Rapid-VIDITEST C. difficile Ag (GDH)

Rapid-VIDITEST
C. difficile Ag (GDH)
(Jednokrokový test pro kvalitativní detekci glutamát dehydrogenázy Clostridium difficile)
Návod k použití soupravy
Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy,
Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: [email protected], Web: www.vidia.cz
POUŽITÍ:
Rapid-VIDITEST C. difficile Ag (GDH) je jednokrokový imunochromatografický test pro
kvalitativní detekci glutamát dehydrogenázy Clostridium difficile ve vzorcích stolice pro
diagnostiku infekcí způsobených C. difficile.
ÚVOD:
Clostridium difficile je anaerobní gram-pozitivní sporulující bakterie. Klíčovou vlastností
umožňující přežívání bakterie C. difficile v organizmu pacienta a v prostředí je její schopnost
tvořit spóry. C. difficile je přenášena fekálně-orální cestou.
C. difficile je nejzávažnějším původcem průjmů a/nebo pseudomembranózní kolitidy spjatých
s podáváním antibiotik u hospitalizovaných pacientů.
Vyzrálá střevní bakteriální flóra u zdravého dospělého jedince je obvykle rezistentní ke
kolonizaci bakterií C. difficile. Pokud dojde k narušení normální střevní flóry, tato rezistence se
ztrácí. To znamená, že jakýkoliv faktor spojený s porušením normální střevní flóry zvyšuje
riziko osídlení bakterií C. difficile po podávání antibiotik, hlavně těch se širokospektrálním
účinkem (penicilíny, cefalosporíny a clindamycin).
C. difficile může uvolňovat 2 vysokomolekulární toxiny, toxin A a toxin B, které jsou
zodpovědné za klinickou manifestaci infekce – od lehkého vodnatého průjmu až po fulminantní
pseudomembranózní kolitidu, toxický megakolon a smrt.
Clostridium difficile glutamát dehydrogenáza (GDH) je enzym produkovaný ve velkém
množství toxigenními i netoxigenními kmeny a proto je vynikajícím markerem přítomnosti této
bakterie.
PRINCIP TESTU:
Rapid-VIDITEST C. difficile Ag (GDH) je kvalitativní imunochromatografický test pro detekci
bakterií GDH antigenu ve stolici. Na testovacích zónách membrány testu jsou navázány
protilátky proti GDH antigenu.V průběhu testování vzorek reaguje s barevnými částicemi
potaženými anti-GDH protilátkami, zasušenými na membráně v místě aplikace vzorku. Směs
pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku je
barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami ve „výsledkové zóně“, což se projeví
jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v
„kontrolní zóně“, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka.
Přítomnost zelené linky ověřuje:
1
1) že se použil dostatečný objem vzorku,
2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku,
3) slouží jako vnitřní kontrola reagencií.
OBSAH SOUPRAVY:
-
testovací kazety/blistery
zkumavky na vzorky obsahující odběrovou tyčinku a ředicí roztok
návod k použití
certifikát kontroly balení
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU
-
nádoba na sběr vzorků
jednorázové rukavice
stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ:
Odeberte dostatečné množství vzorku stolice do čistých a suchých odběrových nádob (1 až 2
gramy stolice nebo 1 až 2 ml tekutého vzorku). Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání
vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 7 dní v chladničce (+2 až +8°C).
V případě delšího skladování by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -20°C. Před použitím
nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu a důkladně promíchejte.
Zpracování vzorků stolice
a) Pro každý vzorek použijte vlastní odběrovou zkumavku. Odšroubujte víčko odběrové
zkumavky s ředicím roztokem (1).
b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku
stolice (cca 250mg), (nejlépe z třech různých částí vzorku) (2). Vraťte víčko s tyčinkou do
zkumavky, zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do
ředicího roztoku. V případě tekutého vzorku napipetujte 250 μl vzorku do odběrové
zkumavky.
c) Důkladně promíchejte obsah zkumavky za účelem dobré homogenizace vzorku (3).
2
PRACOVNÍ POSTUP:
Před testováním nechte kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní
teplotu (+15 až +30°C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test.
Postup pro KAZETU (Card):
1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace
vzorku. Uřízněte nebo odstřihněte špičku víčka zkumavky (obr. 4).
2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST C. difficile Ag (GDH) z obalové
folie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny
a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou
zkumavku a kazetu.
3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky (100 μl)
naředěného vzorku (obr. 5).
4. Po 10 minutách odečtěte výsledek.
Postup pro Blister test:
Pro provedení testu můžete zvolit postup označený A nebo B.
A. Aplikace kapky vzorku z odběrové zkumavky na blister
1. Po vytemperování blisteru otevřete obalovou folii v označeném místě.
2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace
vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky .
3. Těsně před použitím vyjměte blister Rapid-VIDITEST C. difficile Ag (GDH) z obalové
folie a položte ho na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací
zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou
odběrovou zkumavku a blister.
3
4. Aplikujte přesně 5 kapek (150 μl) naředěného vzorku z odběrové zkumavky na bílý konec
blisteru (zóna pro aplikaci vzorku – sample region) (obr. 4).
5. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem.
B. Ponořením blisteru do zkumavky
1. Po vytemperování blisteru otevřete obalovou folii v označeném místě.
2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace
vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky.
3. Přeneste 5-10 kapek vzorku homogenizovaného v ředicím roztoku z odběrové zkumavky do
čisté lahvičky nebo zkumavky. Ponořte testovací blister bílým koncem do zkumavky
(obr. 5). Neponořujte blister hlouběji než po rysku vyznačenou pod bílými šipkami
(sample region – viz obr. 6).
4. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem.
INTERPRETACE VÝSLEDKU:
KAZETA
Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample – vzorek), výsledky se odečítají
v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková-test
zóna).
Zelená
Červená
Červená
4
Negativní
Pozitivní
Neplatný
Neplatný
BLISTER
Kontrolní
zóna
Výsledková
zóna
Zelená
Červená
Červená
Zóna pro
nanesení
vzorku
Pozitivní
Negativní
Neplatný
Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane
čistá.
Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové
zóně T.
Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka, a to bez ohledu
na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu
jsou: nedostatečný objem vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození/stárnutí reagencií.
Zkontrolujte pracovní postup a zopakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže
přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele.
Poznámka k interpretaci výsledků:
Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku.
Nicméně, tímto testem nelze množství antigenu kvantitativně stanovit a ani hodnotit vzestup
nebo pokles koncentrace v průběhu onemocnění.
PLATNOST TESTU:
V testu je použit interní standard. Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně
objeví zelená linka. Objevení se zelené linky v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu a
potvrzuje použití dostatečného objemu a správnou techniku provedení testu.
5
OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY:
Clostridium difficile je spojováno s 95-100% případů pseudomembranózní kolitidy, s 60-75%
případů kolitidy související s podáváním antibiotik a s 35% případů průjmů, které souvisí
s podáváním antibiotik.
OMEZENÍ TESTU:
1. C. difficile Ag (GDH) test ukazuje jen přítomnost Clostridium difficile ve vzorku
(kvalitativní detekce) a měl by být použit jen pro detekci Clostridium difficile ve vzorku
stolice. Tento test nemůže být použit ani pro kvantitativní detekci ani pro určení míry
zvyšování koncentrace antigenu.
2. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu.
3. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé
linky).
4. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky.
5. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu infekce Clostridium difficile. Potvrzení diagnózy
může provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu.
6. Pozitivní výsledek potvrzuje přítomnost Clostridium difficile-GDH ve vzorku stolice.
Nicméně, tento výsledek může znamenat přítomnost toxigenních i netoxigenních kmenů. Po
zjištění pozitivního výsledku by mělo navazovat rozlišení Clostridium difficile kmenů
dalšími laboratorními metodami.
ÚČINNOST TESTU:
Citlivost a Specifita:
Byla provedena studie se vzorky stolic od pacientů s průjmem. Výsledky z C. difficile Ag
(GDH) byly porovnány s jinou komerční soupravou (C. DIFF QUIK CHEK Complete®
TechLab).
C. difficile Ag (GDH) Card/Blister vykazuje > 99% citlivost a > 99% specifitu.
Zkřížená reaktivita:
Byly stanoveny zkřížené reakce Rapid-VIDITEST C. difficile Ag (GDH) testu. Nebyla
nalezena žádná zkřížená reaktivita s běžnými střevními patogeny a dalšími organismy a látkami
občasně se vyskytujícími ve stolici (H. pylori, Escherichia coli spp, Yersinia spp,
Campylobacter spp., Salmonella spp., Shigella spp).
SKLADOVÁNÍ A STABILITA:
Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30°C. Test je stabilní do data expirace
uvedeného na obalu. Nezmrazujte.
6
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ:
-
pouze pro diagnostiku in vitro
nepoužívejte po uplynutí expirační doby
se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem
odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy
REFERENCE:
1.
2.
3.
Wren, M.W.D, et al. “Laboratory diagnosis of Clostridium difficile infection. An
evaluation of tests for faecal toxin, glutamate dehydrogenase, lactoferrin and toxigenic
culture in the diagnostic laboratory”. British Journal of Biomedical Science, 66 (1), 2009
Vaishnavi, Ch., “Clinical spectrum & pathogenesis of Clostridium difficile associated
diseases”. Indican J. Med. Res. 131, April 2010, pp 487-499
POUTANEN, S. M. et al. ”Clostridium difficile-associated diarrhoea in adults”, CMAJ,
171(1) July 2004, pp. 51-58.
POUŽITÉ SYMBOLY:
Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Datum expirace
Výrobce
Poslední revize tohoto návodu: 05/2012
7
8