E.coli Blister

Rapid-VIDITEST
E.coli Blister
(Jednokrokový blisterový test pro in vitro diagnostiku Escherichia coli O157:H7 )
Návod k použití soupravy
Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č. 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, ČR, tel: 261 090 565,
www.vidia.cz
POUŽITÍ:
Rapid-VIDITEST E.coli Blister je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro
kvalitativní detekci Escherichia coli O157:H7 ve stolici.
ÚVOD:
Infekce bakterií Escherichia coli O157:H7 (Enterohemoragická E.coli )se projevuje širokým
spektrem klinických manifestací zahrnujících asymptomatický průběh, průjem, hemoragické
kolitidy, hemolyticko-uremický syndrom, trombotickou nebo trombocytopenickou purpuru.
E.coli O157:H7 je významným agens nejen při hemoragických kolitidách, ale je také jednou
z hlavních příčin bakteriálních průjmů. Přenáší se nejčastěji špatně upravenými potravinami,
zejména nedovařeným masem a mléčnými produkty, významný je také sekundární přenos při
kontaktu s infikovanou osobou. Organismus produkuje nejméně dva toxiny podobné Shiga
toxinům. Tyto toxiny mají pravděpodobně přímý patogenní význam v infekci E.coli
O157:H7. Tato infekce je obvykle diagnostikována na základě pozitivní kultivace stolice
nebo na základě přítomnosti Shiga toxinů, případně z kombinace obou stanovení. Včasný
odběr vzorků stolice pro kultivaci (do 7 dnů od nástupu onemocnění) je pro správný výsledek
zásadní. Rapid-VIDITEST E.coli Blister umožňuje rychlou detekci E.coli O157:H7 přímo ze
vzorků stolice.
PRINCIP TESTU:
Rapid-VIDITEST E.coli Blister je blisterový kvalitativní imunochromatografický test pro
stanovení E.coli O157:H7 ve stolici. Na testovacích zónách membrány blisteru jsou navázány
myší polyklonální protilátky, které rozpoznávají tento sérotyp (myší polyklonální protilátky
proti O157:H7 antigenům).
V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na
membráně (anti-E.coli O157:H7 protilátky – červená mikrosféra). Směs pak kapilárním
efektem vzlíná vzhůru po membráně blisteru. V případě pozitivního výsledku je barevný
konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve „výsledkové zóně“ projeví jako
barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v „kontrolní
zóně“, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje:
1) že se použil dostatečný objem vzorku,
2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku,
3) interní kontrolu reagencií.
1
OBSAH SOUPRAVY:
-
Testovací blistery
Odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky
Návod k použití
Certifikát kontroly balení
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU
-
Nádoba na sběr vzorků
Zkumavky nebo lahvičky
Jednorázové rukavice
Stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ:
Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout co nejdříve po
odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1 - 2 dny před
testováním v chladničce při 2 - 4°C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se
měly vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28°C. Před použitím nechte vzorky
vytemperovat na laboratorní teplotu.
Příprava vzorků
1) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (stool collection tube) (obr. 1)
a pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku
stolice. V případě, že je vzorek tekutý, odeberte 100 μl a pipetujte do odběrové zkumavky
(obr. 2).
2) Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku.
Za účelem dobré homogenizace vzorku zkumavku důkladně promíchejte (obr. 3).
2
PRACOVNÍ POSTUP:
Před testováním nechte testovací blister, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na
laboratorní teplotu (15 - 30°C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test.
Pro provedení testu můžete zvolit postup označený A nebo B.
A. Aplikace kapky vzorku z odběrové zkumavky na blister
1. Po vytemperování blisteru otevřete obalovou folii v označeném místě.
2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré
homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky .
3. Těsně před použitím vyjměte blister Rapid-VIDITEST E.coli Blister z obalové folie
a položte ho na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny
a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou
zkumavku a blister.
4. Aplikujte přesně 5 kapek (150 μl) naředěného vzorku z odběrové zkumavky na bílý konec
blisteru (zóna pro aplikaci vzorku – sample region) (obr. 4).
5. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem.
B. Ponořením blisteru do zkumavky
1. Po vytemperování blisteru otevřete obalovou folii v označeném místě.
2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré
homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky.
3. Přeneste 10 kapek vzorku homogenizovaného v ředicím roztoku z odběrové zkumavky do
čisté lahvičky nebo zkumavky. Ponořte testovací blister bílým koncem do zkumavky
(obr. 5). Neponořujte blister hlouběji než po rysku vyznačenou pod bílými šipkami
(sample region – viz obr. 6).
4. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem.
3
INTERPRETACE VÝSLEDKU:
Vzorky se aplikují na bílý konec blisteru. Výsledky se odečítají v prostředním bílém okénku.
Úsek tohoto okénka blíže k bílému konci blisteru se nazývá „výsledková zóna“. Úsek okénka
dále od bílého konce se nazývá „kontrolní zóna“.
Obr.6
Kontrolní
zóna
Výsledková
zóna
Zelená
Červená
Červená
Zóna pro
nanesení
vzorku
E.coli O157:H7
pozitivní
E.coli O157:H7
negativní
Neplatný
Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna zůstane
čistá.
E.coli Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně se objeví také červená linka ve
výsledkové zóně.
Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví zelená linka bez ohledu na
přítomnost červené ve výsledkové zóně. Nejčastějšími příčinami selhání testu
jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií.
Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže
přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele.
Poznámka k interpretaci výsledku:
Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve
vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst
v průběhu onemocnění.
4
PLATNOST TESTU:
Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit
interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu.
Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu.
OMEZENÍ TESTU:
1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu blisteru.
2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se
hnědé linky). V tomto případě řeďte vzorek ředicím roztokem a opakujte test.
3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky.
4. Negativní výsledek testu může znamenat, že ve vzorku je příliš nízké množství E.coli.
V tomto případě doporučujeme diagnostiku doplnit kultivací stolice.
5. Výsledky tohoto testu pouze naznačují přítomnost bakteriální infekce. Lékař by měl
diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce.
6. Výrobce nezaručuje funkčnost testu po uplynutí exspirační doby.
ÚČINNOST TESTU:
Hodnocení účinnosti
tohoto testu bylo provedené tak, že výsledky získané
Rapid-VIDITEST E.coli Blister testem byly porovnány takto: citlivost tohoto testu byla
porovnána s citlivostí získanou při kultivaci stolice, specifita byla hodnocena při testování
vzorků, které obsahovaly organismy produkující Shiga toxiny a organismy neprodukující
Shiga toxiny, a vzorků od pacientů s infekcí Enterobakteriemi. Tyto vzorky byly
charakterizované španělskou referenční laboratoří pro E.coli.
Citlivost:
Detekce E.coli O157:H7 vykazovala 100% shodu v citlivosti.
Specificita:
Detekce E.coli O157:H7 vykazovala 85% shodu ve specificitě.
Pozitivní prediktivní hodnota je 70%, negativní prediktivní hodnota 100%
Přesnost testu je 94%.
SKLADOVÁNÍ A STABILITA:
Skladujte v originálním obalu při teplotě 2 - 30°C. Test je stabilní do data expirace uvedeného
na obalu. Nezmrazujte.
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ:
-
Pouze pro in vitro diagnostiku
Nepoužívejte po uplynutí expirační doby.
Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem.
Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy.
5
REFERENCE:
1. THOMPSON, J., HODGE, D. and BORCZYK, A.; “Rapid Biochemical Test to Identify
Verocytotoxin-Positive Strains of Escherichia coli Serotype O157”; Journal of Clinical
Microbiology, Oct. 1990, Vol. 28, No. 10, pp 2165-2168.
2. VALLANCE B.A. and FINLAY B.B., “Exploitation of host cells by enteropathogenic
Escherichia coli”, PNAS, August 2000, Vol. 97, No. 16, pp. 8799-8806.
3. BLANCO, M. et al. “ Escherichia coli Verotoxigénicos (ECVT) en Espana: ECVT
O157:H7 y NO-O157 en humanos y alimentos. El ganado bovino y ovino como reservorio.
Técnicas para detección de ECVT” Laboratorio de Referencia de Escherichia coli (LREC),
Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Veterinaria, Universidad de
Santiago de Compostela, 27002 Lugo.
POUŽITÉ SYMBOLY:
Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Datum expirace
Výrobce
Poslední revize tohoto návodu: 11/2010
6