Rapid-VIDITEST Verotoxin I-II

Rapid-VIDITEST
Verotoxin 1-2
(Jednokrokový kazetový test pro kvalitativní detekci verotoxinu 1 (VT1) a verotoxinu 2
(VT2) ve stolici)
Návod k použití soupravy
Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy,
Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: [email protected], Web: www.vidia.cz
POUŽITÍ:
Rapid-VIDITEST Verotoxin 1-2 je jednokrokový imunochromatografický test pro současnou
kvalitativní detekci VT1 a VT2 ve vzorcích stolice za účelem zjištění infekce
enterohemoragickou E. coli (EHEC). Pouze pro laboratorní použití.
ÚVOD:
Enterohemoragická Escherichia Coli (EHEC) patří do skupiny patogenních E. coli, které u lidí
způsobují průjem nebo hemoragickou kolitidu. Hemoragická kolitida občas přechází v
hemolyticko-uremický syndrom (HUS), který je závažnou příčinou akutního selhání ledvin u
dětí a morbidity a mortality u dospělých. Mikroorganismus produkuje dva typy verotoxinů,
které lze rozdělit do dvou základních kategorií: verotoxin 1 (VT1) a verotoxin 2 (VT2).
EHEC se přenáší fekálně-orální cestou. Může se šířit mezi zvířaty přímým kontaktem nebo
prostřednictvím vodních koryt, sdílením krmiva, prostřednictvím kontaminovaných pastvin
nebo jiných zdrojů životního prostředí.
Tento mikroorganizmus může mít velký význam pro veřejné zdraví v případě propuknutí
epidemie a také kvůli závažnosti komplikací způsobených enteritidou.
Lidé se mohou nakazit asymptomaticky nebo se může objevit vodnatý průjem, hemoragická
kolitida a/nebo hemolyticko-uremický syndrom. Tento syndrom je nejčastější u dětí, starších
lidí a jedinců se sníženou imunitou.
PRINCIP TESTU:
Rapid-VIDITEST Verotoxin 1-2 je kazetový kvalitativní imunochromatografický test pro
stanovení verotoxinu 1 a 2 ve vzorcích stolice. Na testovacích zónách membrány kazety jsou
předem navázány monoklonální protilátky proti antigenům VT1 a VT2. V průběhu testování
vzorek reaguje s konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-VT1 a anti-VT2
protilátky). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně kazety. V případě
pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve
„výsledkové zóně“ projeví jako jedna nebo dvě barevné linky. Zelená linka se objeví vždy a
slouží jako kontrolní linka. Přítomnost zelené linky ověřuje:
1) že se použil dostatečný objem vzorku,
2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku,
3) interní kontrolu reagencií.
1
OBSAH SOUPRAVY:
-
testovací kazety
odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky
návod k použití
certifikát kontroly balení
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU
-
nádoba na sběr vzorků
jednorázové rukavice
stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ:
Odeberte dostatečné množství stolice (1 – 2g nebo ml tekutého vzorku). Vzorky odebírejte do
čistých odběrových nádob (bez konzervantů nebo transportního média). Test by měl
proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat
24 hodin před testováním v chladničce při +2 až +8°C. V případě delšího skladování,
maximálně 2 týdny, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -20°C. Před použitím nechte
vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu.
Příprava vzorků
a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1).
b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku
stolice (cca 125mg) (2). Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační
tyčinku do ředicího roztoku.
c) Zkumavku důkladně promíchejte za účelem dobré homogenizace vzorku (3).
d) Při stanovení vzorku z tekuté stolice odeberte 125µL vzorku do ředicího roztoku.
2
PRACOVNÍ POSTUP:
Před testováním nechte kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní
teplotu (+15 až +30°C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test.
1. Znovu protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace
vzorku. Uřízněte nebo odstřihněte konec špičky zkumavky (obr. 4).
2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Verotoxin 1-2 z obalové folie
a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny
a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou
zkumavku a kazetu.
3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky (100 l)
naředěného vzorku (obr. 5).
4. Po 10 minutách odečtěte výsledek.
Přidejte 4 kapky
z odběrové zkumavky
T1 C T2
S
(5)
INTERPRETACE VÝSLEDKU:
Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample – vzorek), výsledky se odečítají
v obdélníkovém okénku uprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T1 a T2 (výsledková
zóna).
T1 C T2
T1 C T2
T1 C T2
T1 C T2
VT1
VT2
VT1-VT2
Negativní
T1 C T2
Neplatný
Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T1 a T2
zůstane čistá.
Pozitivní:
VT1 pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C, se objeví také červená linka ve
výsledkové zóně T1.
3
VT2 pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C, se objeví také červená linka ve
výsledkové zóně T2.
VT1-VT2 pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C, se objeví dvě červené linky ve
výsledkové zóně T1 a T2.
Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na
přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T1 a T2. Nejčastějšími příčinami selhání testu
jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií.
Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají,
kontaktujte svého dodavatele.
Poznámka k interpretaci výsledku:
Intenzita červené barevné linky v místě označeném T1 a T2 závisí na koncentraci antigenů ve
vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst
v průběhu onemocnění.
PLATNOST TESTU:
V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní
kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu.
OMEZENÍ TESTU:
1. Kazeta Rapid-VIDITEST Verotoxin 1-2 slouží pouze k prokázání přítomnosti verotoxinu 1
a/nebo 2 ve vzorku (kvalitativní detekce) a měla by být používána pouze k detekci
verotoxinu 1 a/nebo 2 ve vzorcích stolice. Testem nelze stanovit kvantitativní množství
antigenu ani míru jeho nárůstu v průběhu infekce.
2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé
linky). Vzorek je potřeba naředit ředícím roztokem a opakovat test.
3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky.
4. Pokud je výsledek testu negativní a klinické symptomy přetrvávají, doporučuje se
dodatečné testování za použití jiných klinických metod. Negativní výsledek testu
nevylučuje možnost infekce způsobenou EHEC.
5. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu infekce způsobenou EHEC. Potvrzení diagnózy
může provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu.
6. Vzhledem k jejich podobné struktuře může kazeta Rapid-VIDITEST Verotoxin 1-2
poskytnout pozitivní výsledek s shiga toxinem produkovaným Shigellou dysenteriae typu 1.
Stanovení a rozdlišení Shigelly dysenteriae typu 1 a EHEC by měly být prováděny
selektivní kultivací a biochemickou analýzu.
OČEKÁVANÉ HODNOTY:
Infekce EHEC se může vyskytovat ojedinělých případy nebo propuknout v epidemii.
Odhadovaný roční výskyt EHEC O157: H7 hlášený ve Skotsku, USA, Německu, Austrálii,
Japonsku a Jižní Koreji je v rozmezí 0,08 až 4,1 na 100 000 obyvatel s nejvyšším výskytem ve
Skotsku.
V USA EHEC O157: H7 způsobuje přibližně 73 000 nemocí, 2 000 hospitalizací, a 50 až 60
úmrtí ročně. Komplikace a úmrtí jsou velmi časté u dětí, starších lidí a jedinců s potlačenou
imunitou nebo osob s oslabujícím onemocněním.
4
ÚČINNOST TESTU:
Citlivost a specifita:
Bylo provedeno testování vzorků stolice kazetou Rapid-VIDITEST Verotoxin 1-2 a výsledky
byly porovnány s jiným komerčním imunochromatografickým testem (IC test: Shiga Toxin
Quick Chek, TechLab®).
Výsledky vykazovaly > 99% shodu v citlivosti i specifitě.
Křížová reaktivita:
Rapid-VIDITEST Verotoxin 1-2 byl testován na stanovení křížové reaktivity. Nebyla nalezena
žádná křížová reaktivita s běžnými střevními patogeny, dalšími organismy a látkami někdy
přítomnými ve stolici (Campylobacter, Citobacter freundii, Helicobacter pylori, Clostridium
difficile, Klebsiella pneumoniae, Listeria monocytogenes, Morganelle morganii, Proteus
mirabilis, Staphylococcus aureus, Salmonella, Yersinia enterocolitica).
SKLADOVÁNÍ A STABILITA:
Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30°C. Test je stabilní do data exspirace
uvedeném na obalu. Test musí zůstat zabalen v původní folii. Nezmrazujte
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ:
-
pouze pro in vitro diagnostiku
nepoužívejte po uplynutí exspirační doby
se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem
test by měl zůstat v uzavřeném obalu do okamžiku použití
odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy
test nepoužívejte, jestliže je obal poškozen
během testu nejezte, nepijte a nekuřte, dodržujte Správnou laboratorní praxi, používejte
ochranný oděv a jednorázové rukavice
test musí být proveden do dvou hodin od otevření obalu
REFERENCE:
1. A.C. Mania, T. Williams, C.M Anand and G.W. Hammond. “Detection of Verotoxin in
Stool Specimens”. Journal of Clinical Microbiology, 1990, P. 134-135.
2. Boldtsetseg Tserenpuntsag, Hwa-Gan Chang, Perry F. Smith and Dale L. Morse.
Hemolytic Uremic Syndrome Risk and Escherichia coli O157:H7
5
POUŽITÉ SYMBOLY:
Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Datum exspirace
Výrobce
Poslední revize tohoto návodu: 05/2014
6