HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20

HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20
Ref. 3013
2014/02
HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 - 2014/02
POUŽITÍ KITU
HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 kit je určen k separaci normálního hemoglobinu A abnormálních hemoglobinů S a C a fetálního
hemoglobinu F elektroforézou na kyselých agarózových gelech. Výsledky jsou vyhodnocovány z hlediska abnormalit vizuálně. Elektroforéza na
kyselých gelech HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 je základem k potvrzení identifikace hemoglobinových variant dříve detekovaných na
zásaditých gelech HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 technikou, zvláště k rozlišení hemoglobinu S od D a E od C.
Každý agarózový gel HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 je určen k analýze 7 mi vzorků.
Určeno pro diagnostické použití in vitro.
PRINCIP TESTU
Hemoglobin je komplexní molekula složená ze dvou párů polypeptidových řetězců. Každý řetězec je připojen k hem-chelátovému komplexu
protoporfyrinu s dvojmocným Fe. Hem je u všech hemoglobinů stejný – typ hemoglobinu je určen proteinovou částí, zvanou globin. Polypeptidové
řetězce alfa, beta, gama a delta tvoří normální lidské hemoglobiny :
• hemoglobin A ............................... = alfa 2 beta 2
• hemoglobin A2.............................. = alfa 2 delta 2
• fetální hemoglobin F .................... = alfa 2 gama 2
Alfa řetězec je totožný u všech těchto tří hemoglobinů.
Prostorová struktura hemoglobinu a ostatní vlastnosti jeho bílkovinné molekuly (stejně jako u ostatních bílkovin) závisí na prostorovém uspořádání a
sekvenci aminokyselin, které tyto řetězce tvoří. Substituce aminokyselin mutací je zodpovědná za tvoření variant hemoglobinu, které mají různý
povrchový náboj a následně rozdílnou pohyblivost v elektroforetickém poli, jež rovněž závisí na pH a iontové síle pufru. V kyselém prostředí je mobilita
rovněž ovlivněna elektrostatickou interakcí mezi pozitivně nabitými molekulami hemoglobinu a negativním nábojem agarózové mřížky.
Výsledné kvalitativní (nebo strukturální) abnormality se nazývají hemoglobinopatie. Snížená syntéza jednoho z hemoglobinových řetězců vede ke
kvantitativním (nebo regulačním) abnormalitám zvaným talasemie.
Test je prováděn s hemolyzovanými propranými erytrocyty. Hemoglobiny jsou separovány elekroforeticky na kyselých gelech a frakce jsou
vizualizovány obarvením amidočerní. Suché gely je možno ihned interpretovat.
REAGENCIE A MAT. OBSAŽENÝ V KITU HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20
VAROVÁNÍ : Viz bezpečnostní listy.
POLOŽKY
Agarózové gely (připrav. k použití)
Citrátový pufr (zásobní roztok)
Ředící roztok pro amidočerň (zásobní roztok)
Amidočerň (zásobní roztok)
Odbarvovací roztok (zásobní roztok)
Hemolyzační roztok (připrav. k použití)
Aplikátory (7 zubů) (připrav. k použití)
Tenké filtrační papíry
PRO OPTIMÁLNÍ VÝSLEDKY :
Všechny reagenty ze stejné sady musí být vždy používány společně a podle pokynů v příbalovém letáku.
PROSÍME, ČTĚTE PEČLIVĚ PŘÍBALOVÝ LETÁK.
KAT. Č. 3013
10 gelů
3 lahv. po 100 mL
1 lahv. 60 mL
1 lahv. 20 mL
1 lahv. 100 mL
1 lahv. 20 mL
1 bal. po 10 ks
1 bal. po 10 ks
1. AGARÓZOVÉ GELY
Příprava
Agarózové gely jsou připraveny k použití. Každý gel obsahuje : agarózu ; tlumicí roztok pH 5.9 ± 0.5 ; přídavné látky nezbytně nutné pro optimální
provedení, v koncentracích pro člověka neškodných.
Použití
Nosné medium pro elektroforézu.
Skladování, stabilita a známky poškození
Skladujte v horizontální poloze v originálních ochranných obalech – šipkou na přední straně krabice směrem nahoru. Lze skladovat při pokojové
teplotě (15 - 30 °C) nebo v chladničce (2 - 8 °C). Zamezit prudkým změnám teploty – neskladovat v blízkosti oken nebo tepelného zdroje.
Stabilní do doby exspirace vyznačené na krabici či štítcích na obalech gelů.
NEMRAZIT!
Nepoužívejte :
(i) v případě nálezu krystalů nebo precipitátů na povrchu gelů a pokud struktura gelu v důsledku zmrazení změkne,
(ii) jsou-li přítomny mikroby a plísně,
(iii) abnormální množství tekutiny v obalu gelu (výsledek vypocení pufru z gelu v důsledku nesprávného skladování).
- 88 -
SEBIA NÁVOD - Czech
HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 - 2014/02
2. CITRÁTOVÝ PUFR
Příprava
Každá lahvička zásobního tlumivého roztoku se může zředit destilovanou nebo deionizovanou vodou až na 1 litr.
Pracovní roztok po naředění obsahuje : tlumicí roztok s pH 6.1 ± 0.5 ; přídavné látky nezbytně nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro
člověka neškodných.
Použití
Elektroforetický pufr.
Skladování, stabilita a známky poškození
Zásobní roztok pufru lze skladovat při pokojové teplotě nebo v ledničce. Je stabilní několik let, při nejmenším do data exspirace vyznačeného na balení
či lahvičkách.
Zředěný pufr je stabilní po dobu 1 roku při pokojové teplotě v uzavřené láhvi.
Při zjištění zákalu v roztoku, který je obvykle známkou mikrobiální kontaminace, je nutno pufr vylít.
3. ŘEDÍCÍ ROZTOK PRO AMIDOČERŇ
Příprava
Zásobní ředicí roztok barvicího roztoku musí být použit podle pokynů v odstavci "AMIDOČERŇ". Obsahuje kyselý roztok pH ≈ 2.
Použití
Příprava barvícího roztoku s amidočerní.
Skladování, stabilita, známky znehodnocení roztoku
Zásobní roztok ředícího roztoku pro amidočerň se skladuje při pokojové teplotě nebo při teplotě 2 - 8 °C. Zásobní roztok je stabilní do data exspirace
vyznačeného na obalu či na štítku lahvičky. NEMRAZIT.
Nepřidávat azid sodný.
4. AMIDOČERŇ
Příprava
Koncentrát amidočerni je viskózní roztok, který může gelovatět. Citlivost zásobního barvícího roztoku není změněna zvýšením viskozity nebo
ztuhnutím.
V každém případě je pro dosažení správného rozpuštění barvícího roztoku nutné dodržet následující postup :
1. Přidejte 15 mL ředícího roztoku pro amidočerň do lahvičky s koncentrovanou amidočerní.
2. Pečlivě uzavřete lahvičku.
3. Lahvičku pořádně protřepejte po dobu cca 5 sekund.
4. Přelijte tento roztok do odměrného válce pro přípravu barvicího roztoku.
5. Opakujte tento krok 2 - 3x, až do úplného rozpuštění koncentrované amidočerni.
6. Nalijte zbylý obsah lahvičky s ředícím roztokem pro amidočerň do odměrného válce a doplňte do 300 mL destilovanou nebo deionizovanou vodou
7. Promíchávejte obsah válce po dobu 5 - 10 minut.
Barvící roztok je připraven k použití.
Pracovní barvicí roztok po naředění obsahuje : kyselý roztok o pH ≈ 2 ; amidočerň ; ethylenglykol ; přídavné látky nezbytně nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro člověka neškodných.
Použití
Barvení gelů s rozdělenými bílkovinami po elektroforéze.
DŮLEŽITÉ : Barvicí roztok je určen k obarvení pouze 10 gelů. Roztok vyměňte po 10 použitích k barvení.
Skladování, stabilita, známky znehodnocení roztoku
Zásobní i pracovní barvicí roztok se skladuje při pokojové teplotě nebo v chladničce v těsně uzavřených nádobách tak, aby nedošlo k odpařování.
Zásobní barvicí roztok je stabilní do data expirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky rozpouštědla pro barvicí roztok. Pracovní barvicí
roztok je stabilní 1 měsíc. Stabilita roztoku může být prodloužena na 3 měsíce, pokud je uchováván v chladničce. Ihned po použití musí být uzavřené
nádoby uloženy v chladničce.
Neskladujte pracovní barvicí roztok v blízkosti zdrojů tepla.
Zásobní ředicí roztok pro barvicí roztok skladujte při pokojové teplotě nebo v chladničce. Roztok je stabilní do data expirace vyznačeného na obalu
sady nebo na štítku lahvičky rozpouštědla pro barvicí roztok. NEMRAZIT.
5. ODBARVOVACÍ ROZTOK
Příprava
Každá lahvička zásobního odbarvovacího roztoku je určena k přípravě 100 litrů pracovního odbarvovacího roztoku. Je výhodné připravovat jen 1 litr
pracovního roztoku doplněním 1 mL zásobního roztoku do 1 litru destilovanou nebo deionizovanou vodou.
Po zředění vznikne odbarvovací roztok obsahující kyselý roztok pH ≈ 2.
Použití
Roztokem se odstraňuje přebytečné množství barvičky a odbarvuje se pozadí agarózové plotny.
Skladování, stabilita, známky znehodnocení roztoku
Skladování – při pokojové teplotě nebo v chladničce. Stabilita – do doby exspirace vyznačené na obalu soupravy nebo na štítku lahvičky.
Pracovní odbarvovací roztok je stabilní 1 týden při pokojové teplotě v uzavřené láhvi.
Nepoužívat při změně vzhledu, vzniku zákalu nebo precipitátu v roztoku.
Nepřidávejte azid sodný!
Pro zabránění mikrobiální proliferace ve zředěném odbarvovacím roztoku, který má být skladován déle než dva týdny, přidejte 5 μL/dL roztoku
ProClin 300 nebo roztoku CLEAN PROTECT (SEBIA, KAT. Č. 2059, 1 lahvička, 5 mL).
Viz příbalový leták s návodem k použití roztoku CLEAN PROTECT.
Pracovní odbarvovací roztok s přídavkem roztoku ProClin nebo CLEAN PROTECT je při pokojové teplotě nebo v chladničce v uzavřené nádobě
stabilní do doby exspirace vyznačené na obalu sady nebo na štítku lahvičky.
- 89 -
HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 - 2014/02
6. HEMOLYZAČNÍ ROZTOK
Příprava
Hemolyzační roztok je připraven k použití. Obsahuje : tlumicí roztok pH 6.1 ± 0.5 ; přídavné látky nezbytně nutné pro optimální provedení, v
koncentracích pro člověka neškodných.
Použití
K hemolýze erytrocytů.
Skladování, stabilita a známky poškození
Skladovat při pokojové teplotě nebo v chladničce. Stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu kitu nebo na štítcích lahviček.
Nepoužívat při změně vzhledu roztoku, např. při výskytu zákalu, který znamená mikrobiální kontaminaci.
7. APLIKÁTORY
Použití
Jednorázové aplikátory k nanesení vzorků - připraveny k použití.
Skladování
Skladujte na suchém místě při pokojové teplotě nebo v chladničce.
8. TENKÉ FILTRAČNÍ PAPÍRY
Použití
Proužky tenkého filtračního papíru, na jedno použití. Jsou určeny k odsání přebytečné tekutiny z povrchu gelu před aplikací vzorků.
Skladování
Skladujte na suchém místě při pokojové teplotě nebo v chladničce.
POTŘEBNÉ REAGENTY NEOBSAŽENÉ V BALENÍ
VAROVÁNÍ : Viz bezpečnostní listy.
1. FYZIOLOGICKÝ ROZTOK
Příprava
Příprava samostatně v laboratoři – 0.15 M (9 g/L) roztok NaCl v destilované vodě.
Použití
K proprání erytrocytů a k naředění hemolyzátu.
Skladování, stabilita a známky zhoršení kvality
Skladuje se při teplotě místnosti, nebo v chladničce. Po třech měsících nebo při známkách mikrobiálního znečištění – zákalu vylijte. Po přidání 0.1 g/dL
lze skladovat i delší dobu.
2. FIXAČNÍ ROZTOK (přídavný roztok)
Příprava
Nejméně 15 minut před použitím, připravte roztok obsahující (obj./obj.) : 60 % etanolu ; 10 % kyseliny octové a 30 % destilované vody.
Dobře promíchejte.
Použití
Používá se k fixaci separovaných hemoglobinů v agarózových gelech.
Skladování, stabilita a známky zhoršení kvality
Skladujte fixační roztok v těsně uzavřených nádobách při pokojové teplotě. Vydrží asi 3 měsíce. Používejte každých 150 mL maximálně na 4 gely.
POZNÁMKY :
Zkoušky provedené pro ověření reagentů prokázaly, že pro různé roztoky a použití přizpůsobeného vybavení pro rekonstituci objemu, nemají odchylky
objemu ± 5 % z konečného objemu vliv na výsledek analýzy.
Destilovaná nebo deionizovaná voda použitá pro rekonstituci roztoků musí být bez přítomnosti bakteriální proliferace a plísní (použijte filtr ≤ 0.45 µm)
a musí mít odpor vyšší než 10 megaohmů na cm.
ZAŘÍZENÍ NEZBYTNÁ K PROVEDENÍ TESTU
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Zdroj proudu : MG 300 SEBIA, kat. č. 1302 nebo MG 500 SEBIA, kat. č. 1303.
HYDRAGEL K20 APPLICATOR SEBIA, kat. č. 1409, včetně nosiče aplikátorů HYDRAGEL K20.
Vlhká komůrka kat. č. 1270.
Elektroforetická komora, K20 SEBIA, kat. č. 1400.
Nádobky a držáky gelů pro manipulaci s nimi – HYDRAGEL Accessory Kit SEBIA, kat. č. 1420.
Pipety 5 µL, 10 µL a 200 µL.
Sušička – Inkubátor, IS 80 SEBIA, kat. č. 1430.
ANALYZOVANÉ VZORKY
Odběr a skladování vzorků
Nejlepších výsledků se dosahuje analýzou čerstvých nesrážlivých vzorků krve. Lze použít antikoagulancia jako EDTA, citrát, heparin – vyhnout se
jodoacetátu. Po odběru lze skladovat až 5 dní v chladničce.
- 90 -
HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 - 2014/02
Příprava vzorku
•
•
•
•
•
•
•
•
Před odebráním krve pro přípravu promíchejte zkumavku.
Centrifugujte krev s antikoagulačním činidlem pro získání červených krvinek.
Odstraňte plazmu.
Erytrocyty promyjte 2 x 10 objemy fyziologického roztoku ; pokud pracujeme s objemy erytrocytů menšími než 10 µL je nutné věnovat práci velkou
péči.
Odstraňte přebytek fyziologického roztoku z povrchu (nad erytrocyty) a promíchejte erytrocyty na vortexu před odebráním 10 µL pro hemolyzaci.
Hemolyzujte 10 µL erytrocytů se 130 µL hemolyzačního činidla.
Promíchejte na vortexu po dobu 10 sekund a po dobu 5 minut nechte inkubovat při pokojové teplotě.
Zřeďte 2x hemolyzát destilovanou nebo deionizovanou vodou (např. : 50 µL hemolyzátu + 50 µL destilované nebo deionizované vody).
POZN. :
- Příprava hemolyzátu z krve u anemiků (100 g/L Hb) a anemiků s Hb pod 70 g/L objem erytrocytů musí být zvýšen z 10 µL na 15 µL resp.
20 µL.
Zbarvení jednotlivých zón bude v tomto důsledku zvýšeno, nikoliv však jejich procentuální zastoupení.
- Hemolyzát se nemusí filtrovat ani centrifugovat.
- Opakovaně lze použít hemolyzát připravený pro elektroforézu HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 technikou i pro HYDRAGEL ACID(E)
HEMOGLOBIN(E) K20 techniku s tím, že bude použit ve stejný den a dvakrát zředěn destilovanou nebo deionizovanou vodou.
POZNÁMKA : Odběrové zkumavky a centrifugační parametry pro biologické vzorky jsou popsány v dostupné dokumentaci k předanalytické fázi pro
biomedicínskou analýzu (údaje poskytnuté výrobci for zkumavek, návody a doporučení k odběru biologických vzorků…). Nejsou-li v návodu k použití
pro typ zkumavek, které mají být použity, nebo k centrifugaci uvedeny žádné pokyny, postupujte podle této dokumentace a v případě rozměrů
zkumavek, které mají být použity, postupujte podle dokumentu SEBIA "Charakteristiky zkumavek používaných podle přístroje". Předanalytická fáze
musí být provedena podle stavu poznání, různých doporučení, mimo jiné doporučení výrobců zkumavek a platných předpisů.
PRACOVNÍ POSTUP
I. MIGRACE
1.
2.
3.
4.
Umístěte HYDRAGEL K20 aplikátorový nosič na rovnou plochu (viz Obr. 1) a zvedněte část s očíslovanými zuby
Naneste 120 µL destilované (deionizované) vody na dolní třetinu rámečku vyznačené na nosiči aplikátoru.
Z obalu opatrně vyjměte agarózovou plotnu.
Gelovou plotnu rychle osušte tenkým filtračním papírem tak, že jej z jedné strany narolujete, aby přilnul k celé ploše a rychle odstraňte.
POZOR : Neponechávejte tento filtrační papír delší dobu na povrchu – hrozí dehydratace gelu!
5. Opřete plotnu okrajem o zarážku v dolní části vyznačeného rámečku - gelem k sobě (viz Obr. 2).
6. Nyní gel ohněte a pokládejte tak, aby se voda rovnoměrně rozprostřela pod celým gelem bez tvorby vzduchových. Gel musí být v rámečku
zarovnán (viz Obr. 2).
7. Snižte nosič aplikátoru očíslovanými zoubky dolů do střední polohy se západkou v horní poloze.
8. Umístěte jeden aplikátor na rovnou plochu s čísly jamek v pravé horní pozici (Obr. 3).
9. Do jamek aplikátoru pipetujte 10 µL vzorku. Vzorky je nutno napipetovat do aplikátoru v průběhu 2 minut.
Aplikátor použijte okamžitě.
Pro delší uchování (až 8 hodin) umístěte aplikátor do vlhké komory zoubky nahoru, uchopte za plastikovou část chránící zoubky a celou
komoru umístěte do chladničky.
Podrobnosti najdete v návodu pro vlhkou komoru.
10. Odlomte ochranný rámeček zoubků aplikátoru.
11. Umístěte aplikátor do pozice č. 9 na nosiči.
DŮLEŽITÉ : Čísla natištěná na aplikátoru musí směřovat k obsluze (Obr. 4).
12. Nyní snižte nosič tak, aby se aplikátor dostal do kontaktu s povrchem gelu. NESTLAČUJTE DRŽÁKY AŽ DOLŮ.
13. Po 60 sekundách aplikátor uvolněte, vyjměte a vyhoďte!
14. Gelovou plotnu vložte do migrační elektroforetické komory dle polarity vyznačené na gelu - dolní částí gelu na katodickou stranu. Při použití
komory SEBIA K20 vložte HYDRAGELovou plotnu do zubů můstku gelem dolů a ten pak ponořte do pufru. Okraje plotny budou ponořeny asi
1 cm.
Podrobnosti najdete v návodu pro migrační komoru K20.
15. Připojte dělící komoru ke zdroji proudu.
PODMÍNKY DĚLENÍ
SEBIA K20
Objem pufru ke každé elektrodě
150 mL
Celkový objem pufru
300 mL
Čas dělení
35 minut
Konstantní napětí
40 V
Počáteční proud (na gel)
10 ± 2 mA
16. Po migraci odpojte komoru a vyjměte gelovou plotnu.
II. FIXACE
Zpracujte gel jedním z následujících postupů.
Horkovzdušná fixace (doporučuje se pouze s Inkubátorem-Sušičkou SEBIA IS 80) :
Gel zcela osušte v inkubátoru-sušičce při 80 °C (asi 10 min).
- 91 -
HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 - 2014/02
Fixace pomocí fixačního roztoku :
1.
2.
3.
4.
Vložte gel do držáku.
150 mL fixačního roztoku nalejte do jedné z nádobek HYDRAGEL K20 Acc. Kitu.
Gel ponořte na 5 minut do fixačního roztoku.
Gel vyjměte a osušte při 80 °C.
DŮLEŽITÉ : Gel musí být perfektně suchý.
III. BARVENÍ A ODBARVOVÁNÍ
1. Po usušení a ochlazení ponořte usušený gel do barvícího roztoku na 5 minut.
2. Odbarvěte ve třech po sobě následujících lázních s odbarvovacím roztokem dokud není pozadí zcela bezbarvé a průhledné.
3. Odsajte přebytečnou tekutinu z povrchu gelu tenkým papírem a osušte gel při 80 °C teplého vzduchu. Je-li třeba, očistěte zadní plastikovou
podpůrnou část gelové plotny vlhkým měkkým hadříkem nebo buničinou.
Je dobré výsledek odečítat bez jakéholiv prodlení. Pro porovnání v budoucnosti – max. 3 měsíce, lze skladovat v ochranném obalu na suchém,
tmavém místě, v bezpečné vzdálenosti od zdrojů tepla.
KONTROLA KVALITY
Na každou sérii vzorků se doporučuje zařadit kontrolní vzorek krve, obsahující hemoglobiny A, F, S a C (například Hb AFSC Control, SEBIA,
kat. č. 4792).
VÝSLEDKY
Interpretace
Většina hemoglobinopatií vzniká v důsledku mutační substituce jedné aminokyseliny v jednom ze čtyř typů polypetidových řetězců. Klinický význam
takových změn závisí na ovlivněném typu a pořadí aminokyselin. U klinicky významných onemocnění jsou postiženy řetězce nebo řetězce ß.
U dospělých jedinců je známo více než 200 variant hemoglobinů. První studované a nejčastěji se vyskytující abnormální hemoglobiny mají změněný
celkový elektrický náboj, což umožňuje snadnou detekci pomocí elektroforézy.
Existují čtyři hlavní abnormální hemoglobiny, které si zasluhují zvláštního klinického zájmu – S, C, E a D.
Elektroforézou pomocí soupravy HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 lze identifikovat již dříve stanovené hemoglobinové varianty na
alkalických gelech soupravy HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, SEBIA kat. č. 3010, zejména rozlišit hemoglobiny S do D a E od C.
Pořadí frakcí od anody ke katodě je následující :
• hemoglobin C migruje za bodem aplikace,
• hemoglobin S zůstává na startu (v bodě aplikace),
• hemoglobiny D, E a A0 jsou překryty,
• hemoglobiny F a A1 jsou překryty,
• může být pozorován slabý proužek na anodické straně frakce A1/F, což způsobuje denaturace nebo degradace v průběhu skladování vzorků.
Migrační typy
Normální migrace
hemoglobinů
A
C
S
aplikační bod
A (A0 + A2) + D + E
aplikační bod
A1
A1 + F
Migrace hlavních
abnormálních
hemoglobinů
A0 : neglykovaná frakce normálního hemoglobinu A dospělých.
A1 : glykovaná frakce normálního hemoglobinu A dospělých.
Interference a omezení
• Nepoužívejte hemolyzované vzorky.
• Pokud je zjištěn abnormální hemoglobin, je nutné použít jiný způsob identifikace (např. elektroforéza globinových řetězců) nebo odeslat vzorky krve
do specializované laboratoře.
Problémy
Pokud testy nevycházejí při dodržení veškerých instrukcí pro přípravu, skladování a provedení testu uvedených v příbalovém letáku, volejte TechnickoServisní středisko vašeho dodavatele.
Soupravy, reagencie, bezpečnostní listy a informace o likvidaci odpadu jsou dostupné na Technicko-Servisním středisku vašeho dodavatele.
HODNOTY
Všechchny výsledky jsou založeny na studiích za použití HYDRAGELů a zařízení fy SEBIA a srovnatelných, komerčně dostupných agarózových
gelových systémů. Pro porovnávací studie byla navíc analyzovány typy jednotlivých hemoglobinů a jejich hodnoty byly stanoveny jinou validní
metodou. Níže jsou uvedeny příklady výsledků reprezentativních vzorků z hlediska jednotlivých hodnot.
Všechny elektroforeogramy byly interpretovány vizuálně.
- 92 -
HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 - 2014/02
Reprodukovatelnost na gelu a mezi gely
Každý testovaný vzorek na každém gelu různých šarží vykazoval naprosto stejný elektroforeogram. Navíc žádné z opakování neukázalo dodatečné
pozitivní frakce.
Přesnost – potvrzení hemoglobinových abnormalit
Padesát tři (53) různých krevních vzorků bylo analyzováno pomocí HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 soupravy a jiného, komerčně
dostupného agarózového gelového systému. Krevní vzorky a příslušné dg. byly poskytnuty nemocnicemi. Elektroforetické analýzy byly provedeny na
rutinním alkalickém a kyselém gelech a / nebo pomocí HPLC. Všechny abnormální hemoglobiny detekované metodou HYDRAGEL ACID(E)
HEMOGLOBIN(E) K20 byly srovnatelné s porovnávacím gelovým systémem, nemocničními výsledky a klinickou dg.. Nebyly pozorovány případy
falešně pozitivní jako např. detekce abnormální frakce nebo abnormální hodnoty normální frakce. Nebyly pozorovány i případy falešně negativní.
- 93 -
HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 - 2014/02
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY
V.F. Fairbanks, ed. (1980) Hemoglobinopathies and thalassemia: Laboratory methods and case studies. Brian C. Decker, New York.
F. Galacteros (1986) Thalassémie, drépanocytose et autres hémoglobinopathies. Techniques et Biologie, 3, 174-178.
T.H.J. Huisman and J.H.P. Jonxis (1977) The hemoglobinopathies: techniques of identification. Marcel Dekker, New York.
J.S. Krauss, P.A. Drew, M.H. Jonah, M. Trinh, S. Shell, L. Black and C.R. Baisden (1986) Densitometry and microchromatography compared for
determination of the hemoglobin C and A2 proportions in hemoglobin C and hemoglobin SC disease and in hemoglobin C trait. Clin. Chem. 32,
5, 860-863.
C. Livingstone (1986) The hemoglobinopathies. Edit. London.
M. Maier-Redelsberger, R. Girot (1989) Diagnostic biologique des maladies de l’hémoglobine. Feuillets de biologie 170.
R.G. Schneider (1978) Methods for detection of hemoglobin variants and hemoglobinopathies in the routine clinical laboratory. CRC Crit. Rev.
Clin. Lab. Sci. 9, 243-271.
L. Vovan, D. Lara-Russo, A. Orsini (1985) Diagnostic biologique des hémoglobinoses. Ann. Pédiat. 32, 9, 780-789.
Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité.
Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97.
- 118 -
SCHÉMAS / FIGURES
Figure 1
HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20 - 2014/02
Figure 2
1 2
3 4
5 6
7
Figure 3
Figure 4
1 2
3 4
5 6
7
1 2 3
4 5 6
7
7
5 6
3 4
1 2
- 119 -