Detekce okultního krvácení ve stolici - screening

ABSTRAKT
DETEKCE OKULTNÍHO
KRVÁCENÍ VE STOLICI A
SCREENING
KOLOREKTÁLNÍCH
NÁDORŮ
Kocna P., Vaníčková Z., Krechler T.,
Kovářová J., Dvořák M., Beneš Z., Kohout P.,
Granátová J.
Ústav klinické
klinické biochemie a laboratorní
laboratorní diagnostiky,
diagnostiky,
4.interní
4.interní klinika 1.LF UK a VFN, Oddě
Oddělení
lení klinické
klinické
biochemie,
biochemie, 2.interní
2.interní klinika FTN, Praha
ANALYZÁTOR OC-SENZORμ
OC
SENZORμ
OC-SENZORμ
IMUNOCHEMICKÉ TESTY
Studie porovnávající imunochemické FOBT testy s testem Haemoccult
Jednotný protokol všech studií provedených v letech 1990 - 2005
Porovnány FOBT testy ImmoCare, HemeSelect, Hemolex, ActimFB a Hexogon OBTI
Referenční hodnotou bylo vždy klinické hodnocení totální kolonoskopie
FOB TEST
n
Haemoccult®
ImmoCare®
HemeSelect®
Hemolex®
Actim FB®
Hexagon OBTI®
SEN.(%) SPEC.(%) PŘES.(%)
251
251
104
55
213
225
28.7
62.1
49.3
48.6
55.7
68.4
98.4
94.9
72.4
90.0
93.6
88.5
• automatizovaný analyzátor FOBT
• latex agglutinační imunoturbidimetrie
• polyklonální protilátky k Hb A0 IgG
• rozsahu měření: 20 - 2000 ng Hb/ml
• zdroj světla: LED 660nm
• detektor: křemíková fotodioda
• kyvety: 5mm akrylové
• termostat systému: 37oC
• termostat reagencií: 25oC
• kapacita zásobníku: 10 kyvet
• rychlost analýzy: 80 testů za hodinu
• kapacita paměti: 999 testů
• bar code reader
• termální tiskárna
1.6
5.1
27.6
10.0
6.4
11.5
Ferkl
-151
149
Ferkl M.,
M., Kocna
Kocna P.,
P., Frič
Frič P.
P. -- Časopis
Časopis lékařů
lékařů českých,
českých, 1992,
1992, 131,
131, 5,
5, 149149-151
Benešová
ka V.,
Vokráč
Benešová A.,
A., Frič
Frič P.,
P., Zavoral
Zavoral M.,
M., Kocna
Kocna P.,
P., Matějovič
Matějovič F.,
F., Vokráčka
Vokráčka
V., Mareš,
Mareš, K.
K.
Čas.lék.čes.,
-525
523
Čas.lék.čes., 1993,
1993, 132,
132, 17,
17, 523523-525
Dvořák
-219
217
Dvořák M.,
M., Kocna
Kocna P.,
P., Vaníčková,
Vaníčková, Z.
Z. -- Časopis
Časopis lékařů
lékařů českých,
českých, 2002,
2002, 141;
141; 7,
7, 217217-219
Dvorak
- Facharzt,
-22
Z.
21
Dvorak M.,
M., Kocna
Kocna P.,
P., Vanickova
Vanickova Z.Z.Facharzt, 2003,
2003, 2:
2: 2121-22
STUDIE SYMPTOMATICKÝCH OSOB
ng Hb/ml
iFOBT
iFOBT -- OC
OC Micro
Micro -- Eiken
Eiken
ccut-off
utut-off 75
75 ng/ml
ng/ml
1600
697
697 -- 1477
1477 ng/ml
ng/ml
mean
mean 1087
1087 ng/ml
ng/ml
1000
315
315 -- 654
654 ng/ml
ng/ml
mean
mean 485
485 ng/ml
ng/ml
800
600
140
140 -- 263
263 ng/ml
ng/ml
mean
mean 202
202 ng/ml
ng/ml
400
200
25
25 -- 45
45 ng/ml
ng/ml
mean
mean 35
35 ng/ml
ng/ml
0
NORMAL
NORM AL
ADENOM
ADV.ADENOM
CANCER
Levi
Levi Z.,Rozen
Z.,Rozen P.,Hazazi
P.,Hazazi R.,Vilkin
R.,Vilkin A.,Waked
A.,Waked A.,Maoz
A.,Maoz E.,Birkenfeld
E.,Birkenfeld S.,Leshno
S.,Leshno M.,Niv
M.,Niv Y.
Y.
Ann
-255
2007;146:244
Ann Intern
Intern Med.
Med. 2007;146:2442007;146:244-255
A
ctal Neoplasia
Colore
A Quantitative
Quantitative Immunochemical
Immunochemical Fecal
Fecal Occult
Occult Blood
Blood Test
Test for
for Colorectal
Colorectal
Neoplasia
STUDIE SYMPTOMATICKÝCH OSOB
Studie 4.interní kliniky VFN a 1.LFUK a 2.interní kliniky FTN Praha.
462 pacientů indikovaných ke kolonoskopii bylo vyšetřeno dvěma qi_FOBT testy
393 pacientů bylo vyšetřeno totální kolonoskopií a bylo statisticky vyhodnoceno
225 pacientů tvoří kontrolní skupinu, normální nález na kolonoskopii (včetně hemeroidů)
89 pacientů tvoří skupinu s drobnými polypy a adenomy do 10mm
35 pacientů tvoří skupinu s pokročilými adenomy, polypy > 10mm a karcinomy
Senzitivita, specificita a přesnost je vypočtena pro screeningový program
detekce pokročilých adenomů a karcinomů proti kontrolní skupině.
qi_FOBT TEST
SEN.(%) SPEC.(%) PŘES.(%)
FAL.+(%)
50 ng/ml
75 ng/ml
100 ng/ml
125 ng/ml
150 ng/ml
88.57
88.57
85.71
85.71
80.00
20.44
16.44
13.
13.33
12.00
11.11
79.56
83.56
86.
86.67
88.00
88.89
80.77
84.23
86.54
87.69
87.69
- identifikaci vzorku
čárovým kódem
- optimální odběr stolice
plastovým kartáčkem
- eliminaci stolice
plastovým septem
- filtraci extraktu
nylon filtrem
- ochranu odběrové jamky
hliníkovou fólií
iFOBT
iFOBT -- OC
OC Micro
Micro -- Eiken
Eiken
ccut-off
utut-off 100
100 ng/ml
ng/ml
RANDOMIZACE
1400
VYZVÁNO K TESTU
10 301
10 322
PARTICIPACE OSOB
4 836
6 157
339
103
280
600
POLYPY A KARCINOMY
80
218
400
POKR.ADENOMY A KARCINOMY
57
145
200
KOLOREKTÁLNÍ KARCINOM
11
24
¾ Automatizovaný analyzátor OC-Senzor-μ stanovuje hemoglobin latex agglutinační
imunoturbidimetrií s polyklonální protilátkou k Hb A0 IgG v rozsahu 20 - 2000 ng
Hb/ml. Kapacita analyzátoru (rychlost analýzy) je 80 testů za hodinu.
¾ Kvantitativní analýza umožňuje, oproti kvalitativním - rapid testům - definovat
optimální cut-off hodnotu testu a optimalizovat metodu jak pro screening tak pro
diagnostické účely.
¾ ROC křivky zahraničních studií prokazují specificitu pro pokročilé adenomy a
karcinomy 95.3% při citlivosti 100 ng Hb/ml.
¾ V lednu 2008 byly v České republice instalovány 3 analyzátory OC-Senzor-μ (EikenJapan). Za 6 měsíců jsme vyhodnotili 465 kolonoskopovaných pacientů a
prokázali jsme specificitu 86,7% a senzitivitu detekce pokročilých adenomů a
tumorů 85,71%.
¾ Senzitivita qi_FOBT testu 85,71% při cut-off 100 ng/ml je cca 3x vyšší než senzitivita
gFOBT. Shodné výsledky prokazuje holandská studie - 3x vyšší pozitivita
qi_FOBT testu než guajakového testu umožňující 3x vyšší záchyt kolorektálních
tumorů.
¾ Kvantitativní stanovení lidského hemoglobinu qi_FOBT je nejnovější metodou detekce
krve ve stolici a je vhodnou metodou screeningu kolorektálních nádorů.
¾ Studie jsou podporovány Eiken Chemical Co.Ltd.,Japan a Dialab spol.sro, Praha.
Poster je on-line ke stažení na adrese: http://ukb.lf1.cuni.cz/ppt/fons_fobt.pdf
ODBĚROVÁ LAHVIČKA
ODBĚROVÁ ŠPÁTLE
TEST NA PAPÍRKU
Imunochemické testy
PLASTOVÁ
KAZETA - TEST
- vysoká falešná pozitivita: až 27,6%
- specifický test na lidský hemoglobin
- hodnocení visuální, subjektivní
- cena výrazně vyšší než gFOBT
ODBĚROVÝ KARTÁČEK
VLOŽENÍ
ŽENÍ
VLO
VLOŽENÍ
VZORKU
VZORKU STOLICE
STOLICE
PERFORACE
PERFORACE
HLINÍKOVÉ
ÍKOVÉ FÓLIE
HLIN
HLINÍKOVÉ
FÓLIE
NÁSTŘIK
NÁSTŘIK 25
25 μμll
PRO
PRO ANALÝZU
ANALÝZU
IDENTIFIKAČNÍ
IDENTIFIKAČNÍ
ČÁROVÝ
ČÁROVÝ KÓD
KÓD VZORKU
VZORKU
KARTÁČEK
KARTÁČEK
PRO
PRO ODBĚR
ODBĚR STOLICE
STOLICE
iFOBT
iFOBT -- OC
OC Micro
Micro -- Eiken
Eiken
ccut-off
utut-off 100
100 ng/ml
ng/ml
mean
mean 953,9
953,9
ng/ml
ng/ml
KARCINOM,
POKROČILÉ
ADENOMY
mean
mean 851,6
851,6
ng/ml
ng/ml
TRANSFER
TRANSFER EXTRAKTU
EXTRAKTU
PŘES
PŘES FILTR
FILTR DO
DO
VZORKOVACÍ
VZORKOVACÍ JAMKY
JAMKY
OPTIMALIZACE CUT-OFF
CUT
CUT-OFF
90
HODNOTY
HODNOTY STUDIE
STUDIE
LEVI
LEVI -- ROZEN
ROZEN
800
117
ZÁVĚRY
SEPTUM
SEPTUM DEFINUJÍCÍ
DEFINUJÍCÍ
MNOŽSTVÍ
MNOŽSTVÍ STOLICE
STOLICE
1000
GE VYŠETŘENÍ
van
van Rossum,
Rossum, L.G.,
L.G., van
van Rijn,
Rijn, A.F.,
A.F., Laheij,
Laheij, R.J.,
R.J., van
van Oijen,
Oijen, M.G.,
M.G., Fockens,
Fockens, P.,
P.,
van
om
Rand
van Krieken,
Krieken, H.H.,
H.H., Verbeek,
Verbeek, A.L.,
A.L., Jansen,
Jansen, J.B.,
J.B., Dekker,
Dekker, E.,
E., Random
Random
Comparison
Comparison Of
Of Guaiac
Guaiac And
And Immunochemical
Immunochemical Fecal
Fecal Occult
Occult Blood
Blood Tests
Tests For
For
Colorectal
Colorectal Cancer
Cancer In
In A
A Screening
Screening Population
Population -- Gastroenterology
Gastroenterology (2008)
(2008)
- nízká senzitivita: 28,7%
- nespecifický chemický průkaz
- hodnocení visuální, subjektivní
- jednoduchý, levný test
FILTRAČNÍ
FILTRAČNÍ
VLOŽKA
VLOŽKA
1200
POZITIVNÍ FOBT TEST
Haemoccult test
Odběrové kazety qi_FOBT umožňují optimální řešení odběru vzorku stolice testovanou
osobou, eliminaci nadbytku stolice a zajištění extrakce vzorku stolice 10mg ± 10%,
filtraci extraktu před aplikací do analyzátoru, a nástřik 25μl extraktu do měřicí kyvety.
STUDIE SYMPTOMATICKÝCH OSOB
ng Hb/ml
1600
i-FOBT
TEST NA PAPÍRKU
ELIMINACE
ELIMINACE
NADBYTKU
NADBYTKU STOLICE
STOLICE
TRANSFER
TRANSFER 10
10 mg
mg
20 623 VZORKŮ
g-FOBT
TESTY gFOBT a iFOBT
ODBĚROVÝ SYSTÉM qi_FOBT
HLINÍKOVÝ
HLINÍKOVÝ UZÁVĚR
UZÁVĚR
PRO
PRO PERFORACI
PERFORACI
NÁSTŘIKOVOU
NÁSTŘIKOVOU JEHLOU
JEHLOU
Odběrové kazety qi_FOBT
jsou řešeny pro:
STUDIE ASYMPTOMATICKÝCH OSOB
1400
1200
ODBĚROVÝ SYSTÉM qi_FOBT
qi_FOBT
-Sensor μμ -- instalován
OC
qi_FOBT OCOC-Sensor
instalován (leden
(leden 2008)
2008) ::
Ústřední
Ústřední vojenská
vojenská nemocnice,
nemocnice, Fakultní
Fakultní Thomayerova
Thomayerova nemocnice
nemocnice
Všeobecná
Všeobecná fakultní
fakultní nemocnice
nemocnice
FAL.+(%)
71.7
82.0
55.8
63.7
77.9
80.0
Detekce okultního krvácení - FOB (Fecal Occult Blood) je v klinické praxi indikována především
jako screeningová metoda záchytu kolorektálních nádorů. Laboratorním analytem je hemoglobin, který je
detekován chemicky, immunochemicky nebo fluorescenčně, a to kvantitativně nebo kvalitativně.
Guajakové testy g_FOBT jsou založeny na chemickém principu oxidační reakce pseudoperoxidázové reaktivitě hemu. Výsledek testu může být ovlivněn přítomností jiných oxidačních látek,
hemoglobinu z potravy, falešně pozitivní výsledek může být způsoben i přítomností rostlinných peroxidáz.
Doporučeným testem je Haemoccult distribuovaný pro 6 odběrů stolice. Hodnocení je kvantitativní, vizuální,
vyhodnocením modrého zabarvení testovacího okénka. Specificita testu je velmi vysoká, falešná pozitivita v
našich studiích byla jen 1.6%, test má však velmi nízkou citlivost (cut-off je cca 5 mg Hb/g stolice) a v našich
studiích korelovaných na kolonoskopické nálezy je senzitivita 28.7%.
Imunochemické testy i_FOBT jsou založeny na metodě hemaglutinační, latexové imunoprecipitaci,
radiální imunodifúzi a imunoafinitní chromatografii. Detekce proteinu (lidského hemoglobinu) monoklonální
protilátkou vylučuje možnost ovlivnění jiným zdrojem hemoglobinu (potrava), odpadá interference chemických
látek, není nutná speciální dieta. V předchozích studiích jsme popsali analytické parametry (senzitivita,
specificita, falešná pozitivita) testů ImmoCare (62.1; 94.9; 5.1), HemeSelect (49.3; 72.4; 27.6), Hemolex
(48.6; 90.0; 10.0), Actim FB (55.7; 93.6; 6.4) a Hexagon OBTI (68.4; 88.5; 11.5).
Kvantitativní stanovení lidského hemoglobinu qi_FOBT je nejnovější metodou detekce krve ve
stolici. Metoda stanovuje hemoglobin s polyklonální protilátkou k Hb A0 IgG, automatická analýza je
prováděna turbidimetrickým měřením při 600 nm v rozsahu 20 - 2000 ng Hb/ml. Kvantitativní analýza
umožňuje, oproti kvalitatitivním - rapid testům - definovat optimální cut-off hodnotu. ROC křivky prokazují
specificitu pro pokročilé adenomy 95.3% při citlivosti 100 ng Hb/ml. V lednu 2008 byly v České republice
instalovány 3 analyzátory OC-Senzor-μ (Eiken-Japan).
Za 6 měsíců jsme vyhodnotili 465 kolonoskopovaných pacientů a prokázali jsme specificitu
86,7% a senzitivitu detekce pokročilých adenomů a tumorů 85,74%. Kvantitativní metoda qi_FOBT je
moderní, spolehlivou, a citlivou variantou screeningového testu okultního krvácení ve stolici.
SENZITIVITA
85
SPECIFICITA
80
PŘESNOST
75
70
mean
mean 33,2
33,2
ng/ml
ng/ml
mean
mean 72,4
72,4
ng/ml
ng/ml
65
0
NORM AL
ADENOM
ADV.ADENOM
CANCER
NORMÁLNÍ NÁLEZ
DROBNÉ POLYPY
Průměrné hodnoty v ng/ml pro skupinu kontrolní (normální nález), drobné polypy do
10mm, pokročilé adenomy >10mm, histologicky ověřené karcinomy tlustého střeva.
Studie 4.interní kliniky VFN a 1.LFUK a 2.interní kliniky FTN Praha.
462 pacientů indikovaných ke kolonoskopii bylo vyšetřeno dvěma qi_FOBT testy.
60
50
75
100
125
150
Kvantitativní stanovení hemoglobinu ve stolici metodou qi_FOBT umožňuje
optimalizovat pozitivitu testu vhodným nastavením cut-off hodnoty.
Zobrazena je hodnota specificity, senzitivity a přesnosti (accuracy) pro nastavení
50 - 75 -100 - 125 a 150 ng/ml Hb.