Campylobacter jejuni Blister

Rapid-VIDITEST
Campylobacter jejuni Blister
(Jednokrokový blisterový test pro detekci Campylobacter jejuni )
Návod k použití soupravy
Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č.365, Vestec u Prahy, 252 42 Jesenice, Česká republika,
tel: +420 261 090 565, fax +420 261 090 566, web: www.vidia.cz, e-mail: [email protected]
POUŽITÍ:
Rapid-VIDITEST Campylobacter jejuni Blister je jednokrokový imunochromatografický test
pro kvalitativní detekci Campylobacter jejuni (C. jejuni) ve vzorcích stolice, který může být
užitečný pro diagnózu kampylobakterióz.
ÚVOD:
Kampylobakterióza je infekční onemocnění způsobené bakterií rodu Campylobacter. Většina
lidí, kteří onemocní kampylobakteriózou, dostane během 2 až 5 dnů po vystavení organismu
průjem, křeče, bolesti břicha a horečku. Průjem může být krvavý a může být doprovázen
nevolností a zvracením. Onemocnění obvykle trvá jeden týden. U některých nemocných osob
se nemusí projevit žádné symptomy. U osob s poruchou imunitního systému se někdy
Campylobacter šíří do krevního řečiště a způsobuje závažné, život-ohrožující infekce.
PRINCIP TESTU:
Rapid-VIDITEST Campylobacter jejuni Blister je kvalitativní imunochromatografický test pro
stanovení Campylobacter ve stolici. Na testovacích zónách membrány blisteru jsou navázány
monoklonální protilátky proti antigenům C. jejuni.
V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na
membráně (anti-C. jejuni monoklonální protilátky – červená mikrosféra). Směs pak kapilárním
efektem vzlíná vzhůru po membráně blisteru. V případě pozitivního výsledku je barevný
konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve „výsledkové zóně“ projeví jako
barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v „kontrolní
zóně“, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje:
1) že se použil dostatečný objem vzorku,
2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku,
3) interní kontrolu reagencií.
1
OBSAH SOUPRAVY:
-
testovací blister
odběrová zkumavka s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky
návod k použití
certifikát kontroly balení
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU
-
nádoba na sběr vzorků
jednorázové rukavice
stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ:
Odeberte dostatečné množství stolice (1-2 g nebo ml v případě tekuté stolice). Vzorky
odebírejte do čistých a suchých odběrových nádob (bez konzervačních látek nebo transportního
média). Vzorky lze uchovávat 1 - 2 dny před testováním v chladničce při teplotě +2 až +10°C.
V případě delšího skladování se musí vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28°C. Cyklus
zmrazení a rozmrazení se nedoporučuje opakovat více než třikrát. Před použitím nechte vzorky
vytemperovat na laboratorní teplotu a důkladně promíchejte.
PRACOVNÍ POSTUP:
Před testováním nechte vzorky stolice a odběrové zkumavky s ředicím roztokem
vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30°C). Neotvírejte sáček, dokud nejste
připraveni provést test. Na laboratorní teplotu nechte vytemperovat jen takový počet
blisterů, jaký potřebujete k testování.
a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1).
b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku
stolice (2). Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do
ředicího roztoku.
c) Důkladně promíchejte zkumavku za účelem dobré homogenizace vzorku (3).
2
Pro provedení testu můžete zvolit způsob označený A nebo B.
A. Aplikace kapky vzorku z odběrové zkumavky na blister
1. Po vytemperování blisteru otevřete obalovou folii v označeném místě.
2. Před použitím vyjměte blister z obalové folie a položte ho na vodorovnou podložku.
Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku.
3. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace
vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (4).
4. Přidejte 5 kapek naředěného vzorku z odběrové zkumavky na bílý konec blisteru (zóna pro
aplikaci vzorku )(5). Začněte stopovat čas.
5. Po 10 minutách odečtěte výsledek.
B. Ponořením blisteru do zkumavky
1. Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové fólie
jej otevřete.
2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace
vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (4).
3. Přeneste 5 kapek vzorku homogenizovaného v ředicím roztoku z odběrové zkumavky do
čisté lahvičky nebo zkumavky. Ponořte testovací blister bílým koncem do zkumavky (6).
Neponořujte blister hlouběji než po rysku vyznačenou pod bílými šipkami.
(zóna pro aplikaci vzorku).
4. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem.
3
INTERPRETACE VÝSLEDKU:
Vzorky se aplikují na bílý konec blisteru. Výsledky se odečítají v prostředním bílém okénku.
Úsek tohoto okénka blíže k bílému konci blisteru se nazývá „výsledková zóna“. Úsek okénka
dále od bílého konce se nazývá „kontrolní zóna“.
Obr. 7
Kontrolní
zóna
Zelená
Červená
Výsledková
zóna
Červená
Zóna pro
nanesení
vzorku
pozitivní
negativní
neplatný
Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane
čistá (Obr. 7).
Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové
zóně T (Obr. 7). To může znamenat infekci způsobenou Campylobacter jejuni.
Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na
přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu
jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií.
Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají,
kontaktujte svého dodavatele.
Poznámka k interpretaci výsledku:
Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku.
Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu
onemocnění.
PLATNOST TESTU:
V testu je použit interní standard. Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně
objeví zelená linka. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu.
Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu.
4
OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY:
Campylobacter spp. jsou bakterie, které jsou hlavní příčinou průjmových onemocnění u lidí a
jsou celosvětově považovány za hlavní příčinu bakteriálních gastroenteritid. V rozvojových
zemích je průjmové onemocnění častěji způsobeno právě těmito bakteriemi než například
bakteriemi rodu Salmonella. V rozvojových zemích jsou u dětí do dvou let infekce bakterií
Campylobacter hodně frekventované, někdy končí až smrtí. Téměř ve všech rozvojových
zemích již několik let neustále roste výskyt lidské kampylobakteriální infekce. Důvody toho
jsou neznámé.
OMEZENÍ TESTU:
1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu blisteru.
2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé
linky). Vzorek více zřeďte ředicím roztokem a opakujte test.
3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky.
4. Opakované zmrazení a rozmrazení vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku.
5. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu kampylobakteriózy. Potvrzení diagnózy může
provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu.
ÚČINNOST TESTU:
Citlivost a Specifita:
Bylo provedeno hodnocení Rapid-VIDITEST Campylobacter jejinu Blister testu. Bylo
otestováno 35 vzorků stolice a výsledky byly potvrzeny na soupravě ImmunoCard STAT!
CAMPY. Výsledky vykazovaly > 99% shodu v citlivosti i specifitě.
Použití myší monoklonální protilátky v Rapid-VIDITEST Cympylobacter jejuni Blister testu
zaručuje vysoký stupeň specificity pro detekci těchto bakterií. Protilátky použité k vyhodnocení
tohoto testu rozpoznají epitopy přítomné v antigenu, který se nalézá ve vzorku stolice pacienta,
stejně dobře jako z bakteriálních kultur in vitro.
Toto hodnocení je třeba brát jako předběžné dokud nebudou dostupná další ověřující data.
Křížová reaktivita:
Ke stanovení křížové reaktivity byl použit Rapid-VIDITEST Campylobacter jejuni Blister.
Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s běžnými střevními patogeny, dalšími organismy a
látkami občas přítomnými ve stolici (H. pylori, Escherichia coli, Listeria monocytogenes,
Salmonella).
SKLADOVÁNÍ A STABILITA:
Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30°C. Test je stabilní do data expirace
uvedeného na obalu. Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití. Nezmrazujte.
5
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ:
-
pouze pro in vitro diagnostiku
nepoužívejte po uplynutí expirační doby
test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití
test nepoužívejte jestliže je obal poškozen
během testu nejezte, nepijte a nekuřte, dodržujte Správnou laboratorní praxi, používejte
ochranný oděv a jednorázové rukavice
se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem
odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy
test musí být proveden do dvou hodin od otevření obalu
REFERENCE:
1. Fernández, H. and Farace, M.I.: „Manual de Procedimientos Campylobacter“. INEI. 2003.
2. Kawatsu, K. et. Al.: „Development and Evalution of Immunochromatographic Assay for
Simple and Rapid Detection of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in Human
Stool Specimens“. Journal of Clinical Microbiology, Apr. 2008 Vol. 46, No. 4,
p. 1226-1231.
POUŽITÉ SYMBOLY:
Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Datum expirace
Výrobce
Poslední revize tohoto návodu: 11/2010
6