Adenosine Deaminase Assay Kit

Diazyme Laboratories
12889 Gregg Court
Poway, CA 92064, USA
Tel: 858-455-4768 / Fax: 858-455-3701
Email: [email protected]
Website: www.diazyme.com
Reagencie - Pracovní roztoky
Adenosine Deaminase Assay Kit
Reagent 1
Tris HCl, pH 8.0
4-AA
PNP
XOD
Peroxidáza
Stabilizátory
Složení
Reagencie Diazyme Adenosine Deaminase jsou poskytovány ve
velkém množství a v sadě jsou obsaženy v následujícím
zastoupení:
REF
Množství reagencií
R1: 1 x 50 ml
R2: 1 x 25 ml
DZ117A-K
Reagent 2
Tris-HCl, pH 4.0
Adenosin
EHSPT
Použití
Adenosine Deaminase (ADA) Assay Kit slouží k určení aktivity
ADA ve vzorcích séra a plazmy.
Popis
ADA je enzym katalyzující deaminační reakci, při které dochází
k přeměně adenosinu na inosin. Tento enzym se běžně vyskytuje
v lidských tkáních a především v T-lymfocytech. V publikované
literatuře se uvádí, že zvýšená aktivita ADA v séru byla pozorována
u pacientů s akutní hepatitidou, alkoholovou jaterní fibrózou, aktivní
chronickou hepatitidou, jaterní cirhózou, virovou hepatitidou a
nádorovým onemocněním jater.1,2 Zvýšená aktivita ADA byla dále
pozorována u pacientů s tuberkulózními výpotky.3 V těchto
zprávách se uvádí, že určení aktivity ADA v séru pacienta může
v kombinaci s laboratorním stanovením hodnot ALT nebo γ-GT
(GGT) poskytnout jedinečné informace pro diagnostiku jaterních
onemocnění a může být použito i pro diagnostiku tuberkulózní
pleuritidy.3
Princip
Diazyme ADA Assay je založen na enzymatické deaminaci adenosinu
na inosin, který je poté přeměněn purinnukleosidfosforylázou (PNP) na
hypoxantin. Hypoxantin je následně přeměněn xantinoxidázou na
kyselinu močovou a peroxid vodíku (H2O2). H2O2 dále reaguje
s Ethyl-N-(2-hydroxy-3- sulfopropyl)-3-methylanilinem (EHSPT) a
4-aminoantipyrinem (4- AA) za přítomnosti peroxidázy (POD),
čímž vzniká chinoidní barvivo, které je vyhodnocováno kinetickou
metodou. Níže je zobrazeno kompletní schéma enzymatické
reakce.
ADA
Adenosin + H2O
Inosin + Pi
Hypoxantin + 2H2O + 2O2
Inosin + NH3
PNP
Hypoxantin +
Ribóza-1-fosfát
XOD
kys. močová +
2H2O2
POD
2H2O2 + 4-AA + EHSPT
50 mM
2 mM
0.1 U/ml
0.2 U/ml
0.6 U/ml
50 mM
10 mM
2 mM
Bezpečnostní instrukce
1. USA: Určeno pouze pro výzkumné účely. Není určeno k použití
v diagnostických postupech.
2. EU: Určeno pro účely laboratorní in vitro diagnostiky.
3. R1 je citlivý na světlo a musí být skladován na tmavém
místě.
4. Se všemi vzorky obsahujícími lidský biologický materiál
zacházejte jako s potenciálně infekčními dle laboratorních
bezpečnostních postupů, jako ty, které jsou popsány v Biosafety
in Microbiological and Bio- medical Laboratories (HHS
Publication Number [CDC] 93-8395).
5. Zabraňte spolknutí, kontaktu s očima a kůží viz. bezpečnostní list
(MSDS).
6. Reagencie obsahují < 0.1% azid sodný, NaN3, jako konzervační
látku. Azid sodný může reagovat s mědí nebo olovem a tvořit
vysoce výbušné azidy kovů. Při vylévání důkladně proplachujte
velkým množstvím vody, abyste zabránili ukládání azidu.
7. Nepoužívejte reagencie s prošlou minimální dobou trvanlivosti
uvedenou zevně na krabici.
8. Další bezpečnostní instrukce týkající se skladování a zacházení
s tímto produktem naleznete na bezpečnostním listu (MSDS) tohoto
produktu.
Nakládání s reagenciemi
ADA REAGENT se dodává ve formě dvou tekutých reagencií
připravených k použití
v manuální metodě i v automatizovaných chemických analyzátorech
(kinetická metoda). ADA CONTROL a CALIBRATOR jsou v
lyofilizované formě a před použitím musí být rekonstituovány s 1 ml
deionizované vody.
Rekonstituované
CONTROLS a CALIBRATOR jsou stabilní
1 týden při 2-8°C. CONTROLS a CALIBRATOR jsou prodávány
samostatně.
Stabilita a skladování
4H2O +Chin. barvivo
(λ max 556nm)
Jedna jednotka ADA je definována jako množství ADA, které stačí
k tvorbě jednoho µmolu inosinu z adenosinu za minutu při teplotě
37°C.
REAGENT je stabilní až do data expirace, pokud se skladuje při
teplotě 2- 8°C.
Sběr vzorků a jejich příprava
Testováno může být sérum nebo heparinizovaná plazma.
V ideálním případě by měla být venózní krev odebrána i
zpracována anaerobně. Nepoužívejte citrát ani oxalát jako
antikoagulační činidlo.
Plazma i sérum by po rychlém odstranění případných sraženin nebo
buněk měly být pečlivě uzavřeny. ADA obsažená v krvi je stabilní po
dobu 1 týdne, pokud je skladována při teplotě 2–4°C.
Diazyme Laboratories
70056 Rev. L
Strana 1 ze 2
Platnost: 1/3/14
Vybavení, které je součástí soupravy
Přesnost
Viz. část “Reagencie – Pracovní roztoky” pro REAGENT .
Potřebné vybavení, které není součástí soupravy
• Je možné použít jakýkoli přístroj s nastavitelnou teplotou 37 ±
0.5°C, který je schopný přesně měřit absorbanci v rozmezí 540nm
– 550nm.
• Kontroly pro určení výpovědní hodnoty Diazyme Adenosine
Deaminase Assay Kit ( REF DZ117A-CON)
• Kalibrátory pro Diazyme Adenosine Deaminase Assay Kit jsou
prodávány samostatně ( REF DZ117A-CAL)
• 0.9% fyziologický roztok jako CALIBRATOR 0
• Všeobecné laboratorní vybavení
Přesnost Diazyme Adenosine Deaminase Assay byla vyhodnocena
přístrojem Cobas Mira v souladu s modifikovanou vyhláškou
Clinical Laboratory Standards Institute EP5-A. Během studie
byly duplicitně testovány dva vzorky séra obsahující
11 U/l a 30 U/l ADA dvakrát denně po 15 pracovních dnů.
Přesnost v průběhu
jednoho testu
11 U/l
30 U/l
Přesnost v průběhu
jednoho dne
11 U/l
30 U/l
Počet vstupů
30
30
30
30
Průměrná (U/l)
Průběh testu
Schéma testu pro chemické analyzátory
11.11
30.74
9.63
29.62
SD
0.16
0.45
0.47
0.59
CV%
1.47
1.45
4.90
2.00
Linearita
R1: 180 µl
Vzorek: 5 µl
Proces má lineární charakter v rozmezí 0 – 200 U/l.
R2: 90 µl
550 nm
Rušivé vlivy
Sérový bilirubin do 30 mg/dl, hemoglobin do 200 mg/dl,
triglyceridy do 750 mg/dl a kys. askorbová do 4 mg/dl nemají na
výsledek testu vliv.
o
37 C
0 min
3 min
8 min
A1
11 min
A2
Reference
Aplikační listy pro použití Diazyme Adenosine Deaminase Assay
na automatizovaných klinických analyzátorech jsou dostupné na
vyžádání. Volejte na tel. 858-455-4768 nebo zašlete email na
adresu: [email protected].
Kalibrace
Pro kalibraci je potřeba 0.9% fyziologický roztok a Diazyme
Adenosine Deaminase Calibrator (REF DZ117A-CAL). Mnoho
specifických hodnot pro CALIBRATOR je popsaných v příslušném
osvědčení o analýze.
Kontrola kvality
Doporučujeme, aby každá laboratoř používala Diazyme Adenosine
Deaminase Control Set, uvedený v části “Potřebné vybavení, které
není součástí soupravy“, k potvrzení platnosti a správnosti testu
ADA. Diazyme ADA Control Set je součástí sortimentu Diazyme
Laboratories ( REF DZ117A-CON). Kontrolní intervaly používané
pro CONTROL by měly být přizpůsobeny individuálním
požadavkům každé laboratoře. Výsledky by měly být
v definovaném rozsahu. Každá laboratoř by měla zavést opatření
k nápravě pro případ, že získané hodnoty budou mimo rozsah.
Každá laboratoř by se měla řídit federálními, státními a místními
předpisy pro materiál sloužící ke kontrole kvality testu.
Kobayashi F, Ikeda T, Marumo F, Sato C:
Adenosine deaminase isoenzymes
in
liver
disease. Am. J. Gastroenterol. 88: 266-271
(1993)
1. Kallkan A., Bult V., Erel O., Avci S., and Bingol N. K.: Adenosine
deaminase and guanosine deaminase activities in sera of patients with
viral hepatitis. Mem Inst. Oswaldo Cruz 94(3) 383-386 (1999)
2. Burgess LJ, Maritz FJ, Le Roux I, et al. Use of adenosine deaminase
as a diagnostic tool for tuberculous pleurisy. Thorax 50: 672-674
(1995)
3. Lakkana B., Sasisopin K: Use of Adenosine Deaminase for the Diagnosis of Tuberculosis: A review J. Infect. Dis Antimicrob Agents
2010; 27:111-8
4. Delacour H., Sauvanet C., Ceppa F., Burnat P.: Analytical performances of the Diazyme ADA assay on the Cobas 6000 system. Clinical Biochemistry 43 (2010) 1468-1471.
Výsledky
Výsledky ADA jsou vytištěny v U/L. Dle dostupné literatury by
aktivita ADA ve vzorcích séra by měla být v rozmezí 0-15 U/L1-4.
Dále se uvádí, že hodnoty v pleurální tekutině4 by se měly pohybovat v rozmezí 0-30 U/L, a v mozkomíšním moku4 v intervalu 0-9
U/L.
MDSS
Schiffgraben 41
30175 Hannover,
Germany
12889 Gregg Court
Poway, CA 92064, USA
Tel: (858) 455-4754
Fax: (858) 455-4750
Omezení
Pokud je aktivita ADA ve vzorku vyšší než 200 U/l, měl by být
vzorek před měřením zředěn fyziologickým roztokem. Výsledek
by pak měl být vynásoben ředícím poměrem. Test je specifický pro
ADA a nevyvolává žádné detekovatelné reakce s jinými nukleosidy.
Roztok reagencií by měl být čirý. Pokud je zakalený, mohlo dojít
k znehodnocení reagencií.
Charakteristika analýzy5
Výsledky z různých laboratoří se mohou lišit.
Diazyme Laboratories
70056 Rev. L
Strana 2 z 2
Platnost: 1/3/14