ProSpecT Astrovirus Microplate Assay [CS]

ProSpecT Astrovirus Microplate Assay [CS]

Spotřebujte do
ProSpecT Astrovirus
Stanovení na mikrotitračních destičkách
R240196
1. CS
96
POUŽITÍ
Test ProSpecTTM Astrovirus je kvalitativní amplifikovaná enzymová
imunoanalýza určená k detekci astroviru v lidské stolici.
2. SHRNUTÍ
Astroviry (z čeledi Astroviridae) jsou malé (28 nm), kulaté
jednovláknové RNA viry s pozitivní polaritou, pro které je
charakteristický jejich typický hvězdicovitý vzhled1,2. V současné
době bylo identifikováno alespoň osm lidských sérotypů
astrovirů3.
Astroviry jsou v současnosti považovány za běžné původce
virových gastroenteritid u malých dětí po celém světě3,4.
Inkubační doba je 3 až 4 dny a symptomy trvají obvykle 2 až 3
dny, mohou však přetrvávat u imunokompetentních jedinců
až 12 dnů a u imunodeficitních pacientů ještě významně déle.
Současné zprávy ukazují, že výskyt nákazy astrovirem mohl
být výrazně podhodnocen v důsledku omezení dostupných
diagnostických metod. Tyto studie naznačují, že po rotaviru může
být astrovirus druhým nejběžnějším původcem kojenecké virové
gastroenteritidy a po kmenech rodu Salmonella a rotavirech
třetím nejrozšířenějším patogenem u komunitně získaných
průjmů5,6,7. Astroviry byly uvedeny do spojitosti s epidemiemi
gastroenteritidy v nemocnicích, rodinách, komunitách a ústavech
pro dospělé. Velké, potravinami šířené epidemie, byly hlášeny
také v Japonsku8,9.
Až do nedávné doby byly astrovirové infekce tradičně
diagnostikovány elektronovou mikroskopií (EM). EM je závislá na
dobré konzervaci morfologie vzorku a na kvalifikaci a dovednosti
obsluhy mikroskopu. Protože však jen 10 % částic astrovirů má
charakteristickou hvězdicovitou morfologii, často může být
jejich detekce obtížná a vést k nesprávné diagnóze10,11. Kromě
toho nejsou astroviry vzhledem ke své malé velikosti tak snadno
pozorovatelné jako rotaviry a mohou být zaměněny s jinými
malými kulatými strukturovanými viry. Proto vedlo používání
morfologie zjištěné pomocí EM jakožto jediného diagnostického
kriteria k podhodnocení výskytu těchto virů. Přestože byly
zdokonaleny techniky12,13 kultivace, pro rutinní diagnostiku je
tato metoda volena zřídka pro nedostatečnou citlivost. Současný
vývoj diagnostických postupů zahrnuje dot blot hybridizaci, PCR a
EIA11,14,15. Dostupnost specifických antisér proti skupinově, rodově
nebo druhově specifickým epitopům vedla k vývoji imunoanalýz
pro přímou detekci antigenu15. Bylo prokázáno, že tyto analýzy
mají vyšší citlivost než EM a nabízejí ekonomičtější, spolehlivější a
rychlejší metodu hromadných vyšetření7.
V současné době prokázala nová generace amplifikovaných
imunoanalýz, zahrnujících technologii amplifikace značení
i signálu, zvýšenou citlivost srovnatelnou s molekulárními
amplifikačními metodami16,17.
Test ProSpecT Astrovirus je kvalitativní amplifikovaná enzymová
imunoanalýza určená k rychlé detekci astrovirů ve vzorcích
lidské stolice. Tento test využívá kombinaci rodově specifických
monoklonálních a polyklonálních protilátek spolu s amplifikací
značení k detekci všech známých kmenů lidských astrovirů
pomocí imunoanalýzy na mikrotitračních destičkách.
3. PRINCIP TESTU
Schéma principu stanovení ProSpecT Astrovirus
Substrát
Barva
Pevná fáze
Substrát
Barva
Protilátka pokrývající
destičku
Virus
Na základě amplifikace značky
Substrát
Barva
Molekula
polymeru
Peroxidáza
Konjugovaná protilátka
4. DEFINICE SYMBOLŮ
V informacích o výrobku byly použity následující symboly.
Kód výrobku a katalogové číslo
Viz návod k použití
N
Teplotní rozmezí pro skladování
5. Stanovení ProSpecT Astrovirus na mikrotitračních destičkách
využívá k detekci antigenu astroviru polyklonální protilátku a
konjugát dextranového polymeru s vysokou inkorporací molekul
enzymu a protilátky v enzymové imunoanalýze na pevné fázi.
Jamky odlamovacích mikrotitračních destiček jsou potažené
rodově specifickou polyklonální protilátkou proti astroviru. Do
jamky se přidá suspenze stolice a antigen astroviru přítomný ve
vzorku se naváže na pevnou fázi. Rodově specifická monoklonální
protilátka konjugovaná s dextranem se naváže na antigen
astroviru zachycený na pevné fázi a tím připojí polymerní komplex
konjugátu obsahující několik molekul enzymu (amplifikace
značení). K detekci navázaného enzymu je použit chromogen,
což vede ke změně barvy, která je zastavena přidáním kyseliny.
Intenzita zbarvení významně nad hodnotami pozadí indikuje
přítomnost antigenu astroviru ve vzorku.
Obsah postačí pro „N“ testů
Výrobce
Diagnostický zdravotnický prostředek in vitro
120
ml
koncentrovaného
(10x)
promývacího pufru: roztok fosfátového
pufru obsahující antimikrobiální látku a
detergent.
Kód šarže
10x koncentrovaný promývací pufr
nařeďte přidáním 1 dílu koncentrátu do 9
dílů destilované nebo deionizované vody.
Naředěný promývací pufr je stabilní po
dobu maximálně 30 dnů, je-li skladován
při teplotě 2 – 8 °C.
OBSAH SOUPRAVY
96 – Každá souprava obsahuje dostatek materiálu pro
96 stanovení.
– Doba použitelnosti soupravy je uvedena na
štítku vnějšího obalu.
12 ml substrátu:
3,3’,5,5’-tetramethylbenzidin
ve slabě kyselém pufru.
Všechny složky uchovávejte při teplotě 2 - 8 °C.
Před použitím vytemperujte všechna činidla na pokojovou teplotu
(20 – 25 °C) a jemně je promíchejte. Po použití uchovávejte
všechna nespotřebovaná činidla při teplotě 2 - 8 °C.
Všechna činidla kromě promývacího pufru jsou dodávána
připravená k okamžitému použití. Odléváte-li činidla pro použití
s vícekanálovými pipetami, nelijte přebytek činidla zpět do láhve.
Návod k použití
Pipety pro přenos roztoků
Kryt mikrotitračních destiček
Osvědčení o obsahu
Karta s postupem
Jedna mikrotitrační destička o 96 jamkách,
tvořená 12 odlamovacími proužky po 8
mikrotitračních jamkách potažených králičí
polyklonální protilátkou specifickou proti
astrovirům. Pro uchovávání nepoužitých
mikrotitračních jamek slouží dodaný
uzavíratelný plastový sáček obsahující
vysoušedlo. Jsou-li mikrotitrační jamky
správně skladovány v tomto sáčku, lze je
používat až 16 týdnů po prvním otevření.
Jedna lahvička každého z následujících činidel:
120 ml roztoku pro ředění vzorků: trisem
pufrovaný fyziologický roztok obsahující
antimikrobiální látku a červené barvivo.
4 ml činidla pozitivní kontroly:
inaktivovaný astrovirus typu 1 (neinfekční
rekombinantní
protein)
v
pufru
obsahujícím antimikrobiální látku.
4 ml činidla negativní kontroly: trisem
pufrovaný fyziologický roztok obsahující
antimikrobiální látku a červené barvivo.
12
ml
polymerního
konjugátu:
monoklonální protilátka specifická proti
rodu Astrovirus, konjugovaná na kostru
z dextranového polymeru s několika
navázanými
molekulami
křenové
peroxidázy (HRP), v pufrovaném roztoku
proteinu obsahujícím antimikrobiální látku
a modré barvivo.
12 ml zastavovacího roztoku: 0,46mol/l
kyselina sírová.
6. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ
- Pro diagnostické použití in vitro. Osoby provádějící
stanovení s tímto výrobkem musejí být v jeho použití zaškoleny a
musejí mít zkušenosti s prací v laboratoři.
Informace o potenciálně nebezpečných složkách si laskavě
vyhledejte v příslušném bezpečnostním listu a na označení
výrobku.
ZDRAVOTNÍ A BEZPEČNOSTNÍ INFORMACE
6.1. P
ozitivní kontrola obsahuje rekombinantní protein astroviru
typu 1, s nímž se musí zacházet jako s potenciálně infekčním
materiálem a je nutné ho likvidovat odpovídajícím
způsobem.
6.2. Zastavovací roztok obsahuje kyselinu sírovou (0,46 mol/l).
6.3. P
romývací pufr obsahuje látku potenciálně senzibilizující
kůži (<1 % obj.). Zamezte styku s kůží. Používejte jednorázové
nitrilové rukavice nebo rukavice z PVC.
6.4. V
e vyhrazeném pracovním prostoru nejezte, nepijte,
nekuřte, neskladujte ani nepřipravujte jídlo a nepoužívejte
kosmetické přípravky.
6.5. Nepipetujte ústy.
6.6. P
ři manipulaci s klinickými vzorky a činidly používejte
jednorázové rukavice. Po ukončení práce s infekčními
materiály si vždy umyjte ruce.
6.7. V
šechny klinické vzorky likvidujte v souladu s místními
předpisy.
6.8. Č
inidla soupravy ProSpecT Astrovirus obsahují patentovanou
antimikrobiální látku, která, pokud jsou dodržována běžná
laboratorní bezpečnostní opatření, nepředstavuje žádné
nebezpečí pro uživatele.
ANALYTICKÉ POKYNY
6.9. Nepoužívejte součásti této soupravy po uplynutí data
exspirace uvedeného na štítku. Nemíchejte ani nezaměňujte
následující činidla, mohlo by to zhoršit pracovní
charakteristiky: destičky, konjugát a kontrolní činidla.
8. POSTUP
POZNÁMKA: Vzorky stolice připravené v roztoku pro ředění
vzorků ProSpecT Adenovirus, ProSpecT Rotavirus a ProSpecT
Norovirus mohou být také testovány pomocí testu ProSpecT
Astrovirus. Jiný roztok pro ředění vzorků nebyl pro použití
validován.
6.10.Následující společná činidla lze používat s celou řadou
výrobků ProSpecT: promývací pufr, substrát TMB a
zastavovací roztok.
POTŘEBNÉ DODANÉ MATERIÁLY
6.11.Zabraňte kontaminaci činidel.
Viz Obsah soupravy, část 5
6.12.Při použití metody lahviček s kapátkem dbejte na to, aby
byla všechna kontrolní a jiná činidla přidávána stejným
způsobem. (Použití kombinace metody s kapátkem a
metody s pipetou by mohlo nepříznivě ovlivnit pracovní
charakteristiky soupravy.)
POTŘEBNÉ MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ DODÁVKY
Nádoby pro odběr vzorků stolice.
6.13.Pro každý vzorek, kontrolní nebo jiné činidlo použijte
samostatné jednorázové pipety nebo pipetové špičky
(nepoužíváte-li lahvičky s kapátkem), abyste zabránili
zkřížené kontaminaci vzorků, kontrolních nebo jiných
činidel, což by mohlo vést k chybným výsledkům.
Čistý savý papír (na kterém mohou být mikrotitrační jamky
vyklepány do sucha)
8.3. P
o přidání všech vzorků a kontrolních činidel přidejte
mikropipetou do každé mikrotitrační jamky 100 µl konjugátu
a jemně míchejte po dobu 20 – 30 sekund.
Přesné mikropipety a jednorázové špičky pro dávkování objemů
50 µl, 100 µl a 1000 µl
8.4. Z akryjte destičku a inkubujte při 20 – 30 °C po dobu 60 +/- 5
minut.
Odpadní nádoba s vhodným čerstvým dezinfekčním prostředkem
8.5. O
bsah jamek vytřepejte nebo odsajte. Promyjte tak, že
každou jamku zcela naplníte zředěným promývacím pufrem
(~350 – 400 µl na jamku). Po každém promytí z jamek
vytřepejte nebo odsajte veškerou tekutinu. Promývejte
celkem pětkrát. Po posledním promytí odstraňte obsah a
klepněte destičkou na čisté papírové utěrky nebo ji odsajte.
Používáte-li automatizovanou promývačku, naprogramujte
ji na provedení 5 promývacích cyklů. Promývačky musí být
správně kalibrované, aby bylo zajištěno úplné naplnění
a vyprázdnění mikrotitračních jamek mezi jednotlivými
promytími. Po posledním promytí je nutné mikrotitrační
destičku obrátit a vyklepat na savý nebo filtrační papír, aby
byly odstraněny poslední zbytky promývacího pufru.
6.14.Deionizovanou nebo destilovanou vodu pro ředění
koncentrovaného činidla uchovávejte v čistých nádobách,
abyste zamezili mikrobiální kontaminaci.
6.15.Zamezte kontaminaci ionty kovů a oxidačními činidly.
6.16.Nepoužívejte substrát vykazující před přidáním do
mikrotitračních jamek modré zbarvení.
6.17.Chraňte konjugát a substrát před světlem.
6.18.Mikrotitrační jamky nemohou být opakovaně použity.
6.19.Nespotřebovaný promývací pufr o pracovní koncentraci
lze skladovat pro další použití po dobu maximálně 30 dnů
při teplotě 2 – 8 °C. Když nejsou nádoby na promývací
pufr používány, propláchněte je deionizovanou nebo
destilovanou vodou a nechejte je uschnout.
6.20.Manuální nebo automatizované promývací zařízení musí
být prosté mikrobiální kontaminace, správně kalibrované a
udržované podle pokynů výrobce.
6.21.Při použití lahviček činidla s kapátkem držte lahvičku svisle
s kapací špičkou přibližně 5 mm nad mikrotitrační jamkou.
Lahvičku lehce stiskněte a dbejte na to, aby kapky dopadaly
volně do mikrotitrační jamky, aniž by se dotkly jejích stěn.
Zamezte kontaminaci všech špiček kapátek.
7. ODBĚR VZORKŮ STOLICE
Vzorky stolice by měly být odebírány co nejdříve po nástupu
příznaků.
Vzorky stolice pro přímé testování sbírejte do nádob, které
neobsahují média, konzervační látky, zvířecí séra, ionty kovů,
oxidační činidla ani detergenty, protože všechny tyto přídavné
látky mohou rušit test ProSpecT Astrovirus.
Jsou-li odebírány výtěry z rekta, musí obsahovat dostatek stolice
pro získání 10% suspenze stolice (viz část 8).
Před testováním mohou být vzorky uchovány po dobu 8 dnů
při teplotě 2 – 8 °C. Pro dlouhodobé uchovávání vzorků stolice
použijte teplotu –20 °C.
Čisté, jednorázové nádobky se šroubovacím uzávěrem (o objemu
minimálně 3 ml) pro přípravu vzorku stolice
Stopky (minutka)
Střička na promývací pufr
Destilovaná nebo deionizovaná voda
VOLITELNÉ MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ DODÁVKY
Čtečka mikrotitračních destiček schopná odečtu při 450 nm
(volitelně s referenční vlnovou délkou 620 - 650 nm)
Míchačka Vortex s adaptérem pro destičky nebo inkubátor
mikrotitračních destiček s třepačkou
Automatizovaná promývačka destiček nebo vhodné vybavení pro
promývání proužků o 8 mikrotitračních jamkách
POSTUP
8.1. Otevřete plastový sáček, vyjměte z něj potřebný počet
proužků mikrotitračních destiček a vložte je do držáku
proužků mikrotitračních destiček. Jednu jamku použijte pro
negativní kontrolu a jednu jamku pro pozitivní kontrolu.
Použijete-li méně než 8 jamek, odlomte z proužku potřebný
počet jamek a nepoužité jamky vraťte do plastového sáčku
s vysoušedlem. SÁČEK OPĚT TĚSNĚ UZAVŘETE, ABYSTE
ZABRÁNILI PŘÍSTUPU VLHKOSTI, A VRAŤTE HO DO MÍSTA
ULOŽENÍ PŘI TEPLOTĚ 2 – 8 °C.
ŘEDĚNÍ VZORKŮ STOLICE
Přidejte 1 ml roztoku pro ředění vzorků do vhodné označené
nádobky a použijte ho k přípravě 10% suspenze nebo k
rozředění vzorku stolice přidáním asi 0,1 g tuhé stolice (množství
odpovídající malému hrášku) nebo přenesením asi 100 µl tekuté
stolice pipetou. Důkladně promíchejte a pipetu pro přenos vzorku
ponechejte v nádobce pro pozdější použití.
8.2. D
o jednotlivých mikrotitračních jamek přidejte dvě kapky
(nebo 100 µl) každého zředěného vzorku, činidla negativní
kontroly nebo činidla pozitivního kontroly. Do každé šarže
testů je nutné zařadit nejméně jednu negativní kontrolu a
jednu pozitivní kontrolu.
8.6. D
o každé mikrotitrační jamky přidejte 2 kapky (nebo 100 µl)
substrátu.
8.7. Zakryjte destičku a inkubujte při 20 – 30 °C po dobu 10
minut.
8.8. M
ikrotitrační jamky mohou být vizuálně odečteny ihned po
druhé inkubaci (viz oddíly 9 a 10).
8.9. N
ebo zastavte reakci substrátu přidáním 2 kapek (nebo 100
µl) zastavovacího roztoku do každé mikrotitrační jamky.
Před odečtením výsledků zajistěte důkladné promíchání
mikrotitračních jamek. Barevný produkt je stabilní po dobu
až 30 minut od přidání zastavovacího roztoku.
8.10.Spektrofotometrem změřte absorbanci při 450 nm (viz
oddíly 9 a 10).
9. KONTROLA KVALITY
Při každém provedení testu je nutné zařadit nejméně jednu
pozitivní a jednu negativní kontrolu.
Otáčejte tamponem/štětičkou s výtěrem z rekta v 1 ml roztoku
pro ředění vzorků za současného uvolňování materiálu stolice
vymačkáním tamponu/štětičky s výtěrem o stěny nádobky.
Důkladně promíchejte.
VIZUÁLNÍ STANOVENÍ
Všechny mikrotitrační jamky s negativní kontrolou by měly být
bezbarvé. Pokud tomu tak není, neměly by být výsledky testu
vyhodnocovány vizuálně.
Suspenze stolice, které byly předtím konzervovány ve formalínu,
je nutné před testováním dále zředit v roztoku pro ředění vzorků
ProSpecT Astrovirus tak, aby byla připravena 10% suspenze
stolice.
Mikrotitrační jamky s pozitivní kontrolou by měly mít zřetelné
modré zbarvení, jasně odlišitelné od negativní kontroly.
Vzorky suspendované/ředěné v roztoku pro ředění vzorků
ProSpecT Astrovirus mohou být před testováním uchovávány při
teplotě 2 – 8 °C po dobu až 8 dnů.
SPEKTROFOTOMETRICKÉ STANOVENÍ
Hodnota negativní kontroly nebo průměr hodnot negativních
kontrol by měly být menší než 0,150 jednotek absorbance.
Hodnota pozitivní kontroly musí být vyšší než 0,500 jednotek
absorbance.
10. VÝSLEDKY
VIZUÁLNÍ STANOVENÍ
Každý vzorek, který dává modré zbarvení intenzivnější než
zbarvení negativní kontroly, je pozitivní. Každý vzorek, který dává
zbarvení stejně nebo méně intenzivní než zbarvení negativní
kontroly, je negativní. Jamky, v nichž je intenzita zbarvení ve
srovnání s negativní kontrolou těžko interpretovatelná, by měly
být odečteny fotometricky po přidání zastavovacího roztoku nebo
by měly být testovány znovu.
SPEKTROFOTOMETRICKÉ STANOVENÍ
10.1.Mikrotitrační jamky by měly být fotometricky odečteny do
30 minut po přidání zastavovacího roztoku.
10.2.Zamíchejte obsah mikrotitračních jamek a pomocí
spektrofotometru nastaveného na 450 nm změřte
absorbanci každé jamky. Před odečtením výsledků zajistěte,
aby dna mikrotitračních jamek byla čistá. Čtečka by měla být
před odečtením destičky nastavena na vzduch jako slepý
vzorek.
10.3.Umožňuje-li spektrofotometr použití referenční vlnové
délky (při 620 až 650 nm), měl by být prováděn odečet při
dvojí vlnové délce.
10.4.Vypočtěte mezní hodnotu přičtením 0,100 jednotek
absorbance k hodnotě negativní kontroly nebo k průměrné
hodnotě, pokud je začleněna více než jedna negativní
kontrola.
10.5.Interpretace výsledků testu:
ozitivní: hodnota absorbance klinického vzorku > mezní
P
hodnota.
egativní: hodnota absorbance klinického vzorku < mezní
N
hodnota.
eprůkazný: N
hodnota absorbance klinického vzorku se
neliší od mezní hodnoty o více než 0,010
jednotek
absorbance. Tyto vzorky by měly být otestovány znovu nebo by
měl být
pacientovi znovu odebrán vzorek.
11. FUNKČNÍ OMEZENÍ TESTU
11.1.Platnost výsledků získaných pomocí stanovení ProSpecT
Astrovirus na mikrotitračních destičkách závisí na průběhu
kontrolních reakcí podle očekávání. Viz Kontrola kvality, část
9.
11.2.Negativní výsledek nevylučuje možnost infekce pacienta
astroviry. Neúspěšná detekce astrovirů může být způsobena
faktory, jako je odběr vzorků v nevhodném období choroby,
kdy je ve stolici nedostatečné množství virionů, nesprávný
odběr vzorků nebo nesprávná manipulace se vzorky.
11.3.Test ProSpecT Astrovirus detekuje rodově specifické
virové proteiny přítomné v lidských sérotypech astrovirů.
Tento test nemůže být použit k odlišení mezi jednotlivými
sérotypy astrovirů ani k detekci sérotypů astrovirů jiných
než lidských.
11.4.Činidla se dodávají v pevně daných pracovních
koncentracích. Modifikace činidel nebo jejich uchovávání
za jiných podmínek, než je uvedeno v oddílu 5, bude mít
nepříznivý dopad na pracovní charakteristiku testu.
11.5.Použití stanovení ProSpecT Astrovirus na mikrotitračních
destičkách k přímému testování vzorků jiných, než jsou
vzorky stolice, se nedoporučuje, protože přítomnost
nedostatečného množství antigenu nebo nevhodný odběr
vzorku může být příčinou zavádějících negativních výsledků.
Pozitivní výsledek ve vzorcích stolice spolu s průjmem
s vysokou pravděpodobností naznačuje astrovirovou
gastroenteritidu.
KLINICKÁ ÚČINNOST
Test ProSpecT Astrovirus vykazoval citlivost 100 % a specifičnost
98,3 %.
Tabulka 13.1 Porovnání citlivosti a specifičnosti testu
ProSpecT Astrovirus s testem IDEIA Astrovirus
11.6.Pozitivní výsledek nevylučuje přítomnost dalších střevních
patogenů. I když je vztah mezi astrovirem a gastroenteritidou
pevně potvrzen3,4, výskyt současné infekce jinými
mikrobiálními patogeny je možný.
ProSpecT
Astrovirus
11.8.Výsledky testu interpretujte s přihlédnutím k informacím z
epidemiologických studií, celkové klinické diagnóze pacienta
a jiným diagnostickým postupům.
12. OČEKÁVANÉ HODNOTY
Četnost pozitivity se může měnit v závislosti na prevalenci
astroviru v různých populacích, geografické lokalitě, odběru
vzorků, na manipulaci, skladování a převozu vzorků, na použitém
systému buněčné kultury a na celkových zdravotních podmínkách
populace pacientů zahrnutých do studie.
Astrovirus se vyskytuje na celém světě a v mírném podnebním
pásmu dochází k maximu výskytu během zimy a na jaře18,19. Běžně
jsou postiženi kojenci ve věku do jednoho roku a sérologický důkaz
prodělané infekce vykazuje více než 80 % dětí ve věku do 5 let20.
Z osmi lidských sérotypů je ve Spojeném království zdaleka
nejrozšířenější (>60 %) typ 1 a důkazy svědčí o tom, že se jeho
četnost zvyšuje v každém druhém roce21. Běžné jsou dvojí infekce
s jinými střevními patogeny, zvláště rotavirem22.
13. PRACOVNÍ CHARAKTERISTIKY
KLINICKÉ STUDIE
Test ProSpecT Astrovirus byl nezávisle hodnocen v klinické studii
provedené v referenčním středisku ve Spojeném království.
Studie byla provedena na vzorcích stolice odebraných 94
pacientům s gastroenteritidou (51 žen, 42 mužů a 1 neznámý
ve věkovém rozpětí 0,1 – 88,4 let). Účelem studie bylo porovnat
účinnost testu ProSpecT Astrovirus s dříve hodnoceným testem
IDEIA™ Astrovirus. K potvrzení stavu pozitivních vzorků byla
použita elektronová mikroskopie.
Výsledky této studie jsou uvedeny v tabulce 13.1.
+
-
+
35
1a
-
0
58
Citlivost
11.7.Vzorky mekonia nebyly pro použití stanovení ProSpecT
Astrovirus na mikrotitračních destičkách validovány.
100 % (35/35)
Specifičnost
a
IDEIA Astrovirus
98,3 % (58/59)
Vzorek potvrzený elektronovou mikroskopií jako pozitivní
PŘESNOST
Přesnost v rámci jednoho stanovení
Přesnost v rámci jednoho stanovení byla hodnocena pomocí
tří vzorků stolice představující pozitivní vzorky s nízkou, střední
a vysokou hladinou viru. Každý kontrolní preparát byl testován
24krát v osmi stanoveních provedených dvěma laboranty.
Byla stanovena střední hodnota absorbance a střední hodnota
variačního koeficientu v rámci jednoho stanovení.
Tabulka 13.2
Střední hodnota přesnosti
ProSpecT Astrovirus v rámci jednoho stanovení
Vzorek
testu
Viry
5. Herrmann, J.E., Taylor, D.N., Echeverria P. et al (1991)
Adenovirus a
Kalicivirus
Astroviruses as a cause of gastroenteritis in children.
a
Rotavirusa
N. Engl. J. Med., 324: 1757-1760
Bakterie
6. Oliver, A.R. and Phillips, A.D. (1988)
Acinetobacter sp.
Listeria monocytogenes
Aeromonas hydrophila
Neisseria gonorrhoea
Bacteroides fragilis
Peptococcus sp.
Campylobacter coli
Peptostreptococcus sp.
Citrobacter freundii
Proteus sp.
Clostridium difficilea
Pseudomonas aeruginosa
Clostridium perfringens
Salmonella typhimurium
Enterobacter cloacae
Serratia marcescens
Enterococcus faecalis
Shigella sonnei
8.Utagawa, E.T., Nishizawa, S., Sekine, S., Hayashi, Y., Ishihara, Y.,
Oishi, I., Iwasaki, A., Yamashita, I., Miyamura, K., Yamazaki, S.,
Inouye, S., Glass, R.I.(1994)
Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Astrovirus as a Cause of Gastroenteritis in Japan.
Gardnerella vaginalis
Staphylococcus epidermidis
Journal of Clinical Microbiology, 1841-1845
Haemophilus influenzae
Beta-hemolytický Streptococcus (skupina A)
Klebsiella sp.
Veillonella sp.
9. Oishi, I., Yamazaki, K., Kimoto, T., Minekawa, Y., Utagawa, E.,
Yamazaki, S., Inouye, S., Grohmann, G.S., Monroe, S.S., Stine,
S.E., Carcamo, C., Ando, T.,Glass, R.I. (1994)
n electron microscopical investigation of faecal small round
A
viruses.
J. Med. Virol., 24: 211-218
7.Putzker, M., Sauer, H., Kirchner, G. and Malic, A. (2000)
Community acquired diarrhea – the incidence of astrovirus
infections in Germany.
Clin. Lab., 46: 269-273
Lactobacillus sp.
large Outbreak of Acute Gastroenteritis Associated with
A
Astrovirus among Students and Teachers in Osaka, Japan.
Další mikroorganismy
Journal of Infectious Diseases, 170: 439-443
Candida albicans
10.Willcocks, M.M., Carter, M.J. and Madeley, C.R. (1992)
Legenda:
Astroviruses
Střední
hodnota AU
Střední hodnota
CV %
Nízká
0,454
5,3
a
Mikroorganismy přítomné a testované ve stolici.
Reviews. Med. Virol., 2: 97-106
Střední
0,973
4,4
Vysoká
1,568
Všechny ostatní mikroorganismy byly pěstovány a testovány v
tekutých kultivačních půdách.
11. Willcocks, M.M., Carter, M.J., Silcock, J.G., and Madeley, C.R.
(1991)
14. SEZNAM LITERATURY
1.Madeley, C.R. (1990)
dot-blot hybridisation procedure for the detection of astrovirus
A
in stool samples.
Viruses associated with Acute Diarrhoeal Disease.
Epidemiol. Infect., 107: 405-410
In Principles and Practices of Clinical Virology.
12.Lee, T.W. and Kurtz, J.B. (1981)
(eds A.J. Zuckerman et al). John Wiley and Sons Ltd., 188-189.
S erial Propagation of astrovirus in Tissue Culture with the Aid of
Trypsin.
4,2
Přesnost mezi stanoveními
Přesnost mezi stanoveními byla hodnocena pomocí tří vzorků
stolice. Každé ředění bylo testováno v osmi stanoveních
provedených dvěma laboranty a byly stanoveny střední hodnoty
absorbance a variační koeficient.
Tabulka 13.3
stanoveními
Přesnost testu ProSpecT Astrovirus mezi
2.Carter, M.J. (1994)
enomic organisation and expression of astroviruses and
G
caliciviruses.
Vzorek
Střední
hodnota AU
Střední hodnota
CV %
Nízká
0,454
5,7
3. Walter, J.E. and Mitchell, DK (2000)
Arch. Virol., (Suppl.) 9: 429-439
Střední
0,973
5,1
Role of Astrovirus in childhood diarrhea.
Vysoká
1,568
3,7
Current Opinion in Pediatrics, 12: 275-279
ZKŘÍŽENÁ REAKTIVITA
Testem ProSpecT Astrovirus byly testovány a prokázány jako
negativní následující mikroorganismy. Testy na zkříženou
reaktivitu byly prováděny jak na klinických vzorcích, u kterých
byla přítomnost mikroorganismů stanovena, tak na laboratorních
kulturách známých mikroorganismů obsahujících asi 107-108
životaschopných organizmů na ml. Odkaz na zdroj mikroorganismů
je uveden v legendě níže:
4.Lew, J.F., Glass, R.I., Petric, M. et al (1990)
S ix year retrospective surveillance of gastroenteritis viruses
identified at ten electron
microscopy centres in the United States and Canada.
Ped. Infect. Dis. J., 9: 709-714
J. Gen. Virol., 57: 421-424
13.Willcocks, M.M., Carter, M.J., Laidler, F.R., and Madeley, C.R.
(1990)
rowth and characterisation of human faecal astrovirus in a
G
continuous cell line.
Arch. Virol., 113: 73-81
14.Jonassen, T.O., Kjeldsberg, E. and Grinde, B. (1993)
etection of human astrovirus serotype 1 by the polymerase
D
chain reaction.
J. Virol. Methods., 44: 83-88
15.Herrman, J.E., Nowak, N.A., Perron-Henry, D.M., Hudson,
R.W., Cubitt, W.D., and Blacklow, N.R. (1990)
iagnosis of Astrovirus Gastroenteritis by Antigen Detection with
D
Monoclonal Antibodies.
J. Infect. Dis., 161: 226-229
16.Tanaka, M., Nakayama, H., Sagiyama, K., Haraoka, M.,
Yoshida, H., Hagiwara, T., Akazawa, K., Naito, S. (2000)
E valuation of a new amplified enzyme immunoassay (EIA) for
the detection of Chlamydia trachomatis in male urine, female
endocervical swab and patient obtained vaginal swab specimens
J. Clin. Path., 5: 350-354
17.Chernesky, M., Jand, D., Copes, D., Patel, J., Petrich, A., Biers,
K., Sproston, A., Kapala, J. (2001)
omparison of a polymer conjugate-enhanced enzyme
C
immunoassay to ligase chain reaction for diagnosis of Chlamydia
trachomatis in endocervical swabs
J. Clin. Micro., 2306-2307
18.Kurtz. J.B., and Lee, T.W. (1987)
Novel diarrhoea viruses: Astroviruses: human and animal.
Willey, Chichester (Ciba Foundation Symposium 128), 92-107
19.Moe, C.L., Allen, J.R., Monroe, S.S. et al (1991)
etection of Astrovirus in Paediatric Stool samples by
D
Immunoassay and RNA probe.
J. Clin. Micro., 29: 2390-2395
20.Kurtz, J.B. and Lee, T.W. (1978)
Astrovirus gastroenteritis. Age distribution of antibody.
Med Microbiol. Immunol., 166: 227-230
21.Lee, T. W. and Kurtz, J. B. (1994)
revalence of human astrovirus serotypes in the Oxford region
P
1976 – 92, with evidence for two new serotypes.
Epidemiol. Infect., 112: 187-193
22.Nazer, H., Rice, S., Walker-Smith, J.A. (1982)
Clinical associations of stool Astrovirus in childhood.
J. Pediatr Gastroenterol. Nutr., 1: 555-5
ProSpecTTMis zapsanou ochrannou známku
Oxoid Ltd, Wade Road, Basingstoke, Hants RG24 8PW UK
Pro technickou podporu prosím kontaktujte svého distributora
IFU X7599B r 05. 2012