Laboratorní práce – důkazy sacharidů

Laboratorní práce – důkazy sacharidů
V této laboratorní práci provedete kvalitativní reakce na rozpoznávání cukrů – případně zařazení cukrů do
jednotlivých skupin (aldózy, ketózy, redukující, neredukující, pentózy, hexózy, mono a polysacharidy…).
Úkol:
Na základě uvedených reakcí doplňte tabulku – pište A při pozitivní reakci a N, pokud je reakce negativní.
Na základě výsledků v této tabulce určete neznámý vzorek.
Postup:
Rozpusťte vždy malé množství cukru ve vodě, k důkazům používejte 1 – 2 ml roztoku cukru.
vzorek/čin rozpust
glukóza
fruktóza
arabinóza
sacharóza
maltóza
škrob
celulóza
Molisch
thymol
nitrochrom Barfoed
Selivan
Fehling
Bial
lugol
neznámý
vzorek
1) Rozpustnost ve vodě – malé !! množství vzorku rozpusťte ve vodě.
2) Molischova reakce:
Princip:
Sacharidy poskytují s koncentrovanou kyselinou sírovou a s 1-naftolem intenzivně fialové zbarvení. Reakce
je velmi citlivá
Postup:
Připravte si zkumavky, do každé dejte 2 ml roztoku příslušného sacharidu. Přidejte 5 kapek Molischova
činidla. Poté opatrně podvrstvěte 2 ml koncentrované kyseliny sírové (koncentrovanou kyselinu sírovou
nechte stékat po stěně zkumavky).
Ve všech zkumavkách se na rozhraní koncentrované kyseliny sírové a roztoku cukru s Molischovým
činidlem objevuje červený, červenofialový prstenec. Po zamíchání se kapalina zbarví tmavo fialově,
zředěním vodou se vyloučí modrofialová sraženina, rozpustná v etheru na žlutý roztok.
Poznámka:
Tato reakce není specifická jen pro sacharidy. Při reakci může vznikat zelené zbarvení (nečistoty v 1naftolu), nebo bílý pruh (reakce bílkovin přítomných ve vzorku), což nelze považovat za pozitivní průběh
reakce
3) Thymolova reakce:
Princip:
Roztoky sacharidů poskytují s thymolem v přítomnosti koncentrované kyseliny chlorovodíkové
tmavočervené až purpurově červené sloučeniny.
Postup:
Vzorek + thymol + koncentrovaná HCl + krystalky NaCl →zahřátí
Přidejte ke každému vzorku 3 kapky ethanolového (96 %) roztok thymolu a kyselinu chlorovodíkovou (10
cm3). Vzorky zahřívejte pět minut ve vroucí vodní lázni. Objeví se karmínově červené zbarvení.
4) Nitrochromová reakce:
Princip:
Sekundární alkoholická skupina reaguje s chromanem v prostředí kyseliny dusičné za vzniku modrého
zbarvení. Polysacharidy s výjimkou insulinu nereagují.
Postup:
Ke každému vzorku přidejte opatrně kyselinu dusičnou (3 cm3) a 5 kapek 5% roztok chromanu draselného.
Po promíchání se u monosacharidů a oligosacharidů objeví modré zbarvení.
5) Barfoedova reakce:
Princip:
Roztoky monosacharidů poskytují s Barfoedovým činidlem do 5-ti minut červenohnědou sraženinu. Toho
lze využít oxidací v kyselém prostředí, kdy reagují pouze monosacharidy. Podmínky reakce je nutno přísně
dodržet.
Postup:
K vzorku cukru přidejte 2 ml Barfoedova činidla. Zkumavky ponořte do vodní lázně. V případě pozitivní
reakce se po chvíli objevuje na dně červená sraženina, ostatní roztoky jsou modré.
6) Selivanova reakce
Princip:
Ketózy reagují s resorcinolem v přítomnosti minerální kyseliny za vzniku třešňově červeného zbarvení.
Aldózy reagují pomalu. Oligosacharidy reagují rychleji než aldózy v důsledku hydrolýzy.
Postup:
Do zkumavek dejte asi 1 ml vzorku. Přidejte 2 ml Selivanova činidla. Zahřívejte na vodní lázni.
V případě pozitivní reakce se roztok začne zbarvovat dočervena. I při negativní reakci se roztok může až po
delší době barvit do slabě růžova.
7) Bialova reakce
Princip
Pentozy dávají s Bialovým činidlem do 5 – ti minut zelenomodré zbarvení
Postup:
Do zkumavky odměřte 1 ml Bialova činidla a přidejte 5-6 kapek vzorku. Zahřejte do varu. Za 2 - 3 minuty
vznikne zelené zabarvení dokazující ribózu.
.
8) Fehlingova zkouška
Princip:
Sacharidy redukují za varu alkalický roztok vinanu měďnatého (označovaného jako Fehlingovo činidlo),
přičemž se vyloučí červený oxid měďný. Reakce probíhá v silně alkalickém prostředí, takže při ní může
docházet, zvláště při delším zahřívání k vedlejším reakcím, především k hydrolýze di- a oligosacharidů.
Postup:
Ve zkumavce smíchejte 1 cm3 Fehlingova roztoku I a 1 cm3 Fehlingova roztoku II a přidejte asi 1 ml
roztoku cukru. Zahřejte na vodní lázni. V případě redukující ho cukru vzniká sraženina žluté až
červenohnědé barvy.
9) Jodový test
Postup:
Ke vzorku přidejte Lugolův roztok - hnědé zbarvení je důkazem škrobu.
Molischovo činidlo: 10% roztok 1 - naftolu v ethanolu
Barfoedovo činidlo: (70 g octanu měďnatého a 9 ml konc. kyseliny octové ve výsledném objemu 1 l; tedy 7
g octanu měďnatého a 0,9 ml konc. kyseliny octové ve výsledném objemu 100 ml)
Selivanovo činidlo: 0,05 g resorcinolu ve 100 ml HCl, HCl: 1 objemový díl konc. HCl + 2 objemové díly
vody
Bialovo činidlo: 1,25 g orcinu a 0,1 g FeCl3 a doplnit 707 mol/ HCl do 500 ml.
Fehlingovo činidlo: před vlastním testem smíchat v poměru činidlo I a činidlo II
Fehling I – 6,9 g pentahydrátu síranu měďnatého ve vodě, doplnit na 100 ml
Fehling II – 34 g tetrahydrátu vinanu draselno-sodného a 10 g hydroxidu sodného ve vodě, doplnit na 100
ml