86032 - Testline

CHORUS
dsDNA-G
86032
(36 testů)
Výrobce:
DIESSE Diagnostica Senese
Via delle Rose 10
53035 Monteriggioni (Siena) – Itálie
CHORUS dsDNA-G
CZ
OBSAH
1
Úvod ................................................................................................................ 3
2
Princip testu ..................................................................................................... 3
3
Složení soupravy .............................................................................................. 4
4
Další potřebné vybavení k provedení testu ...................................................... 5
5
Skladování a stabilita komponent .................................................................... 6
6
Bezpečnost práce ............................................................................................. 6
7
Technické připomínky ...................................................................................... 7
8
Vzorky a jejich skladování ................................................................................ 8
9
Pracovní postup. .............................................................................................. 8
10 Validita testu.................................................................................................... 8
11 Hodnocení výsledků ......................................................................................... 9
12 Interpretace výsledků....................................................................................... 9
13 Kalibrační rozmezí ............................................................................................ 9
14 Referenční rozmezí........................................................................................... 9
15 Charakteristika soupravy .................................................................................. 9
16 Literatura ....................................................................................................... 11
17 Vysvětlení symbolů ........................................................................................ 12
2/12
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012
CHORUS dsDNA-G
CZ
Semikvantitativní stanovení IgG protilátek proti dsDNA
v lidském séru na přístrojích Chorus/Chorus TRIO pomocí
jednorázového testovacího zařízení
1
Úvod
Protilátky, které se váží na DNA, patří do skupiny protilátek vážicích se na
antinukleární antigeny. Tyto specifické protilátky byly zjištěny u několika
autoimunitních onemocnění. Protilátky reagující s nativní dvoušroubovicí (ds) DNA
se považují za specifické pro onemocnění systémový lupus erythematosus (SLE) a
byly zjištěny u zhruba 50 až 80 % pacientů.
Protilátky proti dsDNA se nacházejí v průběhu aktivní fáze SLE. Jejich koncentrace
v séru koreluje se závažností onemocnění, a proto je detekce těchto specifických
protilátek důležitá pro vlastní diagnózu a monitoring SLE. Detekce těchto protilátek
reprezentuje jedno z 11 ACR kritérií pro diagnózu SLE. Většina pacientů postižených
SLE vykazuje zvýšené titry protilátek třídy IgG proti dsDNA. Tyto protilátky jsou
asociovány s lupus nefritidou. U zhruba 30 % pacientů trpících SLE se navíc objevují
také specifické protilátky třídy IgA. Existuje názor, že přítomnost těchto IgA může
vymezovat určitou podskupinu SLE pacientů. Studie opravdu prokázaly spojení této
podtřídy s jistými klinickými parametry tohoto onemocnění, jako jsou zvýšená
rychlost sedimentace erytrocytů či rozpad komplementové komponenty C3, jakož i
klinické projevy kožní vaskulitidy, akrální nekrózy a erytému. S nefritidou a artritidou
však žádná asociace zjištěna nebyla.
Specifické protilátky třídy IgM byly nalezeny v 52 % testovaných sér od pacientů
trpících SLE. Na rozdíl od specifických protilátek třídy IgG a IgA, protilátky třídy IgM
nekorelují s aktivitou onemocnění. Byla však dokázána velmi výrazná antagonistická
korelace mezi protilátkami a lupus nefritidou, včetně laboratorních parametrů.
Proto mohou specifické protilátky třídy IgM indikovat podskupinu pacientů s lupus,
kterým nehrozí riziko vzniku nefritidy.
2
Princip testu
Test je založen na principu ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay). CHORUS
dsDNA-G umožňuje stanovení IgG protilátek proti dsDNA na přístroji Chorus.
Vysoce purifikovaný antigen se naváže na pevnou fázi. V průběhu inkubace vzniká
vazba mezi specifickými protilátkami vyšetřovaného séra a imobilizovaným
antigenem. Po promytí, která eliminují nenavázané proteiny, se provádí inkubace s
konjugátem. Konjugát je roztok s obsahem monoklonálních protilátek proti lidským
imunoglobulinům značených křenovou peroxidázou. Po další sérii promytí, které
odstraní nenavázaný konjugát, se přidá substrát reagující s peroxidázou. Intenzita
3/12
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012
CHORUS dsDNA-G
CZ
modrého zbarvení, které vznikne, je přímo úměrné koncentraci specifických
protilátek přítomných v testovaném lidském séru.
Jednorázový test obsahuje všechny reagencie nutné k provedení testu na přístrojích
Chorus.
Tato souprava je kalibrována pomocí referenčních sér z CDC (Atlanta). Výsledky jsou
vyjádřeny pomocí arbitrážních jednotek (IU/ml).
3
Složení soupravy
Souprava umožňuje provést 36 stanovení.
Testovací jednotka
6 × 6 ks
6 samostatných balení po 6 jednotlivých jednorázových
testech
Kalibrátor
1 × 175 µl
Roztok lidského séra s obsahem IgG protilátek proti
dsDNA, obsahující konzervanty, v pracovním ředění
Pozitivní kontrola
1 × 425 µl
Roztok lidského séra s obsahem IgG protilátek proti
dsDNA, obsahující konzervanty, v pracovním ředění
Pracovní návod
1 ks
Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu a ze samostatných balení
odeberte stanovený počet jednorázových testů pro vlastní analýzu. Zbylé
jednorázové testy vraťte zpět do obalu se sušidlem (silikagel – gel obsahující oxid
křemičitý), vytlačte vzduch a hermeticky uzavřete stisknutím uzávěru. Skladujte při
+2 °C až +8 °C.
4/12
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012
CHORUS dsDNA-G
CZ
Obrázek 1 Schéma jednorázového testu
Pozice 8
Místo pro štítek s čárovým kódem
Pozice 7
Prázdná pozice
Pozice 6
Mikrotitrační jamka s potaženými antigeny
Vysoce purifikovaná dsDNA
Pozice 5
Nepotažená mikrotitrační jamka
Pozice 4
TMB Substrát
0,35 ml
Tetrametylbenzidin 0,26 mg/ml a 0,01% H2O2 stabilizovaný
v 0,05 mol/l citrátového pufru (pH 3,8)
Pozice 3
Ředicí roztok vzorků
0,35 ml
Proteinový roztok obsahující 0,2% Tween-20 a 0,1% Proclin
Pozice 2
Konjugát
0,35 ml
Roztok monoklonálních protilátek značených peroxidázou
ve fosfátovém pufru obsahujícím 0,05% fenol a 0,02%Bronidox
Pozice 1
Prázdná jamka
Do této jamky se přidá neředěné vyšetřované sérum
4
Další potřebné vybavení k provedení testu
Tyto reagencie nejsou součástí balení.
Promývací roztok pro testy na stanovení autoimunitních onemocnění
Čistící roztok 2000
83605
Sanitační roztok
83604
Chorus Negativní kontrola / Ředicí roztok vzorků
83607
Destilovaná nebo deionizovaná voda
Běžné laboratorní sklo: odměrné válce, zkumavky atd.
Mikropipety na přesný odběr 50 až 200 μl roztoku
Jednorázové rukavice
Roztok chlornanu sodného (5 %)
Nádoby na potenciálně infekční materiál
5/12
86004
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012
CHORUS dsDNA-G
5
CZ
Skladování a stabilita komponent
Reagencie se musí skladovat při teplotě +2 °C až +8 °C. V případě skladování při
nesprávné teplotě se musí zopakovat kalibrace a validovat test pomocí kontrolního
séra (viz 10, Validita testu).
Datum exspirace je uvedeno na každé komponentě a na štítku soupravy.
Po otevření mají reagencie omezenou stabilitu.
 Jednorázový test – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
 Pozitivní kontrola – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
 Kalibrátor – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
6
Bezpečnost práce
Souprava je určena pouze pro diagnostické účely in vitro.
Tato souprava obsahuje materiály lidského původu, které byly testovány a vykázaly
negativní výsledky při použití metod schválených FDA pro stanovení přítomnosti
HbsAg a anti-HIV-1, anti-HIV-2 a anti-HCV protilátek. Protože však žádný
diagnostický test nemůže poskytnout úplnou záruku, že infekční agens nejsou
přítomna, je třeba s veškerým materiálem lidského původu zacházet tak, jako by byl
potenciálně infekční. Při zacházení s materiálem lidského původu je nutné dodržovat
všechny místní předpisy týkající se bezpečnosti práce.
Likvidace zbytků pro provedení testu
S použitými vzorky sér, kalibrátory, jednorázovými testy je třeba zacházet jako
s potenciálně infekčním materiálem a likvidovat je v souladu s platnou legislativou.
Zdravotní a bezpečnostní informace
1. Nepipetujte ústy. Používejte rukavice na jedno použití a ochranu očí. Po umístění
jednorázového testu do přístroje Chorus si důkladně umyjte ruce.
2. Některé reagencie obsahují nízké koncentrace škodlivých nebo dráždivých látek
Pokud se některá s těchto reagencií dostane do kontaktu s kůží nebo očima,
důkladně omyjte dané místo vodou.
 Konjugát obsahuje fenol
 TMB Substrát je roztok kyseliny
3. Neutralizované kyseliny nebo jiný tekutý odpad by se měl dekontaminovat
přidáním dostatečného množství chlornanu sodného tak, aby konečná
koncentrace dosahovala minimálně 1,0 %. Pro zajištění účinné dekontaminace
ponechejte tento odpad 30 minut v 1% chlornanu sodném.
4. Rozlitý potenciálně infekční materiál je třeba okamžitě odstranit pomocí
absorpčního papírového ručníku a kontaminovanou oblast umýt, například 1,0%
chlornanem sodným, a to předtím, než budete v práci pokračovat. Chlornan
6/12
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012
CHORUS dsDNA-G
CZ
sodný nepoužívejte na rozlité tekutiny s obsahem kyseliny, ty musíte nejprve
otřením vysušit.
5. Materiály použité k čištění potřísněných povrchů, včetně rukavic, se musí
likvidovat jako potenciálně životu nebezpečný odpad. Materiály obsahující
chlornan sodný nevkládejte do autoklávu.
7
Technické připomínky
Pro získání spolehlivých výsledků je nutné přesné dodržování návodu.
Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu (+18 °C až +30 °C) a test
proveďte do 60 minut.
Zkontrolujte a dodržujte následující informace:
 Nepoužívejte jednorázové testy, jestliže je v pozici 4 modře zbarvený Substrát.
 Testovaný vzorek je dokonale na dně jamky rozprostřen.
 Zkontrolujte zda-li všechny reagencie v testu jsou přítomny a jestli není
jednorázový test poškozen. Nepoužívejte testy, které nemají reagencie.
 Jednorázové testy jsou určeny pro použití na přístroji Chorus. Důkladně
dodržujte pokyny pro použití a řiďte se návodem k obsluze přístroje.
 Chorus přístroj správně nastavený (viz návod k obsluze).
 Neměňte čárový kód umístěný na držadle jednorázového testu. Nepoužívejte
testy s poškozenými štítky s čárovými kódy.
 Defektní čárové kódy lze vložit do přístroje manuálně.
 Během skladování a použití nevystavujte jednorázové testy silnému světlu ani
výparům chlornanu.
 Použití silně hemolytických vzorků nebo vzorků s mikrobiální kontaminací může
vést k nereprodukovatelným výsledkům.
 Než vložíte jednorázový test do přístroje, zkontrolujte, že reakční jamka
neobsahuje cizí tělesa.
 Pipetujte sérum (50 µl) do pozice 1 jednorázového testu (viz obrázek 1).
 Nepoužívejte jednorázový test po uplynutí expiračního data.
 Zkontrolujte prosím, zda-li byl k přístroji Chorus připojen promývací roztok
určený pro testy ke stanovení autoimunitních onemocnění (Washing Buffer
Autoimmunity
86004.
7/12
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012
CHORUS dsDNA-G
8
CZ
Vzorky a jejich skladování
Jako vzorek k vyšetření může být použito sérum, získané odběrem žilní krve. Zachází
se s ním v souladu se všemi opatřeními předepsanými správnou laboratorní praxí.
Čerstvé sérum lze skladovat 4 dny při +2 °C až +8 °C. Séra je možné uchovávat
při -20 °C a lze je rozmrazit maximálně 3krát. Neskladujte vzorky v mrazácích s funkcí
vlastního rozmražování.
Rozmrazené vzorky je potřeba před použitím důkladně protřepat. Kvalita vzorku
může být vážně narušena kontaminací, která vede k chybným výsledkům.
Nepoužívejte silně lipemické, ikterické, hemolytické nebo kontaminované vzorky.
Test nelze použít na lidskou plazmu.
9
Pracovní postup.
1. Otevřete balení, vyjměte požadovaný počet jednorázových testů a zbytek
uzavřete zpět do sáčku poté, co vytlačíte vzduch.
2. Zkontrolujte stav jednorázového testu (viz 7 Technické připomínky).
3. Pipetujte 50 μl neředěného séra do pozice 1 každého testu. Při každé změně
šarže soupravy použijte jednorázový test pro kalibraci.
4. Jednorázový test umístěte do přístroje. Proveďte kalibraci (je-li nutná) a vlastní
stanovení podle pokynů uvedených v návodu k obsluze Chorus přístroje.
10 Validita testu
Pomocí kontrolního séra ověřte správnost získaných výsledků. Použijte je v souladu
s instrukcemi uvedenými v návodu na obsluhu. Pokud test ukáže, že se hodnota
kontrolního séra pohybuje mimo přijatelné rozmezí, kalibraci je třeba opakovat.
Předchozí výsledky budou automaticky opraveny.
Pokud je výsledek kontrolního séra i nadále mimo přijatelné rozmezí, kontaktujte
prosím:
Tel:
+39-0577-587121 (technická podpora)
Tel:
+39-0577-587154
8/12
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012
CHORUS dsDNA-G
CZ
11 Hodnocení výsledků
Přístroj Chorus vyjadřuje výsledky v jednotkách IU/ml (WHO/80) vypočítané na
základě grafu, který je uložený k příslušné šarži v přístroji. Hodnocení výsledků je
popsáno v tabulce (Tabulka 1).
Tabulka 1 Hodnocení výsledků
IU/ml
Hodnocení
menší než 20
negativní
20 až 30
hraniční
větší než 30
pozitivní
V případě hraničního výsledku zopakujte test. Pokud zůstává test nadále hraniční, je
vhodné opakovat z nového odběru.
12 Interpretace výsledků
Všechny pozitivní výsledky vyžadují pečlivou interpretaci. Test nelze použít pouze
jako jedinou metodu pro stanovení klinické diagnózy. Serologický nález je třeba vždy
interpretovat pouze v kontextu s výsledky ostatních laboratorních testů a s klinickým
obrazem pacienta.
13 Kalibrační rozmezí
Kalibrační rozmezí se pohybuje v oblasti 10 až 150 IU/ml. Jestliže se objeví vzorky
s výsledkem stanovení nad 150 IU/ml je nutné tyto vzorky naředit Negativní
kontrolou/Ředicím roztokem vzorků (
83607).
14 Referenční rozmezí
V normální populaci (testováno na 120 sérech) se očekávané hodnoty titrů
protilátek pohybují na rozmezí 10 až 19,8 IU/ml.
15 Charakteristika soupravy
15.1 Analytická specifita
Analytická specifita byla testována na 5 vzorcích (2 negativní, 1 CUT-OFF, 2 pozitivní)
obsahujících potenciálně interferující látky:
 Revmatoidní faktor (44 až 220 IU/ml)
 Bilirubin (4,5 až 45 mg/dl)
 Triglyceridy (10 až 250 mg/dl)
 Hemoglobin (5 až 30 mg/ml)
9/12
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012
CHORUS dsDNA-G
CZ
Přítomnost interferujících látek v testovaných vzorcích nemá vliv na výsledek testu.
15.2 Zkřížená reaktivita
Byly testovány vzorky pozitivní na ASCA, Cenp-B, Jo-1, MPO, PR3, kardiolipin,
AMA-M2 U1-70 RNP, Scl-70, Sm, SS-A, SS-B, tTg. Nebyla prokázána žádná významná
zkřížená reaktivita.
15.3 Diagnostická citlivost a specifita
Pro stanovení citlivosti a specifity bylo využito srovnání výsledků na jiné referenční
soupravě. Bylo testováno 159 vzorků. Výsledky srovnání jsou uvedeny v tabulce
(Tabulka 2).
Tabulka 2 Výsledky srovnání zařazení testovaných vzorků
Referenční souprava
DIESSE
Pozitivní
Negativní
Celkem
Pozitivní
16
4
20
Negativní
1
138
139
Celkem
17
142
159
Souprava vykazuje 97,2% specifitu (CI95% 93 až 98,9) a 94,1% citlivost
(CI95% 72,9 až 98,8).
15.4 Přesnost měření
 Intra-assay a Inter-assay: testované vzorky byly opakovaně změřeny; průměr
naměřených hodnot, variační koeficient (%) jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 3).
Tabulka 3 Intra-assay a Inter-assay stanovení
Intra-assay
Vzorek
Inter-assay
Průměr (IU/ml)
Variační koeficient
(%)
Průměr IU/ml)
Variační koeficient
(%)
1
14,3
5,5
16,2
8,6
2
15,6
4,5
17,5
5,5
3
16
8,7
17,9
8,4
4
19,3
5,1
18,9
9,7
5
22,3
7,3
27,6
4,9
6
27
5,9
31,2
9,4
7
30,3
4,7
35,7
6,8
8
39,7
9,4
45,5
8,1
10/12
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012
CHORUS dsDNA-G
CZ
 Přesnost mezi jednotlivými šaržemi a přesnost mezi použitými přístroji: všechny
testované vzorky byly analyzovány; průměr naměřených hodnot, variační
koeficient (%) každého vzorku jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 4).
Tabulka 4 Přesnost mezi šaržemi a přesnost mezi přístroji
Přesnost mezi šaržemi
Vzorek
Přesnost mezi použitými přístroji
Průměr (IU/ml)
Variační koeficient
(%)
Průměr IU/ml)
Variační koeficient
(%)
1
13,1
5,5
13,1
0,9
2
16,1
6
16
4,2
3
15,6
5,8
15,6
4,9
4
20,3
0,5
20,3
2,2
5
25,2
4
25,2
4,5
6
26,6
7,1
26,6
0,5
7
32
8,4
32
4,7
8
43,7
8,1
43,7
1,7
16 Literatura
1.
2.
3.
4.
Itoh Y. and Reighlin M. (1992) Autoimmunity 14: 57-65.
Kalden JR (1988) In: Klinische Rheumatologie. Springer Verlag, Berlin.
Harley JB (1998) J. Autoimmun. 2 : 383-394.
Slobbe RL et al : (1991) Clin. Exp. Immunol. 86 : 99-105.
11/12
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012
CHORUS dsDNA-G
CZ
17 Vysvětlení symbolů
Datum výroby
Použít do data
Nepoužívat opakovaně
Čtěte přiložené dokumenty
Výrobce
Počet testů
Skladovací teplota
Čtěte návod k použití
Biologická rizika
Katalogové číslo
Diagnostický zdravotnický prostředek in vitro
Číslo šarže
Diesse Diagnostica Senese
Via delle Rose 10
53035 Monteriggioni (Siena) – Italy
Tel. 0577-587111
12/12
IO-09/219-C; IFU 86032 – Ed. 02.08.2012