Diazyme Procalcitonin Assay

Diazyme Laboratories
12889 Gregg Court
Poway, CA 92064, USA
Tel: 858-455-4768 / Fax: 858-455-3701
Email: [email protected]
Web: www.diazyme.com
Diazyme Procalcitonin Assay
Nakládání s reagenciemi
Obsah balení
Diazyme Procalcitonin (PCT) Assay se dodává velkoobchodně, nebo v těchto
soupravách:
REF
Složení soupravy
R1: 44 ml
DZ558A-K
R2: 14 ml
*Kalibrátor a kontrola jsou dodávány samostatně
Použití
Diazyme Procalcitonin Assay je určen pro kvantitativní stanovení PCT ve
vzorcích séra, EDTA nebo lithium heparinové plazmy metodou vylepšené
latexové imunoturbidimetrie.
Klinický přínos
Prokalcitonin (PCT) je 116-aminokyselinový protein, prohormon kalcitoninu.
Vzhledem k tomu, že hormonálně aktivní kalcitonin se tvoří výhradně v Cbuňkách štítné žlázy po specifickém vnitrobuněčném proteolytickém zpracování
prohormonu PCT, PCT se všestranně a jednotně projevuje v mnoha tkáních jako
reakce na sepsi1. Ve zdravém stavu jsou koncentrace PCT v oběhu velmi nízké
(< 0,05 ng/ml). Zvýšené koncentrace PCT v oběhu jsou důležitými indikátory
reakce na mikrobiální infekce a účinným nástrojem včasné detekce sepse.
Princip testu
Diazyme PCT test je založen na vylepšené latexové imunoturbidimetrii.
Proteiny PCT ve vzorku se vážou na specifickou anti-PCT protilátku, která je
koutovaná na latexových částicích a způsobuje jejich aglutinaci. Stupeň turbidity
způsobené aglutinací lze opticky měřit a turbidita je úměrná koncentraci PCT ve
vzorku. Přístroj vypočítává koncentraci PCT ve vzorku interpolací získaného
signálu na 6 bodové kalibrační křivce.
Reagencie – pracovní roztoky
REAGENCIE testu Diazyme PCT jsou stabilní kapalné reagencie,
připravené k použití.
Stabilita a uchovávání reagencií
REAGENCIE jsou stabilní, jsou-li skladovány při teplotě 2-8 °C až do data
exspirace uvedeného na štítku. Nemíchejte REAGENCIE z různých šarží.
NEZMRAZUJTE!
Odběr a příprava vzorku 2, 3, 8
Diazyme PCT Assay je připraven pro použití se sérem nebo lithium heparinovou
a EDTA plazmou. Pro účely sledování by se vždy měla používat stejná matrice
vzorků. Hodnoty PCT naměřené v arteriální krvi jsou o cca 4 % vyšší než
hodnoty z venózní krve. PCT se zvyšuje kolem 3 hodin po bakteriální infekci,
dosahuje maximálních hodnot po 6-12 hodinách s poloviční životností 25 až 30
hodin. PCT je relativně stabilní ve vzorcích plazmy i séra a neexistují žádné
zvláštní požadavky na předanalytické nakládání se vzorky. Vzorky uchovávané
při teplotě 4 °C udržují více než 90 procent své původní koncentrace po dobu
několika dnů, zatímco vzorky uchovávané při pokojové teplotě udržují 80
procent původní koncentrace po dobu 24 hodin. Pokud se vzorek uchovává při
teplotě -20 °C, je stabilní po dobu 6 měsíců. 3 cykly mrznutí/tání vedou ke ztrátě
PCT ve vzorku <2%. Po rozehřátí musí být zkalené vzorky vyčištěny
centrifugací.
Vybavení, které je součástí kitu
Viz oddíl „Reagencie - pracovní roztoky“.
Potřebné vybavení, které není součástí kitu
Je možné použít jakýkoli přístroj s tepelnou kontrolou prostředí 37 ± 0,5°C,
který umožňuje měřit přesně absorbanci při 600 nm.
Soupravy Diazyme PCT Calibrator Set (REF DZ558A-CAL) a Diazyme
PCT Control Set ( REF DZ558A-CON) jsou dodávány samostatně.
REAGENT 1: 100 mM Tris-pufr roztok, připraven k použití
Schéma testu pro analyzátor chemického složení
REAGENT 2: Suspenze anti-lidských PCT myší monoklonální protilátky
koutované na latexové částice (0,2%), připravena k použití
KALIBRÁTORY: obsahují PCT v matrici lidského séra, lyofilizovaný materiál
PCT by měl být měřen podle parametrů specifického použití analyzátorů
chemického složení. Níže je uveden příklad schématu stanovení.
R1: 180 µl
Vzorek: 20 µl
R2: 60 µl
H2O: 20 µl
600 nm
Bezpečnostní opatření
1. USA: Určeno pouze pro výzkumné účely. Není určeno pro použití v
diagnostických postupech.
2. EU: IVD
3. Nepoužívejte reagencii po datu exspirace uvedeném na vnějším obalu. Stejně
jako jiné laboratorní testy, výsledky musí být interpretovány s přihlédnutím
k ostatním výsledkům a stavu vzorků.
4. Četnost kalibrace testu závisí na použitém přístroji. Kromě toho by
test měl být zkalibrován a provedeny kontroly u každé nové šarže reagencií.
5. Vyhněte se požití a kontaktu reagencie s pokožkou nebo očima.
6. Se vzorky a reagenciemi obsahujícími lidský materiál by mělo být nakládáno
jako s potenciálně infekčními, s použitím příslušných laboratorních postupů,
jako jsou například postupy popsané v „Biosafety in Microbiological and
Biomedical Laboratories“ (HHS Publication Number [CDC] 93-8395).
7. Dodatečné bezpečnostní informace ohledně uchovávání a nakládání s tímto
produktem jsou uvedeny v bezpečnostním listu (MSDS). Chcete-li ho obdržet,
kontaktujte naše oddělení služeb zákazníkům na tel. 858-455-4768.
Varování
REAGENT obsahuje jako konzervant azid sodný NaN3 v koncentraci < 0,1%.
Azid sodný může reagovat s olovem nebo mědí trubek za vzniku vysoce výbušné
směsi. Při jeho použití proveďte proplach velkým množstvím vody, aby se
zabránilo jeho hromadění.
37°C
0 min
4,5 min
6,5 min
A1
10 min
A2
Otázky ohledně Diazyme PCT Assay by měly být směrovány na technickou
podporu firmy Diazyme. Volejte (858)-455-4768 nebo zašlete email:
[email protected].
Kalibrace
Diazyme PCT Assay by měl být kalibrován pomocí soupravy kalibrátorů PCT
(Diazyme PCT Calibrator Set ( REF DZ558A-CAL). Koncentrace PCT ve
vzorku se určuje z 6 bodové kalibrační křivky získané z KALIBRÁTORŮ PCT.
Kalibrátory Diazyme PCT L0-L5 představují lyofilizovaný prášek a před
použitím vyžadují obnovení pomocí studené deionizované vody. Pro další
instrukce si přečtěte příbalový leták u kalíbrátoru.
Četnost kalibrace
Doporučuje se provádět kalibraci jednou za čtrnáct dní.
Kontrola kvality
Správná laboratorní praxe doporučuje používat KONTROLNÍ materiály. Uživatelé
by měli dodržovat příslušné federální, státní a místní předpisy vztahující se na
provádění externí kontroly kvality.
Pro zajištění adekvátní kontroly kvality by se měly „low“ and „high“
KONTROLY zpracovávat jako neznámé vzorky.
Kontroly ze soupravy Diazyme PCT Control Set (REF DZ558A-CON)
představují lyofilizovaný prášek a před použitím vyžadují rekonstituci pomocí
studené deionizované vody.
Výsledky
Výsledky jsou vytištěny v ng/ml. Poznámka: vzorky s hodnotami vyššími než 50
ng/ml by měly být naředěny fyziologickým roztokem nebo negativním vzorkem
a měřeny opakovaně. Výsledky násobte zřeďovacím poměrem.
V dokumentech z konference American College of Chest Physicians/Society of
Critical Care Medicine byla diagnóza systemické bakteriální infekce/sepse
kategorizována následovně2-4: PCT < 0,5 ng/ml: systemická infekce (sepse) není
pravděpodobná, místní bakteriální infekce je možná; PCT ≥ 0,5 ng/ml a < 2
ng/ml: systemická infekce (sepse) je možná, ale jsou známy různé podmínky,
které také indukují PCT; PCT ≥ 2 ng/ml a < 10 ng/ml: systemická infekce
(sepse) je pravděpodobná, pokud nejsou známy jiné příčiny; PCT ≥ 10 ng/ml,
téměř výlučně způsobeno závažnou bakteriální sepsí nebo septickým šokem.
Omezení
Vzorky s koncentracemi PCT přesahujícími limit 50 ng/ml by měly být naředěny
negativním vzorkem nebo kalibrátorem L0. Opakujte testy a násobte výsledky
zřeďovacím poměrem.
Při používání myších protilátek při měření existuje možnost interference
s lidskými protilátkami proti myším (HAMA) ve vzorku. Diazyme PCT Test
byl vyvinut tak, aby se zmíněná interference minimalizovala. Nicméně vzorky
pacientů, kteří jsou rutinně vystaveni zvířatům nebo produktům obsahující
zvířecí sérum, mohou obsahovat heterofilní protilátky, které mohou způsobit
chybné výsledky.
Stejně jako u jakéhokoli jiné latexové imunoturbidimetrii by po jednotlivých
testech PCT měly následovat kroky patřičného a důkladného promytí. Další
informace naleznete v manuálu příslušného přístroje.
REAGENCIE, rozpuštěné KALIBRÁTORY a KONTROLY by měly být uchovávány
při teplotě 2-8 °C. REAGENCIE NEZMRAZUJTE! Rozpuštěné KALIBRÁTORY
a KONTROLY je možné skladovat v alikvotních částech při teplotě 20 °C po dobu
6 měsíců od data jejich rozpuštění.
Diazyme PCT Assay je určen pro použití se sérem, lithium heparinovou a EDTA
plazmou. Existuje možnost, že některé substance, které nejsou uvedeny níže,
mohou s tímto testem interferovat.
Interference
Byly testovány substance, které jsou běžně přítomné v plazmě. Při testování do
maximálních níže uvedených koncentrací byla odchylka menší než 10%.
Interference
Koncentrace
Kyselina askorbová
10 mmol
Bilirubin, volný
40 mg/dl
Bilirubin, konjugovaný
40 mg/dl
Hemoglobin
400 mg/dl
Triglycerid
1000 mg/dl
Revmatoidní faktor
100 IU/ml
Reference
1. Müller B, et al., Ubiquitous expression of the calcitonin-i gene in multiple
tissues in response to sepsis. J Clin Endocrinol Metab 2001; 86(1):396-404.
2. Meisner M. Procalcitonin (PCT) – A new, innovative infection parameter.
Biochemical and clinical aspects. Thieme; Stuttgart, New York, 2000; ISBN
3-13-105503-0.
3. Christ-Crain M, et al., Procalcitonin in bacterial infections – hype, hope or
more or less? Swiss Med Wkly 2005; 135: 451-60.
4. Bone RC, Balk RA, Cerra FB, Dellinger RP, Fein AM, Knaus WA, Schein
RM, Sibbald WJ. Definitions for sepsis and organ failure and guidelines for
the use of innovative therapies in sepsis. The ACCP/SCCM Consensus
Conference Committee. American College of Chest Physicians/Society of
Critical Care Medicine. Chest 1992; 101: 1644-55
5. Christ-Crain M, Jaccard-Stolz D, Bingisser R, Gencay MM, Huber PR,
Tamm M, Muller B. Effect of procalcitonin-guided treatment on antibiotic use
and outcome in lower respiratory tract infections: cluster-randomised, singleblinded intervention trial. Lancet. 2004;363:600-7.
6. Christ-Crain M, Stolz D, Bingisser R, Muller C, Miedinger D, Huber PR,
Zimmerli W, Harbarth S, Tamm M, Muller B. Procalcitonin Guidance of
Antibiotic Therapy in Community-acquired Pneumonia: A Randomized Trial.
Am J Respir Crit Care Med. 2006;174:84-93.
7. Stolz D, Christ-Crain M, Bingisser R, Leuppi J, Miedinger D, Muller C, Huber
P, Muller B, Tamm M. Antibiotic treatment of exacerbations of COPD:
a randomized, controlled trial comparing procalcitonin-guidance with standard
therapy. Chest. 2007;131:9-19.
8. Schuetz P, et al., Long-term stability of procalcitonin in frozen samples and
comparison of Kryptor and VIDAS automated immunoassays. Clin Biochem.
2010; 43(3):341-4
Analytické charakteristiky
Přesnost měření
Byla hodnocena přesnost Diazyme PCT Assay vzhledem k testované sérii. Ve
studii byly testovány tři úrovně kontrol PCT o koncentracích 0,5 ng/ml, 2,14
ng/ml a 13,13 ng/ml PCT s 20 replikáty v jedné sérii.
Počet datových bodů
Průměr (ng/ml)
SD (ng/ml)
CV (%)
Úroveň 1
20
0,50
0,036
7,2%
Úroveň 2
20
2,14
0,069
3,2%
Úroveň 3
20
13,13
0,353
2,7%
Správnost
Výkonnost tohoto testu byla porovnána s výkonností legálně prodávaného testu
PCT využívajícího vzorky lithium heparinové plazmy. Pro 41 vzorků plazmy o
koncentracích PCT od 0,18 ng/ml do 58,44 ng/ml byl koeficient korelace mezi
těmito dvěma metodami 0,9815, sklon korelační přímky 0,9141 a průsečík
0,3137.
Detekční limit
Byl stanoven detekční limit (LOQ) Diazyme PCT 0,15 ng/ml.
Linearita
Linearita stanovení je 0,15-50 ng/ml. Výsledky nižší než 0,15 ng/ml jsou hlášeny
jako < 0,15 ng/ml. Pokud je výsledná hodnota větší než 50 ng/ml, měl by být
vzorek naředěn negativním vzorkem nebo nulový, kalibrátorem a znovu
testován.
MDSS
Schiffgraben 41
30175 Hannover,
Německo
12889 Gregg Court
Poway, CA 92064, USA
Tel: (858) 455-4754
Fax: (858) 455-4750
Diazyme Laboratories
70808 Rev. D
Strana 2 z 2
Platnost: 15.04.2014