CERULOPLASMIN

CERULOPLASMIN
KVANTITATIVNÍ IMUNOTURBIDIMETRICKÉ STANOVENÍ CERULOPLASMINU V SÉRU.
Návazný na ERM 470 (CRM 470)
200 testů (2 x 20 ml)
SHRNUTÍ
Ceruloplasmin je bílkovina, která je hlavním nosičem mědi v těle. Řídí
zejména přenos mědi mezi enzymy na ní závislé (cytochrom C oxidáza,
tyrosináza) a homeostázou mědi; je také katalyzátorem oxidace železa,
umožňuje spojení mezi transferinem a ionizovaným železem.
Ceruloplasmin může použít svoji slabou oxidační aktivitu k prevenci
lipidické peroxidace, která je vyvolaná ionizovaným železem a mědí.
Ceruloplasmin je bílkovina akutní odpovědní fáze a zvyšuje se během
zánětlivých procesů, některých infekcí, neoplazie, leukémie a Hodgkinova
lymfonu.
Snížené hodnoty ceruloplasminu se mohou vyskytovat u většího počtu
pacientů s Wilsonovou nemocí, vzácných a vážných variant metabolismu
mědi s nedostatky v mozku, ledvinách, játrech a rohovce. Lehce snížená
hodnota může být při podvýživě a nefróze.
PRINCIP
Kvantitativní stanovení ceruloplasminu může být provedeno pomocí
imunoturbidimetrické metody, automatickým analyzátorem nebo manuálně.
Smícháním vzorku s přesným množstvím antigenu v roztoku, který má
odpovídající anti-sérum (antigen), v dobře definovaném poměru, vzniká
zákal; použití nezředěného vzorku vyžaduje bichromatické stanovení.
Použitím doporučeného vícebodového kalibrátoru, který je návazný na
mezinárodní standard CRM 470, je možné sestrojit příslušnou kalibrační
křivku, převážně ne přímočarou a nevycházející z počátku.
Každý vzorek je vyhodnocen na základě absorpčních hodnot z kalibrační
křivky.
OPATŘENÍ PRO POUŽITÍ
Tento produkt je určen pro in-vitro diagnostické použití.
Proporční změna reakčních objemů nemá vliv na výsledek.
Nemíchejte reagencie jiných šarží.
Pro koncentrace ceruloplasminu, které jsou vyšší než maximální
hodnota kalibrátoru (kat. č. CALPRO1) zřeďte vzorek 1:5 fyziologickým
roztokem, opakujte stanovení a vynásobte výsledek 5.
5. Kromě možných indikovaných rizik může reagencie obsahovat
konzervační látky (jako azid sodný nebo jiné), jejichž celková
koncentrace je nižší než limity uvedené v nařízení EU 67/458/CEE a
88/379/CEE a dalších změnách týkajících se klasifikace, označování a
balení nebezpečných přípravků (reagencií).
Nicméně je doporučeno manipulovat s reagenciemi opatrně, vyhněte se
požití, kontaktu s očima, sliznicemi a kůží; používejte reagencie podle
správné laboratorní praxe. Na bezpečnostním listu jsou detailně uvedeny
operační postupy pro manipulaci s tímto produktem. Bezpečnostní listy
jsou dodány na vyžádání.
1.
2.
3.
4.
POZOR!
Aplikace pro rutinní analyzátory může být odlišná od manuálního
stanovení; navíc jsou postupy specifické pro každý analyzátor.
B. Velkou pozornost musíte věnovat interferujícím látkám: určitým lékům
a dalším látkám, které jsou schopné ovlivnit hladiny ceruloplasminu
(viz 2. bod literatury).
C. Reagencie musí být použity jen pro určené cíle, specializovaným a
školeným personálem a podle správné laboratorní praxe.
D. Klinická diagnóza nemůže být stanovena správně za použití výsledku
pouze jednoho testu, ale musí do ní být kriticky začleněny výsledky
dalších laboratorních zkoušek a klinických dat.
E. Mnoho faktorů jako okolní teplota, pracovní teplota reagencie,
správnost mytí a typ spektrofotometru může ovlivnit výkon testů.
F. Kalibrační křivka musí být vždy zopakována při každé změně šarže
reagencie a/nebo kalibrátoru.
G. Všechna opatření, která se normálně používají v laboratořích, musí být
respektována při manipulaci s reagenciemi. Všechny kalibrátory a
kontroly musí být brány jako lidský vzorek, tedy potenciálně infekční;
nutno používat ochranné prostředky tak, abyste se vyhnuli možnému
biologickému riziku.
A.
Kat. č. CE3292
REAGENCIE
Součásti soupravy:
kat. č. CE3292
R1 – Anti-CER
2 x 20 ml
anti-ceruloplasmin (kozí) v PBS >25 mmol/L
NaN3 < 0,1%
STABILITA
Reagencie jsou stabilní do data expirace uvedeného na štítku, pokud jsou
skladovány při 2-8°C v jejich uzavřeném neporušeném obalu; nevystavovat
zdrojům tepla a/nebo kolísání tlaku.
V případě poškození původního obalu je zlikvidujte.
POMOCNÉ REAGENCIE PRO KONTROLU KVALITY
Pro zajištění správného výkonu používejte následující soupravy (viz
příslušný návod k použití (IFU)):
PLASMAPROTEINS CALIBRATOR 5 koncentrací kat. č. CALPRO1
PLASMAPROTEINS CALIBRATOR zvýšená hladina kat. č. CALPRO45
PLASMAPROTEINS NORMAL CONTROL liquid kat. č. PRONOR
PLASMAPROTEINS ELEVATED CONTROL liquid kat. č. PROEL
Kalibrační křivka musí být vždy zopakována při každé změně šarže
reagencie a/nebo kalibrátoru.
PŘÍPRAVA REAGENCIÍ
Připraveny k použití. Před použitím dobře zamíchejte a nechte
vytemperovat na laboratorní teplotu. Ihned po manipulaci zavřete.
Reagencie musí být použity správně, abyste se vyhnuli kontaminaci.
Nesprávná manipulace nás zbavuje veškeré odpovědnosti.
STABILITA PO PRVNÍM OTEVŘENÍ
Výrobek je stabilní 4 měsíce po prvním otevření, pokud se skladuje při 28°C.
POŽADOVANÉ MATERIÁLY NEDODÁVANÉ SE SOUPRAVOU
Běžné laboratorní vybavení.
Mikropipety pro objemy od 3 do 500 µl.
Jednorázové špičky na mikropipety.
Průhledné skleněné zkumavky pro ředění vzorků.
Fyziologický roztok. Kalibrátory a kontroly.
Spektrofotometr nebo automatický biochemický analyzátor.
VZORKY
 Čerstvé nehemolyzované sérum.
Odběr vzorků v souladu s CLSI (NCCLS) (viz bod 3. literatury)
Vzorky mohou být skladovány až 6 dnů při teplotě 2-8°C. (viz bod 1.
literatury).
NAKLÁDÁNÍ S ODPADY
Dodržujte všechny místní předpisy pro životní prostředí a nakládání
s odpady.
ANALYTICKÝ POSTUP NA RUČNÍM SPEKTROFOTOMETRU







Vlnová délka: 340 nm (prim.) 700 nm (sec.)
Šířka optické vrstvy: 1 cm
Měření: proti blanku reagencie
Teplota: 37°C
Metoda: end-point
Reakce: 20 vteřin
Vzorek/reagencie: 1/50
Před použitím nechte reagencie vytemperovat na laboratorní teplotu.
Pipetujte do testovací zkumavky nebo kyvety, jak je uvedeno:
R/B: reagenční blank, ST: kalibrátor, S: vzorek
Verze 2015.02
CERULOPLASMIN
R/B
S
ST
500 µl
500 µl
500 µl
Vzorek
----
10 µl
----
Kalibrátor
----
----
10 µl
R1 – Anti-CER
VÝROBCE
BEN – BIOCHEMICAL ENTERPRISE S.r.l.
via Toselli, 4
20127 Milano - Italy
www.bensrl.it
Opatrně míchejte a čekejte asi 20 sekund. Měřte absorpci kalibrátoru (Ast)
a vzorku (As) proti blanku reagencie. Čtěte v krátkém čase.
POZOR!
Souprava je testována pro manuální spektrofotometr a pro systémy
HITACHI, COBAS a MINDRAY. Aplikace pro automatické analyzátory
může být úplně jiná od toho, co bylo získáno manuálním stanovením.
REFERENČNÍ HODNOTY (viz bod literatury 1.)
Normální hodnoty ceruloplasminu: 20 – 60 mg/dl.
Poněvadž normální hodnoty závisí na věku, pohlaví, dietě, geografickém
původu a jiných faktorech, měla by si každá laboratoř stanovit jejich vlastní
normální hodnoty pro postup.
VÝPOČET
Všechny stanovené hodnoty jsou odečteny z kalibrační křivky.
ANALYTICKÉ VÝKONY
(potvrzeno na analyzátoru MINDRAY BS300)
Výkon reagencie CERULOPLASMIN byl testován na analyzátoru
MINDRAY BS300. Data, která představují vlastnosti produktu, mohou být
různá pro každou laboratoř i analyzátor.
Limity metody: nejsou známy.
Linearita metody: test je lineární až do 170 mg/dl.
Nicméně pro koncentrace ceruloplasminu vyšší než maximální hodnota
kalibrátoru je doporučeno ředit vzorek 1:5 fyziologickým roztokem, testovat
znovu a vynásobit 5.
Sensitivita metody (LoD): senzitivita metody byla stanovena jako
minimální koncentrace odlišitelná od nuly a je 0,3 mg/dl.
Interference: viz body literatury 2.
Interferenční kritéria testu: výtěžnost ± 30% počáteční hodnoty. Nebyly
pozorovány žádné interference ve vzorku s následujícími interferenty:
- celkový bilirubin až 20 mg/dl;
- hemoglobin až 300 mg/dl;
- kyselina askorbová až 50 mg/dl.
Přesnost v rámci stanovení: stanovení na 20 replikacích dvou vzorků.
Získané výsledky jsou následující:
Průměr (mg/dl) ± 2s
CV %
Vzorek 1
24,7 ± 1,2
2,4
Vzorek 2
51,4 ± 0,6
0,6
Vzorek
Přesnost mezi stanoveními: stanoveno po dobu 5 dnů s 20 replikacemi
pro každý den pro dva vzorky.
Získané výsledky jsou následující:
Průměr (mg/dl) ± 2s
CV %
Vzorek 1
24,2 ± 1,2
2,5
Vzorek 2
50,9 ± 1,6
1,5
Vzorek
Správnost: skupina 20 sér byla testována za použití tohoto postupu
a podobných reagencií dostupných na trhu.
Srovnání dává tyto výsledky:
Lineární rovnice regrese: y = 1,0377x - 4
Korelační koeficient: r = 0,9920
n = 20
LITERATURA
1. Textbook of Clinical Chemistry, Ed. by N.W. Tietz, W.B. Saunders Co.,
Philadelphia (1999).
2. Young D.S., Effect of drugs on Clinical Lab. Test, 5th Ed. AACC Press
(2000).
3. CLSI (NCCLS) GP44-A4/H18-A4: Proc. for the Handling and
Processing of Blood Specimens for Common Lab. Tests.
Verze 2015.02