Phadebact Streptococcus Tests (A,B,C,G) Phadebact Streptococcus

Určeno pro diagnostické použití in vitro. 53-1058-02, Břez-06
Phadebact® Streptococcus Tests (A,B,C,G)
Phadebact® Streptococcus Tests (A-D,F,G)
Phadebact® Streptococcus Tests (A-D,G)
Phadebact® Strep Respiratory Test (A,C,G)
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D Tests
Phadebact® Strep F Test
NÁVOD K POUŽITÍ
Výrobce:
MKL Diagnostika AB (dříve BACTUS AB)
Kung Hans Väg 3
192 68 Sollentuna
Švédsko
Stafylokoky obalene protilátkami
Ko-aglutinace
Mikroorganismus s příslušným antigenem
ROZSAH POUŽITÍ
Phadebact® Streptococcus Tests, Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G), Phadebact® Strep A Test, Phadebact® Strep B Test,
Phadebact® Strep D Tests, Phadebact® Strep F Test jsou určené na identifikaci beta-hemolytických streptokoků patřících do skupin A,
B, C, D, F a G.
SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ TESTU
Rozdělení beta-hemolytických streptokoků do skupin podle Lancefiledové je důležité kvůli léčbě a prognóze pacienta (1). V případě, že
lékař dostane informaci o serologické skupině streptokoka, může pak zvolit správnou léčbu a vyhnout se nevhodnému použití antibiotik
(2). Nejčastěji jsou s humánními streptokokovými infekcemi asociované streptokoky skupin A, B, C, D, F a G (3-9).
Existuje několik metod na identifikaci streptokoků. Na předběžnou identifikaci se používají biochemické reakce a bacitracinový test.
Definitivní identifikace poskytují precipitační metoda podle Lancefildové, imunoelektroforéza a latexová aglutinace. Avšak při těchto
metodách je potřebná extrakce skupinově-specifických antigenů. Phadebact® Streptococcus Test je založený na ko-aglutinační
metodě (10), která umožňuje identifikaci streptokokových skupin A, B, C, D, F a G s použitím jednoduché a rychlé aglutinační metody.
PRINCIP METODY
Ko-aglutinační metoda: Protilátky získané od králíků a specifické proti streptokokovým skupinám A, B, C, D, F a G, jsou vázané na
Protein A neživých stafylokoků. Pokud je vzorek obsahující streptokoky patřící do některé z těchto skupin a je smíchaná s těmito
protilátkami, specifické antigeny na povrchu streptokoků se naváží na příslušnou specifickou protilátku. Vzniká „ko-aglutinační salát“
viditelný pouhým okem.
REAGENCIE
Každá Phadebact® souprava na testování streptokoků obsahuje reagencie dostatečné na následující počet stanoveni.
Produkt
Phadebact® Streptococcus Test (A, B, C, G)
Phadebact® Streptococcus Test (A-D, F, G)
Phadebact® Streptococcus Test (A-D, G)
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G)
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D 100 Test
Phadebact® Strep D Test
Phadebact® Strep F Test
Počet stanoveni
300
300
250
200
100
100
100
50
50
Reagencie jsou modré (metylenová modrá), aby se ulehčila interpretace výsledků.
Součásti testu
Phadebact® Streptococcus Test (A, B, C, G) - 1 lahvička pro každou skupinu A, B, C a G.
Skupinově specifické antiserum, získané od králíků, navázané na neživé stafylokoky.
Phadebact® Strep A-D, F, G Test - 1 lahvička pro každou skupinu A, B, C, D, F a G.
Skupinově specifické antiserum, získané od králíků, navázané na neživé stafylokoky.
Phadebact® Strep A-D, G Test - 1 lahvička pro každou skupinu A, B, C, D, a G.
Skupinově specifické antiserum, získané od králíků, navázané na neživé stafylokoky.
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G) - 1 lahvička pro každou skupinu A, C a G.
Skupinově specifické antiserum, získané od králíků, navázané na neživé stafylokoky.
Phadebact® kontrolní reagencie: Gamaglobulin z neimunizovaných králíků navázaný na neživé stafylokoky- 1 lahvička
Phadebact® Strep A Test
Strep A reagencie: Skupinově specifické antiserum, získané od králíků, navázané na neživé stafylokoky – 1 lahvička
Phadebact® kontrolní reagencie: Gamaglobulin z neimunizovaných králíků navázaný na neživé stafylokoky- 1 lahvička
Phadebact® Strep B Test
Strep B reagencie: Skupinově specifické antiserum, získané od králíků, navázané na neživé stafylokoky – 1 lahvička
Phadebact® kontrolní reagencie: Gamaglobulin z neimunizovaných králíků navázaný na neživé stafylokoky- 1 lahvička
Phadebact® Strep D 100 Test
Strep D reagencie: Skupinově specifické antiserum, získané od králíků, navázané na neživé stafylokoky – 2 lahvičky
Phadebact® kontrolní reagencie: Gamaglobulin z neimunizovaných králíků navázaný na neživé stafylokoky - 2 lahvičky
Phadebact® Strep D Test
Strep D reagencie: Skupinově specifické antiserum, získané od králíků, navázané na neživé stafylokoky – 1 lahvička
Phadebact® kontrolní reagencie: Gamaglobulin z neimunizovaných králíků navázaný na neživé stafylokoky - 1 lahvička
Phadebact® Strep F Test
Strep F reagencie: Skupinově specifické antiserum, získané od králíků, navázané na neživé stafylokoky – 1 lahvička
Phadebact® kontrolní reagencie: Gamaglobulin z neimunizovaných králíků navázaný na neživé stafylokoky - 1 lahvička
Další součásti:
• Kapátka
• Jednorázové aglutinační karty
• Návod na použití
Upozornění
Pouze pro in vitro diagnostické účely!
POZOR! Činidla obsahují azid sondý jako ochranné činidlo. Může reagovat s olovem a mědí za vzniku velmi explozivních kovových
azidů. Pokud dojde k vylití, nalejte na plochu velké množství vody, abyste zabránili vzniku azidů. Dekontaminace podle pravidel jako
např. u CDC (18)
Příprava reagencií
Reagencie jsou PŘIPRAVENÉ NA POUŽITÍ.
Datum exspirace a skladování
Datum exspirace je uvedený na vnějším obalu a na štítcích lahviček. Skladujte při teplotě 2-8°C. Nezmrazujte!
Odběr vzorků a zpracování
Odběr a zpracování vzorků se řídí standardními mikrobiologickými postupy. Vzorky na detekci se odebírají z jakýchkoli částí těla, kde
mohou být přítomné živé bakterie. Při transportu vzorků do laboratoře by se měli použít transportní média, jako např. Stuartovo
transportní médium. Vzorek by se měl dostat do laboratoře do 24-48 hodin. V průběhu transportu a kultivace není nutné přidávat žádné
aditiva nebo ochranné látky. Vzorky pacientů užívajících antibiotika mohou obsahovat velmi málo nebo žádné živé baktérie.
TEST
Poskytnutý materiál
viz REAGENCIE.
Materiál, který je potřebný, ale není součástí testu
• Primární kultura
• Obohacený bujon (doporučený je Todd-Hewittův bujón od BBL) – potřebný jen pro referenční bujonovou metodu
• Pasteurovy pipety
• Jednorázové kličky nebo jejich ekvivalent
• Inkubátor na 35-37°C potřebný jen pro referenční bujonovou metodu
• Hodiny s jednoduchým odčítáváním minut
Parametry metody
• Teplota reakce - pokojová teplota
• Celkový čas reakce - 1 minuta
• Objem reagencií jedna kapka na každou testovanou skupinu
Příprava vzorků
Příprava vzorků z primární kultury se řídí standardními mikrobiologickými postupy. Existují tři alternativy při přípravě vzorku u
Phadebact Streptococcus testu.
I. Příprava vzorků přímo z kolonií
• Zkontrolujte důsledně plotnu s primární kulturou na přítomnost beta-hemolytických kolonií.
• Odeberte 1-5 kolonií beta-hemolytických streptokoků jednorázovou kličkou nebo ekvivalentem v dostatečném množství tak, abyste
je rozetřeli do 2 – 6 kroužků označených na kartičce.
• Tyto kolonie se použijí na testování
II. Přímá extrakce kolonie
Metoda přímé extrakce kolonie používá Phadebact extrakční roztoky nabízené fy. MKL Diagnostics. Metoda často využívá
v případech kdy:
- je přítomné nedostatečné množství vzorků na použití první alternativy (1-5 kolonií na reagencii).
- výsledky při použití I. alternativy jsou nepřesvědčivé
Poznámka! Při Strep D a Strep F se nepoužívá extrakce (doporučená je inokulace do bujonu).
III. Inokulace do bujonu
• Zkontrolujte důsledně plotnu s primární kulturou na přítomnost beta-hemolytických kolonii.
• Odeberte 1 a víc kolonií beta-hemolytických streptokoků.
• Inokulujte do 2 ml obohaceného bujonu.
• Inkubujte pří 35-37°C přes noc nebo dokud se nestane turbidita evidentní (odpovídá Mac-Farlandovej stupnici 2-3). Obvykle je
dostatečný růst už po 4 hodinách, pokud se inkubuje několik kolonií v 0.5 ml obohaceného bujonu.
• Na testování se používají kapky této suspenze.
Pracovní protokol
• Pořádně protřepejte roztoky před použitím.
• Všechny reagencie mají mít v čase použití pokojovou teplotu.
• Správné laboratorní postupy předpokládají znalost použití negativních a pozitivních kontrol tak, jako při jiných metodách
I.
Test přímo z kolonie
Na aglutinační kartě označte všechny ovály
příslušnými vybranými testovacími
skupinami. Důkladně a jemně rozetřete
kolonie po celé ploše vnitřních kruhů
označených oválů. Obrázek č.1
Kápněte 1 kapku vybrané reagencie na rozetřené
kolonie v příslušně označeném ovále. Obrázek. č. 2
Obr. 2.
Obr. 1.
Použijte čisté dřevěné tyčinky nebo jednorázové kličky na úplné
smíchání kapky reagencie s rozetřenou kolonií.
Použijte na každý ovál novou tyčinku nebo kličku.
Uchopte kartičku do ruky a promíchávejte kývavým
pohybem. Výsledek odčítejte do 1 minuty. Obrázek č.4.
POZOR!
- papírové tyčinky mohou absorbovat reagencii, což může
vést k nesprávné nebo žádné reakci..
- rozetření reagencie na větší plochu v rámci oválu než
jsou rozetřené kolonie ve vnitřním kruhu umožňuje
jednodušší odčítání reakce. Obrázek č.3
Obr. 4.
Obr. 3.
II. Metoda přímé extrakce kolonie
• Ze soupravy Phadebact Extraction Solutions smíchejte 4 kapky Extraction Solution 1 se 4 kapkami Extraction Solution 2 v malé
zkumavce (např. o rozměrech 8 x 50 mm).
• Vyberte 1-3 kolonie beta-hemolytických streptokoků z primární kultury a smíchejte je s extrakční směsí.
• Inkubujte při pokojové teplotě 10-15 minut nebo pri 100°C jednu minutu.
• Použijte Pasteurovu pipetu na kápnutí jedné kapky extrahovaných kolonií na každý oznacený ovál určený na testování na aglutinační
kartě.
• Přidejte jednu kapku z každé Phadebact reagencie vybrané na testování vedle příslušně označených kapek s extrahovanými
koloniemi.
• Použijte čisté dřevěné tyčinky nebo jednorázové kličky na úplné smíchání kapky reagencie s rozetřenou kolonií. Rozetřete kapky na
plochu v rámci oválu větší jak rozetřené kolonie ve vnitřním kruhu. Ujistěte se, že jste důkladně smíchali reagencie s extrakčními
roztoky v každém oválu. Použijte na každý ovál novou tyčinku nebo kličku.
• Chyťte kartičku do ruky a promíchejte kývavým pohybem. Výsledek odčítejte do 1 minuty.
III. Referenční bujónový test
• Na aglutinační kartě označte každý ovál patřící k vybrané testované skupině.
• Kápněte jednu kapku bujónové kultury do malého vnitřního kruhu v každém označeném oválu.
• Přidejte jednu kapku z každé Phadebact reagencie vybrané na testování vedle kapek v příslušně označeném oválu.
• Použijte čisté dřevěné tyčinky nebo jednorázové kličky na úplné smíchání kapky reagencie s kapkami bujónové kultury. Rozetřete
kapky na plochu v rámci oválu větší jako jsou rozetřené kolonie ve vnitřním kruhu. Ujistěte se, že jste důkladně smíchali reagencie
s extrakčním roztokem v každém oválu. Použijte na každý ovál novou tyčinku nebo kličku.
• Chyťte kartičku do ruky a promíchejte kývavým pohybem. Výsledek odčítejte do 1 minuty.
Stabilita výsledné reakční směsi
Ko-aglutinace je stabilní, ale na základě standartních laboratorních postupů se výsledek odečítá do 1 minuty (může dojít k vysychání
reagencií, které můžete mylně považovat za pozitivní reakci)
Kalibrace
Kalibrace není nutná.
Kontrola kvality
Pozitívna kontrola
• Phadebact Strep Positive Controls poskytuje fy. MKL diagnostics. Souprava obsahuje oddělené lahvičky s antigenem z čisté kultury
streptokoků skupiny A, B, C, D, F a G.
• Protože tyto antigeny jsou separované a purifikované, mohou se použít na testování specifičnosti a reaktivity Phadebact
streptokokovych reagencií. Proto kontroly se živými mikroorganismy nejsou potřebné.
• Tyto pozitivní kontroly se testují tak, jako neznáme bakterie z bujónové kultury
• Alternativně se mohou použít standardní laboratorní kmeny streptokoků, např. Strep A (ATCC 19615), Strep B (ATCC 12401),
Strep C (ATCC 9892), Strep D (ATCC 9812), Strep F (ATCC 12392) a Strep G (ATCC 12395).
Negatívna kontrola
• Simultáním použití několika reagencií na testování kontrolního vzorku nebo neznámého vzorku se vytváří negativní kontrola. Jestliže
neznámou baktérií je streptokok skupiny A, dojde k pozitivní ko-aglutinaci s reagencií A. S reagenciemi B, C, a G je výsledek negativní
(žádná nebo signifikantně slabší reakce).
• Pokud se testuje jen s jednou reagencií např. u Phadebact Strep A testu, Phadebact Strep B testu, Phadebact Strep D testu nebo
Phadebact Strep F testu, jako negativní kontrola se použije streptokok s jinou skupinou (kontrolní nebo laboratorní kmen).
Vzhled reakce
Žádná reakce
Pozitivní reakce
VÝSLEDKY
Pozitivní výsledek
Pozitivní výsledek je tedy, jestliže dojde k signifikantně silnější a o mnoho rychlejší reakci v jedné z reagencií v porovnání s ostatními.
Phadebact kontrolní reagencie se musí použít i na ostatní testy.
Negativní výsledek
Negativní výsledek je tedy, jestliže nepozorujete žádnou reakci v kterékoli reagencii. Znamená to, že testované bakterie nepatří do
skupiny A, B, C, D, F nebo G; nebo vzorek neobsahuje dostatek antigenního materiálu (viz LIMITY TESTU)
Neinterpretovatelný výsledek
Pokud je ko-aglutinace stejně intenzivní a rychlá s více skupinovými streptokokovými reagenciemi, čtěte více v kapitole LIMITY TESTU.
LIMITY TESTU
• Streptokokové kmeny používané na produkci antiser rostou v Todd-Hewittovo bujóně firmy Difco. Proto není doporučené používat bujon
Difco na růst vzorků, které jsou testované s Phadebact reagenciemi.
• Pokud jsou výsledky po vykonání testu přímo z kolonie nepřesvědčivé (I) kvůli nedostatečnému množství materiálu, doporučuje se
zopakovat test pomocí volitelného testu přímé extrakce kolonie (II).
• Pokud jsou výsledky 4 hodinového bujonového testu (III) nepřesvědčivé kvůli nedostatečnému růstu, je doporučené bujon reinkubovat
přes noc a znovu testovat podle návodu.
• Pokud dochází k stejně silné a rychlé ko-aglutinaci u více jako jedné streptokokové reagencie, doporučuje se test opakovat použitím
volného testu přímé extrakce kolonie (II).
• Kmeny Listeria mají podobnou antigenicitu jako streptokoky skupiny B a mohou tedy reagovat pozitivně s reagencií skupiny B. Na
odlišení Listerie od streptokoků skupiny B se používá katalázový test: streptokoky jsou kataláza-negativní a Listeria je kataláza-pozitivní.
• U Phadebact Strep D a Phadebact Strep F se nepoužívá test přímé extrakce kolonie (II).
HODNOTENIE TESTU
Specifita a sensitivita
I. Testování kolonií
V klinických studiích (11,12) bylo správně identifikovaných 263 z 279 (94,3%) beta-hemolytických streptokoků.
II. Testování bujonové kultury po 4 hodinové inkubaci
Klinické studie (13,14,15) dokázali identifikovat v porovnání s metodou Lancefieldové 272 z 285 (95,4%) betahemolytických
streptokoků po 4 hodinové inkubaci.
III. Testování bujonové kultury po 24 hodinové inkubaci
Klinicke studie (16,17) ukázaly, že 99% streptokoků bylo identifikovaných po 24 hodinové inkubaci (přes noc).
Poznámka! Nesprávné výsledky se mohou objevit pokud se testují jiné jak beta-hemolytické streptokoky. Například, kmeny
Streptococcus faecalis mohou slabě ko-aglutinovat s C reagencií. Streptococcus pneumoniae (Diplococcus pneumoniae) může koaglutinovat s C reagenciou, což je v souladu se známými podobnostmi mezi antigeny S. pneumoniae a streptokoky skupiny C.
Reprodukovatelnost
Reagencie, které se používají v tomto testu jsou pravidelně kontrolované použitím známých kmenů na zachování reprodukovatelnosti
testu.
ZÁRUKA
Údaje, které jsou tu prezentované byly získané vykonáním testu podle návodu. MKL diagnostics nedoporučuje jakoukoli změnu nebo
modifikaci, protože by mohlo dojít k ovlivnění výsledků. V tomto případě nenese MKL diagnostics žádnou odpovědnost a záruku, MKL
dg a autorizovaní distributoři nenesou žádnou zodpovědnost za vzniknuté jakékoli škody, ať už přímé, nepřímé nebo následné.
Literatura:
1. Moody M D: p 182 in Streptococci and streptococcal diseases. Eds. Wannamaker & Matsen. Academic Press
(New York, London) 1972.
2. Wadström T, Nord C-E, Lindberg A & Möllby R: Rapid grouping of streptococci by immunoelectrophoresis. Med
Microbiol Immunol 159 (1974), 191-200.
3. Pollock, H M & Dahlgren B J: Distribution of streptococcal groups in clinical specimens with evaluation of
bacitracin screening, Appl Microbiol 27 (1974), 141-143.
4. Horn K, Meyer W T, Wyrick B C & Zimmerman R A: Group B streptococcal neonatal infections. JAMA 230
(1974), 1165-1167.
5. Reid T M S: Emergence of group B streptococci in obstetric and perinatal infections. Br J Med (1975:2),
533-536.
6. Feingold D S, Stagg N L & Kunz L J: Extra-respiratory streptococcal infections. New Eng J Med 275 (1966),
356-361.
7. Finnegan P, Fitzgerald M M, Cumming G & Geddes A M: Lancefi eld group C streptococcal endocarditis. Thorax
29 (1974), 245-247.
8. Baker C: Unusual occurence of neonatal septicaemia due to group G streptococcus. J Pediatr 53 (1974),
568-569.
9. Facklam R: Isolation and identifi cation of streptococci, part II. US. HEW/Public Health Service/Center for
Disease Control/Atlanta Georgia 30333.
10. Christensen P, Kahlmeter G, Johnson S & Kronvall G: New method for the serological grouping of streptococci
with specifi c antibodies absorbed to protein A containing staphylococci. Inf Imm 7 (1973), 881-885.
11. Pillot S, Lebrun L & De Maneville M: Progress in the identifi cation of pathogenic Streptococcus. La Nouvelle
Presse Medicale 6 (1977), 1822.
12. Slifkin M, Engwall C, Pouchet G R: Direct-plate serological grouping of beta-hemolytic streptococci from primary
isolation plates with the PhadebactR Streptococcus Test. J Clin Microbiol 7 (1978), 356-360.
13. Rosner R: Clinical evaluation of a rapid four hour serological grouping of groups A, B, C and G beta-streptococci
using the PhadebactR Streptococcus Test. J Clin Microbiol 6 (1977), 23-26.
14. Farrel B & Amirak I: Agglutination grouping of streptococci. Lancet (1976:2), 1082.
15. West M E and Jacobs P F: Abstract C 162, presented Annual Meeting American Society for Microbiology, 1979.
16. Arvilommi H: Grouping of beta-hemolytic streptococci by using co-agglutination, precipitin or bacitracin
sensitivity. Acta Path Microbiol Scand 84 (1976), 79-84.
17. Finch R G & Philips I: Serological grouping of streptococci by a slide co-agglutination method. J Clin Pathol 30
(1977), 23-26.
18. Manual Guide-Safety Management, No CDC-22, 4/30/76.
Další výrobky:
Phadebact COA System
Phadebact Streptococcus Tests
Phadebact Streptococcus Respiratory Test
Phadebact Strep A Test
Phadebact Strep B Test
Phadebact Strep D Tests
Phadebact Strep F Test
Phadebact Strep Positive Controls
Phadebact Pneumococcus Test
Phadebact Haemophilus Test
Phadebact GC Positive Controls
Phadebact CSF Test
Phadebact CSF Positive Controls
Phadebact Extraction Solutions
Phadebact Monoclonal GC Test
Phadebact ETEC-LT Test
Phadebact Salmonella Test
Phadebact Staph Aureus Test
Testování u pacienta
Phadirect Strep A
Phadirect Rapid CRP Test