CHORUS Rubella IgM

CHORUS
RUBELLA IgM
81031
(36 testů)
Výrobce:
DIESSE Diagnostica Senese
Via delle Rose 10
53035 Monteriggioni (Siena) – Itálie
CHORUS Rubella IgM
CZ
OBSAH
1
Úvod ................................................................................................................ 3
2
Princip testu ..................................................................................................... 3
3
Složení soupravy .............................................................................................. 4
4
Další potřebné vybavení k provedení testu ...................................................... 5
5
Skladování a stabilita komponent .................................................................... 6
6
Bezpečnost práce ............................................................................................. 6
7
Technické připomínky ...................................................................................... 7
8
Vzorky a jejich skladování ................................................................................ 8
9
Pracovní postup. .............................................................................................. 8
10 Validita testu.................................................................................................... 8
11 Hodnocení výsledků ......................................................................................... 9
12 Interpretace výsledků....................................................................................... 9
13 Charakteristika soupravy ................................................................................ 10
14 Literatura ....................................................................................................... 11
15 Vysvětlení symbolů ........................................................................................ 12
2/12
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011
CHORUS Rubella IgM
CZ
Kvalitativní stanovení IgM protilátek proti viru zarděnek
v lidském séru na přístroji CHORUS pomocí jednorázového
testovacího zařízení
1
Úvod
Virus zarděnek je původcem zarděnek (rubeolla), v lidské populaci běžné
onemocnění doprovázené výsevem vyrážky. Průběh onemocnění je obvykle lehký,
bez komplikací a mající krátký průběh. Virus zarděnek patří mezi viry s teratogenním
účinkem. Především při infekci neimunní matky v prvním trimestru může způsobit u
vyvíjejícího se plodu vážné malformace. Proto je velmi důležité stanovit stav imunity
ještě před plánovaným otěhotněním, aby se případně provedlo očkování. Pokud
toto není možná, je nezbytné monitorovat průběh těhotenství a sledovat, zda-li
nedochází k sérokonverzi. Serologickou diagnózu rubeoly lze provádět stanovením
specifických IgM protilátek, protože tyto protilátky mají, spolu s klinickými
symptomy, značnou diagnostikou relevanci.
Jednou z možností průkazu specifických protilátek je plně automatizovaná metoda
ELISA na přístroji Chorus.
2
Princip testu
Jednorázový test připravený k použití na přístrojích Chorus umožňuje stanovení IgM
protilátek proti viru zarděnek. Test je založen na principu ELISA (Enzyme linked
Immunosorbent Assay).
Antigen složený z částečně purifikovaného a inaktivovaného viru zarděnek se naváže
na pevnou fázi. V průběhu inkubace vzniká vazba mezi specifickými protilátkami
vyšetřovaného séra a imobilizovaným antigenem. Zároveň prostřednictvím Ředícího
roztoku vzorků obsahujícího protilátku proti lidskému IgG dojde k blokování IgG
protilátek. Po promytí, která eliminují nenavázané proteiny, se provádí inkubace s
konjugátem. Konjugát je roztok s obsahem monoklonálních protilátek proti lidskému
IgG značených křenovou peroxidázou. Po další sérii promytí, které odstraní
nenavázaný konjugát, se přidá substrát reagující s peroxidázou. Intenzita barvy,
která vznikne, je přímo úměrná koncentraci specifických protilátek přítomných v
testovaném lidském séru.
Jednorázový test obsahuje všechny reagencie nutné k provedení testu na přístrojích
Chorus.
3/12
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011
CHORUS Rubella IgM
3
CZ
Složení soupravy
Souprava umožňuje provést 36 stanovení.
Testovací jednotka
6 × 6 ks
6 samostatných balení po 6 jednotlivých jednorázových
testech
Kalibrátor
1 × 175 µl
Roztok lidského séra o známé koncentraci protilátek,
obsahující Proclin a Gentamicin, v pracovním ředění
Pozitivní kontrola
1 × 425 µl
Roztok lidského séra o známé koncentraci protilátek,
obsahující Proclin a Gentamicin, v pracovním ředění
Pracovní návod
1 ks
Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu a ze samostatných balení
odeberte stanovený počet jednorázových testů pro vlastní analýzu. Zbylé
jednorázové testy vraťte zpět do obalu se sušidlem (silikagel – gel obsahující oxid
křemičitý), vytlačte vzduch a hermeticky uzavřete stisknutím uzávěru. Skladujte při
+2 °C až +8 °C.
4/12
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011
CHORUS Rubella IgM
CZ
Obrázek 1 Schéma jednorázového testu
Pozice 8
Místo pro štítek s čárovým kódem
Pozice 7
Prázdná pozice
Pozice 6
Mikrotitrační jamka s potaženým antigenem
purifikovaný a inaktivovaný virus zarděnek
Pozice 5
Nepotažená mikrotitrační jamka
Pozice 4
TMB Substrát
0,35 ml
Tetrametylbenzidin 0,26 mg/ml a 0,01% H2O2 stabilizovaný
v 0,05 mol/l citrátového pufru (pH 3,8)
Pozice 3
Ředicí roztok vzorků
0,35 ml
Proteinový roztok obsahující 0,05% fenol, 0,02% Bronidox
a indikátor přítomnosti séra
Pozice 2
Konjugát
0,35 ml
Roztok monoklonálních protilátek značený peroxidázou
ve fosfátovém pufru obsahujícím 0,05% fenol a 0,02%Bronidox
Pozice 1
Prázdná jamka
Do této jamky se přidá vyšetřované sérum
4
Další potřebné vybavení k provedení testu
Tyto reagencie nejsou součástí balení.
Promývací roztok
83606
Čistící roztok
83605
Sanitační roztok
83604
Přístroj Chorus/ Chorus Trio Instrument
Destilovaná nebo deionizovaná voda
Běžné laboratorní sklo: odměrné válce, zkumavky atd.
Mikropipety na přesný odběr 50 až 200 μl roztoku
Jednorázové rukavice
Roztok chlornanu sodného (5 %)
Nádoby na potenciálně infekční materiál
5/12
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011
CHORUS Rubella IgM
5
CZ
Skladování a stabilita komponent
Reagencie se musí skladovat při teplotě +2 °C až +8 °C. V případě skladování při
nesprávné teplotě se musí zopakovat kalibrace a validovat test pomocí kontrolního
séra (viz 10, Validita testu).
Datum exspirace je uvedeno na každé komponentě a na štítku soupravy.
Po otevření mají reagencie omezenou stabilitu.
 Jednorázový test – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
 Pozitivní kontrola – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
 Kalibrátor – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
6
Bezpečnost práce
Souprava je určena pouze pro diagnostické účely in vitro.
Tato souprava obsahuje materiály lidského původu, které byly testovány a vykázaly
negativní výsledky při použití metod schválených FDA pro stanovení přítomnosti
HbsAg a anti-HIV-1, anti-HIV-2 a anti-HCV protilátek. Protože však žádný
diagnostický test nemůže poskytnout úplnou záruku, že infekční agens nejsou
přítomna, je třeba s veškerým materiálem lidského původu zacházet tak, jako by byl
potenciálně infekční. Při zacházení s materiálem lidského původu je nutné dodržovat
všechny místní předpisy týkající se bezpečnosti práce.
Likvidace zbytků pro provedení testu
S použitými vzorky sér, kalibrátory, jednorázovými testy je třeba zacházet jako
s potenciálně infekčním materiálem a likvidovat je v souladu s platnou legislativou.
Zdravotní a bezpečnostní informace
1. Nepipetujte ústy. Používejte rukavice na jedno použití a ochranu očí. Po umístění
jednorázového testu do přístroje Chorus si důkladně umyjte ruce.
2. Některé reagencie obsahují nízké koncentrace škodlivých nebo dráždivých látek
Pokud se některá s těchto reagencií dostane do kontaktu s kůží nebo očima,
důkladně omyjte dané místo vodou.
 Konjugát obsahuje fenol
 TMB Substrát je roztok kyseliny
3. Neutralizované kyseliny nebo jiný tekutý odpad by se měl dekontaminovat
přidáním dostatečného množství chlornanu sodného tak, aby konečná
koncentrace dosahovala minimálně 1,0 %. Pro zajištění účinné dekontaminace
ponechejte tento odpad 30 minut v 1% chlornanu sodném.
4. Rozlitý potenciálně infekční materiál je třeba okamžitě odstranit pomocí
absorpčního papírového ručníku a kontaminovanou oblast umýt, například 1,0%
chlornanem sodným, a to předtím, než budete v práci pokračovat. Chlornan
6/12
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011
CHORUS Rubella IgM
CZ
sodný nepoužívejte na rozlité tekutiny s obsahem kyseliny, ty musíte nejprve
otřením vysušit.
5. Materiály použité k čištění potřísněných povrchů, včetně rukavic, se musí
likvidovat jako potenciálně životu nebezpečný odpad. Materiály obsahující
chlornan sodný nevkládejte do autoklávu.
7
Technické připomínky
Pro získání spolehlivých výsledků je nutné přesné dodržování návodu.
Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu (+18 °C až +30 °C) a test
proveďte do 60 minut.
Zkontrolujte a dodržujte následující informace:
 Substrát obsažený v pozici 4 je bezbarvý. Nepoužívejte jednorázové testy, které
toto nesplňují.
 Testovaný vzorek je dokonale na dně jamky rozprostřen.
 Zkontrolujte zda-li všechny reagencie v testu jsou přítomny a jestli není
jednorázový test poškozen. Nepoužívejte testy, které nemají reagencie.
 Jednorázové testy jsou určeny pro použití na přístroji Chorus. Důkladně
dodržujte pokyny pro použití a řiďte se návodem k obsluze přístroje.
 Chorus přístroj správně nastavený (viz návod k obsluze).
 Neměňte čárový kód umístěný na držadle jednorázového testu. Nepoužívejte
testy s poškozenými štítky s čárovými kódy.
 Defektní čárové kódy lze vložit do přístroje manuálně.
 Během skladování a použití nevystavujte jednorázové testy silnému světlu ani
výparům chlornanu.
 Použití silně hemolytických vzorků nebo vzorků s mikrobiální kontaminací může
vést k nereprodukovatelným výsledkům.
 Než vložíte jednorázový test do přístroje, zkontrolujte, že reakční jamka
neobsahuje cizí tělesa.
 Pipetujte sérum (50 µl) do pozice 1 jednorázového testu (viz obrázek 1).
 Nepoužívejte jednorázový test po uplynutí expiračního data.
7/12
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011
CHORUS Rubella IgM
8
CZ
Vzorky a jejich skladování
Jako vzorek k vyšetření může být použito sérum, získané odběrem žilní krve. Zachází
se s ním v souladu se všemi opatřeními předepsanými správnou laboratorní praxí.
Čerstvé sérum lze skladovat 4 dny při +2 °C až +8 °C. Séra je možné uchovávat
při -20 °C a lze je rozmrazit maximálně 3krát. Neskladujte vzorky v mrazácích s funkcí
vlastního rozmrazování.
Rozmrazené vzorky je potřeba před použitím důkladně protřepat. Kvalita vzorku
může být vážně narušena kontaminací, která vede k chybným výsledkům.
Nepoužívejte silně lipemické, ikterické, hemolytické nebo kontaminované vzorky.
Test nelze použít na lidskou plazmu.
9
Pracovní postup.
1. Otevřete balení, vyjměte požadovaný počet jednorázových testů a zbytek
uzavřete zpět do sáčku poté, co vytlačíte vzduch.
2. Zkontrolujte stav jednorázového testu (viz 7 Technické připomínky).
3. Pipetujte 50 μl neředěného séra do pozice 1 každého testu. Při každé změně
šarže soupravy použijte jednorázový test pro kalibraci.
4. Jednorázový test umístěte do přístroje. Proveďte kalibraci (je-li nutná) a vlastní
stanovení podle pokynů uvedených v návodu k obsluze Chorus přístroje.
10 Validita testu
Pomocí kontrolního séra ověřte správnost získaných výsledků. Použijte je v souladu
s instrukcemi uvedenými v návodu na obsluhu. Pokud test ukáže, že se hodnota
kontrolního séra pohybuje mimo přijatelné rozmezí, kalibraci je třeba opakovat.
Předchozí výsledky budou automaticky opraveny.
Pokud je výsledek kontrolního séra i nadále mimo přijatelné rozmezí, kontaktujte
prosím technickou podporu:
Tel: +39-0577-587154
+39-0577-587121 (technická podpora)
8/12
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011
CHORUS Rubella IgM
CZ
11 Hodnocení výsledků
Přístroj Chorus vyjadřuje výsledky jako INDEX (je to poměr mezi naměřenou
hodnotou absorbance testovaného vzorku a CUT-OFF hodnotou). Tento INDEX je
možné použít jako kvantitativní míru, jelikož je přímo úměrný množství přítomných
specifických IgM protilátek v testovaném vzorku lidského sér.
Hodnocení výsledků je popsáno v tabulce (Tabulka 1).
Tabulka 1 Hodnocení výsledků
INDEX
Hodnocení
menší než 0,9
negativní
0,9 až 1,1
hraniční
větší než 1,1
pozitivní
V případě hraničního výsledku zopakujte test. Pokud zůstává test nadále hraniční, je
vhodné opakovat z nového odběru, který bude proveden s určitým časovým
odstupem (1 až 2 týdny.)
12 Interpretace výsledků
Vzorky získané méně než 5 dní po nástupu symptomů nemusí vykazovat zvýšený titr
IgM protilátek, aby vyšly při testování pozitivně. Protože IgM protilátky matky
neprojdou placentou, mohou se virus-specifické IgM protilátky u novorozence
považovat za výsledek vrozené infekce. Protože existuje možnost kontaminace
pupečníkové krve IgM protilátkami matky, je rozumné potvrdit pozitivní výsledky na
virové IgM protilátky v pupečníkové krvi otestováním dalších vzorků od dítěte.
V poslední době byla zjištěna odezva IgM protilátek proti rubeole u malého počtu
pacientů trpících infekční mononukleózou; někteří z těchto pacientů vykazovali
nízkou specificitu pro určité rubeolové kmeny. Polyklonální stimulace B paměťových
buněk pomocí EBV byla v některých případech považována za možný mechanizmus
heterotypické odezvy IgM protilátek. Séra od pacientů v časném nebo pokročilém
stádiu onemocnění mohou dát opakovaně negativní výsledek blížící se CUT-OFF
hodnotě. V takových případech doporučujeme provést konfirmační testování
nového vzorku, získaného od stejného pacienta v intervalu 7 až 10 dní od prvního
vzorku.
Serologický nález je třeba vždy interpretovat pouze v kontextu s výsledky ostatních
laboratorních testů a s klinickým obrazem pacienta.
9/12
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011
CHORUS Rubella IgM
CZ
13 Charakteristika soupravy
13.1 Analytická specifita
Analytická specifita byla testována na vzorcích obsahujících potenciálně interferující
látky (bilirubin, revmatoidní faktor, hemolytické vzorky a triglyceridy). Přítomnost
interferujících látek v testovaných vzorcích nemá vliv na výsledek testu. Nebylo ani
zjištěno, že by výsledky testů od těhotných žen byly ovlivněny.
13.2 Diagnostická citlivost a specifita
Pro stanovení citlivosti a specifity bylo využito srovnání výsledků na jiné referenční
soupravě. Při srovnání bylo testováno 431 vzorků. Výsledky srovnání jsou uvedeny
v tabulce (Tabulka 2).
Tabulka 2 Výsledky srovnání zařazení testovaných vzorků
Referenční souprava
DIESSE
Pozitivní
Negativní
Celkem
Pozitivní
74
4
78
Negativní
2
351
353
Celkem
76
355
431
Souprava vykazuje 98,9% specifitu (CI95% 97,1 až 99,6) a 97,4% citlivost (CI95% 90,9 až
99,3).
13.3 Přesnost měření
 Intra-assay: všechny testované vzorky byly změřeny; průměr naměřených
hodnot, směrodatná odchylka a variační koeficient (%) každého vzorku jsou
uvedeny v tabulce (Tabulka 3).
Tabulka 3 Intra-assay stanovení
10/12
Vzorek
Průměr
naměřených
hodnot (INDEX)
Směrodatná
odchylka
Variační
koeficient (%)
Pozitivní kontrola
1,7
0,16
9
RVM 1
0,5
0,08
15
RVM 2
0,9
0,12
13
RVM 3
2,2
0,14
6
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011
CHORUS Rubella IgM
CZ
 Inter-assay: všechny testované vzorky byly analyzovány; průměr naměřených
hodnot, směrodatná odchylka a variační koeficient (%) každého vzorku jsou
uvedeny v tabulce (Tabulka 4).
Tabulka 4 Inter-assay stanovení
Průměrná hodnota (INDEX)
Vzorek
Test 1 Test 2 Test 3 Test 4
Průměr
Směrodatná
naměřených
odchylka
hodnot
Test 5
Variační
koeficient
(%)
RVM 3
1,6
1,6
1,5
1,8
1,5
1,6
0,12
8
RVM 2
0,7
0,8
0,8
0,7
0,8
0,8
0,05
6
Vzorek 32
0,9
1
1
1
0,8
0,9
0,09
10
Vzorek 2208
1,1
0,8
1
1,1
1,1
1
0,13
13
Pozitivní
kontrola
1,4
1,4
1,4
1,4
1,4
1,4
0
0
14 Literatura
1. G.B. Wisdom: Enzyme-Immunoassay. Clin. Chem. 22: 1243 (1976).
2. Chantler and C.J. Evans: Selection and performance of monoclonal and
polyclonal antibodies in an IgM antibody capture enzyme immunoassay for
rubella. J. Immunol. Meth. 87: 109 (1986).
3. R.S. Tedder and J.L. Yao: The production of monoclonal antibodies to rubella
haemagglutinin and their use in antibody-capture assays for rubella-specific IgM.
J. Hyg. Camb. 88: 335 (1982).
4. B. Forghani, C. Myoraku, N. Schmidt: Use of monoclonal antibodies to human
immunoglobulin M in "capture" assays for measles and Rubella immunoglobulin
M. J. Clin. Microbiol. 18, 652 (1983).
5. T.Zhang , C.A. Mauracher , L.A. Mitchell , : Detedtion of Rubella Virus-Specific
Immunoglobulin G (IgG) , IgM , and IgA Antibodies by Immunoblot Assays.
J.Clin.Microbiol. Apr.1992.p.824-830.
6. 6. P.Partanen, H. Seppanen , Jukka Suni , A. Vaheri : Selective Reactivity of
antibodies to Human Immunoglobulins G , M and A with Rubella Virus Proteins.
J.clin.microbial.,May 1985 , p.800-802.
11/12
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011
CHORUS Rubella IgM
CZ
15 Vysvětlení symbolů
Datum výroby
Použít do data
Nepoužívat opakovaně
Čtěte přiložené dokumenty
Výrobce
Počet testů
Skladovací teplota
Čtěte návod k použití
Biologická rizika
Katalogové číslo
Diagnostický zdravotnický prostředek in vitro
Číslo šarže
Diesse Diagnostica Senese
Via delle Rose 10
53035 Monteriggioni (Siena) – Italy
Tel. 0577-587111
12/12
Rif. IO-09/011-C; IFU 81031 – Ed. 09.06.2011