Monoclonal Mouse Anti-Human IMP3 Clone 69.1 Kód M3626

Monoclonal Mouse
Anti-Human IMP3
Clone 69.1
Kód M3626
Použití
K diagnostice in vitro.
Protilátka Monoclonal Mouse Anti-Human IMP3, Clone 69.1 je určena pro použití v imunohistochemii. Protilátka je
užitečnou pomůckou při identifikaci buněk exprimujících IMP3 v normálních a neoplastických tkáních. Klinickou
interpretaci jakéhokoli zabarvení nebo jeho nepřítomnosti se musí doplnit morfologickými studiemi s využitím
správných kontrol a je nutno ji vyhodnocovat v kontextu klinické anamnézy pacienta a jiných diagnostických
vyšetření provedených kvalifikovaným patologem.
Synonyma antigenu
KOC (doména K-homologie obsahující protein nadměrně exprimovaný v rakovině), L523S, IGF2BP3
Souhrn
a vysvětlení
IMP3 (inzulínu podobný růstový faktor II navázaný na mRNA protein 3) je onkofetální RNA vázající protein z 580
aminokyselin obsahující čtyři domény K-homologie, který je kódovaný transkripcí mRNA 4350 produkovaný genem
IGF2BP3 na chromozomu 7p11.5 (1, 2). Tento protein o molekulové hmotnosti 65 až 70 kD reguluje transkripce
inzulínu podobného růstového faktoru II (IGF-II) během embryogeneze a je později reexprimován v části
neoplastických buněk z různých typů nádorů včetně skvamózních buněk karcinomu plic a adenokarcinomu plic a
slinivky břišní (3-6). IMP3 byl původně identifikován během analýzy různě exprimovaných genů, která porovnávala
rakovinu slinivky břišní s normální slinivkou (1). Následně byl IMP3 izolován pomocí subtrakce knihovny cDNA a
technologie mikroarray, jako exprimovaný zejména v rakovině plic v porovnání s normálními plícemi (7). Transkripce
IMP3 byly rovněž detekovány v punkcích tenkou jehlou u pacientů s diagnózou kolorektálního karcinomu a
karcinomu slinivky břišní (8). Minimální exprese mRNA byla nalezena v mnoha normálních tkáních za použití rtPCR
a analýzy mikroarray (5). Bylo zjištěno, že subset rakovin exprimuje protein IMP3, včetně melanomu, mezoteliomu a
karcinomu močového měchýře, děložního hrdla, kolorekta, jícnu, jater, plic, slinivky břišní, žaludku a dělohy (9-19).
V kapitolách General Instructions for Immunohistochemical Staining (Obecné pokyny pro imunohistochemické
barvení) společnosti Dako nebo v návodu k detekčnímu systému pro IHC metody naleznete tyto části: 1) Princip
metody, 2) Potřebné materiály, které nejsou součástí dodávky, 3) Skladování, 4) Příprava vzorku, 5) Postup barvení,
6) Kontrola kvality, 7) Řešení problémů, 8) Interpretace zabarvení, 9) Obecná omezení.
Dodávaná činidla
Monoklonální myší protilátka se dodává v kapalné podobě jako supernatant buněčných kultur (obsahuje fetální
bovinní sérum) dialyzovaná proti 0,02 mol/L PBS, pH 6,0 a s obsahem 0,015 mol/L azidu sodného. Tento produkt
obsahuje stabilizující protein.
Klon: 69.1(4). Izotyp: IgG2a, kappa.
Koncentrace myší IgG v mg/L: Viz štítek na lahvičce.
Proteinová koncentrace mezi šaržemi se může lišit bez ohledu na optimální ředění. Titr každé konkrétní šarže je
upraven, aby byla zajištěna srovnatelná účinnost imunohistologického zabarvení v rámci jednotlivých šarží.
Imunogen
Rekombinantní purifikovaný protein kódovaný aminokyselinami 2-580 (4).
Specificita
Interní studie prokázaly metodou Western blots s buněčným lyzátem A549 lidského karcinomu plic za použití antiIMP3 pruh o velikosti 70 kD, který odpovídá indikované molekulové hmotnosti proteinu IMP3 (1, 5). Byl rovněž
identifikován slabý pruh s menší molekulovou hmotností 48 kD. Za účelem zjištění imunoreaktivity s rekombinantním
proteinem IMP3 byla též testována monoklonální myší anti-IMP3 metodou ELISA.
Bezpečnostní
opatření
1.
Určeno pro profesionální uživatele.
2.
Tento výrobek obsahuje azid sodný (NaN3), který je v čisté formě vysoce toxický. Přestože se koncentrace
azidu sodného ve výrobku neklasifikuje jako nebezpečná, může reagovat s olovem a mědí v odpadním potrubí
a vytvářet vysoce explozivní azidy těchto kovů. Při likvidaci splachujte dostatečným množstvím vody, aby
nedocházelo k usazování azidů kovů v potrubí.
3.
Jako u každého výrobku biologického původu je nutno dodržovat řádná bezpečnostní opatření.
Skladování
(114336-003)
4.
Používejte odpovídající osobní ochranné prostředky, aby nedošlo k zasažení očí nebo pokožky.
5.
Nespotřebované roztoky je nutno likvidovat v souladu s místními a celostátními předpisy.
Skladujte při 2 – 8 °C. Nepoužívejte po datu exspirace vytišt ěném na lahvičce. Pokud se činidla skladují za
jakýchkoli jiných než uvedených podmínek, musí uživatel tyto podmínky ověřit. Neexistují žádné známky toho, že by
tyto produkty byly nestabilní. Proto je nutno provádět pozitivní a negativní kontroly současně s pacientovými vzorky.
Pokud zpozorujete neočekávané zabarvení, které nelze vysvětlit změnami laboratorních postupů a máte podezření,
že se jedná o problém s protilátkou, obraťte se na technickou podporu společnosti Dako.
306573CZ_004 str. 1/4
Příprava vzorku
včetně potřebných
materiálů, které
nejsou součástí
dodávky
Parafinové řezy:
Protilátku lze používat ke značení řezů tkání zalitých v parafínu a fixovaných ve formalínu. Předchozí zpracování
tkání proteolytickými enzymy se nedoporučuje.
Deparafinované řezy musí být před IHC barvením zahřáty. Při tepelně indukovaném vyhledávání epitopu (HIER) se
řezy tkáně ponořují do předehřátého pufrového roztoku a ve vodní lázni se udržuje teplota (95–99 °C). Používají-li se
pro HIER jiné než doporučené zdroje tepla, je třeba jejich účinnost ověřit. Pro test HIER prováděný při teplotě
95 – 99 °C použijte 40 minutový protokol oh řevu; po tepelném zpracování nechejte nádobu s pufrem a skly
chladnout 20 minut při pokojové teplotě. Po testu HIER důkladně vypláchněte pufrem nebo deionizovanou vodou.
Doporučuje se používat Target Retrieval Solution pH 9 (kód S2368) nebo 10x Concentrate (kód S2367).
Tkáňové řezy nesmí během zpracování nebo během následného imunohistochemického barvení vyschnout.
Z důvodu vyšší přilnavosti řezů tkání k podložním sklům se doporučuje používat silanizovaná podložní skla Dako
Silanized Slides (kód S3003).
Zmrazené řezy a buněčné nátěry:
Protilátku lze používat ke značení zmrazených řezů fixovaných v acetonu a buněčných nátěrů.
Postup barvení
včetně potřebných
materiálů, které
nejsou součástí
dodávky
Ředění: Protilátku Monoclonal Mouse Anti-Human IMP3, kód M3626 lze ředit v ředicím poměru 1:100 při použití na
řezech předem zpracovaných, fixovaných ve formalínu a zalitých v parafínu při inkubování v délce 30 minut při
pokojové teplotě. Doporučuje se protilátku ředit roztokem Dako Antibody Diluent s komponenty BackgroundReducing Components, kód S3022. Toto jsou pouze obecné pokyny. Optimální podmínky se mohou lišit v závislosti
na vzorku a způsobu přípravy a měly by být v každé laboratoři stanovovány samostatně. Doporučené činidlo pro
negativní kontrolu je Dako Negative Control, Mouse IgG2a (kód X0943), zředěné na stejnou koncentraci myší IgG
jako primární protilátka. Pokud nebyla stanovena stabilita naředěné protilátky a negativní kontroly v stávajícím
postupu barvení, doporučuje se naředit tato činidla bezprostředně před použitím. Pozitivní a negativní kontroly je
třeba provádět současně s pacientovými vzorky.
Vizualizace: Doporučuje se Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse (kód K4061), Dako
EnVision™+ System/HRP, Mouse (kódy K4000/K4001/K4006/K4007). Dodržujte postup přiložený ke zvolenému
vizualizačnímu systému.
Automatizace: Protilátka je vhodná pro imunohistochemické barvení pomocí automatických přístrojů, například na
barvicích automatech Dako Autostainer, Autostainer Plus a Autostainer Link.
Interpretace
zabarvení
Buněčný obrazec po obarvení pro anti-IMP3 je převážně cytoplazmatický, s ojedinělým nukleárním a membránovým
zabarvením (4,20).
Charakteristiky
účinnosti
Normální tkáně (20):
Anti-IMP3 barví imunologicky řadu typů normálních buněk, přičemž intenzita zabarvení většiny typů pozitivních
buněk je převážně nízká. Intenzivní imunologické zabarvení bylo pozorováno v oocytech vaječníku, glandulárním
epitelu žaludku a skvamózním epitelu a v buňkách zárodečného centra tonzily. (20)
Typ tkáně (testovaný počet)
(114336-003)
Pozitivně zabarvené prvky tkání
Nadledvina (3)
3/3 kortikální buňky nadledviny (< 5 - 50 %), cytoplazmatické
Prs (3)
3/3 duktální a lobulární epiteliální buňky (< 5 - 20 %),
cytoplazmatické
Kostní dřeň (3)
0/3
Mozek/malý mozek (3)
3/3 granulární vrstvy buněk (100 %), cytoplazmatické
Mozek/velký mozek (3)
0/3
Děložní hrdlo (3)
1/3 endocervikální buňky (100%), cytoplazmatické
Tračník (3)
3/3 glandulární epiteliální buňky (70 %), cytoplazmatické
Jícen (3)
1/3 skvamózní buňky sliznice (< 5 %), cytoplazmatické
Srdce (3)
0/3
Ledvina (3)
0/3
Játra (3)
0/3
Plíce (3)
3/3 bronchiální epiteliální buňky (90 %), cytoplazmatické
Nerv (3)
0/3
Vaječník (3)
2/3 oocyty (100 %), cytoplazmatické a nukleární;1/3 granulózní
buňky (100 %), cytoplazmatické
Slinivka břišní (3)
3/3 ostrůvkové buňky 2/3 (100 %), cytoplazmatické a membránové;
1/3 jadérka (30 %), cytoplazmatické
Příštitná tělíska (3)
0/3
Osrdečníkové mezoteliální buňky (2)
2/2 (100 %), cytoplazmatické
Hypofýza (3)
3/3 pituicyty (20 - 60 %), cytoplazmatické
Prostata (3)
0/3
Slinná žláza (3)
0/3
Kosterní sval (3)
0/3
306573CZ_004 str. 2/4
Kůže (3)
1/3 epiteliální buňky vlasových folikulů (40 %), cytoplazmatické
Tenké střevo (3)
0/3
Slezina (3)
0/3
Žaludek (3)
3/3 glandulární epiteliální buňky (< 10 - 30 %), cytoplazmatické
Varlata (3)
3/3 spermatogonie (50 %), Sertoliho buňky (90 %), cytoplazmatické
a nukleární
Brzlík (3)
3/3 epiteliální buňky brzlíku (100 %), cytoplazmatické
Štítná žláza (3)
0/3
Mandle (3)
3/3 buňky zárodečného centra (70 %), skvamózní epiteliální buňky
(30 %), cytoplazmatické
Děloha (3)
2/3 endometriální buňky (< 5 - 60 %), cytoplazmatické
Abnormální tkáně (4, 9 -19):
(114336-003)
Typ tkáně (testovaný počet)
Pozitivně zabarvené nádory
Anální karcinom (10)
2/10
Karcinom močového měchýře (115)
58/115
Karcinom prsu (26)
2/26
Cervikální karcinom (9)
5/9
Cholangiokarcinom (4)
3/4
Kolorektální karcinom (37)
18/37
Karcinom jícnu (14)
10/14
Endometriální karcinom (174)
77/174
Karcinom jater (395)
259/395
Karcinom plic (30)
22/30
Melanom (27)
23/27
Mesotheliom (11)
10/11
Neuroendokrinní karcinom, extrapulmonární (53)
47/53
Neuroendokrinní karcinom, pulmonární (14)
14/14
Karcinom slinivky břišní (98)
91/98
Karcinom příštítného tělíska (3)
0/3
Karcinom renálních buněk (24)
3/24
Karcinom slinné žlázy (10)
0/10
Karcinom žaludku (25)
15/25
Karcinom štítné žlázy (24)
4/24
Cervikální karcinom dělohy (44)
41/44
306573CZ_004 str. 3/4
Reference
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
Mueller-Pillasch F, Lacher U, Wallrapp C, Micha A, Zimmerhackl F, Hameister H, Varga G, Friess H, Buchler M,
Beger HG, Vila MR, Adler G, Gress TM. Cloning of a gene highly overexpressed in cancer coding for a novel
KH-domain containing protein. Oncogene 1997;14(22):2729–33
Nielsen J, Christiansen J, Lykke-Andersen J, Johnsen AH, Wewer UM, Nielsen FC. A family of insulin-like
growth factor II mRNA-binding proteins represses translation in late development. Mol Cell Biol
1999;19(2):1262–70
Mueller-Pillasch F, Pohl B, Wilda M, Lacher U, Beil M, Wallrapp C, Hameister H, Knochel W, Adler G, Gress
TM. Expression of the highly conserved RNA binding protein KOC in embryogenesis. Mech Dev 1999;88(1):95–9
Yantiss RK, Woda BA, Fanger GR, Kalos M, Whalen GF, Tada H, Andersen DK, Rock KL, Dresser K. KOC (K
homology domain containing protein overexpressed in cancer): a novel molecular marker that distinguishes
between benign and malignant lesions of the pancreas. Am J Surg Pathol 2005;29(2):188–95
Wang T, Fan L, Watanabe Y, McNeill PD, Moulton GG, Bangur C, Fanger GR, Okada M, Inoue Y, Persing DH,
Reed SG. L523S, an RNA-binding protein as a potential therapeutic target for lung cancer. Br J Cancer
2003;88(6):887–94
Monk D, Bentley L, Beechey C, Hitchins M, Peters J, Preece MA, Stanier P, Moore GE. Characterisation of the
growth regulating gene IMP3, a candidate for Silver-Russell syndrome. J Med Genet 2002;39(8):575–81
Wang T, Hopkins D, Schmidt C, Silva S, Houghton R, Takita H, Repasky E, Reed SG. Identification of genes
differentially over-expressed in lung squamous cell carcinoma using combination of cDNA subtraction and
microarray analysis. Oncogene 2000;19(12):1519–28
Mueller F, Bommer M, Lacher U, Ruhland C, Stagge V, Adler G, Gress TM, Seufferlein T. KOC is a novel
molecular indicator of malignancy. Br J Cancer 2003;88(5):699–701
Istvanic S, Fanger GR, Fraire AE, Khan A, Li C, Yantiss, RK. Spectrum of KOC (K Homology Domain
Containing Protein Over-Expressed in Cancer) immunostaining among carcinomas of different sites. Mod
Pathol 2005;18(S1):298A–9A
Pryor JG, Bourne PA, Yang O, Spaulding BO, Scott GA, Xu H. IMP-3 is a novel progression marker in
malignant melanoma. Mod Pathol 2008;21(4):431-7.
Hanley KZ, Facik MS, Bourne PA, Yang O, Spaulding BO, Bonfiglio TA, Xu H. Utility of anti-L523S antibody in
the diagnosis of benign and malignant serous effusions. Cancer 2008;114(1):49-56.
Jeng YM, Chang CC, Hu FC, Chou HY, Kao HL, Wang TH, Hsu HC. RNA-binding protein insulin-like growth
factor II mRNA-binding protein 3 expression promotes tumor invasion and predicts early recurrence and poor
prognosis in hepatocellular carcinoma. Hepatology 2008;48(4):1118-27.
Zheng W, Yi X, Fadare O, Liang SX, Martel M, Schwartz PE, Jiang Z. The oncofetal protein IMP3: a novel
biomarker for endometrial serous carcinoma. Am J Surg Pathol 2008;32(2):304-15.
Li C, Rock KL, Woda BA, Jiang Z, Fraire AE, Dresser K. IMP3 is a novel biomarker for adenocarcinoma in situ
of the uterine cervix: an immunohistochemical study in comparison with p16INK4a expression. Mod Pathol
2007;20:242-7.
Li L, Xu H, Spaulding BO, Cheng L, Simon R, Yao JL, di Sant’Agnese PA, Bourne PA, Huang J. Expression of
RNA-binding protein IMP3 (KOC) in benign urothelium and urothelial tumors. Hum Pathol 2008;39(8):1205-11.
Ligato S, Zhao J, Mandich D, Cartun RW. KOC (K homology domain containing protein overexpressed in
cancer) and S100A4-protein immunoreactivity improves the diagnostic sensitivity of biliary brushing cytology for
diagnosing pancreaticobiliary malignancies. Diagn Cytopathol 2008;36(8):561-7.
Xu H, Bourne PA, Spaulding BO, Wang HL. High-grade neuroendocrine carcinomas of the lung express K
homology domain containing protein overexpressed in cancer but carcinoid tumors do not. Human Pathol
2007;38:555-63.
Zhao H, Mandich D, Cartun RW, Ligato S. Expression of K homology domain containing protein overexpressed
in cancer in pancreatic FNA for diagnosing adenocarcinoma of pancreas. Diagn Cytopathol 2007;35(11):700-4.
Simon R, Bourne PA, Yang Q, Spaulding BO, di Sant’Agnese PA, Wang HL, Xu H. Extrapulmonary small cell
carcinomas express K homology domain containing protein overexpressed in cancer, but carcinoid tumors do
not. Human Pathol 2007;38:1178-83.
IHC003 Report On File
Vydání 12/08
(114336-003)
306573CZ_004 str. 4/4