Příbalový leták

Alkalická fosfatáza
mod. IFCC metoda
Dvousložková souprava, kapalná činidla ke stanovení alkalické fosfatázy v lidském séru nebo plazmě
REF
D95564
Cont
4x100 ml R1
1x100 ml R2
Parametry měření
Metoda:
Vlnová délka:
Měření:
Teplota:
Linearita:
Mez detekce:
Mez stanovitelnosti:
kinetické měření, nárůst absorbance
405 nm ( 400 – 420 nm)
proti destilované vodě
37°C
do 66,7 μkat/l (Hitachi 911)
0,011 µkat/l
0,033 μkat/l
Princip
p-nitrofenylfosfát +
H2O
ALP
——> p-nitrofenol + fosfát
V alkalickém prostředí přechází bezbarvý p-nitrofenol na žlutě zbarvený iont, intenzita zbarvení je úměrná
kata-lytické koncentraci ALP ve vzorku.
Složení a koncentrace činidel (v reakční směsi)
R1
R2
2-amino-2-metyl-1-propanol
pH 10,4
octan hořečnatý
síran zinečnatý
HEDTA
p-nitrofenylfosfát
0,90 mol/l
1,6 mmol/l
0,4 mmol/l
2,00 mmol/l
16 mmol/l
Příprava činidel
Pro start substrátem jsou činidla připravena k použití. Pro start vzorkem se připraví pracovní činidlo
smícháním 4 dílů činidla R1 a 1 dílu činidla R2. Maximální přípustná hodnota absorbance pracovního
činidla je 1,00 při 405 nm proti destilované vodě.
Stabilita a skladování činidel
Činidla skladujeme při teplotě 2-8°C. Činidla jsou stabilní po celou dobu exspirace, vyznačené na obalu,
pokud se zabrání kontaminaci po otevření originálního balení. Pracovní činidlo je stabilní 4 týdny při
teplotě 2-8°C, případně 5 dní při laboratorní teplotě. Činidlo chráníme před světlem ( R2 )! Nedodržení
uvedených doporučení zbavuje firmu DIALAB jakékoli zodpovědnosti.
_________________________________________________________________________________________________________________________
Rev. 07-1502
Strana 1 (celkem 4)
Vzorek
Sérum, heparinová plazma, bez hemolýzy. Aktivita ALP se nemění po dobu 7 dní, je-li vzorek skladován
při 4 °C, při -20°C je stabilní 2 měsíce. Při skladování při teplotě 20-25°C se aktivita po 2-3 dnech snižuje
o 10 %.
Odběr doporučujeme provést do zkumavky:
"VACUETTE" pro sérum (červené) nebo "VACUETTE" s heparinem (zelené).
Interferující látky
Bez interference do koncentrace:
Kyselina askorbová
30 mg/dl
Konjugovaná bilirubin
1026 µmol/l
Nekonjugovaný bilirubin
428 µmol/l
Triacylglyceroly
22,6 mmol/l
Provedení testu
Start substrátem
Činidla inkubujeme na laboratorní teplotu.
Do zkumavky pipetujeme:
činidlo R1
vzorek/dest. voda (blank)
1,00 ml
0,02 ml
Promícháme, inkubujeme asi 1 minutu a přidáme:
činidlo R2
0,25 ml
Promícháme a změříme počáteční absorbanci 1 minutu po přidání činidla R2, spustíme stopky. Měříme
absorbance přesně po 1, 2 a 3 minutách. Stanovíme ΔA/min z lineární části měření.
Start vzorkem
Pracovní činidlo inkubujeme na laboratorní teplotu
Do zkumavky pipetujeme:
pracovní činidlo
vzorek
1,00 ml
0,02 ml
Promícháme a změříme počáteční absorbanci za 1minutu, spustíme stopky. Měříme absorbance přesně
po 1, 2 a 3 minutách. Stanovíme ΔA/min. z lineární části měření.
Kalkulace
ΔA/min vzorku - ΔA/min blanku = ΔA/min
Pro start substrátem:
ΔA/min x 57,2 = μkat/l ALP
Pro start vzorkem:
ΔA/min x 45,9 = μkat/l ALP
Referenční rozmezí*
sérum/plazma
Dospělí
Ženy
Ženy
Muži
Muži
Věk
20-50
60
20-50
60
37°C
(μkat/)
0,70-1,63
0,88-2,35
0,93-2,13
0,93-1,98
_________________________________________________________________________________________________________________________
Rev. 07-1502
Strana 2 (celkem 4)
Děti
1-30 dní
1 měsíc - 1 rok
37°C (μkat/l)
ženy
muži
0,80 – 6,77 1,25 –5,32
2,07 – 5,68 1,37 – 6,38
1 - 3 roky
1,80 – 5,28 1,73 – 5,75
4 - 6 let
1,60 – 4,95 1,55 – 5,15
7 - 9 let
1,15 – 5,42 1,43 – 5,25
10 - 12 let
0,85 – 5,53 0,70 – 6,03
13 - 15 let
0,83 –2,70
1,23 – 6,50
16 - 18 let
0,78 – 1,98 0,87 – 2,85
* Doporučujeme každé laboratoři stanovit si vlastní referenční rozmezí.
Analytické parametry stanovení
Linearita
Metoda je lineární do 66,7 μkat/l (Hitachi 911). Při vyšší katalytické koncentraci ALP stanovení
opakujeme se vzorkem ředěným roztokem NaCl o koncentraci 0,154 mol/l. Naměřený výsledek násobíme
příslušným faktorem ředění.
Přesnost (při 30°C)
Intraassay
n = 20
Vzorek 1
Vzorek 2
Vzorek 3
Průměr
[μkat/l]
SD
[μkat/l]
CV
[%]
1,14
1,78
4,05
0,010
0,012
0,016
0,85
0,67
0,40
Interassay
n = 20
Vzorek 1
Vzorek 2
Vzorek 3
Průměr
[μkat/l]
SD
[μkat/l]
CV
[%]
1,15
1,73
3,97
0,023
0,020
0,040
1,99
1,08
1,01
Porovnání metod
Při porovnání Dialab Alkalické fosfatázy (y) a IFCC referenční metody (x) při použití 104 vzorků byly
získány následující výsledky:
y = 1.00 x + 0.025 μkat/l; r= 0.999
Kontrola kvality
Všechna komerční kontrolní séra, kde je uvedena hodnota pro tuto metodu stanovení.
Doporučujeme používat:
REF
DIACON N
D98481
DIACON P
D98482
Kalibrace
Doporučujeme použít vhodný komerční kalibrátor pro automatické systémy, kde je uvedena hodnota pro
tuto metodu.
Doporučujeme používat:
REF
DIACAL AUTO
D98485
Automatizace
Na požádání jsou k disposici aplikační listy pro běžné typy automatických analyzátorů.
_________________________________________________________________________________________________________________________
Rev. 07-1502
Strana 3 (celkem 4)
Odpadové hospodářství
Prázdný obal zneškodněte v rámci tříděného odpadu v souladu se zákonem o odpadech.
Bezpečnostní upozornění
1.
2.
3.
Činidlo obsahuje azid sodný (0,95 g/l) jako konzervační činidlo. Nepolykejte! Vyhněte se kontaktu
s kůží a sliznicemi.
Během reakce vzniká p-nitrofenol, tato sloučenina je jedovatá při požití, inhalaci a absorpci kůží.
V případě kontaktu s reakční směsí opláchněte kůži/tkáň velkým, množstvím vody.
Dodržujte správnou laboratorní praxi.
Literatura
1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p.
36-46.
2. Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of
Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B Saunders Company; 1999. p. 617-721.
3. Tietz NW, Rinker D, Shaw LM. IFCC method for alkaline phosphatase. J Clin Chem Clin Biochem
1983;21:731-48.
4. Burtis CA, Ashwood ER. Eds. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders
Company, 1999. p. 1829.
5. Soldin JS, Hicks JM. Pediatric reference ranges. Washington: AACC Press, 1996. p. 5.
Skladujte při 2-8 °C, nezamrazujte.
Určeno pro "in vitro" diagnostické použití.
DIALAB spol. s r.o.
Nám. Osvoboditelů 1, 153 80 Praha 5
Tel./Fax:257 910 255
257 910 260
257 910 263
e-mail: [email protected]
IČO: 14889200
_________________________________________________________________________________________________________________________
Rev. 07-1502
Strana 4 (celkem 4)