Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actin Clone

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Smooth Muscle Actin
Clone 1A4
Kód M0851
Účel použití
In vitro diagnostikum.
Protilátka Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actin, Clone 1A4, je určena pro použití
v imunohistochemii. Tato protilátka značí hladkosvalové buňky, myofibroblasty a myoepiteliální buňky, a je
užitečným nástrojem při identifikaci leiomyomů, leiomyosarkomů (1, 2), a pleomorfních adenomů (3). Klinickou
interpretaci jakéhokoli zabarvení nebo jeho nepřítomnosti je třeba doplnit morfologickými studiemi s využitím
správných kontrol a je nutno ji vyhodnocovat v kontextu klinické anamnézy pacienta a jiných diagnostických
vyšetření provedených kvalifikovaným patologem.
Souhrn a vysvětlení
Cytoplazmické aktiny, které jsou součástí mikrofilamentového systému cytoskeletálních proteinů, jsou jedněmi z
nejkonzervovanějších eukaryontních proteinů exprimovaných u savců a ptáků. Aktinový protein se skládá ze šesti
izoforem, které se liší aminokyselinovou sekvencí, všechny však mají stejnou molekulární hmotnost 42 kDa.
Izoformy jeví více než 90% celkovou homologii sekvencí, avšak pouze 50-60% homologii u 18 zbytků na N-konci.
Oblast N-konce se jeví jako hlavní antigenní oblast (4). Existují různé α izoformy specifické pro jednotlivé svalové
tkáně, tj. α kosterního svalstva, α srdečního svalu, a α hladkého svalstva (1). Aktiny β a γ se mohou nacházet ve
svalových buňkách a také ve většině jiných buněčných typů v těle, včetně nesvalových buněk (5).
Dodané činidlo
Monoklonální myší protilátka je poskytována v tekuté formě jako supernatant z buněčné kultury dialyzovaný
proti 0,05 mol/L Tris HCl, pH 7,2, a obsahuje 15 mmol/L NaN3.
Klon: 1A4. Klon 1A4 je identický s protilátkou anti-asm-1, popsanou v (4). Izotyp: IgG2a, kappa.
Koncentrace myšího IgG: viz štítek na lahvičce.
Proteinová koncentrace mezi šaržemi se může lišit bez ohledu na optimální ředění. Titr každé konkrétní šarže
je upraven, aby byla zajištěna srovnatelná účinnost imunohistologického zabarvení v rámci jednotlivých šarží
s referenční šarží.
Imunogen
N-koncový syntetický dekapeptid z α-hladkosvalového aktinu, konjugovaný s hemocyaninem z přílipky (KLH)
(4).
Specifičnost
Při použití Western blottingu a SDS-PAGE imunoblottingu u α-hladkosvalové izoformy aktinu protilátka barví
pruh odpovídající α-hladkosvalovému aktinu (4).
Jak prokázal Western blotting popř. imunocytochemické testy, protilátka křížově reaguje s proteiny
ekvivalentními α-hladkosvalovému aktinu u kuřat, krav a krys (4).
Upozornění
1. Pouze pro profesionální uživatele.
2. Tento výrobek obsahuje azid sodný (NaN3), chemikálii, která je v čistém stavu vysoce toxická. V
koncentracích, v nichž se azid sodný nachází v produktu, není klasifikován jako nebezpečný, může však
reagovat s olověnými a měděnými armaturami a vytvářet vysoce výbušné koncentrace kovových azidů. Při
likvidaci spláchněte velkým množstvím vody, abyste zabránili nahromadění kovových azidů v armaturách.
3. Stejně jako u jiných výrobků z biologických zdrojů, i zde dodržujte správné postupy zacházení.
4. Používejte osobní ochranné prostředky, aby nedošlo k zasažení očí nebo pokožky.
5. Nespotřebované roztoky je nutno likvidovat v souladu s místními a celostátními předpisy.
Uchovávání
Uchovávejte při 2-8 oC. Nepoužívejte po uplynutí doby použitelnosti označené na lahvičce. Jsou-li činidla
uchovávána v jiných než uvedených podmínkách, musí je uživatel prověřit. Nestabilita výrobku není
signalizována žádnými zřetelnými známkami. Testujte proto se vzorky pacientů i pozitivní a negativní kontroly.
Pokud dojde k nečekanému zbarvení, které nelze vysvětlit odchylkami v laboratorních postupech, a máte-li
podezření na problém s protilátkou, kontaktujte naši Technickou službu.
Příprava vzorku
Parafínové řezy: Protilátku lze použít pro značení parafínem zalitých tkáňových řezů, fixovaných ve formalínu.
Doporučuje se předběžná úprava tkání vysokou teplotou k odmaskování epitopu. Optimálních výsledků lze
dosáhnout použitím pufru 10 mmol/L Tris, 1 mmol/L EDTA, pH 9,0. Méně optimálních výsledků lze dosáhnout
použitím roztoku Dako Target Retrieval Solution, High pH, kód S3308 či 10 mmol/L citrátového pufru, pH 6,0.
Neúčinným byl shledán odmaskovací roztok Dako Target Retrieval Solution, kód S1700. Bylo zjištěno, že při
předběžné přípravě tkáně proteinázou K dochází k destrukci epitopu. Tkáňové řezy by během přípravy a
následujícího imunohistochemického barvení neměly vyschnout.
Příprava zmrazených řezů a buněk: Protilátku lze použit k označení zmrazených řezů fixovaných acetonem (1).
Postup barvení
(108105-003)
Ředění: Protilátku Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actin, kód M0851, lze použít v rozmezí
ředění 1:50-1:100 při aplikaci na formalínem fixované, do parafínu zalité tkáňové řezy normálního lidského
tlustého střeva a při tepelném odmaskování epitopů po dobu 20 minut v pufru 10 mmol/L Tris, 1 mmol/L EDTA,
pH 9,0, a 30minutové inkubaci s primární protilátkou při pokojové teplotě. Optimální podmínky se mohou lišit
v závislosti na vzorku a metodě zpracování, a každá laboratoř by je měla stanovit individuálně. Doporučenou
M0851/CZ/KRM/2008.09.30. p. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
negativní kontrolou je protilátka Dako Mouse IgG2a, kód X0943, naředěná na stejnou koncentraci myšího IgG,
jakou má primární protilátka. Pokud jste u aktuálního barvicího postupu nestanovili stabilitu naředěné protilátky
a negativní kontroly, doporučujeme tato činidla naředit bezprostředně před použitím či v ředícím roztoku Dako
Antibody Diluent, kód S0809. Současně se vzorkem pacientů testujte i pozitivní a negativní kontrolu.
Vizualizace: Doporučujeme kit Dako LSAB™+/HRP kit, kód K0679, a kity Dako EnVision™+/HRP, kódy K4004
a K 4006. Pokud u zmrazených řezů a buněčných preparátů dochází k problémům se zbarvením endogenní
peroxidázou, je dobrou alternativou sada Dako APAAP, kód K0670. Postupujte podle postupu přibaleného
k vybranému vizualizačnímu kitu.
Automatizace: Protilátka je vhodná k imunohistochemickému barvení pomocí automatických systémů jako
např. Dako Autostainer.
Výkonnostní charakteristika
Buňky označené protilátkou vykazují cytoplazmatické zbarvení.
Normální tkáně: Protilátka barví hladkosvalové buňky cévách a navíc ve vývodech slinných žláz a myoepiteliálních
buňkách kolem acinů ve slinné žláze (3). Také hladkosvalové buňky v 35/36 vzorků normálního děložního
myometria vykázaly pozitivní značení (2). Dále bylo zjištěno přechodné značení perisinusoidálních buněk jater (6).
U zmrazených tkání protilátka značí myofibroblasty a myoepiteliální buňky kolem acinů a vývodů mléčné žlázy,
zatímco epitel (adenózní, dlaždicovitý), lymfocyty, buňky srdečního a kosterního svalstva, endoteliální buňky, buňky
tukové, Schwannovy buňky a fibroblasty jsou negativní (1).
Abnormální tkáně: Protilátka vykázala značení 24/26 leiomyomů, 6/7 atypických leiomyomů a 21/25
leiomyosarkomů uteru, jakož i 13/13 extrauterinních negastrointestinálních leiomyosarkomů (2). Kromě toho
protilátka vykázala značení variabilního množství buněk u 8/8 pseudosarkomatózních myofibroblastických tumorů
močového měchýře u dětí (7). U pleomorfních adenomů protilátka vykázala značení tumorových epiteliální buněk
(myoepiteliálních buněk) v 19/20 případů (3). U zmrazené tkáně protilátka, kromě značení 5/5 leiomyomů a 6/7
leiomyosarkomů, také vykázala značení 4/22 maligních fibrózních histocytomů a 1/2 rhabdomyosarkomů.
Negativní bylo 6/6 maligních schwanomů a také 13/13 jiných tumorů měkkých tkání včetně 1 fibrosarkomu, 6
liposarkomů, 1 angiosarkomu, 1 kapilárního hemagiomu, 1 tumoru typu Triton, a 3 synoviálních sarkomů (1).
Literatura
1. Roholl PJM, Elbers HRJ, Prinsen I, Claessens JAJ, van Unnik JAM. Distribution of actin isoforms in
sarcomas: an immunohistochemical study. Hum Pathol 1990;21:1269-74.
2. Rizeq MN, van de Rijn M, Hendrickson MR, Rouse RV. A comparative immunohistochemical study of
uterine smooth muscle neoplasms with emphasis on the epithelioid variant. Hum Pathol 1994;25:671-7.
3. Brennan PA, Umar T, Zaki GA, Langdon JD, Spedding A, Buckley J, et al. Are myoepithelial cells
responsible for the widespread expression of inducible nitric oxide synthase in pleomorphic adenoma? An
immunohistochemical study. J Oral Pathol Med 2000;29:279-83.
4. Skalli O, Ropraz P, Trzeciak A, Benzonana G, Gillessen D, Gabbian G. A monoclonal antibody against smooth muscle actin: a new probe for smooth muscle differentiation. J Cell Biol 1986;103:2787-96.
5. Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K, Watson JD. The cytoskeleton. In: Alberts B, Bray D, Lewis J,
Raff M, Roberts K, Watson JD, editors. Molecular biology of the cell. 2nd ed. New York and London:
Garland Publishing; 1989. p. 613-629.
6. Schmitt-Gräff A, Krüger S, Bochard F, Gabbiani G, Denk H. Modulation of alpha smooth muscle actin and
desmin expression in perisinusoidal cells of normal and diseased livers. Am J Pathol 1991;138:1233-42.
7. Hojo H, Newton WA, Hamoudi AB, Qualman SJ, Wakasa H, Suzuki S, et al. Pseudosarcomatous
myofibroblastic tumor of the urinary bladder in children: a study of 11 cases with review of the literature. Am
J Surg Pathol 1995;19:1224-36.
Vysvětlení symbolů
(108105-003)
Katalogové číslo
Teplota skladování
In vitro diagnostický
zdravotnický prostředek
Číslo šarže
Viz návod k použití
Použitelné do
Výrobce
M0851/CZ/KRM/2008.09.30. p. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17