EPPENDORF - ceník pipet a spotřebního materiálu

Kolona TSKgel Glyco HSi- návod k použití
1. Úvod
Založeno na principu vysokotlaké kapalinové chromatografie, kdy kolona TSKgel Glyco HSi se používá
výhradně na automatickém analyzátoru glykohemoglobinu TOSOH HLC-723GHbV A1c2.2. (Medical Instrument
License no.35BZ0019). Nelze použít na žádných jiných systémech HPLC.
Glykohemoglobin (GHb) je obecné označení pro všechny komplexy krevní glukózy, které jsou neenzymaticky
vázány k α a β řetězcům lidského hemoglobinu. Nejpočetnější komplex se nazývá HbA1C, ve kterém se glukóza
váže k N-konci β řetězce.
HbA1C je syntetizován neenzymaticky ve dvou krocích:
1. Glukózová aldehydická skupina reaguje s volnou amino skupinou valinu v N-konci β řetězce a vytvoří
Schiffovu vazbu (aldimin, labilní A1C).
2. Stabilní ketoaminová forma (stabilní HbA1C (S-A1C)) je vytvářena pomocí reakce známé jako Adamoriho
rovnice.
Vzhledem k tomu, že L-A1C (meziprodukt tohoto procesu) se rychle mění v závislosti na celkové koncentraci
glukózy v krvi, tak se k měření HbA1C používá S-A1C komplex. S-A1C na rozdíl od L-A1C nekolísá v závislosti na
fyziologických faktorech a poskytuje lepší indikaci průměrné hladiny glukózy během posledních 1 až 3 měsíců.
Dříve bylo přesné měření S-A1C možné jen po odstranění L-A1C pomocí předběžné úpravy. Nyní použitím kolony
TSKgel Glyco HSi lze S-A1C a L-A1C rychle od sebe oddělit a pro potřeby léčby měřit jen S-A1C .
2. Před použitím
Je třeba prohlédnout balení kolony, zda nejeví jakoukoliv známku poškození. Je-li obal poškozený, kontaktujte
svého místního prodejce.
Součástí balení je i tento návod k použití.
3. Obsah balení
Katalogové číslo
Kolona
Měřící varianta
Systém
Teplota stability:
18426
TSKgel Glyco HSi
hemoglobin A1c (S-A1c),analýza 2.2 min
HLC-723 GHbV A1c2.2 automatický analyzátor glykohemoglobinu.
4 – 15 oC
4. Části kolony
5. Další potřebné součásti
HbA1c Calibrator set (NGSP, IFCC)
HbA1c Control set (HSi)
Eluční pufr HSiV 1-3 (S)
HSi Hemolyzační / promývací roztok
6. Skladování a stabilita
TSKgel Glyco HSi kolona:
Stabilní při 4 - 15 oC na chladném a temném místě.
7. Použití a účinnost
Určeno pro analýzu S-A1c frakce glykovaného hemoglobinu v plné krvi.
8. Princip měření
Separace je založena na principu vysokotlaké kapalinové chromatografie (HPLC) pomocí TSKgel Glyco HSi
kolony. Využívá rozdíly ve vzájemném iontovém působení mezi skupinou kationtů kolony a součástmi
hemoglobinu a to k separaci celkem šesti frakcí v časovém rozpětí 2.2 minuty. HbF, S-A1C a celkový A1 lze měřit
prováděním postupné eluce použitím tři HSi V elučních pufrů (1,2 a 3) s rozdílnými koncentracemi solí.
9. Postup použití kolony
Instalace kolony:
1. Vyjměte kolonu z obalu, odstraňte její ochranné šrouby. Dejte je na bezpečné místo pro případ uložení
kolony mimo analyzátor.
2. Přesvědčte se, že analyzátor je ve stavu STAND-BY( na obrazovce STATUS), otevřete komoru kolony
a odstraňte použitou kolonu.
3. Na obrazovce nejdříve zvolte MENU, pak MAINTENANCE. Spusťte pumpu stiskem PUMP FLOW a
ověřte si, zda eluční pufr teče z připojené hadičky. Pak pumpu zastavte.
4. Připojte kolonu k hadičce na přítoku pufrů, směr toku pufru je naznačen na povrchu kolony a opět
stiskem PUMP FLOW nechte protéct pufr kolonou a pak uzavřete kolonu na odtoku.
5. Pomocí pumpy zkontrolujte, že tlak rychle stoupá a spojení kolony a hadiček nikde neprosakuje.
6. V MAINTE a COLUMN COUNT vynulujte počet testů na koloně.
10. Měření
Podrobné informace najdete v operačním manuálu analyzátoru HLC-723GHbV A1c2.2.
11. Opatření pro bezpečné použití
1. TSKgel Glyco kolona je určena pro použití výhradně v kombinaci s těmito systémy:
- TOSOH HLC-723GHbV A1c2.2automatický analyzátor glykovaného hemoglobinu.
Eluční pufry HSiV (1,2,3)
HSi hemolyzační / promývací roztok.
2. Po výměně kolony je třeba několik chromatogramů dobře zkontrolovat.
3. Vždy používejte kolonu a eluční pufry stejné šarže. Kolona i pufry jsou označeny písmenem a musí
spolu souhlasit ( A,B,C...). Eluční pufr č.3 není rozlišen a pracuje se se všemi šaržemi kolony a pufrů
1,2.
4. Je důležité, aby pufry protékaly kolonou ve směru šipky vyznačené na povrchu kolony.
6. V případě, že kolona není používána více jak jeden týden, vyndejte kolonu z analyzátoru, opatřete
ochrannými šrouby a uložte na suché, chladné a temné místo při 4 – 15 oC.
7. Chraňte kolonu před otřesy a nárazy.
8. Vyměňte filtr při abnormálně vysokém tlaku (3,0 MPa vyšší než počáteční tlak). Vyměňte kolonu, pokud
nový filtr neodstraní vysokou hodnotu tlaku.
11. Příklady výsledných hodnot
FORMAT 0
FORMAT 1
FORMAT 2
12. Měřené hodnoty
Měřené hodnoty (%) jsou % každého píku k celkové ploše (vyjma předního píku PF). Minimální hodnota je
0,1%.
13. Analytické charakteristiky
Linearita ředění – analýzy byly provedeny s normálními vzorky ředěnými v různých poměrech
hemolyzačním roztokem a zjišťován vliv na hodnotu S-A1c. Vysoká spolehlivost v měřených výsledcích
byla zjištěna pro hodnotu TOTAL AREA v rozsahu 1000-5000.
Kontrola návratnosti – v tabulce je uvedena procentuální návratnost u dvou vzorků namíchaných různými
poměry.
poměr vysokého poměr nízkého Naměřená hodnota
Logická hodnota
Návratnost
S-A1c(%)
S-A1c(%)
vzorku
vzorku
(%)
0
10
3,1
1
9
4,7
4,5
104,7
2
8
6,3
5,9
107,1
3
7
7,7
7,3
105,9
4
6
9,2
8,7
106,2
5
5
10,7
10,1
106,5
6
4
12,1
11,4
105,8
7
3
13,3
12,8
103,7
8
2
14,7
14,2
103,4
9
1
15,8
15,6
101,2
10
0
17,0
Korelace – v grafu je korelace hodnot S-A1c u analyzátorů HLC-723G7 a HLC-723GHbV A1c2.2.
14. Přesnost
V průběhu jedné série stanovení – tři hladiny kontrol, počet opakování n=24.
Průměr
SD
CV %
Vzorek A
5,48
0,04
0,68
Vzorek B
13,61
0,03
0,20
V různých seriích měření (n=12), měření 1x denně, hodnota S-A1c pro dvě hladiny alibrátorů
Průměr
SD
CV %
CALIB 1
5,32
0,04
0,70
CALIB 2
10,81
0,05
0,45
Specifičnost metody(1)
Následující látky byly přidány do normálních vzorků a byl zjišťován jejich vliv na výsledek měření. Žádný
efekt se neprojevil po přídavku glukózy do 1000 mg/dl, kyanidu sodného do 50 mg/dl a acetaldehydu do
100 mg/dl.
GLUKÓZA
KYANID SODNÝ
ACETALDEHYD
Specifičnost metody (2)
Podobně žádný efekt nebyl pozorován pro následující látky až do koncentrací uvedených v tabulce.
Volný bilirubin
Konjugovaný bilirubin
Aspirin
Kyselina askorbová
Kyselina močová
do 27 mg/dl
do 202 mg/dl
do 200 mg/dl
do 200 mg/dl
do 200 mg/dl