Crypto-Giardia Blister

Rapid-VIDITEST
Crypto-Giardia Blister
(Jednokrokový blisterový test pro in vitro diagnostiku Cryptosporidium parvum
a Giardia lamblia)
Návod k použití soupravy
Výrobce: VIDIA spol.s r.o., Nad Safinou II č. 365, Vestec, 252 42 Jesenice, ČR, tel: +420 261 090 565,
www.vidia.cz
POUŽITÍ:
Rapid-VIDITEST Crypto-Giardia Blister je jednokrokový barevný imunochromatografický
test pro kvalitativní detekci Cryptosporidium parvum a/nebo Giardia lamblia ve stolici.
ÚVOD:
Giardia a Cryptosporidium jsou paraziti nacházející se ve vodě. Způsobují střevní
onemocnění giardiózu a kryptosporidiózu. Tyto infekce jsou nejčastější příčinou nemocí
z vody (oba paraziti se nacházejí v pitné vodě a vodě pro rekreační účely) u člověka.
Giardióza je průjmové onemocnení, které způsobuje malý parazit Giardia lamblia (znám také
jako Giardia intestinales nebo Giardia duodenalis). Je-li zvíře nebo člověk infikován Giardií,
parazit žije ve střevě a dál prochází do stolice. Parazit je chráněn vnějším obalem (cysta) a
může přežít po dlouhou dobu mimo tělo a ve vnějším prostředí. Nejčastějšími symptomy
giardiózy jsou: průjem, řídká nebo vodová stolice, křeče žaludku a nevolnost.
Infekce parazitem Cryptosporidium parvum je nejčastější příčinou přetrvávajících
průjmových onemocnění v rozvojových krajinách. Cryptosporidium je vysoce infekční střevní
patogen a infekční stádium parazita je přenášeno fekálně-orální cestou. Příznaky
kryptosporidiózy jsou vodnatý průjem, křeče žaludku, ztráta váhy, nevolnost a někdy horečka.
PRINCIP TESTU:
Rapid-VIDITEST Crypto-Giardia Blister je blisterový kvalitativní imunochromatografický
test pro stanovení antigenů parazitů Cryptosporidium parvum a Giardia lamblia ve stolici. Na
testovacích zónách membrány blisteru jsou navázány protilátky proti těmto antigenům.
V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na
membráně (anti-Cryptosporidium protilátky – červená mikrosféra a anti-Giardia
protilátky – modrá mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně
blisteru. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými
protilátkami, což se ve „výsledkové zóně“ projeví jako barevné linky. Směs pak vzlíná dále
po membráně k imobilizovaným protilátkám v „kontrolní zóně“, kde se vždy na konci testu
objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje:
1) že se použil dostatečný objem vzorku,
2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku,
3) interní kontrolu reagencií.
OBSAH SOUPRAVY:
1
-
Testovací blistery
Odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky
Návod k použití
Certifikát kontroly balení
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU
-
Nádoba na sběr vzorků
Zkumavky nebo lahvičky
Jednorázové rukavice
Stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ:
Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout hned po odebrání
vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1 - 2 dny před testováním
v chladničce při 2 až 10°C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly
vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28°C. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na
laboratorní teplotu.
Příprava vzorků
1) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (stool collection tube)
a pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku
stolice (asi 150 mg). V případě, že je vzorek tekutý, odeberte 150 μl a pipetujte do
odběrové zkumavky (obr.1).
2) Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku.
Za účelem dobré homogenizace vzorku zkumavku důkladně promíchejte (obr. 2).
Vzorek stolice
(1)
(2)
Odběrová zkumavka
2
PRACOVNÍ POSTUP:
Před testováním nechte testovací blister, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na
laboratorní teplotu (15 - 30°C). Vytemperujte jenom počet blisterů, které použijete
k testování. Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test.
Pro provedení testu můžete zvolit postup označený A nebo B.
A.
Aplikace kapky vzorku z odběrové zkumavky na blister
1. Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové
fólie jej otevřete. Blister ponechte na spodní části hliníkové fólie a položte jej na
vodorovnou podložku.
2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré
homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (obr.3).
3. Těsně před použitím vyjměte blister Rapid-VIDITEST Crypto-Giardia Blister z obalové
folie a položte ho na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací
zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou
odběrovou zkumavku a blister.
4. Aplikujte přesně 5 kapek naředěného vzorku z odběrové zkumavky na bílý konec blisteru
(zóna pro aplikaci vzorku – sample region) (obr.4).
5. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem.
Postup A
Postup B
Aplikujte 5 kapek
(3)
Přidejte 10 kapek
(4)
(5)
B. Ponořením blisteru do zkumavky
1. Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové
fólie jej otevřete.
2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré
homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (obr.3).
3. Přeneste 5 - 10 kapek vzorku homogenizovaného v ředicím roztoku z odběrové zkumavky
do čisté lahvičky nebo zkumavky. Ponořte testovací blister bílým koncem do zkumavky
(obr.5). Neponořujte blister hlouběji než po rysku vyznačenou pod bílými šipkami
(zóna pro aplikaci vzorku - sample region).
4. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem.
3
INTERPRETACE VÝSLEDKU:
Vzorky se aplikují na bílý konec blisteru. Výsledky se odečítají v prostředním bílém okénku.
Úsek tohoto okénka blíže k bílému konci blisteru se nazývá „výsledková zóna“. Úsek okénka
dále od bílého konce se nazývá „kontrolní zóna“.
Kontrolní
zóna
Zelená
Červená
Modrá
Zelená
Červená
Modrá
Výsledková
zóna
Modrá
Zóna pro
nanesení
vzorku
Crypto
Giardia Crypto-Giardia
Negativní
Neplatný
Pozitivní
Negativní: V kontrolní zóně se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna zůstane
čistá.
Pouze Crypto Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně se objeví také červená linka ve
výsledkové zóně.
Pouze Giardia Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně se objeví také modrá linka ve
výsledkové zóně.
Crypto-Giardia Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně se objeví obě barevné
linky – tedy červená a modrá zároveň – ve výsledkové zóně.
Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví zelená linka bez ohledu na
přítomnost červené nebo modré linky ve výsledkové zóně. Nejčastějšími příčinami selhání
testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození
reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže
přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele.
Poznámka k interpretaci výsledku:
Intenzita červené nebo modré barevné linky ve výsledkové zóně závisí na koncentraci
antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani
jeho nárůst v průběhu onemocnění.
4
Červená
PLATNOST TESTU:
Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit
interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu.
Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu.
OMEZENÍ TESTU:
1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu blisteru.
2. K testu použijte jenom čerstvé nebo čerstvě rozmražené nekonzervované a nefixované
vzorky.
3. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se
hnědé linky). V tomto případě řeďte vzorek ředicím roztokem a opakujte test.
4. Po jednom týdnu trvající infekce počet parazitů ve stolici klesá a tím se snižuje reaktivita
vzorku. Proto by vzorky měly být odebrány v průběhu jednoho týdne od nástupu příznaků.
5. Výsledky tohoto testu pouze naznačují přítomnost parazitární infekce. Lékař by měl
diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce.
6. Výrobce nezaručuje funkčnost testu po uplynutí expirační doby.
ÚČINNOST TESTU:
Citlivost a specificita:
Byly testovány vzorky stolice (Giardia a Cryptosporidium pozitivních a negativních
testovaných mikroskopicky) od pacientů z lokální nemocnice ve Španělsku. Sensitivita pro
Rapid-VIDITEST Crypto Giardia Blister testu pro Giardia byla >99% a pro Cryptosporidium
>99%; specificita pro Giardia byla >99% a pro Cryptosporidium >99%.
SKLADOVÁNÍ A STABILITA:
Skladujte v originálním obalu při teplotě 2 až 30°C. Test je stabilní do data expirace
uvedeného na obalu. Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití. Nezmrazujte.
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ:
-
Pouze pro in vitro diagnostiku
Nepoužívejte po uplynutí expirační doby.
Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem.
Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy.
5
REFERENCE:
1. MARSHALL, M.M., ET AL., “Waterborne Protozoan Pathogens”, Clinical Microbiology
Review, Jan. 1997, pp 67/85.
2. DYLAN R., PILLAI AND KEVIN C. KAIN, “Immunochromatographic Strip-Based
Detection of Entamoeba hystolitica-E. dispar and Giardia lamblia Coproantigen”.
Journal of Clinical Microbiology, Sept. 1999, Vol. 37, No 9, p. 3017-3019.
3. LYNNE S. GARCIA et. Al., “Commercial Assay for Detection of Giardia lamblia and
Cryptosporidium parvum Antigens in Human Fecal Specimens by Rapid Solid-Phase
Qualitative Immunochromatography”, Journal of Clinical Microbiology, Jan. 2003, Vol.
41, No. 1, p. 209-212.
POUŽITÉ SYMBOLY:
Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Datum expirace
Výrobce
Poslední revize tohoto návodu: 11/2010
6