CerTest hCG Card

Rapid-VIDITEST
Crypto
(Jednokrokový test pro kvalitativní detekci antigenu Cryptosporidia)
Návod k použití soupravy
Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy,
Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: [email protected], Web: www.vidia.cz
POUŽITÍ:
Rapid-VIDITEST Cryptosporidium je rychlý imunochromatografický test pro kvalitativní
detekci antigenu Cryptosporidium parvum ve vzorcích lidské stolice pro diagnostiku
kryptosporidiózy. Pouze pro laboratorní použití.
ÚVOD:
Kryptosporidióza je průjmové onemocnění způsobené mikroskopickými parazity rodu
Cryptosporidium. Parazit žije ve střevě a prochází do stolice. Je chráněn vnějším obalem
umožňujícím dlouhodobé přežívání mimo organismus hostitele a způsobujícím vysokou
rezistenci k dezinfekčním prostředkům na bázi chlóru. Onemocnění i parazit sám je obvykle
označován jako „Krypto”.
PRINCIP TESTU:
Rapid-VIDITEST Cryptosporidium je kvalitativní imunochromatografický test pro detekci
antigenu Cryptosporidia ve vzorcích lidské stolice. Na testovacích zónách membrány testu
jsou navázány protilátky proti antigenům Cryptosporidia.
V průběhu testování vzorek reaguje s částicemi potaženými anti-Cryptosporidiovými
protilátkami, jež byly zasušeny na membráně v místě aplikace vzorku. Směs pak kapilárním
efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát
zachycen specifickými protilátkami ve „výsledkové zóně“, což se projeví jako červená linka.
Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v „kontrolní zóně“, kde se
vždy na konci testu objeví zelená linka.
Přítomnost zelené linky ověřuje:
1) že se použil dostatečný objem vzorku,
2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku,
3) slouží jako vnitřní kontrola reagencií.
1
OBSAH SOUPRAVY:
-
Testovací kazety/blistery
Zkumavky na vzorky obsahující odběrovou tyčinku a ředicí roztok
Návod k použití
Certifikát kontroly balení
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU
-
Nádoba na sběr vzorků
Jednorázové rukavice
Stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ:
Odeberte odpovídající množství (1-2 g nebo ml v případě tekutého vzorku) vzorku stolice do
čistých a suchých odběrových nádob, neobsahujících žádná ochranná nebo transportní média.
Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze
vzorky uchovávat 1 – 2 dny před testováním v chladničce (+2 až +4°C). V případě delšího
skladování by se měly vzorky uchovávat zmrazené při cca -20°C, avšak maximálně 1 rok.
Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu a důkladně promíchejte.
Ujistěte se, že vzorky nebyly upravovány pomocí rozpouštědel obsahujících formaldehyd
nebo jeho deriváty.
POSTUPY:
Zpracování vzorků stolice:
a) Pro každý vzorek použijte vlastní odběrovou zkumavku. Odšroubujte víčko odběrové
zkumavky s ředícím rozokem (1)
b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte dvakrát malé
množství vzorku stolice (cca 150 mg) (2). Vraťte víčko s tyčinkou do zkumavky,
zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředícího
roztoku. V případě tekutého vzorku napipetujte 150 l do odběrové zkumavky s
pufrem.
c) Důkladně promíchajte obsah zkumavky za účelem dobré homogenizace vzorku (3).
2
PRACOVNÍ POSTUP:
Před testováním nechte kazetu, resp.blister, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na
laboratorní teplotu (+15 až +30°C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést
test.
Postup pro kazetu (Card):
1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré
homogenizace vzorku. Uřízněte nebo odstřihněte špičku víčka zkumavky (4).
2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Cryptosporidium z obalové fölie
a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny
a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou
zkumavku a kazetu.
3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky (100 l)
naředěného vzorku (5). Vyvarujte se aplikace pevných částic stolice.
4. Po 10 minutách odečtěte výsledek.
3
Postup pro blister:
Pro provedení testu můžete zvolit postup označený A nebo B.
A. Aplikace kapky vzorku z odběrové zkumavky na blister
1. Po vytemperování blisteru otevřete obalovou fólii v označeném místě.
2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré
homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky .
3. Těsně před použitím vyjměte blister Rapid-VIDITEST Cryptosporidium z obalové fólie
a položte ho na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny
a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou
zkumavku a blister.
4. Aplikujte přesně 5 kapek (150 l) naředěného vzorku z odběrové zkumavky na bílý
konec blisteru (zóna pro aplikaci vzorku – sample region) (4).
5. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem.
B. Ponořením blisteru do zkumavky
1. Po vytemperování blisteru otevřete obalovou fólii v označeném místě.
2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré
homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky.
3. Přeneste 5-10 kapek vzorku homogenizovaného v ředicím roztoku z odběrové zkumavky
do čisté lahvičky nebo zkumavky. Ponořte testovací blister bílým koncem do zkumavky
(5). Neponořujte blister hlouběji než po rysku vyznačenou pod bílými šipkami.
4. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem.
INTERPRETACE VÝSLEDKU:
KAZETA
Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample – vzorek), výsledky se
odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T
(výsledková-test zóna).
4
Zelená
Červená
Negativní
Červená
Cryptosporidium pozitivní
Neplatný
Neplatný
BLISTER
Kontrolní
zóna
Výsledková
zóna
Zelená
Červená
Červená
Zóna pro
nanesení
vzorku
Cryptosporidium pozitivní
Negativní
5
Neplatný
Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové
zóně T. To může znamenat infekci způsobenou parazitem Cryptosporidium.
Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T
zůstane čistá.
Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka, a to bez
ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání
testu jsou: nedostatečný objem vzorku, nesprávný pracovní postup nebo zkáza/stárnutí
reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a zopakujte test s novou testovací sadou. Pokud
potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele.
Poznámka k interpretaci výsledků:
Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve
vzorku. Nicméně, tímto testem nelze množství antigenu kvantitativně stanovit a ani hodnotit
vzestup nebo pokles koncentrace v průběhu onemocnění.
PLATNOST TESTU:
Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit
interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu.
Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu.
OMEZENÍ TESTU:
1. Souprava Cryptosporidium může indikovat pouze přítomnost parazita ve vzorku
(kvalitativní detekce) a může být použita pouze pro detekci antigenu Cryptosporidia ve
vzorcích stolice. Testem nelze stanovovat kvantitativní hodnoty nebo rychlost nárůstu
koncentrace antigenu.
2. K testu použijte jenom čerstvé nebo čerstvě rozmražené nekonzervované a nefixované
vzorky (vzorky nesmí obsahovat formaldehyd ani jeho deriváty).
3. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se
hnědé linky). V tomto případě řeďte vzorek ředicím roztokem a opakujte test.
4. Je-li výsledek testu negativní a klinické symptomy přesto přetrvávají, doporučuje se další
vyšetření za použití jiných klinických metod. Negativní test nevylučuje pravděpodobnost
kryptosporidiózy.
5. Po jednom týdnu trvající infekce počet parazitů ve stolici klesá a tím se snižuje reaktivita
vzorku. Proto by vzorky měly být odebrány v průběhu jednoho týdne od nástupu příznaků.
6. Výsledky tohoto testu pouze naznačují přítomnost parazitární infekce. Lékař by měl
diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce.
7. Výrobce nezaručuje funkčnost testu po uplynutí expirační doby.
OČEKÁVANÉ HODNOTY:
Cryptosporidium způsobuje rozsáhlé vodou přenášené epidemie gastrointestinálních
onemocnění, se symptomy jako jsou průjem, nevolnost anebo žaludeční křeče. Lidé s vážně
oslabeným imunitním systémem (tedy vážně imunokompromitovaní) jsou náchylní
vykazovat vážnější a úpornější symptomy než zdraví jedinci.
6
ÚČINNOST TESTU:
Citlivost a specificita:
Byly testovány vzorky stolice (Cryptosporidium pozitivních a negativních, které byly
zároveń testovány mikroskopicky). Vzorky pocházely od hospitalizovaných pacientů .
Výsledky při použití Crypto ukazují:
>99% citlivost a
>99% specificitu
Vzorky byly ověřovány mikroskopickými technikami.
Zkřížená reaktivita
Byla provedena vyhodnocení pro stanovení možné zkřížené reaktivity souprav RapidVIDITEST Cryptosporidium. Nebyla nalezena žádná zkřížená reaktivita s běžnými
gastrointestinálními parazity příležitostně se vyskytujícími ve stolici.
-
Entamoeba hystolitica
-
Giardia lamblia
SKLADOVÁNÍ A STABILITA:
Různé šarže soupravy Rapid-VIDITEST Cryptosporidium byly vystaveny 18 cyklům měnící
se teploty a vlhkosti (od +2ºC do +40º C/90% RH) v klimatizované místnosti po dobu 4 dnů.
Po této době byly soupravy použity ke stanovení vlivu stárnutí na citlivost k přípravku s
referenčním standardem antigenu Cryptosporidium. Soupravy Rapid-VIDITEST
Cryptosporidium si uchovávají své vlastnosti i po expozici těmto extrémním teplotním
podmínkám.
Stabilita celé soupravy je za daných podmínek skladování 24 měsíců.
Zmražování nebo skladování v chladničce neovlivňuje účinnost testu Rapid-VIDITEST
Cryptosporidium. Avšak ředící pufr pro vzorky nesmí být zmražován a musí být skladován
při teplotě +2ºC - +8ºC nebo při pokojové teplotě. Teplotní rozmezí pro skladování je mezi
+2 až +30ºC.
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ:
- pouze pro diagnostiku in vitro
- nepoužívejte po uplynutí expirační doby
- testovací souprava musí do doby použití zůstat ve vzduchotěsné fólii, pokud byla fólie
poškozena, testovací soupravu nepoužívejte.
- řiďte se pokyny Správné laboratorní praxe (GLP), používejte ochranný oblek, rukavice na
jedno použití, nejezte, nepijte nebo nekuřte v prostoru pracoviště.
- se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem.
- odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy
- test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsné fólie.
7
REFERENCE:
- Hill DR, Nash TE. Intestinal Flagellate and Ciliate Infections. In: Guerrant RL, Walker DH,
Weller PF, eds. Tropical Infectious Diseases. Principles, Pathogens & Practice. 2nd ed.
Elsevier, Philadelphia. 2006:984-8.
- Copue S, Delabre K, Pouillot R et al. Detection of Cryptosporidium, Giardia and
Enterocytozoon bieneusi in surface water, including recreational areas: a one year
prospective study: FEMS Immunol Med Microbiol. 2006; 47:351-9.
POUŽITÉ SYMBOLY:
Výrobce
Určeno pro diagnostiku in
vitro
Číslo šarže (LOT)
Datum expirace
Poslední revize tohoto návodu: 04/2013
8