Konjugace

Funkþní oblasti F-plazmidu
Transferová oblast
Oblast IS sekvencí
Vedoucí oblast
TraT = vnČjší membránový protein zabraĖující
stabilnímu spojení bunČk obsahujících plaĨmidy
TraS = protein vnitĜní membrány zabraĖující
vstupu DNA do buĖky pĜi náhodném spojení
bunČk s F
Typická buĖka F+ má asi 20 pilusĤ
Interakce místa nic s relaxázou v místČ oriT
Oblast oriT (500 bp)
AT+
nic (10 bp)
IR, DR
traY, traZ?
Rozpoznání místa nic relaxázou (místnČ specifická endonukleáza)
Relaxozom
DNA + mob-proteiny
Relaxaþní komplex
Donor conjugal DNA synthesis (DCDS) - náhradová syntéza DNA v
donorové buĖce mechanismem otáþející se kružnice
Repliconation - syntéza komplementárního ĜetČzce v recipientní buĖce
F plazmid
R-plazmid
transpozice
homologní rekombinace
PĜenos genĤ probíhá v definovaném poĜadí, mĤže probíhat v obou smČrech, a probíhá
konstantní rychlostí 45 kb/minutu. Celý chromozom E. coli se pĜenese za 100 minut.
F+ = Leu+StrS
F- = Leu-StrR
Rekombinanta =
Leu+StrR
Za vznik rekombinantĤ jsou zodpovČdné buĖky Hfr
+
KĜížení kmenĤ F x F
Populace bunČk F
+
-
buĖky F
-
Po pĜenosu do recipientní buĖky
mají všechny geny stejnou
pravdČpodobnost zaþlenČní do
chromozomu (vyjma prvních 1-2´)
+
F
x
Geny pĜenášené jako první
(vysoká pravdČpodobnost
pĜenosu)
Hfr
-4
10
1. V populaci bunČk F+ je nízká proporce bunČk Hfr, v nichž je Fplazmid zaþlenČn do rĤzných míst chromozomu
2. Volný F-plazmid se pĜenáší do F- bunČk za vzniku bunČk F+
3. Z bunČk Hfr se pĜenáší þást chromozomu do F- bunČk za vzniku
rekombinant
4. Dochází k superinfekci rekombinant F plazmidem, v dĤsledku þehož
výsledné rekombinanty obsahují F-plazmid
Geny pĜenášené pozdČji (nízká
pravdČpodobnost pĜenosu)
Vznik plazmidĤ F´
typ I (IA n. IB) - plazmid
obsahuje distální nebo
proximální þást bakteriálního
chromozomu
typ II - plazmid obsahuje
proximální i distální þást
bakteriálního chromozomu
Podíl chromozomové
DNA v F´plazmidu
mĤže þinit až 30%
Sex factor affinity
Prvotní kmen F´
Chová se jako Hfr
Druhotný kmen
F´ = diploidní pro
alelu pĜenesenou
F´plazmidem
Mobilizace nekonjugativních plazmidĤ donací
Nedochází k fyzickému kontaktu
plazmidĤ
Delece ori T
Mobilizace plazmidĤ kondukcí - dochází k
fyzickému kontaktu obou plazmidĤ