvířeti. Dalším cílem byla kultivaci porcinních hepatocytů v experimentu s bioreaktorem s nanovláknovou technologií, další práce na bioreaktoru Oliver RanD. Pokračovali jsme v měření nitrolebních laboratorních biochemických parametrů pomocí mikrodialýzy s možností hlouběji poznat patofyziologické procesy spojené s akutním selháním jater, především možnost terapeutického ovlivnění. Sledovali jsme vliv eliminačních metod a transplantovaných hepatocytů v léčbě akutního selhání jater. (Ryska) Studium možností malého bioreaktoru jaterních buněk. Použili jsme následující metodiku použití bioreaktoru: u 10 miniprasat byl proveden chirurgický model Akutního jaterního selhání (ASJ) technikou devaskularizace (portokavální anastomóza, ligace hepatické tepny). Tato zvířata jsme následně léčili pomocí bioreaktoru BAL (Bioartificial Liver). Průběh ASJ jsme monitorovali prostřednictvím laboratorních a hemodynamických parametrů včetně intrakraniálního tlaku. Výsledky jsme porovnali s kontrolní skupinou miniprasat s ASJ bez léčby. Při srovnání léčené a neléčené skupiny jsme pozorovali rozdíl pouze v sérových koncentracích bilirubinu. Rozdíl hodnot v 6. a 9. hodině je statisticky významný (p< 0,01) ve prospěch skupiny BAL (20,86 vs. 10,60, 9 22.29 vs. 11,75), rozdíl hodnot ve 12. hodině je též statisticky významný (37,4 vs. 12,88) při p<0,01. Hodnoty intrakraniálního tlaku (ICP) ve skupině léčené BAL a ve skupině kontrolní se v průběhu experimentu statisticky významně nelišily. Prokázali jsme tudíž funkčnost zapojení bioeliminační metody (BAL) u námi vytvořeného chirurgického modelu ASJ. Dosáhli jsme iniciální 85% viability čerstvých izolovaných prasečích hepatocytů a jejich přežívání po celou dobu, kdy byl bioreaktor použit k léčbě. Vyjma koncentrace bilirubinu naše výsledky neprokázaly signifikantní změny hodnot laboratorních ukazatelů ASJ. Naměřené hodnoty nitrolebního tlaku se statisticky významně nelišily ve skupině s léčbou akutního selhání jater napojením na BAL a v kontrolní skupině. (Ryska, Motlík) 2. Komentář k týmu: V r. 2011 nenastaly žádné podstatné změny v řešitelském kolektivu, které by ohrozily časový harmonogram řešení dílčích úkolů Centra. Pracovní náplně jednotlivých pracovníků Centra přijatých na řešení projektu byly v souladu s původním návrhem. Několik mladších pracovníků v jednotlivých řešitelských týmech Centra odešla (Dr. Burian, Dr. Krylov, Dr. Šušor, Dr. Usvald, Dr. Hrdličková) a byla proto nahrazena jinými pracovníky (Dr. Beneš, Dr. Dmytrenko, Dr. Jirák, Dr. Mareková, Dr. Sedmera, Dr. Fulková, Dr. Nováková, Dr. Říhová, Dr. Deylová). 3. Zdůvodnění vynaložených prostředků: Účelová dotace na provoz Centra byla v r. 2011 čerpána dle následujícího rozpisu: Investiční prostředky: Nebyly přiděleny Neinvestiční prostředky: Věcné náklady spotřebního charakteru byly použity na nákup laboratorních zvířat, plynů, běžných chemikálií, chemikálií pro syntézu polymerů, protilátek pro imunohistochemii, kultivačních médií, kultivačního plastiku, růstových faktorů, imunochemikálií pro fenotypizaci buněk, reakčních činidel a meziproduktů pro syntézu peptidů, čistých proteinů pro studium jejich sorpce, fluorescenčních barviv, filmů a fotografických papírů, RTG materiálu, chirurgického spotřebního materiálu, spotřebního kancelářského materiálu, anestetik, léků, steliva a krmiva pro laboratorní zvířata, zdravotnického materiálu, náhradních dílů k polymerizačním aparaturám. Náklady na drobný hmotný a nehmotný majetek byly použity na nákup drobných chirurgických nástrojů, laboratorního skla, drobných laboratorních přístrojů a zařízení apod. Náklady na služby byly použity např. na úhradu výkonů spojů, oprav a údržbu přístrojů, na fotografické práce, publikační náklady a na zvěřincové služby. Náklady na cestovné byly využity na úhradu výdajů spojených s uskutečněním služebních cest na zahraniční a tuzemské kongresy, kde se aktivní formou presentovaly výsledky výzkumu financované z prostředků Centra. Mzdové prostředky byly použity pro pracovníky, kteří se podíleli na řešení úkolů Centra. Specifikace položek hrazených z prostředků nositele a spolunositelů Z prostředků nositele a spolunositelů byly hrazeny mzdy kmenových pracovníků institucí podílejících se na řešení výzkumných úkolů Centra a odpovídající sociální a zdravotní pojištění. 10 Režijní výdaje kryly náklady na energie a na služby spojené s provozem jednotlivých institucí (např. knihovnické služby, praní prádla, zvěřincové služby, a pod.). 4. Přehled změn, které nastaly: V r. 2011 nenastaly žádné změny, které by ohrozily plnění výzkumných úkolů projektu. 5. Plnění smlouvy o spolupráci Dne 1.12.2004 byla mezi Univerzitou Karlovou v Praze, Ústavem živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i., Ústavem experimentální medicíny AV ČR, v.v.i., Institutem klinické a experimentální medicíny a Ústavem hematologie a krevní transfuze podepsána dohoda o založení Centra buněčné terapie a tkáňových náhrad jako společného pracoviště k řešení projektu MŠMT č. 1M0538. V průběhu celého období řešení projektu, t.j. v l. 2005-2011, se tato smlouva plnila bez výhrad jakékoliv smluvní strany, pro úspěšné splnění dílčích úkolů byly všem smluvním stranám zajištěny převody finančních prostředků, jak ze zdrojů MŠMT, tak i od jednotlivých sponzorů. Účastníci smlouvy dle smluvních podmínek dodali veškeré podklady pro vypracování průběžné smlouvy. 6. Plnění podmínek programu Všechny podmínky programu byly splněny. Výzkumné centrum se podílelo na uskutečňování doktorských studijních programů a na pracovištích centra byli vzděláváni studenti doktorských studijních programů. Na činnosti centra se rovněž pracovně podíleli studenti magisterských a doktorských studijních programů. Byla splněna podmínka účelové podpory a finančního podílu příjemce podpory. V l. 2005-2011 se podařilo zajistit sponzorské dary zajištěné na řešení projektu ve výši více než 10% celkových uznaných nákladů ročně. Přehled finančních darů na činnost Centra v r. 2011: UK v Praze, 2.LF Buněčná terapie, obč. sdružení AET, s.r.o. Traders, s.r.o. UK v Praze, 1.LF Česká spol. HPB chirurgie BioTech, a.s. ITA, s.r.o. ÚŽFG, v.v.i. Výzkumný ústav živ. výroby Maneko, s.r.o. Wichterle & Vacík, s.r.o. Watrex, s.r.o. Medicem, s.r.o. Siemens, s.r.o. Nadace Karla Pavlíka ÚHKT CELKEM 500.000 Kč 400.000 Kč 690.000 Kč 241.000 Kč 100.000 Kč 200.000 Kč 450.000 Kč 60.000 Kč 60.000 Kč 200.000 Kč 80.000 Kč 120.000 Kč 100.000 Kč 100.000 Kč 240.000 Kč 300.000 Kč 89.000 Kč 3.930.000 Kč 11 7. Výsledky řešení projektu v r. 2011: Impaktované publikace: Jsou uvedeny v závěrečném přehledu impaktovaných publikací za l . 2005-2011 na konci této zprávy Neimpaktované publikace: 1. Havlas, V., Kos, P., Jendelová, P., Lesný, P., Trč, T., Syková, E.: (2011) Comparison of Chondrogenic Differentiation of Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells with Cultured Chondrocytes and Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells. Acta Chir. Orthop. Traumatol. Cechoslov. 78(2): 138-144 Abstrakta: 1. Amemori T., Romanyuk N, Jendelova P, Herynek V, Turnovcova K, Marekova D, Kapcalova M, Price J, Sykova E. Human fetal spinal stem cells improve locomotor function after spinal cord injury in the rat. Glia 2011, 59 suppl. 1: S84-S85. 10th European meeting on Glial Cells in Health and Disease, Prague, 13-17 September, 2011. 2. Baranovicova, L., Kubinova, S., Marekova, D., Sykova, E. (2011): Differentiation of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells into neuron-like cells on IKVAV-modified hydrogel scaffolds. Stem Cells / Tissue Engineering: From Bench to Bedside 6th Annual Congress of the German Society for Stem Cell Research, November 20 – 22, 2011 Duesseldorf · Germany 3. Baxa, M., Hruška-Plocháň, M., Juhás, Š., Vodička, P., Pavlok, A., Juhásová, J., Šolc, P., Klíma, J., Marsala, S. , Miyanohara, A. , Weiss, A. , Vrtel, R. , Kubíčková, S. , Musilová, P., Cattaneo, E. , Difiglia, M.,Marsala, M. , Motlík, J. (2011) F1 And F2 Generations Of Treansgenic Miniature Pig Expressing The N-Terminal Truncated Mutant Human Huntigtin. V Meeting On The Molecular Mechanisms Of Neurodegenaration 13-15. May 2011, Milan, Italy. 4. Brynda, E., T. Riedel, J. Chlupáč, E. Filová, and L. Bačáková. Endothelization of synthetic vascular prostheses modified with surface fibrin network. Hemocompatibility of Biomaterials: State of the Knowledge and New Developments, Dresden, September 8-9, 2011. 5. Doležalová, D., Mráz, M., Bárta, T., Vinarský, V., Holubcová, Z., Kubíčková, M., Jaroš, J., Dvořák, P., Pospíšilová Š., Hampl, A. (2011) Role microRNA v regulaci odpovědi na poškození DNA u lidských embryonálních kmenových buněk. In Chemické listy, vol. 105 (5), 321-436. 6. Forostyak S., Jendelova P., Kapcalova M., Arboleda D., Sykova E. Cambridge Centre for Brain Repair Spring School 2011: Restructuring the Deconstructing Brain: Neurodegeneration and its Repair. Poster presentation: Disease prognosis in a rat model of familial amyotrophic lateral sclerosis: the effect of treatment with bone marrow mesenchymal stem cells. Cripps Court, Magdalene College, 29.3-1.4.2011 Cambridge, UK. 7. Forostyak S. Scientific conference of 2nd medical faculty 2011. Oral presentation “Bone marrow mesenchymal stem cells change disease prognosis in a rat model of familial amyotrophic lateral sclerosis”. Charles University, Prague, Czech Republic. 8. Herynek V, Babič M, Jendelová P, Horák D, Syková E, Hájek M. Dopamine-hyaluronate conjugate-coating improves efficency of maghemite probes. WMIC 2011, poster no.P059. San Diego, California, 7.-10.9.2011. 12 9. Herynek V, Babič M, Horák D, Jendelová P, Francová P, Syková E, Hájek M. Effect of dopamine-hyaluronate coating of maghemite probes on relaxivity and cellular uptake. 28th Ann Sci Meeting ESMRMB, no. 305, Leipzig, Oct 6-8, 2011. 10. Hobzová R., Kostina N., Mareková D., Širc J., Michálek J.: Incorporation of bioactiva ligand to methacrylate hydrogel surface through avidin-biotin complex for targeted cell cultivation , POLYCHAR 19 World Forum on Advanced Materials, Katmandu, Nepál, 20.-24.3.2011, ISBN 9937-2-3292-9 [P] 11. Hobzová, R., M. Dušková-Smrčková, Z. Karpushkin, J. Michálek, P. Gatenholm: Kompozitní materiály na bázi syntetického hydrogelu a bakteriální celulózy. 63. Zjazd chemikov , Tatranské Matliare, Slovensko, 5.-9.9.2011. 12. Horák D, Babič M, Jendelová P, Herynek V. Multifunctional magnetic nanoparticles for cell imaging. EUROPEAN BIOPHYSICS JOURNAL WITH BIOPHYSICS LETTERS 2011, 40 Suppl. 1:228-228. 8th EBSA European Biophysics Congress Location: Budapest, HUNGARY, AUG 23-27, 2011. 13. Hrubá A., Fales I., Langkramer- Konrádová Š. Kultivace mesenchymálních buněk z kostní dřeně v médiích bez fetálního telecího sera II. Celostátní konference Bioimplantologie 2010, Brno 14. Hrubá A., Fales I., Langkramer Konrádová Š., Rahmatová Š., Kobylka P. Příprava alogenních MSC pro potenciální využití při transplantacích krvetvorných buněk. Ústav hematologie a krevní transfuze, Praha Celostátní konference Bioimplantologie 2011, Brno 15. Hruška-Plocháň, M., Juhás, Š., Juhásová, J., Galik, J. , Miyanohara, A. , Marsala, M. , Bjarkam, C. R., Cattaneo, E., Difiglia, M.,Motlík, J. Acute porcine model of Huntington's disease-a candidate for pre-clinical tests. 7th FENS Forum of European Neuroscience 3-7.June 2010, Amsterdam, The Netherlands. 16. Jaroš, J., Proks, V., Pop-Georgievski, O., Kučka, J., Popelka, Š., Rypáček, F., Hampl, A. “Click&Seed” system – biomimetic modification of 2D and 3D surfaces to control the cell behaviour. In XX. Biologické dny. Plzeň, Česká republika. 25.-27.10.11. 17. Jaroš J., Proks V., Dvořák P., Rypáček F., Hampl A. Modifikace povrchů unikátním systémem „Click&Seed“ za účelem stimulace chování adherentních buněk. In Bioimplantologie 2011., Brno Česká republika. 14-15.4.2011 18. Jaroš J., Proks V., Pop-Georgievski, O., Kučka, J., Popelka, Š., Rypáček F., Hampl A. Biomimetic control of cell behaviour by substrate independent modification with “Click&Seed” system. In World conference on regenerative medicine, Leipzig, Německo, 2.5.11.2011 19. Jendelova P, Hejcl A, Kozubenko N, Amemori T, Sykova E. Stem cells and biomaterials for the treatment of spinal cord injury, 2011, Glia, 59 (S1) S14. 20. Jendelova P., Nanotechnology in regenerative medicine of the brain and spinal cord. 10th International Congres of the Polish Neuroscience Society, Lodz, September 21-24, 2011 21. Jendelová, P., A. Hejčl, M. Přádný, E. Syková Macroporous polymer hydrogels can serve as scaffolds and cell carriers for the treatment of spinal cord injury. 4th International Conference on Tissue Engineering, 31.5.-5.6. 2011, Chania, Crete, GreeceAegean Cenferences series Vol55, p 123 22. Jendelova P, Kozubenko N, Amemori T, Turnovcova K, Jirak D., Sykova E. The treatment of brain and spinal cord injury using human induced pluripotent stem cell-derived neural 13 precursors Joint Conference of the Czech and Slovak Neuroscience Societies. Smolenice Castle, Slovakia, May 18.-21. 2011 23. Jendelova P, Kozubenko N, Amemori, T, Turnovcova K, Seminatore C, Jirak D, Onteniente B, Sykova E. The use of human induced pluripotent stem cell-derived neural precursors in brain and spinal cord injury, 2011 Cell transplantation, 20 (4), 565. 24. Jirak D, Turnovcova K, Kozubenko N, Jendelova P, Hajek M. Metabolic Changes in the Focal Brain Ischemia in Rats Treated with Human Induced Pluripotent Cell-Derived Neural Precursors. 4177, ISMRM 19th Ann Meeting and Exhibition, Montreal, May 7-13, 2011. 25. Kapcalová M., Mareková D., Babič M., Syková E,Jendelová P.The effect of different nanoparticle coatings on human mesenchymal stromal cell proliferation and migration Joint Conference of the Czech and Slovak Neuroscience Societies. Smolenice Castle, Slovakia, May 18.-21. 2011 26. Kapcalová, M., D. Mareková, E. Syková, P. Jendelová The effect of iron oxide nanoparticle labeling on human mesenchymal stromal cell proliferation and migration. Vědecká konference 2. lf UK 2011 13.-14.4. Praha, Motol. 27. Kozubenko N, Turnovcova K, Seminatore C, Jirak D, Onteniente B, Jendelova P, Sykova E. Treating experimental stroke with human-induced pluripotent stem cell-derived neural precursors, 2011, Cambridge Centre for Brain Repair Spring School 2011, abstract book p.1516. 28. Kubinova S, Forostyak S, Hejcl A, Baranovicova L, Horak D, Plichta Z, Proks V, Sykova E. SIKVAV-modified poly(2-hydroxyethyl methacrylate) hydrogel scaffolds with oriented channels for spinal cord injury treatment. Histol Histopathol, 26 (supplement 1), 2011. 32.P12 29. Kubinova S, Forostyak S, Hejcl A, Baranovicova L, Arboleda D, Sykova E. SIKVAVmodified hydrogel scaffolds for neural differentiation and the treatment of spinal cord injury. 30. Kubinova S, Baranovicova L, Marekova D, Horak D, Plichta Z, Proks V, Sykova E. Neural differentiation of adipose-derived mesenchymal stem cells on IKVAV-modified superporous hydrogel scaffolds. Regenerative Medicine, November 2011, Volume 6, 31. Michálek J., Fenclová T., Přádný M., Chmelíková D.: Commonly mentioned disinformation in contactology. 41th ECLSO Congress, Istanbul, Turecko, 9.-11.9.2011, [P] 32. Michálek J., Širc J., Hobzová R., Přádný M., Kostina N., Holáň V., Munzarová M., Biocompatible nanofibrous constructs targeted for control delivery of selected drugs XII. European Polymer Congress (EPF 2011), Granada, Spain, 26th June - 1st July 2011, [Poster]. 33. Pop-Georgievski, O., M. O. Diesner, D. Verreault, V. Proks, P. Koelsh, and F. Rypáček. Nonfouling Poly(ethylene oxide) Layers End-tethered ˝to-˝ Polydopamine: Effects of Chain Length, Density, Conformation and Distal Chemistry. 13th International SAOT Workshop on Nonlinear Optics and Interfaces, Erlangen, Germany, 26.-27.04.2011. 34. Proks, V., Jaroš, J., Pop-Georgievski, O., Kučka, J., Popelka, Š., Hampl, A., Rypáček, F. (2011) Click&Seed approach to the biomimetic modification of material surfaces. In Polymers for Advanced Technologies, Lodz, Polsko, 2.-5.10.2011 35. Proks, V.,Jaroš, J.,Pop-Georgievski, O.,Kučka, J.,Popelka, Š.,Hampl, A.,Rypáček, F. (2011) Click&Seed strategie biomimetické modifikace povrchů. ChemZi.. 7, 13, 108-109. In Zjazd chemikov, Tatranské Matliare, Slovensko, 5.-9.9.2011 36. Přádný M., Rampichova M., Martinova L., Košťáková E., Filová E., Koláčná L., Michálek J., Lukáš D., Amler E.: Nanofibers from poly(2-hydroxyethyl methacrylate) and poly(vinyl 14 alcohol)/chitosan as suitable scaffolds for tissue engineering. International conference on nanotechnology research and commercialization, Kota Kinabalu, Malajsie, 6.-9.6.2011, [P] 37. Riedel, T., E. Brynda, J. Chlupáč, E. Filová, L. Bačáková, and J. E. Dyr. Modification of vascular prostheses with surface fibrin network promotes endothelization. 24th European Conference on Biomaterials, Dublin, Ireland, 4. - 9. September, 2011. 38. Romanyuk N, Amemori T, Turnovcová K, Jendelová P, Onteniente B, Price J, Syková E. Using human fetal neural stem cells or human induced pluripotent stem cell-derived neural precursors for the treatment of experimental spinal cord injury, 2011, IBRO, B089, Session Title: 04. Stem cells: neural injury & repair (Stem cells). 39. Romanyuk N, Amemori T, Turnovcová K, Jendelová P, Onteniente B, Syková E. Treating experimental spinal cord injury with human induced pluripotent stem cell-derived neural precursors, 2011, Glia, 59 (S1) S122. 40. Romanyuk N, Amemori T, Turnovcová K, Jendelová P, Forostyak O, Dayanithi G, Onteniente B, Price J, Syková E. Treating experimental spinal cord injury with human fetal neural stem cells or human induced pluripotent ctem cell-derived neural precursors, 2011, Regenerative Medicine, November 2011 Vol. 6 No.6(Suppl. 2), P145. 41. Rypáček, F., E. Chánová, J. Svobodová, T. Sedlačík, H. Studenovská, and V. Proks. Biodegradable and Biomimetic Polymer Materials for Tissue Engineering. International Symposium on Biomaterials and China-Japan-Korea Foresight Joint Symposium on Gene Delivery, May 29 - Jun 2, 2011, Guilin City, Guangxi Province, China. (Invited lecture) 42. Rypáček, F., Polymer Biomaterials for Future: The Tissue Regeneration/Engineering Concept calls for Biomaterials with Bulit-in Information. FUMAT 2011: Future Materials for Grand Challenges of our time, Warsaw, Poland, 22-23.9.2011. (Invited lecture) 43. Rypáček, F., E. Chánová, V. Proks, Š. Popelka, O. Pop-Georgievski, and J. Svobodová. Biomimetic surfaces of polymer biomaterials for tissue engineering. Polymers for Advanced Technologies (PAT 2011), Lodz, Poland, 2nd – 5th October, 2011, 2011. (Invited lecture) 44. Ryska O., Pantoflicek T., Ryska M.: Acute liver failure – animal models and experimental treatment. In: Book of Abstracts. Budapest: CECS 2011. s. 23 45. Sedlačík, T. and F. Rypáček. Cryogelation of synthetic poly(alpha-amino acid)s. Anonymous. Anonymous. 2011. 3rd International Congress on Biohydrogels, November 8-12, 2011 Florence, Italy. (Oral presentation) 46. Studenovská, H., P. Vodička, V. Proks, J. Juhásová, J. Motlík, and F. Rypáček. 3D porous biomimetically modified hydrogels supporting stem cells adhesion. 24th European Conference on Biomaterials, and Annual Conference of the European Society for Biomaterials, Dublin, Ireland, September 4 - 9, 2011.(PSIII-630:S119, 2011.) 47. Svobodová, J. and F. Rypáček. Electrospinning of poly(gamma-benzyl-L-glutamate) nanofibres: the effect of polymer molecular weight and spinning conditions in various solvents. XII. European Polymer Congress (EPF 2011), 26th June - 1st July 2011, Granada, Spain. 48. Syková, Jendelová, Homola, Stem cells and the treatment of spinal cord injury: preclinical and clinical studies. 4th International Conference on Tissue Engineering, 31.5.-5.6. 2011, Chania, Crete, GreeceAegean Cenferences series Vol55, p 126 49. Turnovcova K., Romanyuk N., Kapcalova M., Jirak D., Burian M., Onteniente B., Sykova E., Jendelova P.: Different types of in vitro-derived neural precursors for the treatment of brain and spinal cord injury in the rat. Analytical Cytometry VI, Prague, Czech Republic, 8. – 11. 10. 2011, No. 61, p. 15 50. Turnovcova K., Romanyuk N., Onteniente B., Jirak D., Sykova E., Jendelova P.: Induced pluripotent cell-derived neural precursors in the treatment of focal brain ischaemia in rats. Regenerative Medicine, November 2011, Volume 6, Number 6s World Conference on Regenerative Medicine, Leipzig, Germany, 2. – 4. 11. 2011, Oral Presentation OP-127 51. Vetrík M., Hrubý M., Přádný M., Krumbholcová E., Michálek J.: Acid-biodegradable hydrogels for esophageal stents. POLYCHAR 19 World Forum on Advanced Materials, Katmandu, Nepál, 20.-24.3.2011, ISBN 9937-2-3292-9 [P] 52. Zacharovova, K., Z. Berkova, E. Dovolilova, D. Jirak, F. Saudek, Rejection of islets labeled with superparamagnetic nanoparticles (spio). Artificial Insulin Delivery Systems Pancreas and Islet Transplantation, Igls, Rakousko, leden 2011 53. Zacharovova, K., Z. Berkova, E. Dovolilova, D. Jirak, F. Saudek, Detection of rat islets labeled with superparamagnetic iron oxide nanoparticles (SPIO) during rejection. International Pancreas and Islet Transplant Association, Praha, červen 2011 8. Přínos projektu za celou dobu řešení 2005-2011 Cílem projektu "Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad" v l. 2005-2011 bylo uplatnit ověřené postupy získané v oblasti výzkumu buněčných zdrojů, biokompatibilních hydrogelů a nosičů pro užití v klinické praxi a připravit klinické zkoušky. Výsledky Centra získané v oblasti výzkumu buněčných zdrojů a experimentálních modelů buněčné terapie, v oblasti výzkumu a využití biomateriálů, v oblasti klinických studií a klinicky orientovaných experimentálních modelů byly publikovány v časopisech s přísným recenzním řízením, a byly využity při provádění klinických studií a při přenosu poznatků do lékařské praxe. Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad koordinovalo výzkum a vývoj v oblasti buněčné terapie onemocnění CNS, diabetu, jaterního selhání, náhrad chrupavek, kostí a kožních náhrad v ČR. Centrum bylo základnou pro systematickou postgraduální výchovu a místem intenzivní mezinárodní spolupráce. a) Přínos projektu v oblasti výzkumu buněčných zdrojů V rámci Centra byly zavedeny kultivace lidských embryonálních buněk a provedena jejich diferenciace do neurálních prekursorů. Ty je pak transplantovali potkanům s modelem iktu. Získali jsme tak nové poznatky o chování a tumorogenicitě kmenových buněk. Naše výsledky významně přispěly k charakterizaci neurálních prekurzorů z hlediska bezpečné transplantace do živých systémů. Vyvinuli jsme a otestovali nové magnetické nanočástice, vhodné ke značení transplantovaných buněk. Tato metoda umožnila sledování migrace transplantovaných buněk i tvorbu případných tumorů během života experimentálních zvířat. V klinických studiích využívajících buněčnou terapii bude implementace této metody velice důležitá. Dále jsme vyvinuli a otestovali několik polymérních materiálů, které slouží k přemostění chronických míšních lézí i jako nosiče transplantovaných kmenových buněk. Tyto materiály v kombinaci s kmenovými buňkami významně zlepšily neurologický deficit způsobený míšní lézí i po půl roce od transplantace. Otevírá se tak možnost léčit i chronicky poškozenou míchu. Dále jsme vyvinuli novou metodu měření protonové spektroskopie, která ukázala, že transplantace kmenových buněk může ovlivnit i metabolity v opačné, než poškozené hemisféře. Navíc, u zvířat s transplantovanými neurálními prekurzory lze sledovat i nárůst metabolitů typických pro nervové buňky. Společně jsme tedy vyvinuli novou neinvazivní metodu, kterou je možné sledovat osud transplantovaných buněk v mozku. 16 Významným přínosem projektu byl vývoj a realizace několika technologií pro kultivaci a definici molekulárních mechanismů lidských embryonálních kmenových buněk. V rámci funkční a molekulární charakterizace lidských embryonálních kmenových buněk byly nově popsány významné molekulární mechanismy lidských embryonálních kmenových (hES) buněk: i) schopnost aktivovat G1/S kontrolní bod včetně funkčnosti molekul identifikovaných u somatických buněk. Byl také popsán mechanismus objasňující roli microRNA při řízení kontrolního bodu G1/S před a po poškození DNA. ii) dlouhodobou kultivací hES buněk v in vitro podmínkách se snižuje účinnost bázově excizního opravného mechanizmu (BER), což může mít přímý vliv na zvýšenou frekvenci mutací a tím na nestabilitu genomu hES buněk jako celku. iii) centrozomální abnormality zodpovědné za genetickou/chromozomální nestabilitu hES buněk kultivovaných in vitro, přičemž bylo ukázáno, že toto riziko lze snížit zásahem do adheze buněk či do aktivity některých regulátorů (CDK, Aurora A). Byla vytvořena unikátní technologie “Click&Seed” umožňující biomimetickou funkcionalizaci povrchů pro podporu růstu a stimulace chování kmenových buněk. Metoda umožňuje modifikovat povrchy z rozdílných materiálů s přesným řízením koncentrace vázaných ligandů a zároveň zabránit nespecifické sorpci proteinů z okolního prostředí. Technologie je navržena tak, aby bylo možné navázat v podmínkách kterékoliv biochemické laboratoře požadované ligandy (peptidy, fragmenty proteinů). Poznatky z planárního modelu budou využity při analýzách třírozměrných struktur, čímž bude možné definovat molekulární mechanismy vlivu daných ligandů s ohledem na 3D prostředí. Testováním trojrozměrných nosičů na bázi nanovláken a hydrogelů byl vypracován komplexní aparát pro analýzu buněk kultivovaných v 3D biomateriálech. Byly definováno vhodné složení a parametry, které mají podpůrný vliv na udržení nediferencovaného stavu lidských embryonálních kmenových buněk a z nich derivovaných neurálních progenitorů. Tyto poznatky budou využity při aplikaci kmenových buněk v tkáňovém inženýrství a buněčné terapii. V průběhu řešení projektu jsme vypracovali řadu postupů buněčných terapií s ohledem na jejich využití v humánní medicíně. Jednalo se především o terapie oocytů, kde byl hlavní cíl eliminace mutované mtDNA (mitochondriální DNA). Ta se dědí výhradně maternálně a pokud je mutovaná, znamená to zpravidla výskyt devastující choroby u potomka. Bylo navrhnuto několik schémat, které v podstatě představují přenos jaderného materiálu z defektního oocytu do cytoplastu, který je připraven enukleací normálního oocytu získaného od dárce. Uplatnění lze předpokládat i obecně v asistované humánní reprodukci při řešení problémů aneuploidií, nekvalitní cytoplasmy oocytů, atd. Postup derivace ESC konverzí meiosy na mitosu představuje eticky akceptovatelnou cestu produkce linií ESC.Navíc by tento postup využil oocyty, které jsou obecně na klinikách IVF likvidovány. Kmenové buňky získané z prasete mohou sloužit jako vhodný zvířecí model. Jasně definované embryonální kmenové buňky nebyly dosud odvozeny. Problémem se zdá být nevhodný kultivační systém, který je problémem i u iPS prasečích buněk. Naše výzkumy potvrdily, že prasečí ES buňky je třeba charakterizovat nejen na základě jejich morfologických vlastností a potvrzením exprese několika markerů pluripotence, ale je třeba otestovat i panel markerů diferenciace. Je zřejmé, že embryonální kmenové buňky některých živočišních druhů důležitých pro biomedicínský výzkum (např. prasečí) nejsou dosud uspokojivě definovány. A to jak z hlediska jednoznačné identifikace (exprese markerů pluripotence není tak jasně definována jako v případě myších nebo lidských ES buněk), tak hlavně z hlediska technologie izolace a kultivace těchto buněk. Námi popsaný systém pro testování faktorů (exogenních/vliv kultivačního systému a endogenních/exprese vybraných faktorů) umožňuje efektivní hledání vhodných podmínek pro derivaci a kultivaci zvířecích pluripotentních buněk. Vnášení vytipovaných proteinů oocytu pomocí lentivirových vektorů by mohlo přinést vyšší efektivitu reprogramace doprovázenou nižší biologickou nebezpečností indukovaných pluripotentních buněk. Výzkum je zatím prováděn na lidských buňkách, u kterých byl jasně definován vhodný kultivační systém. Získané informace budou využity i u prasečího modelu. Detailní charakterizace MSC izolovaných z pupečníku přináší hlubší vhled do mechanismů regenerativní medicíny. Používání velkých savců jako modelu pro studium 17 MSC skýtá výhodu z hlediska etických problémů práce s humánním materiálem a poskytuje nadlimitní množství tkáně potřebné pro izolační experimenty. Množství mesenchymálních buněk, které je možné izolovat z tkáně pupečníku, představuje uspokojivé depo materiálu použitelného pro transplantační léčebné postupy na rozdíl od pupečníkové krve, jejíž objem je již při odběru velmi omezený a procento kmenových buněk v ní je velmi nízké. Riziko použití kmenových buněk spočívá především v nutnosti delší kultivace in vitro. Udržování těchto kultur je obtížné a může docházet k poškození buněk neoptimálními kultivačními podmínkami (oxidativní stres), které vyvolávají takzvaný „kultivační stres“. Buňky za těchto podmínek zpravidla ztrácí svůj pluripotentní charakter a mění se v jiný buněčný typ. Proto jsme se zaměřili na stanovení optimálního izolačního postupu, při kterém bude získáno z výchozího materiálu co největší množství žádaných buněk a nebude nutná následná dlouhodobá kultivace in vitro. Možnost správné a detailní charakterizace MSC na molekulární úrovni umožní sledování jejich okamžité reakce na kultivační podmínky a podmíní tak jejich správnou optimalizaci. Pokusili jsme se objasnit důvody rozporuplných výsledků aktivní demetylace paternálního prvojádra pozorovaných u modelového druhu prasete. V průběhu této studie byly prověřeny tři možné faktory - technika produkce embryí, faktory spermie a kvalita oocytů. Během studie se ukázalo, že technika produkce embryí (klasické IVF versus ICSI) zásadním způsobem neovlivňuje výslednou epigenetickou remodelaci paternálního prvojádra. Dále, spermie se zdá být pasivní složka remodelace; spermie v oocytech jiného druhu jsou remodelovány způsobem, jaký je typický pro druh, ze kterého je odvozen oocyt. Kvalita oocytu se může podílet na schopnosti oocytu vytvořit paternální prvojádro, nicméně rozdíl ve schopnosti epigenetické remodelace jsme nepozorovali. Výsledky nám umožňují lépe pochopit obecný mechanismus remodelace paternálního prvojádra. Zároveň výsledky potvrzují rozdíl v remodelaci typické pro jednotlivé druhy savců. Poznatky jsou důležité v oblasti biologie reprodukce a také nabízejí potenciální možnost využití mezidruhového iICSI pro analýzu lidských spermií v oblasti asistované reprodukce. Část práce věnující se výskytu RNA polymerázy II v oocytech prasete nám ukazuje změny, které probíhají během vývoje oocytu. Za významný přínos projektu považujeme prioritní zjištění významné molekulární paralely mezi nádorovým stromatem a hojící se ránou včetně mikroprostředí, které stimulačně působí na okolní buňky tak, že se svým fenotypem podobají buňkám kmenovým (epitelová kmenová buňka, mesenchymová kmenová buňka). Jako klíčový element tohoto mikroprostředí byl určen nádorově asociovaný fibroblast, který parakrinním způsobem ovlivňuje buňky ve svém okolí a inhibuje jejich diferenciaci. Mikrochipovou a proteomickou analýzou byly určeny diferencovaně exprimované geny u těchto fibroblastů a byly navrženy kandidátní cytokiny, které se podílejí na tomto procesu. Tyto cytokiny jsou schopné po přidání do kultivačního média významným způsobem ovlivňovat okolní buňky, což přispívá k šíření nádoru. Tato znalost však může být využita i k in vitro expanzi kmenovým buňkám podobných elementů a tím i pro regenerativní medicínu. Jako další vhodná molekula byl vytipován endogenní lektin galektin-1, který je typickou bohatě exprimovanou molekulou nádorového stromatu a granulační tkáně hojící se rány.Tento galektin indukuje spolu s TGF-β vznik myofibroblastů podobných nádorově-asociovaným fibroblastům a buňkám odpovědným za kontrakci rány. Zároveň indukuje produkci 3-D sítě nanovláken extracelulární matrix vhodné pro buněčné kultury a tkáňové inženýrství. Výsledky získané studiem nádorového stromatu byly patentově chráněny. Byl vyvinut jedinečný biomedicínský model miniaturních prasat. V současné době disponujeme F0, F1 a F2 generacemi transgenních miniprasat pro N-terminální část lidského mutovaného huntingtinu. Tento model nám zaručuje širokou mezinárodní spolupráci v oblasti studia patofyziologie Huntingtonovy choroby a současně je příslibem pro testování nových farmak i nových molekulárně genetických přístupů pro budoucí léčení této neurodegenerativní choroby. Největším příslibem pro budoucí základní i aplikovaný výzkum v oblasti neurodegenerativních onemocnění je fakt, že v každém vrhu F2 generace jsou zdravá a transgenní selátka v poměru 1:1. 18 Vývoj fenotypu Huntingtonovy choroby může být srovnáván na naprosto identickém genetickém pozadí. Tento model je prostřednictvím firmy BIOTEST nabízen pro farmakokinetické testování potencionálních léčiv. Na modelu miniprasat jsme vypracovali jedinečné, počítačem řízené zařízení, které umožňuje naprosto opakovatelné, svoji intenzitou odstupňované poškození míchy. O praktické uplatnění této metodiky je zájem jak od farmaceutických firem, tak od laboratoří, které se věnují transplantaci kmenových buněk. Popsali jsme metodu izolace neembryonálních kmenových buněk neurální lišty izolovaných z vlasových folikulu. K jejich identifikaci, analýze a k experimentálním studiím byly použity vlasové folikuly dospělých transgenních myších a jejich vlastnosti byly porovnávány s buňkami neurální lišty izolovanými z myších embryí. V další fázi byla izolace a identifikace těchto buněk ověřena a potvrzena na buňkách získaných z lidských vlasových folikulů. Předností těchto dospělých kmenových buněk je snadná dostupnost v pacientově kůži. Nebudou se proti nim tvořit protilátky a s jejich přípravou nebudou spojeny etické problémy jako je tomu u embryonálních kmenových buněk. Dospělé kmenové buňky neurální lišty proto představují významný potenciální zdroj buněk pro účely výzkumu, pro regenerativní medicínu a buněčnou terapii. V oblasti výzkumu faktorů řídících diferenciaci buněk neurální lišty v srdci jsme prokázali, že endotelinová signalizace v této buněčné populaci nemá vliv na diferenciaci převodního systému. Oproti tomu jsme potvrdili, že se podílí na patogenezi vrozených vývojových vad výtokové části, a pilotní pokusy naznačily možnost terapeutické ovlivnění pomocí suplementace kyselinou listovou. Hlavním dosaženým přínosem, podloženým dvěma publikačními výstupy, je charakterizace modelu srdečního selhání u laboratorního potkana na morfologické a proteomické úrovni. Tento model jednoho z nejpalčivějších problémů současné kardiologie nám do budoucna umožní testovat další nové terapeutické intervence, které mohu přispět ke medicínskému řešení této novodobé epidemie. b) Přínos projektu v oblasti výzkumu a využití biomateriálů Metody vizualizace transplantovaných buněk vyvinuté v posledních letech umožnily detekci buněk pomocí MRI. Vizualizace vyžaduje značení buněk pomocí kontrastních látek. MR vizualizace byla podstatně zlepšena pomocí nově syntetizovaných nanočástic s modifikovaným povrchem, který zvyšuje průnik nanočástic do buněk. Díky tomu lze detekovat podstatně nižší počty buněk v tkáni in vivo. Úspěšně byly testovány a následně využity v experimentální práci nanočástice na bázi oxidů železa s modifikovaným povrchem pomocí poly-L-lysinu, manózy, polydimetylakrylamidu. Byla testována viabilita, účinnost značení a relaxivita suspensí značených buněk. Viabilita buněk nebyla přidáním jednotlivých nanočástic ovlivněna a účinnost značení byla ve všech případech vyšší než při použití komerční látky, i když mechanismus transportu částic do buněk se lišil. Nejlepších výsledků bylo dosaženo s nanočásticemi potaženými PLL. Modifikace nanočástic na bázi oxidů železa hyaluronovou kyselinou umožňuje další funkcionalizaci povrchu a tím lze docílit vyšší specificity značení. Konjugace určitého množství dopaminu v obalu navíc výrazně zvyšuje prostup nanočástic přes membránu a lze tak docílit vyšší efektivity značení. Buněčné značky pro MR zobrazování byly také vybaveny fluoresceinem, který umožňuje i detekci pomocí fluorescenční mikroskopie. Dále byla vyzkoušena možnost zvýšit účinnost detekce transplantovaných buněk metodou dvojího kontrastu, která aplikací standardní gadoliniové kontrastní látky zvyšuje kontrast mezi původní tkání a transplantovanými buňkami značenými nanočásticemi na bázi železa. Metoda byla úspěšně aplikována při detekci a monitorování Langerhansových ostrůvků transplantovaných do jater experimentálních diabetických potkanů. Po intravenózní aplikaci Gd-BOPTA došlo k významnému zvýšení kontrastu v MR obrazu. Metoda dvojího kontrastu významně zpřesnila kvantifikaci transplantovaných ostrůvků v MR obrazu a zpřesnila tak sledování odhojování transplantovaných ostrůvků v čase. Potenciál buněčných transplantací v případě mozkových lézí na experimentálním modelu potkana byl ověřen pomocí in 19 vivo 1H MR spektroskopie. Spektroskopie prokázala, že po podání mesenchymálních buněk dochází k rychlejší adaptaci potkana. Přestože nebyly pozorovány statisticky významné změny v koncentraci klíčových metabolitů v lézi u potkanů s transplantovanými buňkami a u potkanů neléčených, metoda však prokázala, že funkci poškozené hemisféry přebírá kontralaterální hemisféra rychleji po transplantaci mesenchymálních buněk. Transplantované buňky tak významně stimulovaly vlastní regenerační procesy potkana. Metoda 1H MR spektroskopie též prokázala rychlejší regeneraci tkáně v případě lokální ischémie vyvolané okluzí cerebrální artérie po transplantaci neurálních prekurzorů. Neurální prekurzory odvozené z lidských indukovaných pluripotentních buněk by mohly být slibným nástrojem při léčbě cévní mozkové příhody a obnově neurologické funkce. Metabolické profily byly sledovány v striatální tkáni (z léze a z kontralaterální hemisféry). Po čtyřech měsících byla pozorována úplná (u malých lézí) nebo částečná (u velkých lézí) regenerace absolutních koncentrací metabolitů u transplantovaných zvířat. Histologie potvrdila přítomnost neurálních prekurzorů v oblasti léze. Některé buňky se diferencovaly na zralé a tkáňově specifické neurony. Výsledky naznačují, že buňky se po transplantaci dále diferencují a integrují do striatální tkáně. Funkční testování podpořilo hypotézu, že transplantace může sloužit jako efektivní terapeutický nástroj. V průběhu řešení projektu Centra byly vyvinuty nové typy polymerních biomateriálů s vlastnostmi specificky přizpůsobenými účelu jejich použití jako nosičů buněk pro regeneraci tkání a tkáňové inženýrství. Zejména jde tyto nové typy biomateriálů: a) hydrofilní chemicky síťované polymerní gely, tzv. hydrogely, na bázi poly(alkyl methakrylátů) s řízenou porozitou a širokou škálou mechanických vlastností a b) nové biodegradovatelné polymery s různými mechanismy biodegradace, které zahrnují jak prostou spontánní hydrolýzu u polymerů na bázi alifatických polyesterů, tak selektivní degradaci působením určitého faktoru v prostředí, např. změnou pH, přítomností reduktivních sloučenin, až po selektivně degradovatelné polymery na bázi syntetických poly(aminokyselin), jejichž polypeptidický řetězec je selektivně degradován enzymy aktivními v regenerující se tkáni. Dále byly vyvinuty nové postupy pro formování 3D struktury polymerních nosičů – scaffoldů – zahrnující přípravu gelů s trvale přítomnými superpóry ( 60 -150 mm), přípravu polymerních vláken a scaffoldů tvořených jejich slinutím do 3D-struktury vláknité plstě a přípravu nanovláken a jejich formování do membrán a vícevrstvých nosičů tvořených kombinací syntetických nanovláken a přírodních polymerů (např. kolagen, kys. hyaluronová). Byly prostudovány a úspěšně aplikovány nové postupy modifikace povrchů biomateriálů biologicky aktivními molekulami, jako jsou proteiny extracelulární matrix (kolagen, laminin, fibronektin) nebo biomimetickými peptidy odvozenými jako segmenty proteinů ECM lamininu a fibronektinu (RGDS, YIGSR, REDV apod.). V pokusech s buněčnými kulturami byl prostudován vliv biomimetických modifikací na adhezi a proliferaci buněk osídlujících polymerní nosič. Vyvinuly jsme nové responsivní mikročástice a nanočástice jejichž vlastnosti a chování v biologickém prostředí selektivně reagují na vnější stimuly, např. na změnu teploty, nebo magnetické částice citlivé k aplikaci magnetického pole. Biokompatibilní paramagnetické nanočástice s upraveným povrchem zabraňujícím jejich agregaci a podporující jejich průnik do buněk byly úspěšně aplikovány pro značení kmenových buněk. V průběhu spolupráce mezi chemiky a biology byly na půdorysu Centra vytvořeny funkční mezioborové týmy z různých institucí, schopné komplexně řešit mezioborovou problematiku vývoje nových biomateriálů a jejich aplikace v regenerativní medicíně, efektivně využívající jak znalosti makromolekulární chemie a chemického inženýrství tak biologie a medicíny. Vedle nových poznatků, které budou dále rozvíjeny, jsou to právě týmy schopné řešit komplexní problematiku na pomezí lékařských a inženýrských oborů jsou významným pozitivním faktorem pro budoucí přínosy. c) Přínos projektu v oblasti klinických studií a klinicky orientovaných experimentálních modelů 20 Klinická studie "Autologní kmenové buňky kostní dřeně v léčbě poranění míchy" vznikla v roce 2003 ve spolupráci s Neurologickou klinikou FN Motol a dosud bylo do ní zařazeno celkem 41 pacientů. Jejím cílem je ověřit bezpečnost a účinnost systémového podání autologních kmenových buněk kostní dřeně v léčbě pacientů s poraněnou míchou. Kmenové buňky byly získány od pacientů izolací mononukleárních buněk z kostní krve aspirované z lopaty kosti kyčelní. Způsob aplikace kmenových buněk byl rozdělen na formu intraarteriální a intravenózní. Intraarteriální cestou (katetrizací arteria vertebralis) byly kmenové buňky podány 10 pacientům. Ostatním pacientům byly kmenové buňky aplikovány intravenózně (katetrizací periferní žíly). U skupiny deseti pacientů s intraarteriálním způsobem podání došlo v sedmi případech ke zlepšení motorických nebo senzorických funkcí. Ze skupiny pacientů s intravenózní aplikací jsme neurologické zlepšení zaznamenali u 11 (ze 31) pacientů. Pokud jsme porovnávali výsledky u skupiny pacientů s chronickým (déle než 30 dní po úraze) a subakutním (do 30 dní po úraze) poraněním míchy, buněčná terapie vyzněla lépe ve prospěch časného podávání: z 19 subakutních pacientů jsme částečné klinické zlepšení zaznamenali u 14 z nich. Naopak z 22 chronických pacientů se zlepšilo pouze pět. Z pomocných vyšetření jsme pro sledování našich pacientů využívali elektrofyziologické (motorické a somatosezorické evokované potenciály) a MRI vyšetření. Elektrofyziologické vyšetření dobře korelovalo s případným motorickým nebo senzorickým zlepšením. Naproti tomu kontrolní MRI vyšetření neprokázalo jiné změny v ložisku myelopatie než regresi edému nebo krvácení. Sledování detailních změn v místě poranění míchy však bylo často limitováno artefakty z kovových implantátů, používaných při chirurgické stabilizaci poraněných obratlů. První pacienti prodělali transplantaci kmenových buněk v roce 2003 a doposud jsme u žádného z nich nezaznamenali žádné komplikace, které by vznikly v souvislosti s buněčnou terapií. Rovněž pomocí kontrolních vyšetření MRI míchy jsme vyloučili strukturální léze, které by odpovídali formaci novotvarů. Tato studie potvrdila bezpečnost intraarteriální a intravenózní aplikace autologních kmenových buněk kostní dřeně u pacientů s traumatickou míšní lézí. Vzhledem k faktu, že na zlepšení neurologického deficitu se v akutní fázi poranění míchy může podílet i ústup míšního šoku nebo regrese edému míchy, je nutné provádět hodnocení na co možná největším souboru pacientů. Proto plánujeme do této studie zařadit další pacienty. Klinická studie „Použití dřeňových kmenových buněk v léčbě ischemické choroby dolních končetin u pacientů se syndromem diabetické nohy“ byla zahájena ve spolupráci ÚEM a Centra diabetologie Institutu klinické a experimentální medicíny. Do studie bylo zařazeno 14 pacientů (11 mužů, 3 ženy, průměrný věk 61,9 ± 9,6 roku, průměrné trvání diabetu 23,5 ± 11,1 roku, průměrný glykovaný hemoglobin 6 ± 1 %). Osm pacientů bylo léčeno buňkami z kostní dřeně, 6 pacientů buňkami z periferní krve po stimulaci filgrastimem. Získaná suspenze kmenových buněk byla pak aplikována do svalů postižené dolní končetiny. Byl hodnocen vzestup hodnot transkutánní tenze kyslíku (TcPO2), subjektivní vnímání bolesti podle Visual Analog Scale (VAS) a hojení defektů. U všech pacientů došlo po intramuskulární implantaci buněk k signifikantnímu vzestupu TcPO2 z 10 ± 8,7 mm Hg před léčbou na 39,4 ± 9,5 mm Hg po 6 měsících (p = 0,0005) od aplikace. Dále byla pozorována signifikantní redukce plochy defektů a snížení bolesti, hodnocené VAS během sledovaného období: medián plochy defektu se snížil ze 4,3 (0,7–31,7) cm2 před léčbou na 0,06 (0– 0,5) cm2 po 6 měsících od léčby (p = 0,0078). Snížení klidových bolestí bylo pozorováno u všech pacientů, průměrná hodnota VAS se snížila z 5,3 ± 1,8 před léčbou na 1,1 ± 1,3 po 6 měsících po aplikaci (p = 0,002). Hodnocená inovativní léčba syndromu diabetické nohy pomocí kmenových buněk je dle výsledků studie u pacientů s těžkou ischémií dolních končetin účinnou metodou bez závažných nežádoucích účinků, která zvyšuje transkutánní tenzi kyslíku, zlepšuje hojení defektů a vede ke zmírnění klidových bolestí. V oblasti zpracovávání odebrané kostní dřeně přínosem projektu bylo zejména systematické zpracovávání odebrané autologní kostní dřeně/kostní krve pacientů za podmínek SOP pro manipulaci s hemopoetickou tkání pro klinické použití. Systematicky se dařila příprava frakce 21 mononukleárních buněk sedimentační technikou s cílem redukovat erytrocytární kontaminaci pod hranici 5% původního množství za použití uzavřeného/polouzavřeného systému vaků, dále sledování buněčné bilance manipulace a ve finálním produktu zjišťování standardním způsobem buněčnosti a procenta CD34+ progenitorů. Úprava objemu produktu a zkoncentrování na požadovaný objem maximálně 20 ml, případně méně, se rutinně dařila a tudíž jednotlivá podání deponovala do tkáně relevantní množství buněk. Pokud byly buňky podávány i.v. cestou, redukovataný objem odebrané kostní krve snížil množství heparinu v produktu. Zvětšení rozsahu kohorty sledovaných pacientů po autologním podání kmenových buněk umožňuje kvantifikovat regenerační efekt buněčné terapie. Právě dlouhodobé sledování kohorty pacientů umožňuje validní závěry o potenciálním efektu zákroku na proces hojení nervové tkáně. Praktické zkušenosti získané během celého projektu umožňují rozšíření indikací autologního použití buněk kostní dřeně v oblasti regenerace cév u pacientů s chronickou ischemickou chorobou dolních končetin (ICHDK), a u vybraných případů tzv. diabetické nohy. Zhodnotili jsme efektivitu nebiologického eliminačního léčebného postupu u akutního selhání jater v experimentu na resekčním modelu u velkého laboratorního zvířete a posoudit tak použitelnost metody na úrovni ROLE 3. Těžké poranění jater vede v mnoha případech k těžké devastaci jaterní tkáně s následným rozvojem jaterní dysfunkce různého stupně, v nejtěžších případech k akutnímu jaternímu selhání (AJS). Urgentní ošetření někdy vyžaduje provést pro nekontrolovatelné krvácení resekční výkon, který spolu s ischemicko – reperfuzním poškozením může stávající jaterní dysfunkci či počínající AJS ještě prohloubit. Tyto situace vznikají vznikající jak v mírových podmínkách, tak i při válečných konfliktech či teroristických útocích, vedou bez léčby k smrti postiženého v 65 - 80 %. Přínos projektu byl v zmapování možnosti použití eliminační metody, která by – v podobě dialýzy u nemocného s renálním selháním – po určitou dobu nahradila funkci selhaných jater a tím umožnila regeneraci jaterního parenchymu nebo provedení jaterního přenosu. Dále projekt umožnil nácvik úspěšného použití této metody v experimentu a ozřejmil možnosti jejího zavedení do klinické praxe v případech léčby těžkého poranění jater. V oblasti výzkumu transplantace Langerhansových ostrůvků jsme nejprve dokončili přípravné experimentální práce u zvířat a doplnit přístrojové vybavení a jeho adaptaci. Poté jsme zahájili klinický program transplantace izolovaných Langerhansových ostrůvků u člověka a tím realizovali klinickou aplikaci nové metody tkáňové a buněčné transplantace. Do konce roku 2011 bylo v IKEM provedeno celkem 62 transplantací ostrůvků a to u 39 příjemců. V 15 případech se jednalo o pacienty se syndromem porušeného vnímání hypoglykémie, z nichž 4 podstoupili celkem 3 implantace, 6 podstoupilo 2 implantace a u 5 osob byla provedena implantace jen jedna. Ve 3 případech byla současně transplantována játra a ostrůvky, 5 byla provedena kombinovaná transplantace ledviny a ostrůvků. V 5 případech byla provedena autotransplantace ostrůvků u pacientů, kteří podstoupily totální pankreatektomii a ostrůvky byly izolovány z jejich vlastního pankreatu. Podařilo se tak přiřadit ČR mezi přední světová pracoviště, která se transplantační léčbou diabetu a její inovací zabývají. Originálních výsledků jsme dosáhli v oblasti neinvazivního zobrazování transplantovaných ostrůvků pomocí magnetické resonance. In vitro metoda byla díky interdisciplinární spolupráci v rámci projektu dovedena k vypracovaní vhodné experimentální metody u zvířat až po pilotní zavedení do humánní medicíny. V této oblasti byly principy metody široce přijaty a citovány v literatuře. Podařilo se zavést modely diferenciace a proliferace prekursorových linií buněk pankreatu, které se částečně mění v buňky schopné inzulínové sekrece. Lze tudíž shrnout, že vytvoření Centra buněčné terapie a tkáňových náhrad UK přispělo v rámci ČR k vytvoření zcela unikátních mezioborových týmů pro základní a aplikovaný výzkum v oblasti buněčné terapie s možností uplatnění získaných výsledků pro užití v lékařské praxi. Význam Centra v letech 2005-2011 rovněž spočívá i ve výchově mladých výzkumných pracovníků, a propojení pracovišť, vyjádřené m.j. 176 společnými impaktovanými publikacemi s celkovým 22 IF=572,504, 6 patenty a 2 klinickými studiemi. Téměř všichní mladí pracovníci, vychovaní v Centru, pokračují ve výzkumu v dané oblasti. Na základě výzkumné činnosti Centra vznikly 2 spin-off firmy (Chondros, s.r.o. a CellNova, s.r.o.), jejichž prostřednictvím se získané výsledky budou uplatňovat v lékařské praxi. 9. Výsledky řešení projektu v impaktovaných časopisech v l. 2005-2011 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 2005 Bryja, V., Čajánek, L., Pacherník, J., Hall, A.C., Horváth, V., Dvořák, P., Hampl, A. (2005) Abnormal development of mouse embryoid bodies lacking p27Kip1 cell cycle regulator. Stem Cells, 23: 965974. IF 5,500 Syková E., Voříšek I., Antonova T., Mazel T., Meyer-Luehmann M., Jucker M., Hájek M., Ort M. and Bureš J. (2005) Changes in extracellular space size and geometry in APP23 transgenic mice - a model of Alzheimer’s disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:479-484. IF 10,272 Dvořák, P., Dvořáková, D., Košková, S., Vodinská, M., Najvirtová, M., Krekáč, D., Hampl, A.: (2005) Expression and potential role of fibroblast growth factor 2 and its receptors in human embryonic stem cells. Stem Cells, 23: 1200-1211. IF 5,500 Ogushi, S., Fulka, Jr., J. a Miyano, T. (2005) Germinal vesicle materials are requisite for male pronucleus formation but not for change in the activities of CDK1 and MAP kinase and fertilization of pig oocytes. Developmental Biology 286, 287 -298. IF 5,432 Brynda, E., Pacherník, J., Houska, M., Pientka, Z.; Dvořák, P.: (2005) Surface-immobilized protein multilayers for cell seeding. Langmuir, 21:7877-7883. IF 3,295 Chovanec, M., Smetana, K., Jr., Betka, J., Plzák, J., Brabec, J., Moya-Álvarez,, V., André, S., Kodet, R., Gabius, H.-J. (2005) Correlation of expression of nuclear proteins pKi67 and p63 with lecitin histochemical features in head and neck squamous cell cancor. Int. J. Oncol. 27: 409-415 IF 3,056 Dvořánková, B., Smetana, K., Jr., Chovanec, M., Lacina, L., Štork, J., Plzáková, Z., Galovičová, M., Gabius, H.-J. (2005) Transient expression of kreatin 19 is induced in originally negative interfollicular epidermal cells by adhesion of suspended cells. Int. J. Molec. Med. 16: 525-31 IF 3,190 Kriz J, Jirák D, Girman P, Berková Z, Zacharovova K, Honsova E, Lodererova A, Hajek M, Saudek F.(2005) Magnetic resonance imaging of pancreatic islets in tolerance and rejection. Transplantation 80: 1596-1603. IF 3,568 Andersson B, Bjelke B, Syková E. (2005) Temporal profile of ultrastructural changes in cortical neurones after a compression lesion. Physiol Res. IF 1,140 Berkova Z, Kriz J, Girman P, Zacharovova K, Koblas T, Dovolilova E, Saudek F. (2005) The vitality of pancreatic islets labeled for magnetic resonance imaging with iron particles. Transplant. Proc. 37: 3496-3498. IF 0,511 Dvořák, P., Hampl, A.: (2005) Basic fibroblast growth factor and its receptors in human embryonic stem cells. Folia Histochemica et Cytobiologica, 43: 203-208. IF 0,672 Jendelová P, Herynek V, Urdzíková L, Glogarová K, Rahmatová S, Fales I, Andersson B, Procházka P, Zámečník J, Eckschlager T, Kobylka P, Hájek M, Syková E. (2005) Magnetic resonance tracking of human CD34+ progenitor cells separated by means of immunomagnetic selection and transplanted into injured rat brain. Cell Transplant., 14:173-82. IF 2,497 Kieslichova E, Ryska M, Pantoflicek T et al: (2005) Hemodynamic parameters in a surgical devascularization model of fulminant hepatic failure in the minipig. Physiol Res 54: 485 – 490 IF 0,939 Klima J, Smetana K Jr, Motlik J, Plzakova Z, Liu FT, Stork J, Kaltner H, Chovanec M, Dvorankova B, Andre S, Gabius HJ. (2005) Comparative phenotypic characterization of keratinocytes originating from hair follicles. J Mol Histol. 36:89-96. IF 0,068 Koblas T, Girman P, Berkova Z, Jirak D, Kriz J, Dovolilova E, Zacharovova K, Hajek M, Saudek F. (2005) Magnetic resonance imaging of intrahepatally transplanted islets using paramagnetic beads. Transplant. Proc. 37: 3493-3495. IF 0,511 23 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 32. 33. 34. Kren, R., Fulka, J. a Fulka, H. (2005) Cryopreservation of isolated mouse germinal vesicles. Journal of Reproduction and Development. 51, 289-292. IF 0,42 Krylov, V., Kren, R., Okada, K., Vackova, I., Tlapakova, T., Fulka, J. (2005) Effect of protein supplement source on porcine oocyte maturation and subsequent embryonic development after parthenogenetic activation. Folia Biol (Praha). 51(2):29-33. IF 0,507 Náměstková K, Šimonová Z, Syková E. (2005) Decreased proliferation in the adult rat hippocampus after exposure to the Morris water maze and its reversal by fluoxetine. Behav Brain Res. 163:26-32. IF 2,992 Pacherník, J., Bryja, V., Ešner, M., Hampl, A., Dvořák, P.: (2005) Retinoic acid-induced neural differentiation of P19 embryonal carcinoma cells is potentiated by leukemia inhibitory factor. Physiol Res., 54(2): 257-62. IF 1,140 Přádný, M., Lesný, P., Smetana, K. Jr., Vacík, J., Šlouf, M., Michálek, J., Syková E. (2005) Macroporous hydrogels based on 2-hydroxyethyl methacrylate. Part 2: Copolymers with positive and negative charges, polyelectrolyte complexes. J. Mater. Sci. Mater. Med., 16:767-73. IF 1,128 Syková E. (2005) Glia and volume transmission during physiological and pathological states, J. Neural. Transm., 112:137-47. IF 2,628 Syková E, Jendelová P. (2005) Magnetic resonance tracking of implanted adult and embryonic stem cells in injured brain and spinal cord. Ann. N Y Acad. Sci., 1049:146-60. IF 1,789 Vodicka P, Smetana K Jr, Dvorankova B, Emerick T, Xu YZ, Ourednik J, Ourednik V, Motlik J. (2005) The miniature pig as an animal model in biomedical research. Ann N Y Acad Sci. 1049:16171. IF 1,8 2006 Anděrová M, Kubinová S, Jelitai M, Neprašová H, Glogarová K, Prajerová I, Urdzíková L, Chvátal A, Syková E. (2006) Transplantation of embryonic neuroectodermal progenitor cells into the site of a photochemical lesion: immunohistochemical and electrophysiological analysis. J Neurobiol. 66:1084100. IF 4,170 Dvořák, P., Dvořáková, D., Hampl, A. (2006) Fibroblast growth factor signaling in embryonic and cancer stem cells. FEBS Letters, 580:2869-2874. IF 3,415 Fulková, H. a Fulka, Jr., J. (2006) No differences in the DNA methylation pattern in mouse zygotes produced in vivo, in vitro, or by intracytoplasmic sperm injection. Fert Steril 86,1534-1536.IF 3,114 Kilb W, Dierkes PW, Syková E, Vargová L, Luhmann Hj. (2006) Hypoosmolar conditions reduce extracellular volume fraction and enhance epileptiform activity in the CA3 region of the immature rat hippocampus. J Neurosci Res. 84:119-29. IF 3,374 Sieber-Blum M, Schnell L, Grim M, Schneider R, Schwab ME (2006) Characterization of epidermal neural crest stem cell (EPI-NCSC) grafts in the lesioned spinal cord. Mol Cell Neurosci 32: 67 - 81, IF 3,789 Fulka, J., Fulková, H., Slavík, T., Okada, K. a Fulka, Jr., J. (2006) DNA methylation pattern in pig in vivo produced embryos. Histochem Cell Biol 126, 213-217. IF 2,239 Gál, P., Toporcer, T., Vidinský, B., Mokrý, M., Novotný, M., Kilík, R., Smetana, K., Jr., Gál, T., Sabo, J.: Early changes in tensile strength and morphology of primary sutured skin wounds in rats. Folia Biol. 52: 109-115, 2006 IF 0,719 Homola A, Zoremba N, Šlais K, Kuhlen R, Syková E. (2006) Changes in diffusion parameters, energy-related metabolites and glutamate in the rat cortex after transient hypoxia/ischemia. Neurosci Lett. 404:137-42. IF 1,898 Horák D., Adamyan A., Golubeva O., Skuba N., Vinokurova T. (2006) Poly(2-hydroxyethyl methacrylate) microspheres/liquid poly(dimethylsiloxane) composition for correction of small defects in face: histological evaluation in animal experiment, J. Mater. Sci., Mater. Med. 17, 123-129. IF 1,248 Kroupová, J.; Horák, D.; Pacherník, J.; Dvořák, P.; Šlouf, M. (2006) Functional polymer hydrogels for embryonic stem cell support. J. Biomed. Mater. Res., 76:315-325. IF 1,621 Lacina, L., Plzáková, Z., Smetana, K., Jr., Štork, J., Kaltner, H., André, S.: Glycophenotype of psoriatic skin. Folia Biol. 52: 10-15, 2006 IF 0,719 24 35. 36. 37. 38. 39. 40. 41. 42. 43. 44. 45. 46. 47. 48. Lacina, L., Smetana, K., Jr., Dvořánková, B., Štork, J., Plzáková, Z., Gabius, H.-J. (2006) Immunoand histochemical profilig of nucleostemin expression: Marker of epidermal stem cells? J. Dermatol. Sci. 44: 73-80, IF 2.0 Lesný P, Přádný M, Jendelová P, Michálek J, Vacík J, Syková E. (2006) Macroporous hydrogels based on 2-hydroxyethyl methacrylate. Part 4: Growth of rat bone marrow stromal cells in threedimensional hydrogels with positive and negative surface charges and in polyelectrolyte complexes. J Mater Sci Mater Med. 17:829-33. IF 1.248 Okada, K., Krylov, V., Křen R. and Fulka, J. Jr. (2006) Development of Pig Embryos after Electroactivation and In Vitro Fertilization in PZM-3 or PZM Supplemented with Fetal Bovine Serum. J Repr Dev 52, 91-98. IF 1,3 Přádný M, Michálek J, Lesný P, Hejčl A, Vacík J, Šlouf M, Syková E. (2006). Macroporous hydrogels based on 2-hydroxyethyl methacrylate. Part 5: Hydrolytically degradable materials. J Mater Sci 17:1357-64. IF 1.128 Smetana, K., Jr., Dvořánková, B., Chovanec, M., Bouček, J., Klíma, J., Motlík, J., Lensch, M., Kaltner, H., André, S., Gabius, H.-J. (2006) Nuclear presence od adhesion-/growth-regulatory galectins in normal/malignant cell of squamous epithelia origin. Histochem. Cell Biol. 125: 171-182, IF 2,594 Syková E, Jendelová P, Urdzíková L, Lesný P, Hejčl A. (2006) Bone marrow stem cells and polymer hydrogels - two strategies for spinal cord injury repair. Cell Mol Neurobiol. IF 2,022 Syková E, Homola A, Mazanec R, Lachmann H, Langkramer Konrádova Š, Kobylka P, Pádr R, Neuwirth J, Komrska V, Vávra V, Štulík J, Bojar M. (2006) Autologous bone marrow transplantation in patients with subacute and chronical spinal cord injury. Cell Transplan. 15(8-9):675-87 IF 2,497 Šedý J, Tseng S, Walro JM, Grim M, Kucera J (2006) ETS Transcription factor ER81 is required for the Pacinian Corpuscle Development. Dev Dyn 235: 1081-1089 IF 2,868 Urdzíková L, Jendelová P, Glogarová K, Burian M, Hájek M, Syková E. (2006) Transplantation of bone marrow stem cells as well as mobilization by granulocyte-colony stimulating factor promotes recovery after spinal cord injury in rats. J Neurotrauma. 23:1379-91. IF 2.574 Vackova, I., Kren, R., Loi, P., Krylov, V. and Fulka, J. Jr. (2006) The absence of DNA replication checkpoint in porcine zygotes. Zygote 14, 33-37. IF 1,124 Vodicka P., Skalnikova H., Kovarova H. (2006) The Characterization of stem cell proteomes. Curr Op Mol Ther, 8:232-239. IF 2,701. 2007 International Stem Cell Initiative, Adewumi, O., Aflatoonian, B., Ahrlund-Richter, L., Amit, M., Andrews, P.W., Beighton, G., Bello, P.A., Benvenisty, N., Berry, L.S., Bevan, S., Blum, B., Brooking, J., Chen, K.G., Choo, A.B., Churchill, G.A., Corbel, M., Damjanov, I., Draper, J.S., Dvorak, P., Emanuelsson, K., Fleck, R.A., Ford, A., Gertow, K., Gertsenstein, M., Gokhale, P.J., Hamilton, R.S., Hampl, A., Healy, L.E., Hovatta, O., Hyllner, J,, Imreh, M.P., Itskovitz-Eldor, J., Jackson, J., Johnson, J.L., Jones, M., Kee, K., King, B.L., Knowles, B.B., Lako, M., Lebrin, F., Mallon, B.S., Manning, D., Mayshar, Y., McKay, R.D., Michalska, A.E., Mikkola, M., Mileikovsky, M., Minger, S.L., Moore, H.D., Mummery, C.L., Nagy, A., Nakatsuji, N., O'Brien, C.M., Oh, S.K., Olsson, C., Otonkoski, T., Park, K.Y., Passier, R., Patel, H., Patel, M., Pedersen, R., Pera, M.F., Piekarczyk, M.S., Pera, R.A., Reubinoff, B.E., Robins, A.J., Rossant, J., Rugg-Gunn, P., Schulz, T.C., Semb, H., Sherrer, E.S., Siemen, H., Stacey, G.N., Stojkovic, M., Suemori, H., Szatkiewicz, J., Turetsky, T., Tuuri, T., van den Brink, S., Vintersten, K., Vuoristo, S., Ward, D., Weaver, T.A., Young, L.A. a Zhang, W. (2007) Characterization of human embryonic stem cell lines by the International Stem Cell Initiative. Nat Biotechnol. 25, 803-816. IF 22,672 Syková E, Jendelova P. (2007) Migration, fate and in vivo imaging of adult stem cells in the CNS. Cell Death Digger 14(7), 1336-42. IF 7.463 Skalníková, H., Halada, P., Vodička, P., Motlík, J., Řehulka, P., Horning, O., Chmelík, J., Jensen, O. N., Kovářová, H. (2007) A proteomic approach to studying the differentitation of neural stem cells. Proteomics, 7, 1825-1838, IF 5,735 25 49. 50. 51. 52. 53. 54. 55. 56. 57. 58. 59. 60. 61. 62. 63. 64. 65. 66. Fulková, H. a Fulka, Jr., J. (2007) The use of micromanipulation methods as a tool to prevention of transmission of mutated mitochondrial DNA. Current Topics in Developmental Biology 77, 187-211. IF 3,246 Horák D., Babič M., Jendelová P., Herynek V., Trchová M., Pientka Z., Pollert E., Hájek M., Syková E. (2007) D-mannose-modified iron oxide nanoparticles for stem cell labeling, Bioconjugate Chem 18, 635-644. IF 3,823 Chvátal, A., Anděrová, M., Hock, M., Prajerová, I., Neprašová, H., Chvátal, V., Kirchhoff, F., Syková, E. (2007) Three-dimensional confocal morphometry reveals structural changes in astrocyte morphology in situ. J. Neurosci. Res. 85:260-271 IF 3,378 Jelitai M, Anděrová M, Chvátal A, Madarász E. (2007) Electrophysiological characterization of neural stem/progenitor cells during in vitro differentiation: a study on an immortalized neuroectodermal cell line J. Neurosci. Res. 85(8):1606-17 IF 3,378 Lacina, L., Smetana, Jr., K., Dvořánková, B., Pytlík, R., Kideryová, L., Kučerová, L., Plzáková, Z., Štork, J., Gabius, H.-J., André, S. (2007) Stromal fibroblasts from basal cell carcinoma affect phenotype of normal keratinocytes Brit. J. Dermatol. 156, 819-829. IF 3.343 Neprašová H, Anděrová M, Petřík D, Vargová L, Kubinová Š, Chvátal A, Syková E. (2007) High extracellular K+ evokes changes in voltage-dependent K+ and Na+ currents and volume regulation in astrocytes. Pflugers Arch. 453: 839-849 IF 3,564 Šedý J, Urdzikova L, Likavcanova K, Hejcl A, Burian M, Jendelova P, Zicha J, Kunes J, Sykova E. (2007) Low concentration of isoflurane promotes the development of neurogenic pulmonary edema in spinal cord injured rats. J Neurotrauma,1487-501. IF 3.453 Zoremba N, Homola A, Rossaint R, Syková E. (2007) Brain metabolism and extracellular space diffusion parameters during and after transient global hypoxia in the rat cortex. Exp Neurol. 203(1):34-41. IF 3.767 Čada, Z., Bouček, J., Dvořánková, B., Chovanec, M., Plzák, J., Kodet, R., Betka, J., Pinot, G., L., Gabius, H.-J., Smetana, Jr., K. (2007) Nucleostemin Expression in Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck. Anticancer Res. 27, 3279-3284. IF 1.479 Dvořánková, B., Lacina, L., Smetana, Jr., K., Lensch, M., Manning, J., C., André, S., Gabius, H.-J. (2008) Human galectin-2: nuclear presence in vitro and its modulation by quiescence/stress factors. Histol. Histopathol. 23, 167-168. IF 2.182 Fulka, Jr., J., Fulková, H. a St John J.C. (2007) Transmission of mitochondrial DNA disorders: possibilities for the elimination of mutated mitochondria. Cloning Stem Cells 9, 47-50. IF 2,431 Hejčl A, Urdzíková L, Šedý J, Lesný P, Přádný M, Michálek J, Burian M, Hájek M, Zámečník J, Jendelová P, Syková E. (2008) Acute and delayed implantation of positively charged HEMA scaffolds in spinal cord injury in the rat. J Neurosurg – Spine 8(1), 67-73. IF 1.478 Jirák D., Náměstková K., Herynek V., Liščák R., Vymazal J., Mareš V., Syková E., Hájek M. Lesion evolution after gamma knife irradiation observed by magnetic resonance imaging. Int.J.Radiat.Biol., 83:237-244. IF 1.312 Klíma , J., Motlík, J., Gabius, H.-J., Smetana, K. Jr. (2007) Phenotypic characterization of porcine interfollicular keratinocytes separated by elutriation: a technical note. Folia Biologica (Praha), 53:3336. IF 0,387 Lacina, L., Dvořánkova, B., Smetana, Jr., K. , Chovanec, M., Plzák, J., Tachezy, R., Kideryová, L, Kučerová, L., Čada, Z., Bouček, J., Kodet, R., André, S., Gabius, H.-J. (2007) Marker profiling of normal keratinocytes identifies the stroma from squamous cell carcinoma of the oral cavity as a modulatory microenvironment in co-culture. Int. Radiation. Biol. 83: 837-848. IF 1.312 Motlík, J., Klíma, J., Dvořánková, B., Smetana, K. Jr. (2007) The porcine epidermal stem cells as a biomedical model for wound healing and normal/malignant epithelial cell propagation. Theriogenology 67,105-111, IF 1,898 Pacherník, J., Horvath, V., Kubala, L., Dvořák, P., Kozubík, A., a Hampl, A. (2007) Neural Differentiation Potentiated by the Leukaemia Inhibitory Factor through STAT3 Signalling in Mouse Embryonal Carcinoma Cells. Folia Biol (Praha), 53, 157-163. IF 0,387 Popelka, Š, L. Machová, and F. Rypáček. (2007) Adsorption of poly(ethylene oxide)-blockpolylactide copolymers on polylactide as studied by ATR - FTIR spectroscopy. J.Colloid Interface Sci. 308(2):291-9 IF 2,023 26 67. 68. 69. 70. 71. 72. 73. 74. 75. 76. 77. 78. 79. 80. 81. 82. 83. 84. 85. Syková E, Jendelova P. (2007) In vivo tracking of stem cells in brain and spinal cord injury. Prog Brain Res 161, 367-83. IF 2.872 Šedý J, Urdzikova L, Likavcanova K, Hejcl A, Jendelova P, Sykova E. (2007) A new model of severe neurogenic pulmonary edema in spinal cord injured rat. Neurosci Lett 423(2),167-71. IF 2.092 Vacková, I., Ungrová, A. a Lopes, F. (2007) Putative embryonic stem cell lines from pig embryo. Journal of Reproduction and Development 53 (6): 1137-1149. IF 1,149 2008 Syková E, Nicholson C. (2008) Diffusion in brain extracellular space. Physiol Rev. 88:1277-340. IF 29.600 Šedý J, Urdzíková L, Jendelová P, Syková E. (2008) Methods for behavioral testing of spinal cord injured rats. Neuroscience and Biobehavioural Reviews. 32(3):550-80 IF 8.293 Fulka, Jr., J., Fulková, H., St John, J., Galli, C., Lazzari, G., Lagutina, I., Fulka, J. a Loi, P. (2008) Cybrid human embryos--warranting opportunities to augment embryonic stem cell research. Trends Biotechnol. 26, 469-474. IF 7.610 Skalníková, H., Vodička, P., Pelech, S., Motlík, J., Řehulka, P., Gadher, S. J. a Kovářová, H. (2008) Protein signaling pathways in differentiation of neural stem cells. Proteomics 8, 4547-4559. IF 5,479 Zoremba N., Homola A., Šlais K., Voříšek I., Rossaint R., Lehmenkühler A., Syková E. (2008) Extracellular diffusion parameters in the rat somatosensory cortex during recovery from transient global ischemia/hypoxia. J Cereb Blood Flow Metab. 28:1665-73. IF 5.147 Babič M, Horák D, Trchová M, Jendelová P, Glogarová K, Lesný P, Herynek V, Hájek M, Syková E. (2008) Poly(L-Lysine)-Modified Iron Oxide Nanoparticles for Stem Cell Labeling. Bioconjug Chem. 19(3):740-50. IF 4.384 Berková Z., Jirák D., Zacharovová K., Kříž J., Lodererová A., Girman P., Koblas T., Dovolilová E., Vancová M., Hájek M., Saudek F.(2008) Labeling of pancreataic islet with iron oxide nanoparticles for in vivo detection with magnetic resonance. Transplantation 85: 155-159. IF 3.64 Bryja, V., Pacherník, J., Vondráček, J., Souček, K., Čajánek, L., Horváth, V., Holubcová, Z., Dvořák, P. a Hampl, A. (2008) Lineage specific composition of cyclin D-CDK4/CDK6-p27 complexes reveals distinct functions of CDK4, CDK6 and individual D-type cyclins in differentiating cells of embryonal origin. Cell Proliferation 41, 875-893. IF 3,120 Fulková, H., Barnetová, I., Moško, T. a Fulka, Jr., J. (2008) Epigenetic analysis of human spermatozoa after their injection into ovulated mouse oocytes. Hum. Reprod. 23, 627-634. IF 3.543 Skalníková, H., Vodička, P., Gadher, S. J. a Kovářová, H. (2008) Proteomics of neural stem cells. Expert Rev Proteom 5, 175-186. IF 3,65 Likavčanová K, Urdzíková L, Hájek M, Syková E. Metabolic changes in the thalamus after spinal cord injury followed by proton MR spectroscopy. Magn Reson Med. 2008 Mar;59(3):499-506. IF 3.131 Šlais K, Voříšek I, Zoremba N, Homola A, Dmytrenko L, Syková E. (2008) Brain metabolism and diffusion in the rat cerebral cortex during pilocarpine-induced status epilepticus. Exp Neurol. 209:14554. IF 3.982 Thorsen F, Jirák D, Wang J, Syková E, Bjerkvig R, Enger PØ, van der Kogel A, Hájek M. Two distinct tumor phenotypes isolated from glioblastomas show different MRS characteristics. (2008) NMR Biomed. Oct;21(8):830-8. IF 3.063 Bridges N, Šlais K, Syková E. The effects of chronic corticosterone on hippocampal astrocyte numbers: a comparison of male and female Wistar rats. (2008) Acta Neurobiol Exp (Wars).;68(2):1318 . IF 0.940 Dvořánková, B., Lacina, L., Smetana, K., Jr., Lensch, M., Manning, J., C., André, S., Gabius, H.-J. (2008) Human galectin-2: nuclear presence in vitro and its modulation by quiescence/stress factors. Histol Histopathol 23,167-178. IF 2,182 Eiselleová, L., Peterková, I., Neradil, J., Slaninová, I., Hampl, A. a Dvořák, P. (2008) Comparative study of mouse and human feeder cells for human embryonic stem cells. Int J Dev Biol 52, 353-363. IF 2,830 27 86. Fulková, H., St John, J.C., Fulka, J. a Hozák, P. (2008) Chromatin in early mammalian embryos: achieving the pluripotent state. Differentiation 76,3-14. IF 2.899 87. Hejcl A, Urdzikova L, Sedy J, Lesny P, Pradny M, Michalek J, Burian M, Hajek M, Zamecnik J, Jendelova P, Sykova E. Acute and delayed implantation of positively charged 2-hydroxyethyl methacrylate scaffolds in spinal cord injury in the rat. J Neurosurg Spine 2008 Jan;8(1):67-73. IF 2.242 88. Hejčl, A., Lesný, P., Přádný, M., Michálek, J., Jendelová, P., Stulík, J., Syková, E. (2008) Biocompatible hydrogels in spinal cord injury repair. Physiol Res. 57 (Suppl. 3): S121-S132, IF 2.093 89. Horák, D.; Galibin, I.E.; Adamyan, A.A.; Sitnikov, A.V.; Dan, V.N.; Titova, M.I.; Shafranov, V.V.; Isakov, Y.F.; Gumargalieva, K.Z.; Vinokurova, T.I. (2008) Poly(2-hydroxyethyl methacrylate) emboli with increased haemostatic effect for correction of haemorrhage of complex origin in endovascular surgery of children. J Mater Sci, Mater Med 19, 1265-1274. IF 1.581 90. Chvátal A, Anděrová M, Neprašová H, Prajerová I, Benešová J, Butenko O, Verkhratsky A. (2008) Pathological potential of astroglia. Physiol Res. 57 (Suppl. 3): S101-S110, IF 1,505 91. Krejčí, J., Pacherník, J., Hampl, A. a Dvořák, P. (2008) In vitro labeling of mouse embryonic stem cells with SPIO nanoparticles. Gen Physiol Biophys 27, 164-173. IF 1,286 92. Studenovská, H., Šlouf, M., and Rypáček, F. Poly(HEMA) hydrogels with controlled pore architecture for tissue regeneration applications (2008) J. Mater. Sci-Mater. Med., 19: 615-621, IF 1.581 93. Smetana, K., Jr., Dvořánková, B., Lacina, L., Čada, Z., Vonka, V. (2008) Human hair follicle and interfollicular keratinocyte reaktivity to mouse HPV16-transformed cells: An in vitro study. Oncol Rep 20: 75-80. IF 1,567 94. Syková E, Vargová L. (2008) Extrasynaptic transmission and the diffusion parameters of the extracellular space. Neurochem Int. Jan;52(1-2):5-13. IF 2.975 95. Šedý J, Likavcanova K, Urdzikova L, Zicha J, Kunes J, Hejcl A, Jendelova P, Sykova E. (2008) Low degree of anesthesia increases the risk of neurogenic pulmonary edema development. Med Hypotheses. 70(2):308-13 IF 1.299 96. Šedý J, Zicha J, Kuneš J, Jendelová P, Syková E. (2008) Mechanisms of neurogenic pulmonary edema development. Physiol Res. 57(4):499-506. IF 2.093 97. Usvald, D., Hlučilová, J., Strnádel, J., Procházka, R., Motlík, J. a Maršala, M. (2008) Permanent jugular catheterization in miniature pig: treatment, clinical and pathological observations. Vet Med 53, 365-372. IF 0,645 98. Vacík, J., Dvořánková, B., Michálek, J., Přádný, M., Krumbholcová, E., Fenclová, T., Smetana, K., Jr. (2008) Cultivation of human keratinocytes without feeder cells on polymer carriers containing ethoxyethyl methacrylate – in vitro study. J Mater Sci Mater Med 19, 883-888. IF 1,562 99. Vargová L, Syková E. Extracellular space diffusion and extrasynaptic transmission. (2008) Physiol Res. 57 (Suppl. 3):S89-S99 . IF 1.505 100. Šedý, J., Zicha, J., Kuneš, J., Jendelová, P., Syková, E. (2008) Rapid but not slow spinal cord compression elicits neurogenic pulmonary edema in the rat. Physiol Res.Apr 1. [Epub ahead of print] IF 2.093 2009 101. Babič, M., Horák, D., Jendelová, P., Glogarová, K., Herynek, V., Trchova, M., Likavčanová, K., Lesný, P., Pollert, E., Hájek, M., Syková, E.: (2009) Poly(N,N-dimethylacrylamide)-coated maghemite nanoparticles for stem cell labeling. Bioconjugate Chem. 20(2): 283–294. IF 4.584 102. Brynda, E., Houska, M., Kysilka, J., Přádný, M., Lesný, P., Jendelová, P., Michálek, J., Syková, E.: (2009) Surface modification of hydrogels based on poly(2-hydroxyethyl methacrylate) with extracellular matrix proteins. J. Mater. Sci. -Mater. M. 20(4): 909–915. IF 1.508 103. Čada, Z., Chovanec, M., Smetana, K., Jr., Betka, J., Lacina, L., Plzák, J., Kodet, R., Štork, J., Lensch, M., Kaltner, H., André, S., Gabius, H.-J.: (2009) Galectin-7: will the lectin's activity establish clinical correlations in head and neck squamous cell and basal cell carcinomas? Histol. Histopathol. 21: 44-48, IF 2.182 28 104. Eiselleová, L., Matulka, K., Kříž, V., Kunová, M., Schmidtová, Z., Neradil, J., Tichý, B., Dvořáková, D., Pospíšilová, Š., Hampl, A., Dvořák, P. (2009) A Complex Role for FGF-2 in Self-Renewal, Survival, and Adhesion of Human Embryonic Stem Cells. Stem Cells 27, 1847-1857. IF 7.741 105. Fulková, H., Fulka, J., Jr. (2009) Nucleolar transplantation in oocytes and zygotes: challenges for further research. Mol Hum Reprod. 2009 Oct 9. [Epub ahead of print] IF 2.537 106. Fulkova, H., Novakova, Z., Mosko, T., Fulka, J., Jr. (2009) The inability of fully grown germinal vesicle stage oocyte cytoplasm to transcriptionally silence transferred transcribing nuclei. Histochem Cell Biol. 32(4):457-68. IF 2.320 107. Fulková, H., Langerova, A., Barnetova, I., Novakova, Z., Mosko, T., Fulka, J., Jr. (2009) How to repair the oocyte and zygote? J Reprod Dev (December Issue) IF 1.609 108. Gál, P., Toporcer, T., Grendel, T., Vidová, Z., Smetana, K., Jr., Dvořánková, B., Gál, T., Mozek, Š., Lenhardt, L., Longauer, F., Sabol, M., Sabo, J., Bačkor, M.: (2009) Effect of Atropa belladonna L. on skin wound healing: Biomechanical and histological study in rats and in vitro study in keratinocytes, 3T3 fibroblasts, and human umbilical vein endothelial cells. Wound Rep Regen. 17: 378-386 IF 2.732 109. Hejčl, A., Lesný, P., Přádný, M., Šedý, J., Zámečník, J., Jendelová, P., Michálek, J., Syková, E.: (2009) Macroporous hydrogels based on 2-hydroxyethyl methacrylate. Part 6: 3D hydrogels with positive and negative surface charges and polyelectrolyte complexes in spinal cord injury repair. J. Mater. Sci. -Mater. M. 20(7): 1571–1577. IF 1.508 110. Herynek, V., Růžičková, K., Jendelová, P., Syková, E., Hájek, M.: (2009) Metabolic changes in the rat brain after a photochemical lesion treated by stem cell transplantation assessed by 1H MRS. Magn. Reson. Mat. Phys. Biol. Med. 20(4): 909-915. IF 1.844 111. Horák, D., Babič, M., Jendelová, P., Herynek, V., Trchová, M., Likavčanová, K., Kapcalová, M., Hájek, M., Syková, E.: (2009) The effect of different magnetic nanoparticle coatings on the efficiency of stem cell labeling. J. Magn. Magn. Mater. 321(10): 1539-1547. IF 1.283 112. Jirak D, Kriz J, Strzelecki M, Yang J, Hasilo C, White DJ, Foster PJ. (2009) Monitoring the survival of islet transplants by MRI using a novel technique for their automated detection and quantification. Magn Reson Mater Phy; 22(4):257-65. IF 1.844 113. Kideryová, L., Lacina, L., Dvořánková, B., Štork, J., Čada, Z., Szabo, P., André, S., Kaltner, H., Gabius, H.-J., Smetana K., Jr.: (2009) Phenotypic characterization of human keratinocytes in coculture reveals differential effects of fibroblasts from benign fibrous histiocytoma (dermatofibroma) as compared to cells from its malignant form and to normal fibroblasts. J. Dermatol. Sci. 55: 18-26 IF 2.515 114. Klíma, J., Lacina, L., Dvořánková, B., Herrmann, D., Carnwath, J., W., Niemann, H., Kaltner, H., André, S., Motlík, J., Gabius, H.-J., Smetana, K. Jr.: (2009) Differential regulation of galectin expression/reactivity during wound healing in porcine skin and in cultures of epidermal cells with functional impact on migration. Physiol. Res. IF 1.653 115. Kubíková, I., Konečná, H., Šedo, O., Zdráhal, Z., Řehulka, P., Hříbková, H., Řehulková, H., Hampl, A., Chmelík, J., Dvořák, P. (2009) Proteomic profiling of human embryonic stem cell-derived microvesicles reveals a risk of transfer of proteins of bovine and mouse origin. Cytotherapy 11, 330– 340. IF 3.471 116. Kubinová, Š., Horák, D., Syková, E.: (2009) Cholesterol-modified superporous poly(2-hydroxyethyl methacrylate) scaffolds for tissue engineering. Biomaterials 30(27): 4601-4609. IF 6.646 117. Ryska M, Laszikova E, Pantoflicek T, Ryska O, Prazak J: (2009) Prometheus Significantly Decreases Intracranial Pressure on Acute Liver Failure. Experimental Study. ESR; 42: 230 - 235 IF 0.903 118. Szabo, P., Dam, T., K., Smetana, K., Jr., Dvořánková, B., Kübler, D., Brewer, C., F., Gabius, H.-J. (2009) Phosphorylated human lectin galectin-3: Analysis of ligand binding by histochemical monitoring of normal/malignant squamous epithelia and by isothermal titration kalorimetry. Anat. Histol. Embryol. 38: 67-75, IF 0.554 29 119. Šedý, J., Zicha, J., Kuneš, J., Jendelová, P., Syková, E.: (2009) Rapid but not slow spinal cord compression elicits neurogenic pulmonary edema in the rat. Physiol. Res. 58: 269–277. IF 1.653 120. Šedý, J., Zicha, J., Kuneš, J., Syková, E.: (2009) Atropine prevents the neurogenic pulmonary edema development. Med. Hypotheses 73(1): 42–44. IF 1.416 121. Šedý, J., Zicha, J., Kuneš, J., Hejčl, A., Syková, E.: (2009) The role of nitric oxide in the development of neurogenic pulmonary edema in spinal cord injured rats: the effect of preventive interventions. Am. J. Physiol.-Regul. Integr. Comp. Physiol. 297(4): R1111-R1117. IF 3.272 122. Turnovcová, K., Růžičková, K., Vaněček, V., Syková, E., Jendelová, P.: (2009) Properties and growth of human bone marrow mesenchymal stromal cells cultivated in different media. Cytotherapy 25: 112. IF 3.471 2010 123. Amemori T, Jendelová P, Růzicková K, Arboleda D, Syková E. (2010) Co-transplantation of olfactory ensheathing glia and mesenchymal stromal cells does not have synergistic effects after spinal cord injury in the rat. Cytotherapy. 12:212-25. IF 2.204 124. Anděrová, M., Voříšek, I., Pivoňková, H., Benešová, J., Vargová, L., Cicanič, M., Chvátal, A., Syková, E.: (2010) Cell death/proliferation and alterations in glial morphology contribute to changes in diffusivity in the rat hippocampus after hypoxia-ischemia. J. Cereb. Blood Flow Metab. In press. IF 5.457 125. Barnetova, I., Okada, K. (2010) Genome reprogrammig during the first cell cycle in in vitro produced porcine embryos. Czech J. Anim. Sci., 55 (2), 2010: 49-57 IF 1,008 126. Barnetova, I., Fulka, H., Fulka, J. Jr. (2010) Epigenetic characteristics of paternal chromatin in interspecies zygotes. Journal of Reproduction and Development, 56 (6), 2010: 601-606 IF 1,697 127. Bárta, T., Vinarský, V., Holubcová, Z., Doležalová, D., Verner, J., Pospíšilová, Š., Dvořák, P., Hampl, A. (2010) Human embryonic stem cells are capable of executing G1/S checkpoint activation. Stem Cells, 28:1143-1152. IF 7.741 128. Bekku Y, Vargová L, Goto Y, Vorísek I, Dmytrenko L, Narasaki M, Ohtsuka A, Fässler R, Ninomiya Y, Syková E, Oohashi T. (2010) Bral1: its role in diffusion barrier formation and conduction velocity in the CNS. J Neurosci. 30:3113-23. IF 7.178 129. Borghese, L., Doležalová, D., Opitz, T., Haupt, S., Leinhaas, A., Steinfarz, B., Koch, P.,Edenhofer, F., Hampl, A., Brustle, O. (2010) Inhibition of Notch signaling in human embryonic stem cell - derived neural stem cells delays G1/S phase transition and accelerates neuronal differentiation in vitro and in vivo. Stem Cells, 28:955-964. IF 7.741 130. Fulka, H., Hirose, M., Inoue, K., Ogonuki, N., Wakisaka, N., Matoba, S., Ogura, A., Mosko, T., Kott, T., Fulka, J. Jr. (2010) Production of Mouse Embryonic Stem Cell Lines from Maturing Oocytes by Direct Conversion of Meiosis into Mitosis. Stem Cells. 2010 Dec 23. [Epub ahead of print] IF 7.747 131. Hejcl A, Sedý J, Kapcalová M, Arboleda Toro D, Amemori T, Likavčanová-Mašínová K, Lesný P, Krumbholcová E, Přádný M, Michálek J, Burian M, Hájek M, Jendelová P, Sykova E. (2010) HPMARGD hydrogels seeded with mesenchymal stem cells improve functional outcome in chronic spinal cord injury. Stem Cells Dev.. 19(10): 1535-1546. IF 4.146 132. Holubcová, Z., Matula, P., Sedláčková, M., Vinarský, V., Doležalová, D., Bárta, T., Petr Dvořák, P., Hampl, A. (2010) Human embryonic stem cells suffer from centrosomal amplification. Stem Cells, published online in October 19 IF 7.741 133. Jelínek, M., Smetana, Jr., K., Kocourek, T., Dvořánková, B., Zemek, Remsa, J., a Luxbacher, T. (2010) Biocompatibility and sp3/sp2 ratio of laser created DLC films. Mater Sci Engn B 169, 89–93. IF 1.715 30 134. Krejčí E, Grim M (2010) Isolation and characterization of neural crest stem cells from adult human hair follicles. Fol. Biol. (Praha) 56:149-57. IF 0,924 135. Kříž J, Jirák D, Vilk GJ, Girman P, White DJ, Hájek M, Saudek F (2010) Vascularization of artificial beds for pancreatic islet transplantation in a rat model. Transplant Proc. Jul-Aug; 42(6):2097-2101. IF 0.994 136. Kozubenko N, Turnovcova K, Kapcalova M, Butenko O, Anderova M, Rusnakova V, Kubista M, Hampl A, Jendelova P, Sykova E. (2010) Analysis of in vitro and in vivo characteristics of human embryonic stem cell-derived neural precursors. Cell Transplant. 19(4): 471-486. IF 5.126 137. Kubinová S, Syková E. (2010) Nanotechnology for treatment of stroke and spinal cord injury. Nanomedicine (Lond). 5:99-108. IF 5.982 138. Kubinová, Š., Syková, E.: (2010) Nanotechnologies in regenerative medicine. Minim. Invasive Ther. Allied Technol. 19(3): 144-156. IF 1.330 139. Kubinová, Š., Horák, D., Kozubenko, N., Vaněček, V., Proks, V., Price, J., Cocks, G., Syková, E.: (2010) The use of superporous Ac-CGGASIKVAVS-OH-modified PHEMA scaffolds to promote cell adhesion and the differentiation of human fetal neural precursors. Biomaterials 31(23): 5966-5975. IF 7.365 140. Kunová, M., Matulka, K., Eiselleová, L., Trčková, P., Hampl, A., Dvořák, P. (2010) Development of humanized culture medium with plant-derived serum replacement for human pluripotent stem cells. Reproductive BioMedicine Online, Available online 25 June 2010. IF 2.380 141. Pivoňková, H., Benešová, J., Butenko, O., Chvátal, A., Anděrová, M.: (2010) Impact of Global Cerebral Ischemia on K(+) Channel Expression and Membrane Properties of Glial Cells in the Rat Hippocampus. Neurochem. Int. 57(7): 783-794. IF 3.541 142. Plzák, J., Lacina, L., Chovanec, M., Dvořánková, B., Szabo, P., Čada, Z. a Smetana, Jr., K. (2010) Epithelial – stromal interaction in squamous cell epithelium – derived tumors: an important new player in the control of tumor biological properties. Anticancer Res 30, 455-462. IF 1.428 143. Prajerová, I., Honsa, P., Chvátal, A., Anděrová, M.: (2010) Distinct effects of Sonic hedgehog and Wnt-7a on differentiation of neonatal neural stem/progenitor cells in vitro. Neuroscience 171:693– 711. IF 3.292 144. Seminatore, C., Polentes, J., Ellman D., Kozubenko, N., Itier, V., Tine, S., Tritschler, L., Brenot, M., Guidou, E., Blondeau, J., Lhuillier, M., Bugi, A., Aubry, L., Jendelova, P., Sykova, E., Perrier, A.L., Finsen, B, Onteniente, B. (2010) The post-ischemic environment differentially impacts teratoma or tumour formation following transplantation of human embryonic stem cells-derived neural progenitors. Stroke, 41:153-9.. IF 6.499 145. Skalníková, H., Motlík, J., Gadher, S.J., Kovářová, H. (2010) Mapping of the secretome of primary isolates of mammalian cells, stem cells and derived cell lines. Proteomics, 2010 Dec 15. IF 4,426 146. Studenovská, H., Vodička, P., Proks, V., Hlučilová, J., Motlík, J., Rypáček, F. (2010) Synthetic poly(amino acid) hydrogels with incorporated cell-adhesion peptides for tissue engineering. J Tissue Eng Regen Med 2010, 4, 454-463, IF 3,857 147. Třesohlavá, E., Popelka, Š., Machová, L., Rypáček, F. (2010) Modification of polylactide surfaces with lactide-ethylene oxide functional block copolymers: Accessibility of functional groups. Biomacromolecules 11:68-75 IF 4.146 148. Viero, C., Shibuya, I., Kitamura, N., Verkhratsky, A., Fujihara, H., Katoh, A., Ueta, Y., Zingg, H. H., Chvátal, A., Syková, E., Dayanithi, G.: (2010) Oxytocin: Crossing the Bridge between Basic Science and Pharmacotherapy. CNS Neurosci. Ther. 16(5): e138-e156. IF 2.690 2011 31 149. Arboleda, D., Forostyak, S., Jendelová, P., Mareková, D., Amemori, T., Pivoňková, H., Mašínová, K., Syková, E.: (2011) Transplantation of predifferentiated adipose-derived stromal cells for the treatment of spinal cord injury. Cell. Mol. Neurobiol. 31(7): 1113-1122. IF 2,423 150. Barnetova, I., Vackova, I., Firla, P. (in press) Dynamics of epigenetic remodeling in interspecies porcine zygotes. Czech J Anim Sci; IF 1, 19 151. Benes, J., Jr., Melenovsky, V., Skaroupkova, P., Pospisilova, J., Petrak, J., Cervenka, L., a Sedmera, D. (2011) Myocardial Morphological Characteristics and Proarrhythmic Substrate in the Rat Model of Heart Failure Due to Chronic Volume Overload. Anat Rec (Hoboken) 294:102-111. IF 1,490 152. Chekina, N., Horák, D., Jendelová, P., Trchová, M., Beneš, M. J., Hrubý, M., Herynek, V., Turnovcová, K., Syková, E.: (2011) Fluorescent magnetic nanoparticles for biomedical applications. J. Mater. Chem. 21: 7630-7639. IF 4,795 153. Dvořánková, B.Szabo, P., Gál., P., Uhrová, J., Zima, T., Kaltner, H., André, S., Gabius, H.-J. a Smetana, Jr., K. (2011) Human galectins induce conversion of dermal fibroblasts into myofibroblasts and production of extracellular matrix: potential application in tissue engineering and wound repair. Cells Tissues Organs 194, 469-480. IF 2,302 154. Forostyak, S., Jendelová, P., Kapcalová, M., Arboleda, D., Syková, E.: (2011) Mesenchymal stromal cells prolong the lifespan in a rat model of amyotrophic lateral sclerosis. Cytotherapy 13(9): 10361046. IF 2,925 155. Fulková, H., Hirose, M., Inoue, K., Ogonuki, N., Wakisaka, N., Matoba, S., Ogura, A., Mosko, T., Kott, T., Fulka, Jr., J. (2011) Production of mouse embryonic stem cell lines from maturing oocytes by direct conversion of meiosis into mitosis. Stem Cells 29, 517-527. IF 7, 871 156. Gál, P., Vasilenko, T., Kostelníková, M., Jakubco, J., Kovác, I., Sabol, F., André, S., Kaltner, H., Gabius, H.-J. a Smetana, Jr., K. (2011) Open wound healing in vivo: monitoring, binding and presence of adhesion/growth-regulatory galectins in rat skin during the course of complete re-epithelialization. Acta Histochem Cytochem 44, 191–199. IF 1,00 157. Herynek V, Berková Z, Dovolilová E, Jirák D, Kříž J, Girman P, Saudek F, Hájek M. Improved detection of pancreatic islets in vivo using double contrast. Contrast Media Mol. Imaging 2011, 6, 308–313, DOI:10.1002/cmmi.432 IF 4,02 158. Horák, D., Matulka, K., Hlídková, H. Lapčíková, M., Beneš, M.J., Jaroš, J., Hampl, A., Dvořák, P., (2011) Pentapeptide-modified poly(N,N-diethylacrylamide) hydrogel scaffolds for tissue engineering. Journal of Biomedical Materials Research, Part B: Applied Biomaterials. 98B,1, 54-67. IF 2,2 159. Juhásová, J., Juhás, S., Klíma, J., Strnádel, J., Holubová, M., Motlík, J. (2011) Osteogenic differentiation of miniature pig mesenchymal stem cells in 2D and 3D environment. Physiological Research. 60(3):559-71. Epub 2011 Mar 14. IF 1.646 160. Kodet, O., Dvořánková, B. Lacina, L., André, S., Kaltner, H., Gabius, H.-J. a Smetana, Jr., K. (2011) Comparative analysis of nuclear presence of adhesion/growth-regulatory galectins and reactivity in nuclei of interphasic and mitotic cells. Folia Biol 57, 125-132. IF 0,729 161. Kubinová, Š, Horák, D., Hejčl, A., Plichta, Z., Kotek, J., Syková, E.: (2011) Highly superporous cholesterol-modified poly(2-hydroxyethyl methacrylate) scaffolds for spinal cord injury repair. J. Biomed. Mater. Res. A.. IF 3,044 162. Navarro, R., Juhás, S., Keshavarzi, S., Juhásova, J., Motlík, J., Johe, K., Marsala, S., Scadeng, M., Lazar, P., Tomori, Z., Schulteis, G., Beattie, M.S., Ciacci, J.D., Marsala, M. Chronic spinal compression model in minipigs: a systematic behavioral and qualitative and quantitative neuropathological study. Journal of Neurotrauma. 2011 Oct 26. IF 3.426 163. Novotný, M., Vasilenko, T., Varinská, L., Smetana, K., Jr., Szabo, P., Šarišský, M., Dvořánková, B., Mojžíš, J., Bobrov, N., Toporcerová, S., Sabol, F., Matthews, B.J.O. a Gál, P. (2011) ER-α agonist induces conversion of fibroblasts into myofibroblasts, while ER-β agonist increases ECM production 32 and wound tensile strength of healing skin wounds in ovarectomised rats. Exp Dermatol 20, 703-708. IF 4,159 164. Pantoflicek, T. - Koblihová, E. - Ryska, M. (2012) S–adenosylmethionine does not reduce ischaemiareperfusion injury to a marginal liver graft in an in-vivo experiment. Hepatogastroenterology. JanFeb;59(113):216-8. doi: 10.5754/hge11239., IF 0.677 165. Petrak J, Pospisilova J, Sedinova M, Jedelsky P, Lorkova L, Vit O, Kolar M, Strnad H, Benes J, Sedmera D, Cervenka L, Melenovsky V. (2011). Proteomic and transcriptomic analysis of heart failure due to volume overload in a rat aorto-caval fistula model provides support for new potential therapeutic targets - monomaine oxidase A and transglutaminase 2. Proteome Sci 9,69. IF 2,488 166. Proks, V.,Jaroš, J.,Pop-Georgievski, O.,Kučka, J.,Popelka, Š.,Dvořák, P.,Hampl, A.,Rypáček, F. (submitted 2011) “Click & Seed” Approach to the Biomimetic Modification of Material Surfaces. Journal of Biomedical Materials Research, Part A. IF 3,044 167. Sedlačík, T.,Studenovská, H.,Rypáček, F. (2011), Enzymatic degradation of the hydrogels based on synthetic poly(.alpha.-amino acid)s. Journal of Materials Science-Materials in Medicine. Roč. 22, č. 4, s. 781-788, 2011. IF 2.325 168. Svobodová, J.,Rypáček, F. (2012) Polyglutamate copolymers as a tissue-engineering platform: polymer scaffold modification through aminolysis of poly(.gamma.-benzyl-L-glutamate-co-2,2,2.gamma.-trichlorethyl-L-glutamate). European Polymer Journal. Roč. 48, č. 1, s. 183-190, 2012, IF 2.517 169. Syková E, Jendelová P, Herynek V. Magnetic resonance imaging of stem cell migration. Methods Mol Biol. 2011;750:79-90. IF 13,9 170. Szabo, P., Kolář, M., Dvořánková, B., Lacina, L., Štork, J., Vlček, Č., Strnad, H., Tvrdek, M., Smetana, Jr. K.(2011) Mouse 3T3 fibroblasts under the influence of fibroblasts isolated from stroma of human basal cell carcinoma acquire properties of multipotent stem cells. Biol Cell 103, 233-248. IF 4.898 171. Šponarova, D., Horák, D., Trchová, M. Jendelová, P., Mitina, N., Zaichenko, A., Stoika, R., Lesný, P., Syková, E.: (2011) The Use of Oligoperoxide-Coated Magnetic Nanoparticles to Label Stem Cells. J. Biomed. Nanotechnol. 7(3): 384-394. IF 2,626 172. Usvald, D., Vodička, P., Hlučilová, J., Procházka, R., Motlík, J., Kuchorová, K., Johe, K., Marsala, S., Scadeng, M., Kakinohana, O., Navarro, R., Santa, M., Hefferan, M.P., Yaksh, T.L., Marsala, M. (2010) Analysis of dosing regimen and reproducibility of intraspinal grafting of human spinal stem cells in immunosuppressed minipigs. Cell Transplantation. 19:1103-22. Epub 2010 Apr 21. IF 6.204 173. Urdziková, L., Likavčanová-Mašínová, K., Vaněček, V., Růžička, J., Šedý, J., Syková, E., Jendelová, P.: (2011) Flt3 ligand synergizes with granulocyte–colony-stimulating factor in bone marrow mobilization to improve functional outcome after spinal cord injury in the rat. Cytotherapy 13(9): 1090-1104. IF 2,825 174. Vackova, I., Novakova, Z., Krylov, V., Okada, K., Kott, T., Fulka, H., Motlik, J. (2011) Analysis of marker expression in porcine cell lines derived from blastocysts produced in vitro and in vivo. J Reprod Dev 57, 594-603. IF 1,637 175. Vetrík M., Hrubý M., Přádný M., Michálek J., (2011) New type of irreversibly reductively biodegradable hydrogel. Polym. Degrad. Stabil., 96(5), 892-897, IF 2.594 176. Vetrík M., Přádný M., Hrubý M., Michálek J., (2011)Hydrazone-based hydrogel hydrolytically degradable in acidic environment. Polym. Degrad. Stabil., 96(5), 756-759 IF 2.594 33 10. Uplatněné aplikační výstupy a) Patenty 1. Brynda, E., Houska, M., Syková, E., Jendelová, P., Dyr, J., Filová, E., Riedel, T., Chlupáč, J., Lesný, P., Bačáková, L.: Způsob přípravy regulovaných vrstev fibrinu na pevných površích. PV 2006-821 Uděleno: 12.9.2008 č. 299 687 2. Horák, D., Syková, E., Babič, M., Jendelová, P., Hájek, M.: Superparamagnetické nanočásticové sondy na bázi oxidů železa s modifikovaným povrchem, způsob jejich přípravy a použití. PV 2006-120 Uděleno: 17.9.2009 č. 301 067 3. Lesný, P., Syková, E., Michálek, J., Přádný, M., Jirsák, O.: Biomateriál na bázi nanovlákenných vrstev a způsob jeho přípravy. PV 2007-54 Uděleno: 2.7.2009 č. 300 805 4. Lesný, P., Syková, E., Michálek, J., Přádný, M., Jirsák, O., Martínková, L.: Biomateriál na bázi nanovlákenné vrstvy a způsob jeho přípravy. PS 2009-252 Uděleno: 27.08.2009 č. 301 002 5. Horák, D., Syková, E., Babič, M., Jendelová, P., Hájek, M.: Methods of preparation of superparamagnetic nanoparticles based on iron oxides with modified surface and superparamagnetic nanoparticles obtained by such a method. Uděleno: 08.09.2010 č. EP 1991503 B1 6. Smetana, K., Gabius, H. J., Dvořánková, B., Kaltner, H., Lacina, L., André, S., Szabo, P., Valach, J., Zima, T., Syková, E., Jendelová, P.: Použití galektinů a způsob přípravy myofibroblastů a nanovláken extracelulární matrix. 2010-107 Uděleno: 11.05.2011 č. 302 505 b) Klinické studie 1. Klinická studie "Autologní kmenové buňky kostní dřeně v léčbě poranění míchy". 2. Klinická studie "Použití dřeňových kmenových buněk v léčbě ischemické choroby dolních končetin u pacientů se syndromem diabetické nohy". 34 Document number: 299687; Page: 0 Document number: 299687; Page: 1 Document number: 299687; Page: 2 Document number: 299687; Page: 3 Document number: 299687; Page: 4 Document number: 299687; Page: 5 Document number: 299687; Page: 6 Document number: 299687; Page: 7 Document number: 301067; Page: 0 Document number: 301067; Page: 1 Document number: 301067; Page: 2 Document number: 301067; Page: 3 Document number: 301067; Page: 4 Document number: 301067; Page: 5 Document number: 301067; Page: 6 Document number: 301067; Page: 7 Document number: 301067; Page: 8 Document number: 301067; Page: 9 Document number: 301067; Page: 10 Document number: 301067; Page: 11 Document number: 301067; Page: 12 Document number: 301067; Page: 13 Document number: 301067; Page: 14 Document number: 300805; Page: 0 Document number: 300805; Page: 1 Document number: 300805; Page: 2 Document number: 300805; Page: 3 Document number: 300805; Page: 4 Document number: 300805; Page: 5 Document number: 300805; Page: 6 Document number: 300805; Page: 7 Document number: 300805; Page: 8 Document number: 300805; Page: 9 Document number: 300805; Page: 10 Document number: 300805; Page: 11 Document number: 300805; Page: 12 Document number: 300805; Page: 13 Document number: 300805; Page: 14 Document number: 300805; Page: 15 Document number: 300805; Page: 16 Document number: 300805; Page: 17 Document number: 301002; Page: 0 Document number: 301002; Page: 1 Document number: 301002; Page: 2 Document number: 301002; Page: 3 Document number: 301002; Page: 4 Document number: 301002; Page: 5 Document number: 301002; Page: 6 Document number: 301002; Page: 7 Document number: 301002; Page: 8 Document number: 301002; Page: 9 Document number: 301002; Page: 10 Document number: 301002; Page: 11 Document number: 301002; Page: 12 Document number: 301002; Page: 13 Document number: 301002; Page: 14 Document number: 301002; Page: 15 Document number: 301002; Page: 16 (19) I 11111111111111111111111111~11 EuropiiKhos htent1mt Europe1n l'ltent Offlce Offtce europHn des brevets EP 1 991 503 81 (11) EUROPEAN PATENT SPECIFICATION (12) (45) Date of publication and mention of the grant of the patent 08.09.2010 Bulletin 2010/36 (51) lntCI.: C01G 49fOS(200UI} A61K 49/18(200UI} (21) Application number: 07711106.0 (86) lntemational application number. PCT/CZ2007/000012 (22) Date of filing: 23.02.2007 C01G 49f06(200e.OI} C09C 1124 (200e.OI} (87) lntemational publication number. WO 2007/095871 (30.08.2007 Gazette 2007/35) (54) METHOD OF PREPARATION OF SUPERPARAMAGNETIC NANOPARTICLES BASED ON IRON OXIDES WITH MODIFIED SURFACE AND SUPERPARAMAGNETIC NANOPARTICLES OBTAINED BY SUCH A METHOD VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG VON SUPERPARAMAGNETISCHEN NANOPARTIKELN AUF BASl S VON EISENOXIDEN MITMODIFIZIERTER OBERFLÁCHE UND NACH Dl ESEM VERFAHREN HERGESTELLTE SUPERPARAMAGNETISCHE NANOPARTIKEL PROCÉDÉ DE PRÉPARATION DE NANOPARTICULES SUPERPARAMAGNÉTIQUES D'OXYDES DE FER AYANT UNE SURFACE MODIFIÉE ET NANOPARTICULES SUPERPARAMAGNÉTIQUES OBTENUES PAR LEDIT PROCÉDÉ • SYKOVA, Eva 162 00 Praha 6 (CZ) • BABIC, Michal 278 32 Zborovice,okr.Krome riz (CZ) • JENDELOVA, Pavla 252 68 Stredokluky (CZ) • HAJEK, Milan 148 00 Praha 4 (CZ) (84) Designated Contracting States: DE FR GB ITSK (30) Pri ority: 24.02.2006 CZ 20060120 (43) Date of publication of application: 19.11.2008 Bulletin 2008/47 (73) Proprietors: • Ustav Makromolekulami Chemie Akademie Ved Ceske Republiky, v.v.l 16206 Praha 6 (CZ) • Ustav Experimentalni Mediciny Akademie Ved Ceske Republiky, v.v.i. 142 20 Praha 4 (CZ) (72) lnventors: • HORAK, Daniel 152 00 Praha 5 (CZ) A BASE (74) Representative : Beetz & Partner Patentanwálte Steinsdorfstrasse 1O 80538 Milnchen (DE) (56) References cited: EP-A2- O 516 252 WO-A-97/35200 US-A- 4101 435 US-A- 4 827 945 US-A1- 2005 271 593 WO-A-91/02811 DE-A1- 2 642 383 US-A- 4 452 773 US-A- 5 492 814 ,.... m ('t) oLt) ,.... m m ,.... o. w Note: Within nine months of the publication of the mention of the grant of the European patent in the European Patent Bulletin, any person may give notice to the European Patent Office of opposition to that patent, in accordance with the lmplementing Regulations. Notice of opposition shall not be deemed to have been filed until the opposition fee has been paid. (Art. 99(1) European Patent Convention) . Printed by Jouve, 75001 PARl S (FR) - - - - -- -- -- - -- - - -- Document number: 302505; Page: 0 Document number: 302505; Page: 1 Document number: 302505; Page: 2 Document number: 302505; Page: 3 Document number: 302505; Page: 4 Document number: 302505; Page: 5 Document number: 302505; Page: 6 Document number: 302505; Page: 7 Smlouv a o využití výsledků výzkum u a vývoje Smluvní strany: organizace: Ústav experiment ální medicíny AV ČR, v.v.i. se sídlem: Vídeňská 1083, 142 20, Praha 4 IČ : 68378041 DIČ : CZ 683 78041 bankovní spojení: č. účtu 19-2795070297/0100, Komerční banka ,a.s. Praha Zastoupená: Prof. MUDr. Evou Sykovou, DrSc. funkce: ředitelka (dále jen spolu příjemce podpory, na straně jedné) a organizace: Biolnova s.r.o. se sídlem: Vídeňská 1083, 142 20, Praha4 IČO : 28452682 DIČ: CZ28452682 bankovní spojení: č. účtu 432727880247/0100, Komerční banka ,a.s. Praha zápis vOR: Městský soud v Praze, oddíl C, vložka 142571 zastoupená: Ing. Petrem Bažantem, MBA, jednatelem (dále jen uživatel, na straně druhé) ve smyslu § 11 zákona č.l30/2002 Sb. o podpoře výzkumu a vývoje z veřejných prostředků a o využití výsledků změně některých souvisejících zákonů (zákon o podpoře výzkumu a vývoje) tuto smlouvu o výzkumu vývoje: uzavřely I. 1.1. podpory na základě výsledků veřejné soutěže vyhlášené poskytovatelem, realizuje projekt evidenční číslo I M0538 s názvem "Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad" (dále jen projekt). 1.2. Termín 1.3. Na základě Smlouvy o poskytnutí podpory na projekt výzkumu a vývoje evidenční číslo jednací 13 022/2005-31 ze dne ze dne 24.2.2005 a jejího dodatku číslo jednací 2588/20 I 0-31 ze dne 15.2.201 O poskytl poskytovatel spolupříjemci finanční prostředky ze státního rozpočtu ČR formou účelové dotace za účelem jejich využití na dosažení cílů a parametrů stanovených v rámci řešení projektu v letech 2005 - 2011 . Spolupříjemce ukončení řešení projektu 31.12.20 ll. II. 2.1. prohlašuje, že ke dni ukončení projektu 31 .12.2011 bude plně dosaženo znalost předpokládaných cílů řešení projektu, přičemž výsledkem výzkumu je míněna nová informace, projektu. řešení při vzniklé nebo technické poznatky 2.2. Definice výsledků , jenžjsou předmětem této smlouvy: Patent: Horák, D., Syková, E., Babič, M., Jendelová, P., Hájek, M.: Superparam agnetické a nanočásticové sondy na bázi oxidů železa s modifikova ným povrchem, způsob jejich přípravy 067 použití. PV 2006-120, udělen: 17.9.2009 č. 301 Patent: Horák, D., Syková, E., Babič, M., Jendelová, P., Hájek, M.: Methods of preparation of superparam agnetic nanoparticl es based on iron oxides with modified surface and superparam agnetic nanoparticl es obtained by such a method. Udělen 08.09.2010 Číslo dokumentu EP 1991503 Bl Patent: Smetana, K., Gabius, H. J., Dvořánková, B., Kaltner, H., Lacina, L., André, S., Szabo, P., Valach, J., Zima, T., Syková, E., Jendelová, P.: Použití galektinů a způsob přípravy Číslo 11.05.2011 udělen myofibroblastů a nanovláken extracelulá rní matrix. 2010-107, dokumentu 302 505. Spolupříjemce 1 Dosažené výsledky, které bude uživatel používat a jež jsou předmětem této smlouvy včetně charakteru jejich využití: a) použití superparam agnetickýc h nanočásticových sond na bázi oxidů železa s modifikovaným povrchem, b) endogenní buněčná adheze a růst ovlivňujících lektinů z rodiny galektinů jako induktorů in vitro přechodu fibroblastů do myofibroblastů a biotechnologické produkce prostorové sítě nanovláken extracelulá rní matrix. 2.3. m. Smluvní strany shodně prohlašují v souladu s ust. § 16, odst. 3. zák. č . 130/2002 Sb., že výlučným vlastníkem výsledků řešení projektu jsou příjemce a spolupříjemce podpory. Příjemce, spolupříjemce a způsob nakládání s výsledky řešení projektu byly upraveny smlouvou o úpravě vzájemných vztahů v rámci výzkumnéh o centra"Cent rum buněčné terapie a tkáňových náhrad UK" ze dne 2.2.2009. 3. I. podpory prohlašuje, že má smluvně vypořádány veškeré práv duševního vlastnictví chráněných jako patenty, registrované vzory souvislosti s realizací řešení projektu. 3.2. Spolupříjemce 3.3. podpory se zavazuje využití za stejných podmínek. Spolupříjemce zpřístupnit výsledky řešení nároky týkající se autorská práva, vzniklá v uplatněné či projektu všem zájemcům o jejich IV. O způsobu a rozsahu využívání výsledků řešení projektu a jejich zveřejňování je uživatel povinen podávat pravidelné písemné informace spolupříjemci podpory počínaje prvním rokem po sepsání smlouvy po dobu 3 let tj. do 31.12.2014. Uživatel se dále zavazuje při zveřejňování výsledků řešení projektu zajistit, aby ve všech informacích zveřejňovaných v souvislosti s výsledky řešení projektu bylo vždy uvedeno, že řešení bylo realizováno za finanční podpory ze státních prostředků poskytnutých prostřednictvím poskytovate le (jmenovitě za 4. 1. 4.2. podpory projektu MŠMT 1M0538). podpory se zavazuje, že nebude žádným způsobem omezovat propagaci pokud bude prováděna v souladu s obecně závaznými právními předpisy. Spolupříjemce 4.3. v. netvoří Výsledky řešení projektu zvláštních právních předpisů . 5.1. žádné důvěrné informace, se kterými by bylo třeba výsledků , nakládat podle VI. písemně upozornit spolupříjemce podpory na každou změnu údajů uvedených v 6.1 . Uživatel je povinen této smlouvě. 6.2. Tuto smlouvu je možno smluvními stranami. 6.3. Tato smlouva je sepsána ve 2 vyhotoveních, z nichž každá ze smluvních stran obdrží po jednom. Tato smlouva nabývá účinnosti dne I. 1.2012. Smlouva je sjednána na dobu určitou , a to do 6.4. měnit nebo doplňovat jen písemnými dodatky vzájemně potvrzenými 31.12.2014 Za spolupříjemce O1 -1Z- Z011 uživatele:~ ~ . . Za Á i ÚSTAV EXPERIMENT LN MEDICIN\ O 1 -12v. v. i. 4~Vi~ká lQSl ~ podpory: \ 1 2011 l jméno, podl t.")fu11kce, razítko G) ~( Brofnova • s.'· o. Vídeň k · IČ.· 28~5~~g: · 14 2 20 Praha 4 Tel.: 2964433610/FC: CZ28452682 ax . 29644:1350 2 3 oběma Smlouva o využití výsledků výzkumu a vývoje Smluvní strany: organizace: Ústav experimentáln í medicíny AV ČR, v.v.i. se sídlem: Vídeňská I 083 , 142 20, Praha 4 IČ : 68378041 DIČ: CZ 68378041 bankovní spojení: č . účtu 19-2795070297/0 I 00, Komerční banka ,a. s. Praha Zastoupená: Prof. MUDr. Evou Sykovou, DrSc. funkce : ředitelka (dále jen spolupříjemce podpory, na straně jedné) a organizace: ArtiCell, s.r.o. se sídlem: Vídeňská I 083 , 142 20, Praha 4 IČO: 24736660 DIČ: CZ 24736660 bankovní spojení: č. účtu 198 906 69110600, GE Money Bank, a. s. zápis v OR: Městský soud v Praze, oddíl C, vložka I 70076 zastoupená: Mgr. Davidem Hradiským, jednatelem (dále jen uživatel, na straně druhé) ve smyslu § I I zákona č.l30/2002 Sb. o podpoře výzkumu a vývoje z veřejných prostředků a o změně některých souvisejících zákonů (zákon o podpoře výzkumu a vývoje) tuto smlouvu o využití výsledků výzkumu vývoje: uzavřely I. 1.1. podpory na základě výsledků veřejné soutěže vyhlášené poskytovatelem , realizuje projekt evidenční číslo IM0538 s názvem "Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad" (dále jen projekt). 1.2. Termín 1.3. Na základě Smlouvy o poskytnutí podpory na projekt výzkumu a vývoje evidenční číslo jednací 13 022/2005-3 I ze dne ze dne 24.2.2005 a jejího dodatku číslo jednací 2588/2010-31 ze dne I 5.2.201 O poskytl poskytovatel spolupříjemci finanční prostředky ze státního rozpočtu ČR formou účelové dotace za účelem jejich využití na dosažení cílů a parametrů stanovených v rámci řešení projektu v letech 2005 - 2011. Spolupříjemce ukončení řešení projektu 31 .12.2011. ll. 2. 1. prohlašuje, že ke dni ukončení projektu 31.12.2011 bude plně dosaženo předpokládaný ch cílů řešení projektu, přičemž výsledkem výzkumu je míněna nová informace, znalost nebo technické poznatky vzniklé při řešení projektu. 2.2. Definice Spolupříjemce výsledků , jenžjsou předmětem této smlouvy: Patent: Lesný, P., Syková, E., Michá.fek, J., Přádný, M., Jirsák, 0.: Biomateriál na bázi nanovlákenný ch vrstev a způsob jeho přípravy. PV 2007-54, udělen 2.7.2009, č. 300 805 Patent: Lesný, P., Syková, E., Michálek, J., Přádný, M., Jirsák, O., Martínková, L.: Biomateriál na bázi nanovlákenné vrstvy a způsob jeho přípravy. PS 2009-252, udělen 27.08.2009, č. 301 002 2.3. Dosažené výsledky, které bude uživatel používat a jež jsou jejich využití: předmětem této smlouvy včetně charakteru a) biomateriál na bázi nanovlákenný ch vrstev, jehož podstata spočívá v tom, že sestává alespoň ze dvou nanovlákenný ch vrstev, porostlých na obou stranách souvisle živými buňkami, přičemž tyto vrstvy jsou vzájemně propojeny prorůstáním buněk, přičemž nanovlákenné vrstvy jsou netkané a jsou tvořeny syntetickými polymery nebo kopolymery monomerů vybraných ze 1 skupiny zahrnující estery kyseliny methakrylové , amidy kyseliny methakrylové , urethany, vinylalkohol a monomery odvozené od kyseliny mléčné a jejích derivátů., b) biomateriál na bázi nanovlákenný ch vrstev, jehož podstata spočívá v tom, že sestává z nanovlákenné vrstvy porostlé na jedné straně živými buňkami, které jsou funkčně polarizované, přičemž nanovlákenná vrstva je tvořena syntetickými polymery nebo kopolymery monomerů vybraných ze skupiny zahrnující estery kyseliny methakrylové , amidy kyseliny methakrylové, urethany, vinylalkohol a monomery odvozené od kyseliny mléčné a jejich derivátů. m. 3. 1. Smluvní strany shodně prohlašují v souladu s ust. § 16, odst. 3. zák. č. 130/2002 Sb., že výlučným vlastníkem výsledků řešení projektu jsou příjemce a spolupříjemce podpory. Přijemce, spolupříjemce a způsob nakládání s výsledky řešení projektu byly upraveny smlouvou o úpravě vzájemných vztahů v rámci výzkumného centra"Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad UK" ze dne 2.2.2009. podpory prohlašuje, že má smluvně vypořádány veškeré práv duševního vlastnictví chráněných jako patenty, registrované vzory souvislosti s realizací řešení projektu. 3.2. Spolupříjemce 3.3. podpory se zavazuje využití za stejných podmínek. Spolupříjemce zpřístupnit výsledky řešení nároky týkající se autorská práva, vzniklá v uplatněné či projektu všem zájemcům o jejich IV. 4.1. O způsobu a rozsahu využívání výsledků řešení projektu a jejich zveřejňování je uživatel povinen podávat pravidelné písemné informace spolupříjemci podpory počínaje prvním rokem po sepsání smlouvy po dobu 3 let tj. do 31.12.2014. 4.2. Uživatel se dále zavazuje při zveřejňování výsledků řešení projektu zajistit, aby ve všech informacích zveřejňovaných v souvislosti s výsledky řešení projektu bylo vždy uvedeno, že řešení bylo realizováno za finanční podpory ze státních prostředků poskytnutých prostřednictvím poskytovatele (jmenovitě za podpory projektu MŠMT 1M0538). Spolupříjemce podpory se zavazuje, že nebude žádným způsobem omezovat propagaci výsledků , pokud bude prováděna v souladu s obecně závaznými právními předpisy. 4.3. v. 5.1. Výsledky řešení projektu netvoří žádné zvláštních právních předpisů : důvěrné informace, se kterými by bylo třeba nakládat podle VI. písemně upozornit spolupříjemce podpory na každou změnu údajů uvedených v 6.1 . Uživatel je povinen této smlouvě. 6.2. Tuto smlouvu je možno smluvními stranami. 6.3 . Tato smlouvaje sepsána ve 2 vyhotoveních, z nichž každá ze smluvních stran obdrží po jednom. Tato smlouva nabývá účinnosti dne 1. 1. 2012. Smlouva je sjednána na dobu určitou a to do 31. 12. 6.4. měnit nebo doplňovat jen písemnými dodatky vzájemně 2014 Za uživatele: Za spolupříjemce podpory: AV EXPERIMENT ÁLNÍ MEDICÍNY V Praze dne 1.12.2011 V Praze dne 1.12.2011 2 potvrzenými oběma Smlouva o využití výsledků výzkumu a vývoje Smluvní strany: organizace: Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i. se sídlem: Vídeň ská 1083, 142 20, Praha4 IČ : 68378041 DIČ : CZ 68378041 bankovní spojení: č . účtu 19-2795070297/0100, Komerční banka ,a.s. Praha Zastoupená: Prof. MUDr. Evou Sykovou, DrSc. funkce: ředitelka (dále jen spolu příjemce podpory, na straně jedné) a organizace: EponaCell s.r.o. se sídlem: Vídeňská 1083 , 142 20, Praha 4 IČO : 24722022 DIČ: CZ24 722022 bankovní spojení: č . účtu 198906093/0600, GE Money Bank, a.s. zápis v OR: Městský soud v Praze, oddíl 168820, vložka C zastoupená: Mgr. Danielem Bezděkem , jednatelem (dále jen uživatel, na straně druhé) ve smyslu § ll zákona č . 130/2002 Sb. o změně některých souvisejících zákonů (zákon o výsledků výzkumu vývoje: uzavřely výzkumu a vývoje z veřejných prostředků a o podpoře výzkumu a vývoje) tuto smlouvu o využití podpoře I. 1.1. podpory na základě výsledků veřejné soutěže vyhlášené poskytovatelem, realizuje projekt evidenční č íslo 1M0538 s názvem "Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad" (dále jen projekt). 1.2. Termín 1.3. Na základě Smlouvy o poskytnutí podpory na projekt výzkumu a vývoje evidenční číslo jednací 13 022/2005-31 ze dne ze dne 24.2.2005 a jejího dodatku číslo jednací 2588/2010-31 ze dne 15 .2.201 O poskytl poskytovatel spolupříjemci finanční prostředky ze státního rozpočtu ČR formou účelové dotace za účelem jejich využití na dosažení cílů a parametrů stanovených v rámci řešení projektu v letech 2005 - 20 I I . Spolupříjemce ukončení řešení projektu 31.12.20 ll. II. 2.1. prohlašuje, že ke dni ukončení projektu 31.12.20 ll bude plně dosaženo projektu, přičemž výsledkem výzkumu je míněna nová informace, znalost nebo technické poznatky vzniklé při ře šení projektu. Spolupříjemce předpokládaných cílů ře šení 2.2. Definice výsledku, jenž je předmětem této smlouvy: Patent: Brynda, E., Houska, M., Syková, E., Jendelová, P., Dyr, J., Filová, E., Riedel, T., Chlupáč, J., Lesný, P., Bačáková, L.: Způsob přípravy regulovaných vrstev fibrinu na pevných površích. PV 2006-821, udělen: 12.9.2008, č. 299 687. 2.3. Dosažené výsledky, které bude uživatel používat a jež jsou charakteru jejich využití: předmětem této smlouvy včetně Řešení podle vynálezu bude využito pro přípravu a úpravu podpůrných struktur vhodných jako matrice pro pěstování buněk v tkáňovém inženýrství. 1 III. Smluvní strany shodně prohlašují v souladu s ust. § 16, odst. 3. zák. č. 130/2002 Sb., že výlučným vlastníkem výsledků řešení projektu jsou příjemce a spolupříjemce podpory. Příjemce, spolupříjemce a způsob nakládání s výsledky řešení projektu byly upraveny smlouvou o úpravě vzájemných vztahů v rámci výzkumného centra"Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad UK" ze dne 2.2.2009. Spolupříjemce podpory prohlašuje, že má smluvně vypořádány veškeré uplatněné nároky týkající se práv duševního vlastnictví chráněných jako patenty, registrované vzory či autorská práva, vzniklá v souvislosti s realizací řešení projektu. 3.1. 3.2. podpory se zavazuje využití za stejných podmínek. Spolupříjemce 3.3. zpřístupnit výsledky řešení projektu všem zájemcům o jejich IV. 4.1. O způsobu a rozsahu využívání výsledků řešení projektu a jejich zveřejňování je uživatel povinen podávat pravidelné písemné informace spolupříjemci podpory počínaje prvním rokem po sepsání smlouvy po dobu 3 let tj. do 31.12.2014. 4.2. Uživatel se dále zavazuje při zveřejňování výsledků řešení projektu zajistit, aby ve všech informacích zveřejňovaných v souvislosti s výsledky řešení projektu bylo vždy uvedeno, že řešení bylo realizováno za finanční podpory ze státních prostředků poskytnutých prostřednictvím poskytovatele Umenovitě za podpory projektu MŠMT 1M0538). 4.3. podpory se zavazuje, že nebude žádným způsobem omezovat propagaci pokud bude prováděna v souladu s obecně závaznými právními předpisy. 5.1. Výsledky řešení projektu netvoří žádné zvláštních právních předpisů . Spolupříjemce výsledků , v. důvěrné informace, se kterými by bylo třeba nakládat podle VI. písemně upozornit spolupříjemce podpory na každou změnu údajů uvedených 6.1. Uživatel je povinen v této smlouvě. 6.2. Tuto smlouvu je možno měnit nebo oběma smluvními stranami. 6.3. Tato smlouvaje sepsána ve 2 vyhotoveních, z nichž každá ze smluvních stran obdrží po jednom. Tato smlouva nabývá účinnosti dne 1.1.2012. Smlouva je sjednána na dobu určitou a to do 6.4. doplňovat vzájemně jen písemnými dodatky potvrzenými 31.12.2014 Za uživatele: Za spolupříjemce podpory: Prof. MUDr. ředite Mgr. Daniel Syková, DrSc. ka jefte:poncC~II (JBTAV EXPElUMENT ÁLNÍ MEDiciNY Vídeňská AV CR, v. v. i. V Bezděk PrJ~ dR~f'f=kA lQ83 v Praze dne 2 1083, Praha 4, 142 00 1 . 1 :2~0 17f4 223 323, 774 223 23 3 ICO: 24722022, DIČ: CZ2472202?. CENTRUM BUNĚČNÉ TERAPIE A TKÁŇOVÝCH NÁHRAD IMPLEMENTAČNÍ PLÁN NA VYUŽITÍ VÝSLEDKŮ PROJEKTU 2011 1. Úvod - regenerativní medicína, buněčná terapie a tkáňové inženýrství Regenerativní medicína představuje reálnou alternativu pro léčení celé řady obtížně léčitelných patologických stavů, například vrozených nebo degenerativních chorob, poškození nervové tkáně apod. Jejím cílem je nahradit, opravit nebo zlepšit funkci poškozené tkáně nebo orgánu s využitím moderních léčebných postupů využívajících kmenové buňky a moderní biomateriály. V řadě případů se přitom jedná o léčbu poruch, které jsou stávajícími postupy považovány za neléčitelné. Regenerativní medicína zahrnuje buněčnou terapii (BT) a tkáňové inženýrství (TI). Metody buněčné terapie využívají aplikace kmenových buněk; může se jednat jak o vlastní buňky pacienta, které byly odebrány, v prostředí in vitro modifikovány a poté cíleně vráceny do těla tak, aby bylo dosaženo požadovaného terapeutického efektu (autologní buněčná terapie), tak i o buňky jiného pacienta, pocházející například z buněčné banky (alogenní buněčná terapie). Buňky (živá složka tkáně) Růstové faktory Cílová tkáň TKÁŇOVÉ INŽENÝRSTVÍ Biomateriál (3D struktura tkáně) Tkáňové inženýrství navazuje na buněčnou terapii a klade si za cíl rekonstrukci celých tkání a orgánů s využitím vhodných buněk, růstových faktorů a moderních biokompatibilních biomateriálů a nanomateriálů. V současnosti jsou nejperspektivnější biomateriály založeny jednak na bázi makroporézních polymerních hydrogelů, jednak na bázi nanovláken simulujících přirozené prostředí buněk. Strana 2 z 26 2. Charakteristika odvětví a) Buněčná terapie a tkáňové inženýrství Buněčná terapie a tkáňové inženýrství již dávno není jen záležitostí výzkumu a vývoje, ale vyvinula se ve svébytné odvětví průmyslu representované mezinárodní základnou, ročním obratem mnoha miliard dolarů a širokým spektrem osvědčených terapií, od konvenčních transplantací orgánů po pokročilé buněčné terapie. Jistě k tomu přispěla i změna ve vnímání tohoto odvětví poté, co prezident USA Obama spolu s NIH začal měnit negativistický vliv svých předchůdců na výzkum lidských embryonálních kmenových buněk . I díky tomu již v roce 2011 bylo dosaženo významného mezníku - roční tržby přesáhly miliardy dolarů. Kromě toho první blockbuster (Provenge ® (Dendreon,Seattle, WA, USA) nebyl pouze zaveden do běžné klinické praxe, ale také je řádně hrazen pojišťovnou (Centers for Medicare a Medicaid Services, CMS). Všechny ostatní ukazatele, včetně počtu klinických studií, růstu průmyslu a míry infrastruktury, ukazují na velmi slibnou a bezpečnou budoucnost odvětví buněčné terapie a tkáňového inženýrství, které je dnes svébytným zdravotnickým sektorem rychle rozvíjející své schopnosti a kapacity proto, aby se stal vysoce konkurenceschopným, trvale udržitelným, mnohamiliardovým průmyslem 21. století. Obr. 1: Hlavní terapeutické pilíře moderní medicíny (Cell therapy industry: billion dollar global business with unlimited potential, Mason, Brindley, Culme-Seymour & Davie, Regen. Med. (2011) 6(3), 267) Až do nedávné doby byla zdravotní péče podporována třemi hlavními terapeutickými pilíři (obr. 1). Sloupce představují jednotlivé technologické platformy, schody k těmto pilířům představují základní infrastrukturu (včetně scale-up výroby, odpovídajících regulatorních předpisů, finančních úhrad a akceptací odborné i široké veřejnosti; štít (střecha) pak symbolizuje celkovou lékařskou potřebu. Zatímco tři základní pilíře jsou velmi úspěšné, zlepšují život milionů pacientů, vytvářejí tisíce pracovních míst a generují bohatství, stále existují dosud neléčitelná onemocnění, jejich potřebu léčení v současné době nemůžeme Strana 3 z 26 uspokojit. Patří mezi ně např. cukrovka, srdeční selhání, neurodegenerativní onemocnění apod., nemluvě o mnohem závažnějším problému globální nerovnosti ve zdravotní péči. Každý z tří hlavních terapeutických pilířů zdravotní péče (farmaceutika, biofarmaceutika a zdravotnické prostředky), je postaven na jiné technologické platformě s jedinečnými klíčovými kompetencemi: chemické sloučeniny, biologické molekuly a zdravotnické prostředky. Opírají se každá o jiný vědní obor: chemie (Pharma), molekulární biologie (biotechnologie) a fyzika/technika (zdravotnické prostředky), které určují jejich výsledné produkty a služby a pokrývají nejširší spektrum zdravotnických specialit a aplikací. Podobně se děje i v buněčné terapii, včetně terapie trvalých buněčných náhrad (hematologické a ne-hematologické), tkáňového inženýrství (buněk a scaffoldů), dočasné buněčné terapie, které narušují nebo snižují progresi přirozených nemocí, imunomodulační terapie buňky, buněčné terapie, které chrání buňky a tkáně v ohrožení, genová terapie (přes prostředky k transportu buněk) a vakcíny proti karcinomům. Buněčná terapie je jiná léčebná technologická platforma, než současná hlavní tři terapeutická odvětví. Přestože jde o průlomové technologie, není to nic nového. CTI má své kořeny v transfuzi krve, transplantaci kostní dřeně i orgánů, v tkáňových bankách a reprodukčním oplodnění in vitro. Zhruba 200 letá historie prošla cestu od počátečních klinických pokusů a omylů, přes laboratorní průzkumy a vyvrcholila v nezbytně potřebný kritický objem a jedinečné výzvy, a tak odůvodnila právo tohoto svébytného odvětví průmyslu na existenci. Proto je dnes buněčná terapie a tkáňové inženýrství čtvrtým a posledním terapeutickým pilířem globální zdravotní péče. b) Možnosti léčby kmenovými buňkami Nejčastěji využívanými zdroji dospělých kmenových buněk jsou kostní dřeň (punkcí kostní dřeně, nejčastěji z lopaty kyčelní kosti) a tuková tkáň (odběrem tukové tkáně). Takto získávané a terapeuticky využívané multipotentní kmenové buňky jsou označovány jako mezenchymální (stromální) kmenové buňky – MSC (Mesenchymal Stem/Stromal/ Cells). Kultivované MSC, jsou „čistou“ vypěstovanou monokulturou, jejich kultivace za účelem rozmnožení do dostatečného počtu trvá 2-3 týdny. Příprava/kultivace kmenových buněk má řadu zásadních předností: Rozmnožení kmenových buněk po prakticky bezbolestném odebrání malého množství pacientovy tkáně Přesně definovaná kvalita a kvantita kultivovaných buněk pro okamžité i pozdější využití. Možnost zmražení takto vyrobených buněk pro pozdější použití. Mezi další výhody buněčné terapie založené na kultivovaných MSC (tedy dospělých kmenových buňkách) patří skutečnost, že nevytvářejí nádory, nemají známé vedlejší účinky a nejsou problémem z etického hlediska. Vedle dospělých kmenových buněk je předmětem výzkumu, vývoje a výroby celá škála multipotentních buněk jsou buňky embryonální, fetální, indukované pluripotentní kmenové buňky (iPSC), atd. MSC jsou v současnosti testovány ve velkém množství klinických hodnocení po celém světě, včetně ČR. c) Nanotechnologie Globální trh nanotechnologií pro zdravotnictví se soustřeďuje na nástroje, materiály a aplikace (Obr. 2). V současné době jsme svědky intenzivního výzkumu a vývoje nanotechnologií zaměřeného na způsoby podávání léků (drug delivery) a zobrazení s Strana 4 z 26 vysokým rozlišením pro neinvazivní diagnostické účely, které vykazují největší tržní potenciál. Další oblastí je vývoj nanovlákenných materiálů jako nosičů pro tkáňové inženýrství. Základním předpokladem využití nanomateriálů pro zdravotnické aplikace je jejich biokompatibilita a biodegradabilita. V popředí vývoje jsou USA s vysokým počtem patentů v důsledku brzké komercializace nanotechnologií pro zdravotnictví. Obr. 2: Možnosti aplikací nanotechnologií ve zdravotnictví d) Veterinární aplikace Stejně jako v humánní medicíně i ve veterinární medicíně se buněčné terapii & tkáňovému inženýrství otevírají nové možnosti léčby v oborech ortopedie, oftalmologie, kožního lékařství, neurologie a dalších. Dosud je léčba daných diagnostik řešena konzervativně, tj. operativně nebo farmakologicky. Buněčné terapie a tkáňové inženýrství jsou velkou příležitostí pro veterinární medicínu. Zvláště výhodné se jeví kombinace biologického materiálu s nanovlákennými nosiči, případně hydrogely. Tento trend je na vzestupu ve státech Evropské unie, Spojených státech a Austrálii, klíčové je postavení USA. Z mnoha společností jmenujme firmu Vet-Stem®/ USA, s 55 patenty a která má dnes zastoupení po celém světě a která již odléčila 3,534 koní a 2,079 psů s úspěšností 70%. e) Regulatorní aspekty Po stránce regulatorní byl projekt Centra buněčné terapie a tkáňových náhrad zaměřen na vývoj léčivých přípravků moderní terapie (buňky, biomateriály obsahující buňky) a zdravotnických prostředků (medical devices = biomateriály bez buněčné složky). Obě dvě oblasti jsou výrazně regulovány na úrovni ČR (prostřednictvím Státního ústavu pro kontrolu léčiv, SÚKL) i na úrovni EU (prostřednictvím Evropské lékové agentury, EMA). Regulace významná pro tržní průzkum se týká zejména Strana 5 z 26 Při vývoji léčivých přípravků musí být dodržena vysoká kvalita získávání výzkumných výsledků; jsou stanovena kritéria pro hodnocení chemických látek (lékopis) i preklinických testů na buňkách (kontrolní laboratoře) i na zvířatech (zařízení splňující standardy Správné laboratorní praxe). I povolení k zahájení klinického hodnocení je uděleno po splnění vysokých požadavků na kvalitu vyráběných přípravků, vědecké podpůrné výsledky a protokol studie (Správná klinická praxe). Obě dvě podmínky významně prodražují vývoj léčivých přípravků a přispívají k nastavení prodejní ceny, která musí odrážet i prostředky vložené do vývoje. Reklama na léčivé přípravky je přísně regulována. Výkon dozoru nad dodržováním zákona o regulaci reklamy v oblasti reklamy na humánní léčivé přípravky a sponzorování v této oblasti (s výjimkou rozhlasového a televizního vysílání) zajišťuje SÚKL. SÚKL se podílí i na stanovování cenové politiky pro léčivé přípravky, na jejichž úhradách se podílí zdravotní pojišťovny, formou rozhodování o maximálních cenách léčivých přípravků a o výši a podmínkách jejich úhrad. Proces stanovování maximálních cen probíhá v režimu správního řízení, který se snaží transponovat Směrnici 89/105/EHS10. Žádosti a podněty jsou hodnoceny především na základě posouzení účinnosti, bezpečnosti a nákladové efektivity. Účastníky správního řízení jsou ze zákona zdravotní pojišťovny, držitelé rozhodnutí o registraci léčivých přípravků, resp. dovozci a výrobci neregistrovaných léčivých přípravků. Podněty mohou podávat i pacientské organizace, odborné společnosti či odborné instituce. Každý hromadně vyráběný léčivý přípravek moderní terapie podléhá před uvedením na trh v České republice nebo Evropské unii centralizované registraci. V rámci registračního procesu posuzují bezpečnost, účinnost a kvalitu přípravku regulatorní orgány všech členských států EU. Posuzují se tam indikace, kontraindikace, dávkování přípravku, klasifikace pro výdej, ale i příbalová informace pro pacienta a návrh textů na obal léčivého přípravku. Centralizovaná registrace nákladná, je nicméně platná pro celou EU. Důsledkem je to, že trh pro léčivé přípravky moderní terapie je na úrovni EU. Strana 6 z 26 3. Velikost a dynamika trhu a) Trh buněčné terapie a tkáňového inženýrství a jeho dynamika V r. 2009 byl potenciál trhu pro všechny buněčné terapie v USA odhadován na více než 100 milionů pacientů. K hlavním oblastem aplikací patřily srdeční onemocnění, diabetes, neurodegenerativní onemocnění a onemocnění pohybového aparátu. Očekávaný nárůst byl odhadován na 2,7 miliardy dolarů v roce 2012 a 5,1 miliardy dolarů do roku 2014 V současné době je osm (8) schválených (FDA /EMA) buněčných terapií Provenge ® (Dendreon,Seattle, WA, USA) [104.105] pro léčbu rakoviny prostaty, kde jen úhrady vakcíny dosahovaly v USA 93.000 dolarů na pacienta a očekává se, že jen za náhrady prostřednictvím Medicare Provenge budou generovat tržby 1,75 miliard dolarů ročně v r. 2014 . Jde o první „blockbuster“buněčné terapie. Globálně pokračuje výzkum buněčné terapie rychlým tempem. Za posledních 10 let bylo zahájeno více než 2500 studií (hematologické a ne-hematologické), v nichž ponejvíce jsou pacienti stále ještě nabíráni nebo se shromažďují klinická data. Mnohem významnější však je fakt, že až 50% z těchto studií je ve fázi II a III, ve kterých se již zkoumá terapeutická účinnost [Davie NL, Culme Seymour-EJ, Brindley,DA, Mason C, nepublikované údaje]. Přes pesimistický odhad úspěšnosti 1-2% (v současné době biotechnologie vykazují 5,3% úspěšnost), přechodu z fáze II k marketinkové autorizaci, odhaduje se, že počet regulatorně schválených buněčných terapií v následujících 5-10 letech může být více než sto. Povzbudivé dále je, že k dnešnímu dni klinické studie buněčné terapie byly daleko úspěšnější než jejich již zavedené protějšky biotechnologie a farmacie. V roce 2011 buněčná terapie dosáhla tržeb jedné miliardy dolarů. Např. firma Dendreon rychle nabírá obrátky po FDA schválení jejich prvního produktu Provenge (sipuleucel-T) dne 29. dubna 2010. Provenge je autologní buněčné imunoterapeutikum pro léčbu metastatického karcinomu prostaty. Komerční prodej výrobku byl zahájen v květnu 2010 a vyústil v příjmy 48 Mill. dolarů za období 2009-2010 . V současné době Dendreon předpovídá tržby pro Provenge v rozsahu 350-400 milionů USD pro rok 2011 . Vedle metod využívajících kultivované buňky jsou na trhu firmy jako např. Cytori Therapeutics (San Diego, CA, USA), jejíž Celution ™ je zařízení, které automatizuje a standardizuje extrakci, promytí a koncentraci autologních tukových buněk, které pak mohou být znovu implantovány zpět stejnému pacientovi v jednom chirurgickém zákroku. V neposlední řadě je třeba zmínit banky pupečníkové krve s očekávaným příjmem 330 Mill. dolarů v r. 2011. Odhad tržního potenciálu a dynamiky růstu trhu je ukázán na obr. 3. Za méně než deset let se trh buněčné terapie a tkáňového inženýrství rozvinul z ročních příjmů z jednotek milionů dolarů do více než jedna miliarda dolarů dnes a konzervativně se očekává nárůst až 5,1 miliardy dolarů v roce 2014. Strana 7 z 26 Obr. 3: Odhadovaný tržní potenciál produktů na bázi buněčných terapií- celosvětově, na základě prodeje všech doposud EMA/ FDA schválených produktů 2008-2014 (Cell therapy industry: billion dollar global business with unlimited potential, Mason, Brindley, Culme-Seymour & Davie, Regen. Med. (2011) 6(3), 271) b) Trh nanotechnologií pro zdravotnictví a jeho dynamika Největší trh využití nanotechnologií ve zdravotnictví representuje Severní Amerika s tržbami ve výši 3,7 Mld. $ v r. 2008 a další růst se očekává se zavedením nových produktů v regenerativní medicíně a v krytech na rány a v implantátech. Evropa je v tomto směru druhým největším trhem s hlavními hráči: Francie, Německo a Velká Británie. Zavádění nových produktů na trh je povětšinou spojeno se spoluprací firem ve výzkumu a vývoji, dohodami a strategickými aliancemi, fúzemi a akvizicemi klíčových hráčů. Oblastí s nejvyšší dynamikou růstu je výzkum, vývoj a inovace lékových forem (drug formulation) a způsobu jejich podávání, které mají na tomto trhu nejvyšší podíl. Aktivní spolupráce a dohody v této produktové oblasti tvoří až 77% z celkové počtu uzavřených spoluprací a dohod. Nanotechnologie pracují na atomové a buněčné úrovni, proto je třeba dosud neznámé interakce mezi nanočásticemi, nanovlákny a živými buňkami obezřetně hodnotit. Odrazem toho je relevantní legislativa, která se tvoří současně s rozvojem nanotechnologií. Nedostatek vhodných výrobních standardů pro nanočástice používané pro zdravotní péči, může představovat omezení v rozvoji (scale-up) nanomedicíny. Nanotechnologie pro zdravotnictví představují dnes zejména: léková forma a způsob podávání léků, biokompatibilní implantáty a kryty, regenerativní medicína, léčba poranění a lékařská diagnostika. Růst globálního trhu lékových forem a způsob podávání léků odhaduje CAGR na 20,4% v období let 2009-2014; současně má největší tržní podíl. Značný růstový potenciál vykazují i neinvazivní lékařská terapie pomocí nanočástic a nanovlákenných materiálů a z nich vyrobených biokompatibilních implantátů (Obr. 4). Strana 8 z 26 Obr. 4: Aplikace nanotechnologií ve zdravotnictví Firmy, které se prosadily na trhu: Léky a diagnostika: Access Pharmaceuticals, Capsulution Nanoscience AG, Luna Innovations Inc, a Starpharma Nanomateriály: Capsulution AG, Debiotech a Elan Corporation, Nanomateriály v CZ: ELMARCO, Contipro, Kertac Hlavní strategií vedoucích hráčů v nanotechnologiích pro zdravotnictví je spolupráce a licenční smlouvy pro vývoj produktů zejména v souvislosti s lékovými formami a řízeným podávání léků. c) Veterinární aplikace Buněčná terapie a tkáňové inženýrství veterinární medicíně se realizuje v oblastech ortopedie, oftalmologie, kožního lékařství, neurologie a dalších. V roce 2009 světový trh v odvětví regenerativní medicíny činil 1,166 mld. dolarů. Výhled na rok 2014 je 3,090 mld. dolarů. Jen v USA trh představuje 78 miliónů psů, 94 miliónů koček a 13 miliónů koní; jen na léky a chirurgické ošetření kloubů pro psy bylo vydáno cca 1,2 miliardy USD. Pro veterinární aplikace není třeba FDA schválení (USA), ošetření vykazuje vysokou ziskovost. Strana 9 z 26 4. Centrum buněčné terapie a tkáňových náhrad - uplatněné aplikační výstupy Hlavním cílem Centra bylo soustředit vybrané směry základního výzkumu v oblasti vývojové biologie, v oblasti syntézy biokompatibilních polymerů, v oblasti neurověd a transplantační chirurgie do vzájemně provázaného celku, poskytujícího experimentální základnu pro výzkum v oblasti buněčné terapie a tkáňových náhrad na úrovni kvalitativně srovnatelné s úrovní dosahovanou ve vyspělých zemích EU a USA. Výsledkem činnosti Centra je celkem 176 impaktovaných publikací, a dále aplikační výstupy - 6 patentů a 2 probíhající klinické studie. Výsledky, které byly zveřejněny v publikacích, budou použity pro rozpracování nových terapeutických postupů v oboru regenerativní medicína. Pro využití patentů byly podepsány smlouvy o využití aplikovaných výsledků s firmami BioInova, s.r.o., ArtiCell., s.r.o. a EponaCell, s.r.o., které plánují jejich využití ve své činnosti. Seznam patentů, uvedených ve smlouvách o využití aplikovaných výsledků: Brynda, E., Houska, M., Syková, E., Jendelová, P., Dyr, J., Filová, E., Riedel, T., Chlupáč, J., Lesný, P., Bačáková, L.: Způsob přípravy regulovaných vrstev fibrinu na pevných površích. PV 2006-821 Uděleno: 12.9.2008 č. 299 687: Způsob přípravy regulovaných vrstev fibrinu na pevných površích pro pěstování buněk spočívající v tom, že se v prvním kroku na pevný povrch adsorpcí z roztoku fibrinogenu adsorbuje fibrinogen, s výhodou o koncentraci 2 až 200 .mi.g/ml, na takto upravený povrch se v druhém kroku působí roztokem trombinu, s výhodou o aktivitě 0,1 až 10 U/ml, načež se v třetím kroku na povrch působí roztokem obsahujícím fibrinogen, s výhodou o koncentraci 200 .mi.g/ml nebo vyšší, a inhibitor trombinu antitrombin nebo antitrombin v kombinaci s heparinem, nebo heparinizovanou krevní plazmou, přičemž fáze působení roztokem trombinu a následné působení roztokem obsahujícím fibrinogen a antitrombin se může provádět opakovaně. Jako roztok fibrinogenu v prvním kroku je možné použít antikoagulovanou krevní plazmu. Horák, D., Syková, E., Babič, M., Jendelová, P., Hájek, M.: Superparamagnetické nanočásticové sondy na bázi oxidů železa s modifikovaným povrchem, způsob jejich přípravy a použití. PV 2006-120 Uděleno: 17.9.2009 č. 301 067: Superparamagnetické nanočásticové sondy na bázi oxidů železa, s výhodou magnetitu nebo maghemitu, s modifikovaným povrchem, pokryté mono-, di- nebo polysacharidy ze skupiny zahrnující D-arabinosu, D-glukosu, D-galaktosu, D-manosu, laktosu, maltosu, dextrany a dextriny nebo aminokyselinami nebo poly(aminokyselinami) ze skupiny zahrnující alanin, glycin, glutamin, asparagin, histidin, arginin, L-lysin, kyselinu asparagovou a glutamovou, které tvoří koloid sestávající z částic s úzkou distribucí velikostí o indexu polydisperzity menším než 1,3, jejichž střední velikost je od 0,5 do 30 nm, s výhodou 1 až 10 nm, obsah oxidu železa tvoří 70 až 99,9 hmotn. %, s výhodou 90 hmotn. %, obsah modifikačního činidla tvoří 0,1 až 30 hmotn. %, s výhodou 10 hmotn. %. Jejich použití pro označení buněk, za účelem jejich sledování. Lesný, P., Syková, E., Michálek, J., Přádný, M., Jirsák, O.: Biomateriál na bázi nanovlákenných vrstev a způsob jeho přípravy. PV 2007-54 Uděleno: 2.7.2009 č. 300 805: Biomateriál na bázi nanovlákenných vrstev sestává alespoň ze dvou nanovlákenných vrstev, porostlých na obou stranách souvisle živými buňkami, přičemž tyto vrstvy jsou vzájemně propojeny prorůstáním buněk. Nanovlákenné vrstvy jsou netkané a jsou tvořeny syntetickými polymery nebo kopolymery monomerů vybraných ze skupiny zahrnující estery kyseliny methakrylové, amidy kyseliny methakrylové, urethany, vinylalkohol a monomery odvozené od kyseliny mléčné a jejích derivátů, a způsobu jeho přípravy. Lesný, P., Syková, E., Michálek, J., Přádný, M., Jirsák, O., Martínková, L.: Biomateriál na bázi nanovlákenné vrstvy a způsob jeho přípravy. PS 2009-252 Uděleno: 27.08.2009 č. 301 002: Řešení se týká biomateriálu na bázi nanovlákenné vrstvy sestávajícího z nanovlákenné vrstvy porostlé na jedné straně živými buňkami, které jsou funkčně polarizované, přičemž nanovlákenná vrstva je tvořena syntetickými polymery nebo kopolymery monomerů vybraných ze skupiny zahrnující estery kyseliny methakarylové, amidy kyseliny methakrylové, urethany vinylalkohol a monomery odvozené od kyseliny mléčné a jejich derivátů; dále je popsán způsob jeho přípravy. Horák, D., Syková, E., Babič, M., Jendelová, P., Hájek, M.: Methods of preparation of superparamagnetic nanoparticles based on iron oxides with modified surface and superparamagnetic nanoparticles obtained by such a method. Uděleno: 08.09.2010 č. EP 1991503 B1 Smetana, K., Gabius, H. J., Dvořánková, B., Kaltner, H., Lacina, L., André, S., Szabo, P., Valach, J., Zima, T., Syková, E., Jendelová, P.: Použití galektinů a způsob přípravy myofibroblastů a nanovláken extracelulární matrix. Strana 10 z 26 2010-107 Uděleno: 11.05.2011 č. 302 505: Řešení se týká použití in vitro alespoň jednoho savčího rekombinantního galektinu vybraného ze skupiny sestávající z galektinu-1, galektinu-4 a galektinu-7 jako induktoru přechodu dermálních fibroblastů do myofibroblastů a tvorby nanovláken extracelulární matrix, dermálními fibroblasty a z nich derivovanými myofibroblasty. Řešení se dále týká způsobu přípravy myofibroblastů a nanovláken extracelulární matrix, jehož podstata spočívá v tom, že se in vitro kultivují dermální fibroblasty v přítomnosti alespoň jednoho savčího rekombinantního galektinu vybraného ze skupiny sestávající z galektinu-1, galektinu-4 a galektinu-7. Galektiny v kombinaci s bioaktivním faktorem TGF-.beta.1 vykazují synergický efekt. Probíhající klinické studie: Klinická studie "Autologní kmenové buňky kostní dřeně v léčbě poranění míchy" vznikla v roce 2003 ve spolupráci s Neurologickou klinikou FN Motol a dosud bylo do ní zařazeno celkem 41 pacientů. Jejím cílem je ověřit bezpečnost a účinnost systémového podání autologních kmenových buněk kostní dřeně v léčbě pacientů s poraněnou míchou. Kmenové buňky byly získány od pacientů izolací mononukleárních buněk z kostní krve aspirované z lopaty kosti kyčelní. Způsob aplikace kmenových buněk byl rozdělen na formu intraarteriální a intravenózní. Intraarteriální cestou (katetrizací arteria vertebralis) byly kmenové buňky podány 10 pacientům. Ostatním pacientům byly kmenové buňky aplikovány intravenózně (katetrizací periferní žíly). U skupiny deseti pacientů s intraarteriálním způsobem podání došlo v sedmi případech ke zlepšení motorických nebo senzorických funkcí. Ze skupiny pacientů s intravenózní aplikací jsme neurologické zlepšení zaznamenali u 11 (ze 31) pacientů. Pokud jsme porovnávali výsledky u skupiny pacientů s chronickým (déle než 30 dní po úraze) a subakutním (do 30 dní po úraze) poraněním míchy, buněčná terapie vyzněla lépe ve prospěch časného podávání: z 19 subakutních pacientů jsme částečné klinické zlepšení zaznamenali u 14 z nich. Naopak z 22 chronických pacientů se zlepšilo pouze pět. Z pomocných vyšetření jsme pro sledování našich pacientů využívali elektrofyziologické (motorické a somatosezorické evokované potenciály) a MRI vyšetření. Elektrofyziologické vyšetření dobře korelovalo s případným motorickým nebo senzorickým zlepšením. Naproti tomu kontrolní MRI vyšetření neprokázalo jiné změny v ložisku myelopatie než regresi edému nebo krvácení. Sledování detailních změn v místě poranění míchy však bylo často limitováno artefakty z kovových implantátů, používaných při chirurgické stabilizaci poraněných obratlů. První pacienti prodělali transplantaci kmenových buněk v roce 2003 a doposud jsme u žádného z nich nezaznamenali žádné komplikace, které by vznikly v souvislosti s buněčnou terapií. Rovněž pomocí kontrolních vyšetření MRI míchy jsme vyloučili strukturální léze, které by odpovídali formaci novotvarů. Tato studie potvrdila bezpečnost intraarteriální a intravenózní aplikace autologních kmenových buněk kostní dřeně u pacientů s traumatickou míšní lézí. Vzhledem k faktu, že na zlepšení neurologického deficitu se v akutní fázi poranění míchy může podílet i ústup míšního šoku nebo regrese edému míchy, je nutné provádět hodnocení na co možná největším souboru pacientů. Proto plánujeme do této studie zařadit další pacienty. Klinická studie „Použití dřeňových kmenových buněk v léčbě ischemické choroby dolních končetin u pacientů se syndromem diabetické nohy“ byla zahájena ve spolupráci ÚEM a Centra diabetologie Institutu klinické a experimentální medicíny. Do studie bylo zařazeno 14 pacientů (11 mužů, 3 ženy, průměrný věk 61,9 ± 9,6 roku, průměrné trvání diabetu 23,5 ± 11,1 roku, průměrný glykovaný hemoglobin 6 ± 1 %). Osm pacientů bylo léčeno buňkami z kostní dřeně, 6 pacientů buňkami z periferní krve po stimulaci filgrastimem. Získaná suspenze kmenových buněk byla pak aplikována do svalů postižené dolní končetiny. Byl hodnocen vzestup hodnot transkutánní tenze kyslíku (TcPO2), subjektivní vnímání bolesti podle Visual Analog Scale (VAS) a hojení defektů. U všech pacientů došlo po intramuskulární implantaci buněk k signifikantnímu vzestupu TcPO2 z 10 ± 8,7 mm Hg před léčbou na 39,4 ± 9,5 mm Hg po 6 měsících (p = 0,0005) od aplikace. Dále byla pozorována signifikantní redukce plochy defektů a snížení bolesti, hodnocené VAS během sledovaného období: medián plochy defektu se snížil ze 4,3 (0,7–31,7) cm2 před léčbou na 0,06 (0– 0,5) cm2 po 6 měsících od léčby (p = 0,0078). Snížení klidových bolestí bylo pozorováno u všech pacientů, průměrná hodnota VAS se snížila z 5,3 ± 1,8 před léčbou na 1,1 ± 1,3 po 6 měsících po aplikaci (p = 0,002). Hodnocená inovativní léčba syndromu diabetické nohy pomocí kmenových buněk je dle výsledků studie u pacientů s těžkou ischémií dolních končetin účinnou metodou bez závažných nežádoucích účinků, která zvyšuje transkutánní tenzi kyslíku, zlepšuje hojení defektů a vede ke zmírnění klidových bolestí. Cílem dalšího využití výsledku projektu Centra buněčné terapie a tkáňových náhrad je komercionalizace vybraných produktů s vysokou přidanou hodnotou využitelných v klinické praxi. Spektrum produktů, které by mohly vzniknout je přehledně shrnuto v následující matici: Strana 11 z 26 Výzkumné a mezioborové aplikace Aplikace v humánní medicíně Aplikace ve veterinární medicíně Inovativní biomateriály na bázi hydrogelů a nanovláken Moderní patentované biomateriály, komercionalizovatelné přímým prodejem zákazníkům. Biomateriály pro léčbu závažných stavů, zejména poranění míchy vstupující do klinických studií. Biomateriály aplikované ve veterinární medicíně (například pro léčbu rozsáhlých kožních lézí nebo poranění nervového systému) Kmenové buňky a tkáňové náhrady Buňky a modely pro výzkumné aplikace, testování léčiv a kosmetických přípravků. Léčebné postupy zahrnující kmenové buňky vstupující do klinických studií. Využití kmenových buněk pro přímou léčbu např. zánětů šlach ve veterinární medicíně. Registrované léčebné postupy, prodej licencí např. velkým farmaceutickým společnostem. Certifikované veterinární léčebné postupy, prodej licencí např. velkým farmaceutickým společnostem. Nové výrobní metody a léčebné postupy Kooperace/prodej know-how Ve všech případech se jedná o produkty s vysokou přidanou hodnotou a obsahující silný potenciál pro uplatnění na trzích ČR i EU. Detailně jsou využití jednotlivých výstupů projektu rozvedeny v následujících kapitolách. Řada výstupů projektu patří mezi „Léčivé přípravky moderní terapie“ (ATMP), což je kategorie zahrnující kromě buněčných léčivých přípravků a produktů tkáňového inženýrství i tzv. „biologickou terapii“. Jedná se o oblast regulovanou přímo Evropskou lékovou agenturou (EMA) (Nařízení ES 1394/2007), ve které je vyžadována současná registrace vyvinutého přípravku, který prošel preklinickými zkouškami a klinickými studiemi ve všech členských státech EU (tzv. „centralizovaná registrace“). Tento postup zvyšuje náklady na vývoj produktů, registrované přípravky však mohou být používány v celé EU. Registrace léčivých přípravků a certifikace terapeutických postupů jsou ultimátním cílem všech metod regenerativní terapie. Dovedení vývoje do stádia registrovaného léčebného postupu umožní získat zpět náklady na vývoj, tak jak je obvyklé mezi farmaceutickými společnostmi. Produktem je registrovaný léčivý přípravek moderní terapie, prostředkem komercionalizace v této fázi je nejčastěji vstup „velkého“ investora nebo partnera, často farmaceutické společnosti. Strana 12 z 26 5. Biomateriály pro výzkumné a mezioborové aplikace Při vývoji materiálů pro buněčnou terapii a tkáňové inženýrství předpokládáme, že vyvinuté vzorky mohou nalézt uplatnění i v jiných oblastech a disciplínách, například: separace a filtrace, chemické analytické metody, zdravotnické materiály, mikrobiologie, biotechnologie a bioinženýrství. Tyto disciplíny využívají unikátních vlastností nanomateriálů, kterými jsou zejména velká a otevřená porozita a velký specifický povrch. Vyvinuté biomateriály na bázi makroporézních polymerních hydrogelů, nanovláken a funkcionalizovaných injikovatelných gelů mohou být po standardizaci a validaci výroby a získání ISO 10993 certifikátu používány ve vědě i nemedicínských oborech pro řadu aplikací. Do této kategorie patří certifikovaná nanovlákna a hydrogely. a) Rozsah a popis trhu Trh biomateriálů na bázi makroporézních polymerních hydrogelů, nanovláken a funkcionalizovaných injikovatelných gelů je velmi obsáhlý, stejně jako počet firem a škála výrobků v kvalitě pro výzkum a vývoj na trh uvádějí. V řadě případů se jedná o mezistupeň v rozvoji firmy, která poté, co získá se svými produkty očekávané výsledky, pokračuje dále v testování in vivo, klinických studiích a registraci výrobku. Jedná se de facto o katalogový prodej následujícího spektra výrobků: Nanovlákenné materiály: Homogenní nanovlákna, koaxiálních nanovlákna a nanovláken obsahujících bio-aktivní činidla, biodegradabilních a biokompatibilních polymerů. Nanovlákna s inkorporovanými částicemi Nanovlákenná hmota v podobě pravidelné mřížky, strukturovaných vrstev a trojrozměrných útvarů pro TI krevních cév, vhodné pro osídlení nanovlákenného nosiče buňkami. Jejich struktura bude značně heterogenní; prostorné póry umožní vniknutí buněčného materiálu a hustější oblasti budou sloužit k zachycení a usídlení buněk. Krátké nanovlákenné příze, svazků vláken, připravené z klasických nebo koaxiálních nanovláken. Nanovlákenné materiály vyrobené metodou tažení nanovláken, biodegradabilní a biokompatibilní nanovlákna a mikronová vlákna. Nanovlákenné materiály vyrobené pomocí vysokého napětí, což povede k výrobě vzorků o složité hierarchické vnitřní struktuře, která připomíná mimobuněčnou hmotu. Jednotlivá vlákna budou mít průměry od desítek až po tisíce nanometrů a budou mít značně vyšší křivost, než je tomu u klasické výroby nanovláken. Nanovlákenné materiály vyrobené metodou odstředivého zvlákňování, které poskytne možnost zvlákňovat i ty polymerní roztoky, které není možné zpracovat metodou koaxiálního zvlákňování. Materiály vyrobené touto technologií budou moci být nanášeny přes vrstvy vyrobené elektrostatickým zvlákňováním. Kompozitní tkáňové nosiče - Budou vyvinuty kompozitní materiály složené z vrstev a lamin připravených pomocí kombinace výše uvedených technologií, tj.: elektrostatického zvlákňování klasického, elektrostatického zvlákňování s užitím netradičních zdrojů vysokého napětí, technologie tažení nanovláken a metodou odstředivého zvlákňování. Kombinací těchto metod budou připraveny nosiče pro tkáňové inženýrství s řízenou hierarchickou strukturou. Budou připraveny vzorky vyrobené kombinací metody elektrostatického zvlákňování a metody rapid prototyping (RP). Hydrogely Makroporézní hydrogel Makroporézní hydrogel povrchově modifikovaný vybranými oligopeptidovými sekvencemi Oba typy hydrogelů mohou sloužit jako nosiče buněk nebo k řízenému dávkování léčiv. Strana 13 z 26 b) SWOT analýza Silné stránky: Slabé stránky: Příležitosti: Hrozby: nové materiály, unikátní materiálové vlastnosti, unikátní geometrické vlastnosti, vysoká modifikovatelnost, vysoká odborná kvalifikace vývojových týmů velká konkurence firem ve vývojové oblasti, vysoké náklady a tedy cena produktů nové vlastnosti produktů, nové aplikační možnosti, dosud neobsazený trh nízká spotřeba materiálů pro výzkumné účely, vysoká rizika spojená s vývojem materiálů. c) Prognóza poptávky po produktu nebo službě Výše uvedené nanovlákenné produkty a makroporézní hydrogely jsou určeny pro další výzkum a vývoj v oblasti tkáňového inženýrství, zejména jako implantáty, kompozitní tkáňové nosiče, nosiče buněk, atd. Současně předpokládáme jejich uplatnění i v jiných oblastech a disciplínách, například, separace a filtrace, chemické analytické metody, zdravotnické materiály, mikrobiologie, biotechnologie a bioinženýrství, kde mohou být využity unikátních vlastností nanomateriálů a hydrogelů. Trhem pro tyto produkty jsou především výzkumná a vývojová pracoviště. Nanovlákenné produkty a hydrogely se uplatní jako součást budoucích zdravotnických a léčivých prostředků a budou mít svůj zájmový trh v celém profilu medicínských aplikací, zejména pak v oblasti humánní a veterinární regenerativní medicíny. Primární vývoj a testování nových biomateriálů bude probíhat na výzkumných a vědeckých pracovištích. Následně farmaceutické firmy budou komercializovat tyto zdravotnické a léčivé prostředky. Relevantní trhy: celosvětově d) Charakteristika spotřebitelů Vědecká pracoviště zabývající se výzkumem v oblasti regenerativní medicíny Farmaceutické firmy rozšiřující své produktové portfolio MSP v oblasti TI hledající nákladově přijatelná řešení pro transfer buněk do tkáně Další pracoviště zabývající se filtrací, zdravotnickými textiliemi a biotechnologiemi obecně. e) Strategie uvedení produktů na trh v CZ i zahraničí Komunikační strategie: B2B – Prezentace na mezinárodních kongresech, výstavách a veletrzích, odborné konference, publikování v odborných periodikách, webové stránky, katalogy, mailing, univerzitní časopisy B2C – reklamní kampaně, webové stránky Distribuční strategie: B2B – katalogový prodej B2C – distribuční společnosti pro sektor výzkumu a vývoje/ zařazením do jejího katalogu Cenová strategie: Cenová hladina produktů bude optimálně nastavena dle poměru cena/výkon vzhledem ke konkurenčním metodám Strana 14 z 26 6. Kmenové buňky pro výzkumné aplikace Výzkum v oblasti nových léčiv se dnes odklání od testování na zvířatech a hledá nové výzkumné modely. Proto je poptávka po primokulturách (buňkách přímo izolovaných ze tkání pacientů), nebo po kmenových buňkách diferencovaných do definovaných, obtížně dostupných cílových tkání. Vyvíjeným výstupem je definovaný produkt obsahující lidské kmenové buňky pro výzkumné a testovací účely, tedy pro neterapeutické použití, doprovázený analytickým certifikátem. Pro manipulaci s produktem musí být zřízena buněčná banka. a) Rozsah a popis trhu Pro základní, aplikovaný i experimentální výzkum využívají různé typy institucí 4 kategorie zdrojů „materiálu“: Nákup požadovaných buněčných linií od specializovaných komerčních subjektů, či bank, které jsou schopné prokázat jejich legální odběr a garantovat jejich žádané vlastnosti, ať se jedná o primokultury, modifikované buněčné linie, vektory, či nástroje a média k jejich modifikacím Tkáně a buňky z transplantačních, či výzkumných programů, které jsou i za tímto účelem pacientovi odebírány proti podepsání příslušného informovaného souhlasu Neoficiální práce se zbytky tkání z odběrových a vaků a instrumentárií, které byly za tímto účelem použity Neoficiální získání tkáně, buněk mimo výzkumný program ze zdravotnických zařízení, nebo uschované z jiných projektů Jedním z významných výzkumných použití kmenových buněk- lidských embryonálních kmenových buněk (hESC), lidských mesenchymálních kmenových buněk (hMSC), z pupečníkové krve derivovaných MSC (CB-MSC), lidských indukovaných pluripotentních buněk (hiPSC), či dalších, představuje použití při testování toxicity a vývoji nových léčiv. Dle údajů společnosti Select Biosciences prezentovaných na letošním kongresu WCRM v Lipsku jsou v současnosti za nejperspektivnější zdroj pro výzkum hESC a hiPSC. Založení banky unikátních buněčných linií, které budou získávány legálně s informovaným souhlasem od určitých definovaných skupin populace by měly sloužit k rozšíření výzkumných možností v oboru regenerativní medicíny, využívaných specializovanými institucemi- státní, regionální, privátní a to zejména v EU, ale potenciálně i celosvětově. b) SWOT analýza Silné stránky: Slabé stránky: Příležitosti: Hrozby: napojení konsorcia na IKEM, UHKT a další výzkumné institucerenomovaná zdravotnická zařízení, výrobní kapacita společnosti BioInova nedostatek zkušeností s legislativou a technologií bankingu, není vytvořena infrastruktura, malé povědomí o BioInově rostoucí poptávka v EU i celosvětově, propojení s dalšími zdravotnickými zařízeními, propojení s vybranými tkáňovými bankami, partnering renomované zahraničního poskytovatele/ banky aktivity konkurence v ČR (NTC, Ostrava), příliš velké regulatorní zásahy, technologické trendy - upřednostňování hESC a hiPSC jako vhodnějšího testovacího modelu c) Prognóza poptávky po produktu nebo službě Představu o celosvětové velikosti tohoto tržního segmentu, zahrnujícího operace s kmenovými buňkami pro testování při vývoji nových léčiv, poskytla na konferenci WCRM Strana 15 z 26 v Lipsku společnost Select –Biosciences. „Drug Screening“- 842 milionů USD. Předpokládaný roční růst obratu v celém segmentu celosvětově stejná společnost odhaduje na 40 %. Data samostatně pro EU, či ČR momentálně nejsou k dispozici. Hepatocyty, kardiomyocyty, dalšími buněčnými typy i kmenovými buňkami a jejich deriváty jako nástrojem pro výzkum cytotoxicity a vývoj nových léčiv ve svých portfoliích disponují všichni významní lídři v tomto life-science oboru. Jmenovitě ATCC, Lonza, AllCells, STEMCELL Technologies, BD Biosciences a další. d) Charakteristika spotřebitelů B2B trh s cílovými skupinami: Portály, banky a komerční subjekty nabízející primokultury či další typy buněčných linií pro výzkum Výzkumná oddělení farmaceutických společnosti, chemického a kosmetického průmyslu – testování produktů se zvláštním zřetelem na testování pro specifické cílové skupiny - věk, diagnóza, fenotyp, komorbidita Výzkumná pracoviště- týmy zabývající se vybranými projekty pro regenerativní medicínu e) Způsob uvedení produktu na trh Prvotním krokem bude prověření souvisejících legislativních omezení v ČR i EU. Následně budou vytvořeny standardní operační postupy pro zahájení provozu buněčné banky tohoto typu a validace všech souvisejících metod kontroly kvality a transportu zamýšlených produktů. F) Strategie uvedení produktu v CZ i zahraničí Komunikační strategie Aktivní kontakt a jednání se zahraničními subjekty vedoucí k zařazení disponibilních primokultur/ buněčných linií z vybraných zdrojů/ donorů do svých portfolií. Snaha o zařazení do portfolií lokálních evropských zastoupení významných světových hráčů v oboru. Osobní prezentace a komunikace na mezinárodních konferencích. Katalog disponibilních primokultur/ linií na webové stránce vybraného partnera konsorcia. Partnering jakýchkoli relevantních kapacit v ČR i střední Evropě. Distribuční strategie Dodávání kryoprezervovaného produktu validovaným způsobem dle objednávky z katalogu. Cenová strategie Cena bude stanovena dle aktuálních tržních možností. Jedná se o komerční příležitost nevelkého rozsahu, zajímavou ale z pohledu budování „share of voice“ v rámci komunity evropské/ globální regenerativní medicíny. Strana 16 z 26 7. Kmenové buňky do klinických hodnocení fáze I, II a III Základem všech buněčných terapií jsou buňky. Firma Bioinova je nositelem povolení SÚKLu pro SVP výrobu kmenových buněk pro potřeby klinických hodnocení fáze I, II a III a klinickou praxi. Realizuje v praxi transfer technologií ze základního výzkumu, přes aplikovaný výzkum a inovační podnikání až do umístění na medicínském trhu. Bioinova se zaměření na SVP výrobu vybraných buněk pro vybrané klinické aplikace, optimalizaci výrobních parametrů, snížení nákladovosti výroby a usnadnění logistiky distribuce buněk, jmenovitě: Rozšíření spektra vyráběných mezenchymálních kmenových buněk s cílem rozšíření spektra možných klinických aplikací Prověřit možnosti diferenciace kmenových buněk do osteogenní a chondrogení linie Zavést metody osazování biomateriálů kmenovými buňkami, a tím zvýšit účinnost cílových buněčných terapií. Prověřit možnosti výroby alogenních buněk a s jejich pomocí tak realizovat ekonomickou optimalizaci výrobního procesu Prověřit možnosti zvyšování velikosti šarží (scale-up) zpracovávaných buněk s cílem dalšího snižování výrobních nákladů. Prověřit možnosti zvětšení komerčně obsluhovaného teritoria s využitím zavedení buněčné banky a prodloužením životnosti buněk při transportu b) Rozsah a popis trhu Tradiční model výzkumu a vývoje léků farmaceutickým průmyslem se vyznačuje nesmírně vysokými náklady na vývoj a velmi nízkou nadějí na úspěch. Výdaje na léky stoupají rychleji než HDP, tento v poslední době trvalý trend je vážným nebezpečím pro trvale udržitelný rozvoj v citlivém sektoru zdravotních služeb. Je jisté, že dlouhodobá udržitelnost sociálního smíru silně závisí na státních výdajích na léčebnou péči, častým řešením je zvyšování výdajů na zdravotnictví na úkor jiných rezortů, nejčastěji pak trpí vzdělání a věda, neboť zde silné lobby nepracují. Růst výdajů na léky je obtížné zastavit nebo omezit. Nalezení alternativních, účinnějších a ekonomicky výhodnějších léčebných postupů je proto nutnou podmínkou dalšího udržitelného rozvoje vyspělých světových ekonomik. Buněčná terapie, k tradiční medicíně komplementární, s obrovským potenciálním objemem trhu a velkou latentní poptávkou, má naději být alternativou, u které se předpokládá větší efektivita léčení s nižšími náklady. Vlády rozvinutých zemí proto významně investují do buněčné terapie s cílem zavést bezpečné, široce využitelné a nákladově efektivní léčebné metody. Projekty RM jsou významně podporovány EU a národními granty. Zvýšení výdajů na biotechnologie je doporučováno i Národní ekonomickou radou vlády, která odhaduje celkovou ztrátu z nezavedení regenerativní medicíny na 1,5 mld. Kč/rok. Biotechnologie jsou prioritou i Národní politiky výzkumu vývoje a inovací na léta 2009 – 2015. c) SWOT analýza: Silné stránky: Bioinova je držitelem licence pro aseptickou výrobu buněčných léčivých přípravků v podmínkách SVP Bioinova disponuje unikátním know-how v oboru zavádění SVP a výroby kmenových buněk Úzká spolupráce s institucemi z oblasti základního výzkumu (zdroj knowhow). Úzká spolupráce s aplikační sférou – FN, kliniky. Strana 17 z 26 Slabé stránky: Příležitosti: Hrozby: vysoká míra nákladů na procedury spojené s uvedením na trh (SVP, klinické testy, registrace), dlouhá doba návratnosti Nízký počet odborných pracovníků v týmu Bioinova Trh RM je globální, vysoce rostoucí, má obrovský objem, velkou potenciální ziskovost Rostoucí poptávka po alternativě k tradiční medicíně – politická i grantová podpora RM. Preference moderních terapií stran lékařů, preference ze strany zdravotních pojišťoven Legislativní bariéry mohou zpozdit prosazení úspěšných RM postupů na trh Nedostatek prostředků na financování celého procesu až po registraci léčivého přípravku d) Prognóza poptávky po produktu nebo službě Obecně je trh léků a léčivých prostředků je trvale rostoucí a globální, vyznačuje se vysokou vnitřní konkurenční intenzitou a vysokými vstupními bariérami. Naproti tomu vznikající trh produktů buněčné terapie se vyznačuje vysokým objemem, obrovskou latentní i reálnou poptávkou, počet registrovaných, a tedy legálně použitelných, léčivých přípravků ještě nepřekročil desítku. V EU trh překotně roste na straně nabídky, dnes má povolení k SVP výrobě buněk v EU již 127 společností. Z nich se 80 zabývá výrobou, 54 firem se specializuje na dovoz buněčných přípravků a 15 firem má licenci jen na propouštění. Tržní podíl buněčné terapie na celkovém zdravotním trhu nelze stanovit, protože většina aplikací buněčné terapie nemá substitut v portfoliu metod klasické medicíny. Na takto rychle rostoucím trhu není vliv konkurence významný. Důležité je získání registrace léčivé prostředku a následně jednání o krytí zdravotnických výkonů pojišťovnou. V České republice je dnes celkem 5 laboratoří s SVP výrobou buněk: FN Hradec Králové, FN Motol, FN Brno MU Brno a Bioinova. Je však třeba zmínit zahraniční společnosti penetrující na český trh (Cellerix – Ontaril ®, Osiris – Provacel™) a produkty tkáňového inženýrství (Fidia AB – Hyalograft®, Genzyme – Carticell®). e) Charakteristika spotřebitelů Kliniky provádějící klinické studie, po registraci léčivého přípravku pak léčbu pacientů Farmaceutické a kosmetické společnosti Investoři, fondy f) Způsob a uvedení produktu na trh Na trh je možné uvést jen registrovaný produkt. To predikuje potřebu zavedení výroby produktu v režimu správné výrobní praxe (SVP), provedení klinické studie a následnou registraci léčivého přípravku (SÚKL s účinností v zemích EU/EMA. g) Strategie uvedení produktu Komunikační strategie: B2B – kongresy, odborné semináře, publikování v odborných periodikách, webové stránky, sociální sítě B2C – referenční pracoviště, spolupráce s vybranými odbornými centry Prodej licencí Strana 18 z 26 Distribuční strategie: Distribuce bude řešena vždy v úzké součinnosti kliniky s výrobcem Cenová strategie: Cenová hladina produktů bude stanovena s ohledem na vynaložené náklady, celospolečenskou potřebu a nalezení vhodného poměru cena/výkon ve vztahu ke konkurenci Strana 19 z 26 8. Medicínské aplikace moderních biomateriálů - hydrogely Léčba míšní léze Po poranění nebo chirurgickém zásahu do tkáně Centrálního nervového systému (CNS) dochází v řadě případů k vytvoření pseudocysty. Rozvoj pseudocysty v nervové tkáni a její zvětšování působící útlak okolní tkáně, který je možné omezit implantací vhodného biomateriálu (obsahujícího buňky nebo bez buněk), do kterého mohou vrůstat cévy, vazivo a výběžky nervových buněk tak, aby byla zachována homogenita tkáně a její dobré prokrvení. Finálním výstupem je pak certifikovaný komplexní biomateriál složený z makroporézního hydrogelu obsahujícího buňky a určený pro klinické studie, u kterého očekáváme maximální léčebný efekt na regeneraci tkáně mozku a míchy. a) Rozsah a popis trhu, Možnost náhrady a regenerace poškozené tkáně mozku a míchy a bránění rozvoji pseudocyst prostřednictvím implantace tkáně nebo jednotlivých buněk je zkoumána již více než 10 let. Experimentálně byly implantovány různé typy tkání a buněk, včetně polymerních implantátů (např.embryonální kmenové buňky (např. Brustle 1999), Schwannovy buňky (Kuhlengel 1990), periferní nervová tkáň (např. Wrathall et al., 1982), matrice na základě kolagenu, biodegradovatelné polylaktidové implantáty (Maquet et al., 2001). Nejdále dospěl Woerly s makroporézním polymerním hydrogelem (patent z r. 1997), se kterým byl prokázán účinek v preklinických studiích. Woerlyho gel dnes vyrábí kanadská firma Aqua gel, avšak bez RGD modifikace; in vivo preklinické testy v ÚEM neprokázaly účinnost gelu. Nicméně výsledky těchto experimentů zůstaly na úrovni výzkumu a vývoje. V současnosti není lékařům dostupná žádná spolehlivá metoda, která by zabránila rozvoji pseudocysty v místě míšního poranění nebo chirurgického zákroku. Tkáň CNS není možné spojovat chirurgickým šitím nejběžnější způsob jejího spojování je s využitím tkáňových lepidel na bázi fibrinu (Baxter), toto spojení je však pouze dočasné, mechanické a nezajišťuje funkční propojení tkáně. b) SWOT analýza: Silné stránky: Slabé stránky: Příležitosti: Hrozby: Celosvětově unikátní technologie Vysoká míra nákladů nutná k uvedení technologie na trh (SVP, klinické testy, registrace), dlouhá doba návratnosti Minimálně EU/EMA trh, možnost dalšího rozšíření trhů, celospolečenský zájem a podpora, extrémní zájem postižených - paraplegiků a kvadruplegiků Nedostatek finančních prostředků, výrazné zpoždění uvedení na trh, nepříznivá regulatorní opatření c) Prognóza poptávky po produktu nebo službě Poranění míchy (PM) jako následek úrazů, je jeden z nejzávažnějších patologických stavů, který ve svých důsledcích připravuje stát o prostředky jak na léčbu pacientů, tak na poskytování péče. Léčba je nákladná, pacienti jsou upoutání na lůžko, posléze ve většině případů invalidní. Podle údajů NSCIA (National Spinal Cord Injury Center, www.sci-infopages.com) žije USA 250 tis. pacientů s poraněnou míchou, z nich 52% jsou paraplegici a 47% kvadruplegici. Průměrné výdaje zdravotní péče za dobu života quadriplegika se uvádí 1,35 mil. USD., 428 tis. USD u paraplegika. Strana 20 z 26 V České republice nejsou přesná čísla k dispozici, odhaduje se, že každoročně přibývá v naší republice okolo 300 pacientů po PM , to odpovídá počtu 6800 žijících pacientů. Počet nezaměstnaných 8 let po úrazu se uvádí 63%, to v ČR odpovídá počtu přes 4000 nezaměstnaných, v invalidním důchodu. K PM dochází v průměru ve věku 31 let, pacienti byli tedy právě na začátku zralého profesionálního života. Odhlédneme-li od nevyčíslitelné snížené kvality života pacienta s PM a významného zkrácení očekávaného věku dožití, můžeme odhadnout škodu za ztrátu pracovní síly, vyplacené invalidní důchody a výdaje za rehabilitaci a výdaje na léčbu následných zdravotních komplikací, celková finanční ztráta pro ČR činí asi 1,5 mld. Kč/rok. V EU je žijících pacientů po poranění míchy asi 420 tis., z nichž je zhruba 270 tis. nezaměstnaných s tím, že každoročně přibývá kolem 18.000 nových úrazů. V evropském měřítku se tedy roční ztráty působené poraněním míchy přesahují 100 mld. Kč. Uvedený odhad můžeme považovat za spodní odhad ročního objemu latentního poptávkového trhu. Vedle SCI se nabízejí další možné oblasti aplikace: Výplň chybějící tkáně - permanentní implantáty: plastická, estetická chirurgie, poranění, popáleniny Využití biomateriálu k transportu buněk nebo jiných biologicky aktivních látek d) Charakteristika spotřebitelů Odběrateli budou neurochirurgické kliniky schopné provést náročný chirurgický zásah buď v rámci klinické studie, nebo posléze k léčbě pacientů. Kliniky musí být úzce provázány s výrobci léčivého prostředku, vybavenými čistými prostory a SVP certifikací, který bude provádět osazování biomateriálu před implantací vlastními kultivovanými kmenovými buňkami pacienta. Dalšími potenciálními klienty budou farmaceutické společnosti po zakoupení licence. Pro uvedení tohoto typu terapií je limitní cena, způsob úhrady a jejich logistika. Obsluha tohoto trhu tvoří celý řetězec služeb související s jejich objednáváním, výrobou, distribucí, terapeutickým užitím. Lze očekávat, že poptávka vysoce převýší reálné možnosti systému veřejného zdravotního pojištění a i při výhledu použití v rámci zdravotnických nadstandardů e) Způsob a uvedení produktu na trh Komplexní biomateriál složený z hydrogelu obsahujícího buňky bude nejprve dodáván (a to i za komerčních podmínek) do multicentrické klinické studie (CZ, EU - Asociace francouzských paraplegiků, apod.). V případě úspěchu klinické studie bude biomateriál registrován v kategorii léčivých přípravků a komercionalizován. Relevantním trhem budou v první řadě země EU/EMA, pravděpodobné je i rozšíření do dalších teritoríí prostřednictvím globálních multicentrických studií nebo licenčního řízení. Vzhledem k celospolečenské závažnosti onemocnění a celkové výši ekonomických dopadů očekává se zájem a podpora státních orgánů CZ jako je Ministerstvo zdravotnictví a Zdravotní pojišťovny, se kterými chceme jednat nejen o podpoře klinického výzkumu, ale zvláště pak o participaci na úhradách za léčbu. f) Strategie uvedení produktu / CZ i zahraničí Komunikační strategie: B2B – kongresy, publikování v odborných periodikách, webové stránky, sociální sítě, spolupráce se sdruženími paraplegiců a kvadruplegiků B2C – referenční pracoviště, spolupráce s vybranými odbornými centry Prodej licencí Strana 21 z 26 Distribuční strategie: Distribuce bude řešena v úzké součinnosti kliniky s výrobcem Cenová strategie: Cenová hladina produktů bude stanovena s ohledem na vynaložené náklady, celospolečenskou potřebu, očekává se i spoluúčast pacienta Strana 22 z 26 9. Medicínské aplikace moderních biomateriálů - nanovlákna Nanovlákenné biomateriály pro tkáňové inženýrství Nanovlákenné biomateriály připomínají svojí strukturou mezibuněčnou hmotu řady tkání; podporují usídlování buněk a mohou podpořit jejich diferenciaci. Tyto materiály mohou být použity pro tkáňové inženýrství řady tkání – kůže, cév i dutých orgánů (například močový měchýř). Nanovlákenné materiály mohou být navíc funkcializovány pomocí bioaktivních molekul. a) Rozsah a popis trhu, Nanovlákenné materiály budou zkoumány z hlediska jejich laboratorní výroby, testování a analýzy, a to v podobě 1D (příz), 2D (vrstev) a 3D (objemných materiálů), které jsou vyvíjeny jako potenciální implantáty kůže, chrupavky, měkkých tkání, kostí a míchy. Možnosti uplatnění jednotlivých typů materiálů: Nanovlákna s inkorporovanými částicemi pro selektivní záchyt a/nebo diferenciaci lidských a zvířecích kmenových buněk pro tkáňové inženýrství kůže. Nanovlákenná hmota v podobě pravidelné mřížky, strukturovaných vrstev a trojrozměrných útvarů pro TI krevních cév. Krátké nanovlákenné příze, které poslouží pro vypracování GMP protokolů pro laboratorní zpracování nanomateriálů a usídlování buněk. Kompozitní tkáňové nosiče, založené na funkcializovaných nanovláknech s biomechanickou výztuží pro chrupavky, vývoj morfologie pro řízení kvality. Nanovlákenné materiály vyrobené pomocí netradičních zdrojů vysokého napětí určené pro implantáty míchy. Nanovlákenné materiály vyrobené metodou odstředivého zvlákňování určené pro preklinické testování cytotoxicity, biokompatibility a schopnosti buněčné proliferace a/nebo diferenciace. Biomateriály pro klinické pokusy vyrobené v souladu s existujícími předpisy (Procedury pro SVP a ISO 13485) Výše uvedené nanovlákenné produkty budou poté preklinicky a klinicky testovány a certifikovány jako zdravotnické nebo léčivé přípravky. Nanovlákenné produkty jako součást budoucích zdravotnických a léčivých prostředků budou mít svůj zájmový trh v celém profilu medicínských aplikací, zejména pak v oblasti regenerativní medicíny.Cílovým trhem jsou v primární fázi výzkumná pracoviště tkáňového inženýrství, následně pak firmy, včetně farmaceutických, komercializující zdravotnické a léčivé prostředky, vyvinuté na těchto pracovištích, kterých budou nanovlákenné struktury součástí. Relevantní trhy: celosvětově b) SWOT analýza: Silné stránky: nová technologie, účinnost metody Slabé stránky: vysoká míra nákladů na procedury spojené s uvedením na trh (SVP, klinické testy, registrace), dlouhá doba návratnosti Příležitosti: velký rozsah trhu, preference moderních terapií stran lékařů Hrozby: v průběhu vývoje bude metoda patentována jiným subjektem, náklady na výrobu budou vyšší než akceptovatelná cena na trhu. c) Prognóza poptávky po produktu nebo službě Vzhledem k výjimečnosti nanovlákenných produktů se při dobré účinnosti a cenové dostupnosti dá předpokládat vysoká poptávka. V případě prokázané funkčnosti Strana 23 z 26 nanovlákenných materiálů vyvíjených jako implantáty (TI) kůže, chrupavky, měkkých tkání, kostí a míchy by mohlo dojít k rozšíření počtu lékařů, kteří budou schopni nabízet léčbu koncovým klientům. d) Charakteristika spotřebitelů Hlavní skupinu spotřebitelů představují lékaři, kteří tvoří nezbytný mezičlánek mezi výrobcem a koncovým spotřebitelem. Jsou schopni správně určit diagnózu, zvolit vhodný způsob léčby a pomoci vyselektovat vhodné případy pro aplikaci našeho produktu. Druhou skupinu představují samotní pacienti, kteří se aktivně zajímají o možnosti léčby pomocí moderní terapie. e) Způsob a uvedení produktu na trh Na trh je možné uvést jen registrovaný produkt. To predikuje potřebu zavedení výroby produktu v režimu správné výrobní praxe (SVP), provedení klinické studie a následnou registraci regulační autoritou – USKVBL. Produkt bude registrován jako léčivý přípravek pro veterinární použití s platností ve všech zemích EMA. Tato skutečnost zjednoduší zavedení produktu – metody léčby na trhy zemí EU/EMA. Současně bude třeba řešit otázku ochrany duševního vlastnictví podáním patentu, případně průmyslového vzoru. f) Strategie uvedení produktu Komunikační strategie: B2B – kongresy, odborné konference, referenční pracoviště, publikování v odborných periodikách, webové stránky B2C – reklamní kampaně, webové stránky Distribuční strategie: B2B – lékaři realizují prodej koncovému spotřebiteli, současně zajišťují navazující služby vč. distribuce Cenová strategie: Cenová hladina produktů bude stanovena s ohledem na používané alternativní metody léčby tak, aby byl optimálně nastaven poměr cena/výkon vzhledem ke konkurenčním metodám g) Strategie uvedení produktu / metody na zahraniční trhy: Spolupráce s vybranými zahraničními odbornými centry Volba vhodné formy zahraniční spolupráce – pobočka, franchisa, pronájem patentu Prodej licence Strana 24 z 26 10. Biomateriály ve veterinární medicíně: kožní kryty Biomateriály pro kožní kryty s bioaktivními látkami nebo kmenovými buňkami Poranění, která vyžadují zvláštní pozornost, představují špatně se hojící rány nejrůznější etiologie, speciálně na distálních částech končetin, popáleniny, omrzliny, proleženiny, apod., často s rozsáhlou ztrátou kožního krytu. Často se hojí dlouhou dobu s neuspokojivým kosmetickým a mnohdy i funkčním výsledkem. Kvůli stupni kontaminace a ztrátě kůže není v řadě případů možné ošetřit ani čerstvé rány okamžitou či opožděnou primární suturou. Pokud jsou však ponechány sekundárnímu hojení, je běžnou komplikací nadměrná tvorba granulační tkáně a nepřijatelného vazivového keloidu. Tento proces však probíhá pomalu a tkáň, která defekt překryje, zdaleka nedosahuje vlastností plnohodnotné kůže. a) Rozsah a popis trhu, Současné metody jsou chirurgické povahy: podpora tvorby zdravé granulační tkáně, sterilní krytí rány, apod. autotransplantace kožních štěpů poměrně spolehlivě řeší problém kolagenní kryty ran Cílem uplatnění výsledků výzkumu je vývoj metody léčby pomocí kožního krytu pro veterinární použití, který by měl zabezpečení sterility rány, dostatečně efektivní odvod exudátu, podpora efektivního hojení, jednoduchá aplikace. Výhody oproti stávajícím metodám řešení: bezproblémová aplikace, eliminuje neúspěch v případě špatné vaskularizace štěpu, obsahuje aktivní substance (kmenové buňky, příp. růstové faktory), které podporují tvorbu nové tkáně. Nový terapeutický postup bude aplikován u indikací: špatně se hojící rány nejrůznější etiologie, speciálně na distálních částech končetin, popáleniny, omrzliny, proleženiny apod., často s rozsáhlou ztrátou kožního krytu. Velikost trhu v ČR: dle konzultací s odborníky z řad veterinárních lékařů se v rámci ČR jedná ročně cca. 100-150 případů. b) SWOT analýza: Silné stránky: nová technologie, účinnost metody Slabé stránky: vysoká míra nákladů na procedury spojené s uvedením na trh (SVP, klinické testy, registrace), dlouhá doba návratnosti Příležitosti: velký rozsah trhu, absence konkurence, preference moderních terapií stran lékařů Hrozby: v průběhu vývoje bude metoda patentována jiným subjektem, v průběhu vývoje se metoda ukáže jako slepá cesta, náklady na výrobu budou vyšší než akceptovatelná cena na trhu c) Prognóza poptávky po produktu nebo službě Současnou metodou řešení je chirurgický zákrok, a to buď podpora tvorby zdravé granulační tkáně nebo sterilní krytí rány a autotransplantace kožních štěpů. Vzhledem k obtížnosti léčby stávajícími metodami se při dobré účinnosti a cenové dostupnosti dá předpokládat masivní poptávka. Očekáváme, že se tyto parametry metody promítnou i do očekávané vysoké poptávky. V případě dostupnosti našich metody se tak rozšíří počet veterinářů, kteří budou schopni nabízet léčbu koncovým klientům. Strana 25 z 26 d) Charakteristika spotřebitelů Cílovou skupinou budou dvě odlišné skupiny spotřebitelů: veterinární lékaři, kliniky majitelé léčených zvířat Veterinární lékaři představují nezbytný mezičlánek mezi výrobcem a koncovým spotřebitelem. Jsou schopni správně určit diagnózu, zvolit vhodný způsob léčby a pomáhají vybrat vhodné případy pro aplikaci produktu. Zároveň jsou někteří z nich ochotni spolupracovat na získávání dat o účinnosti léčby, příp. se spolupodílet na rozvoji léčebné metody. Pro ně samotné má nová metoda význam jako možnost rozšíření klientely a zvýšení vlastní konkurenceschopnosti a odborné prestiže. Druhá skupina spotřebitelů jsou přímí majitelé zvířat. Zájemci o moderní terapie se rekrutují především ze středních a vyšších příjmových skupin. Řada z nich se aktivně zajímá o možnosti léčby jejich zvířat, na což je třeba pamatovat při volbě vhodné marketingové strategie. Oproti klientům z oblasti humánní medicíny jde pouze o samoplátce. e) Způsob uvedení produktu na trh Na trh je možné uvést jen registrovaný produkt. To predikuje potřebu zavedení výroby produktu v režimu správné výrobní praxe (SVP), provedení studie účinnosti a následnou registraci regulační autoritou – USKVBL. Produkt bude registrován pro veterinární použití s platností ve všech zemích EMA. Tato skutečnost zjednoduší zavedení produktu – metody léčby na trhy zemí EU/EMA. Současně bude třeba řešit otázku ochrany duševního vlastnictví podáním patentu, případně průmyslového vzoru. f) Strategie uvedení produktu Komunikační strategie: B2B – direct marketing, kongresy, různé formy vzdělávání veterinárních lékařů, referenční pracoviště, publikování v odborných periodikách, webové stránky B2C – reklamní kampaně, webové stránky Distribuční strategie: B2B – lékaři realizují prodej koncovému spotřebiteli, současně zajišťují navazující služby vč. distribuce B2C – koncový spotřebitelé - majitelé zvířat ve finále hradí jak produkt samotný, tak spektrum služeb spojených s produktem (logistika, diagnostika, operační výkon) Cenová strategie: Cenová hladina produktů bude stanovena s ohledem na používané alternativní metody léčby tak, aby byl optimálně nastaven poměr cena/výkon vzhledem ke konkurenčním metodám. g) Strategie uvedení produktu / metody na zahraniční trhy: Spolupráce s vybranými odbornými centry Volba vhodné formy spolupráce – pobočka, franchisa, pronájem patentu Prodej licence Strana 26 z 26 STANOVISKO Rady "Centra buněčné terapie a tkáňových náhrad" ze dne 7.2.2012 Složení Rady Centra: Prof. MUDr. Eva Syková, DrSc., Ústav neurověd UK 2. LF - předsedkyně Rady Prof. Jan E. Dyr, D.Sc., ÚHKT Doc. Ing. Karel Ulbrich, DrSc., Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i. František Janouch, předseda správní rady, Nadace Charty 77, projekt Buněčná terapie MUDr. Ivan Netuka, Institut klinické a experimentální medicíny (IKEM) Mgr. Jana Křížová-Voláková, místopředsedkyně, Občanské sdružení Buněčná terapie Ing. Jan Tichý, Erilens s.r.o. Doc. MUDr. Martin Bojar, CSc., Neurologická klinika FNM a UK 2. LF Prof. MUDr. Vladimír Vonka, DrSc., Ústav hematologie a krevní transfuze Doc. RNDr. Vladimír Holáň, DrSc. Ústav molekulární genetiky AV ČR, v.v.i. Prof. MVDr. Ivan Míšek, CSc., Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i. Členové Rady Centra byli seznámeni s činností a výsledky Centra za r. 2011. Dale byli členové Rady Centra seznámeni s Výroční zprávou za r. 2011 a celkovému shrnutí práce Centra. Závěr: K výzkumné práci Centra, ani k Výroční zprávě za r. 2011 a celkovému shrnutí práce Centra nebyly vzneseny žádné připomínky. Zapsal dne 7.2.2012 Doc. RNDr. Alexandr Chvátal, DrSc., MBA
Podobné dokumenty
FYZIOLOGIE A PATOFYZIOLOGIE ČLOVĚKA
Prof. MUDr. Michael Aschermann, DrSc.
II. interní klinika
U nemocnice 2, 128 08 Praha 2
e-mail: [email protected]
Navrhované téma:
Fyziologie a patofyziologie člověka
Hlavní publikace vážící se k tém...
âESKÁ SPOLEâNOST PRO BIOCHEMII A MOLEKULÁRNÍ
Některé další informace spolu
s rozsáhlou fotogalerií z akce jsou dostupné
na adrese http://www.ysf2009.org.
Ing. Pavel Ulbrich, Ph.D.
Ústav biochemie a mikrobiologie
VŠCHT Praha
Výroční zpráva ÚŽFG AV ČR, v.v.i. za rok 2011
Popis výsledku
Behaviorální reprodukční izolace můţe vést ke kompletní speciaci (vzniku
nových druhů), pokud částečná postzygotická izolace působí za přítomnosti
divergentních systémů rozpoznání se...
program - orion - Masarykova univerzita
Michal Strouhal, Petra Matějková, Darina Čejková, Lenka Ambrožová, David Šmajs,
George M. Weinstock
doc. Ing. P.Šebo, CSc. - New Concepts in Making Better
indukci IPTG spolu s produkovaným proteinem syntetizovány též chaperony Cpn60 a Cpn10, produkované přirozeně při chladovém
šoku bakteriálních buněk. Ty pak umožňují zpravidla úspěšně produkovat v r...
