CHORUS Rubella IgG Avidity

CHORUS
RUBELLA IgG AVIDITY
81095
(12 testů)
Výrobce:
DIESSE Diagnostica Senese
Via delle Rose 10
53035 Monteriggioni (Siena) – Itálie
CHORUS Rubella IgG Avidity
CZ
OBSAH
1
Úvod ................................................................................................................ 3
2
Princip testu ..................................................................................................... 3
3
Složení soupravy .............................................................................................. 4
4
Další potřebné vybavení k provedení testu ...................................................... 5
5
Skladování a stabilita komponent .................................................................... 6
6
Bezpečnost práce ............................................................................................. 6
7
Technické připomínky ...................................................................................... 7
8
Vzorky a jejich skladování ................................................................................ 8
9
Pracovní postup. .............................................................................................. 8
10 Validita testu.................................................................................................... 8
11 Hodnocení výsledků ......................................................................................... 9
12 Interpretace výsledků....................................................................................... 9
13 Charakteristika soupravy ................................................................................ 10
14 Literatura ....................................................................................................... 11
15 Vysvětlení symbolů ........................................................................................ 12
2/12
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012
CHORUS Rubella IgG Avidity
CZ
Kvalitativní stanovení avidity IgG protilátek proti viru zarděnek
v lidském séru na přístrojích Chorus pomocí jednorázového
testovacího zařízení
1
Úvod
Virus zarděnek je původcem zarděnek (rubeolla), v lidské populaci běžné
onemocnění doprovázené výsevem vyrážky. Průběh onemocnění je obvykle lehký,
bez komplikací a mající krátký průběh. Virus zarděnek patří mezi viry s teratogenním
účinkem. Především při infekci neimunní matky v prvním trimestru může způsobit u
vyvíjejícího se plodu vážné malformace. Proto je velmi důležité stanovit stav imunity
ještě před plánovaným otěhotněním, aby se případně provedlo očkování. Pokud
toto není možná, je nezbytné monitorovat průběh těhotenství a sledovat, zda-li
nedochází k sérokonverzi. Někdy test na IgM protilátky nestačí, protože přítomnost
této třídy může být způsobena persistencí IgM nebo asymptomatickou reinfekcí
rubeolou, které nepředstavují pro plod riziko.
Avidita protilátek vyjadřuje pevnost vazby mezi antigenem a protilátkou. Při
primární infekci se tvoří nejprve protilátky s nízkou aviditou. V průběhu infekce
imunitní odpověď organismu vyzrává a avidita protilátek narůstá. V latentní fázi
onemocnění jsou protilátky vysoce avidní a při sekundární infekci nebo reaktivaci
produkují paměťové B-buňky ihned IgG protilátky s vysokou aviditou. Stanovení
avidity protilátek IgG umožňuje přesnější určení fáze nákazy a je vhodným
doplněním sérologické diagnostiky. Aviditu IgG protilátek v séru lze zjistit pomocí
této soupravy za použití zařízení Chorus.
2
Princip testu
Jednorázový test připravený k použití na přístrojích Chorus umožňuje stanovení
avidity IgG protilátek proti viru zarděnek
Stanovení avidity protilátek je založeno na principu narušení vazby mezi antigenem a
protilátkou Aviditním roztokem. Protilátky s nízkou aviditou jsou působením
Aviditního roztoku z vazby na antigen uvolněny a vymyty. Naopak vysoce avidní
protilátky zůstávají i po působení Aviditního roztoku z větší části navázány na
antigen.
Jednorázový test obsahuje všechny reagencie nutné k provedení testu na přístrojích
Chorus.
3/12
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012
CHORUS Rubella IgG Avidity
3
CZ
Složení soupravy
Souprava umožňuje provést 12 stanovení.
Testovací jednotka
2 × 6 ks
2 samostatné balení po 6 jednotlivých
jednorázových testech
Vysokoaviditní kontrolní sérum
1 × 300 µl
Roztok lidského séra o známé koncentraci
protilátek, obsahující Proclin a Gentamicin,
v pracovním ředění
Ředící roztok vzorků
1 × 1,5ml
Roztok lidského séra neobsahující IgG protilátky,
určené k ředění vzorků, jejichž výsledky přesahují
povolené rozmezí, v pracovním ředění
Pracovní návod
1 ks
Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu a ze samostatných balení
odeberte stanovený počet jednorázových testů pro vlastní analýzu. Zbylé
jednorázové testy vraťte zpět do obalu se sušidlem (silikagel – gel obsahující oxid
křemičitý), vytlačte vzduch a hermeticky uzavřete stisknutím uzávěru. Skladujte při
+2 °C až +8 °C.
4/12
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012
CHORUS Rubella IgG Avidity
CZ
Obrázek 1 Schéma jednorázového testu
Pozice 8
Místo pro štítek s čárovým kódem
Pozice 7
Aviditní roztok
Solný roztok močoviny obsahující 0,05 % fenol a 0,02%
Bronidox
Pozice 6
Mikrotitrační jamka s potaženým antigenem
purifikovaný a inaktivovaný antigen viru zarděnek
Pozice 5
Mikrotitrační jamka s potaženým antigenem
purifikovaný a inaktivovaný antigen viru zarděnek
Pozice 4
TMB Substrát
0,35 ml
Tetrametylbenzidin 0,26 mg/ml a 0,01% H2O2 stabilizovaný
v 0,05 mol/l citrátového pufru (pH 3,8)
Pozice 3
Ředicí roztok vzorků
0,35 ml
Proteinový roztok obsahující 0,05% fenol, 0,02% Bronidox
a indikátor přítomnosti séra
Pozice 2
Konjugát
0,35 ml
Roztok monoklonálních protilátek značených peroxidázou
ve fosfátovém pufru obsahujícím 0,05% fenol a 0,02%Bronidox
Pozice 1
Prázdná jamka
Do této jamky se přidá neředěné vyšetřované sérum
4
Další potřebné vybavení k provedení testu
Tyto reagencie nejsou součástí balení.
Promývací roztok
83606
Čistící roztok 2000
83605
Sanitační roztok
83604
Přístroj Chorus/ Chorus Trio
Destilovaná nebo deionizovaná voda
Běžné laboratorní sklo: odměrné válce, zkumavky atd.
Mikropipety na přesný odběr 50 až 200 μl roztoku
5/12
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012
CHORUS Rubella IgG Avidity
CZ
Jednorázové rukavice
Roztok chlornanu sodného (5 %)
Nádoby na potenciálně infekční materiál
5
Skladování a stabilita komponent
Reagencie se musí skladovat při teplotě +2 °C až +8 °C. V případě skladování při
nesprávné teplotě se musí zopakovat kalibrace a validovat test pomocí kontrolního
séra (viz 10, Validita testu).
Datum exspirace je uvedeno na každé komponentě a na štítku soupravy.
Po otevření mají reagencie omezenou stabilitu.
 Jednorázový test – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
 Vysokoaviditní kontrolní sérum – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
 Ředící roztok vzorků – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
6
Bezpečnost práce
Souprava je určena pouze pro diagnostické účely in vitro.
Tato souprava obsahuje materiály lidského původu, které byly testovány a vykázaly
negativní výsledky při použití metod schválených FDA pro stanovení přítomnosti
HbsAg a anti-HIV-1, anti-HIV-2 a anti-HCV protilátek. Protože však žádný
diagnostický test nemůže poskytnout úplnou záruku, že infekční agens nejsou
přítomna, je třeba s veškerým materiálem lidského původu zacházet tak, jako by byl
potenciálně infekční. Při zacházení s materiálem lidského původu je nutné dodržovat
všechny místní předpisy týkající se bezpečnosti práce.
Likvidace zbytků pro provedení testu
S použitými vzorky sér, kalibrátory, jednorázovými testy je třeba zacházet jako
s potenciálně infekčním materiálem a likvidovat je v souladu s platnou legislativou.
Zdravotní a bezpečnostní informace
1. Nepipetujte ústy. Používejte rukavice na jedno použití a ochranu očí. Po umístění
jednorázového testu do přístroje Chorus si důkladně umyjte ruce.
2. Některé reagencie obsahují nízké koncentrace škodlivých nebo dráždivých látek
Pokud se některá s těchto reagencií dostane do kontaktu s kůží nebo očima,
důkladně omyjte dané místo vodou.
 Konjugát obsahuje fenol
 TMB Substrát je roztok kyseliny
3. Neutralizované kyseliny nebo jiný tekutý odpad by se měl dekontaminovat
přidáním dostatečného množství chlornanu sodného tak, aby konečná
6/12
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012
CHORUS Rubella IgG Avidity
CZ
koncentrace dosahovala minimálně 1,0 %. Pro zajištění účinné dekontaminace
ponechejte tento odpad 30 minut v 1% chlornanu sodném.
4. Rozlitý potenciálně infekční materiál je třeba okamžitě odstranit pomocí
absorpčního papírového ručníku a kontaminovanou oblast umýt, například 1,0%
chlornanem sodným, a to předtím, než budete v práci pokračovat. Chlornan
sodný nepoužívejte na rozlité tekutiny s obsahem kyseliny, ty musíte nejprve
otřením vysušit.
5. Materiály použité k čištění potřísněných povrchů, včetně rukavic, se musí
likvidovat jako potenciálně životu nebezpečný odpad. Materiály obsahující
chlornan sodný nevkládejte do autoklávu.
7
Technické připomínky
Pro získání spolehlivých výsledků je nutné přesné dodržování návodu.
Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu (+18 °C až +30 °C) a test
proveďte do 60 minut.
Zkontrolujte a dodržujte následující informace:
 Substrát obsažený v pozici 4 je bezbarvý. Nepoužívejte jednorázové testy, které
toto nesplňují.
 Testovaný vzorek je dokonale na dně jamky rozprostřen.
 Zkontrolujte zda-li všechny reagencie v testu jsou přítomny a jestli není
jednorázový test poškozen. Nepoužívejte testy, které nemají reagencie.
 Jednorázové testy jsou určeny pro použití na přístroji Chorus. Důkladně
dodržujte pokyny pro použití a řiďte se návodem k obsluze přístroje.
 Chorus přístroj správně nastavený (viz návod k obsluze).
 Neměňte čárový kód umístěný na držadle jednorázového testu. Nepoužívejte
testy s poškozenými štítky s čárovými kódy.
 Defektní čárové kódy lze vložit do přístroje manuálně.
 Během skladování a použití nevystavujte jednorázové testy silnému světlu ani
výparům chlornanu.
 Použití silně hemolytických vzorků nebo vzorků s mikrobiální kontaminací může
vést k nereprodukovatelným výsledkům.
 Než vložíte jednorázový test do přístroje, zkontrolujte, že reakční jamka
neobsahuje cizí tělesa.
 Pipetujte sérum (50 µl) do pozice 1 jednorázového testu (viz obrázek 1).
 Nepoužívejte jednorázový test po uplynutí expiračního data.
7/12
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012
CHORUS Rubella IgG Avidity
8
CZ
Vzorky a jejich skladování
Jako vzorek k vyšetření může být použito sérum, získané odběrem žilní krve. Zachází
se s ním v souladu se všemi opatřeními předepsanými správnou laboratorní praxí.
Čerstvé sérum lze skladovat 4 dny při +2 °C až +8 °C. Séra je možné uchovávat
při -20 °C a lze je rozmrazit maximálně 3krát. Neskladujte vzorky v mrazácích s funkcí
vlastního rozmražování.
Rozmrazené vzorky je potřeba před použitím důkladně protřepat. Kvalita vzorku
může být vážně narušena kontaminací, která vede k chybným výsledkům.
Nepoužívejte silně lipemické, ikterické, hemolytické nebo kontaminované vzorky.
Test nelze použít na lidskou plazmu.
9
Pracovní postup.
1. Otevřete balení, vyjměte požadovaný počet jednorázových testů a zbytek
uzavřete zpět do sáčku poté, co vytlačíte vzduch.
2. Zkontrolujte stav jednorázového testu (viz 7 Technické připomínky).
3. Pipetujte 50 μl neředěného séra do pozice 1 každého testu. Při každé změně
šarže soupravy použijte jednorázový test pro kalibraci.
4. Jednorázový test umístěte do přístroje. Proveďte kalibraci (je-li nutná) a vlastní
stanovení podle pokynů uvedených v návodu k obsluze Chorus přístroje.
10 Validita testu
Pomocí kontrolního séra ověřte správnost získaných výsledků. Použijte je v souladu
s instrukcemi uvedenými v návodu na obsluhu. Pokud test ukáže, že se hodnota
kontrolního séra pohybuje mimo přijatelné rozmezí, kalibraci je třeba opakovat.
Předchozí výsledky budou automaticky opraveny.
Pokud je výsledek kontrolního séra i nadále mimo přijatelné rozmezí, kontaktujte
prosím:
Tel:
+39-0577-587121 (technická podpora)
tel
+39-0577-587154
8/12
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012
CHORUS Rubella IgG Avidity
CZ
11 Hodnocení výsledků
Přístroj Chorus vyjadřuje vypočítá procento avidity vzorků.
Hodnocení výsledků je popsáno v tabulce (Tabulka 1).
Tabulka 1 Hodnocení výsledků
Procento avidity (%)
Hodnocení
menší než 30
nízká avidita
30 až 40
střední avidita
větší než 40
vysoká avidita
V případě výsledku se střední aviditou zopakujte test. Pokud zůstává test nadále
střední, je vhodné opakovat z nového odběru, který bude proveden s určitým
časovým odstupem (2 až 3 týdny), aby bylo možno vyhodnotit možný rozdíl
v procentu avidity.
Pokud se objeví na přístroji symbol „NC“ nedosahuje koncentrace protilátek ve
vzorku hodnotu 15 IU/ml.
Pokud se objeví na přístroji symbol „DIL“ přesahuje koncentrace protilátek ve vzorku
hodnotu 100 IU/ml. V tomto případě nařeďte vzorek v poměru 1:5 Ředícím
roztokem vzorků nebo Negativní kontrolou
83607 a zopakujte test.
12 Interpretace výsledků
Test je dovoleno použít pouze pro vzorky obsahující alespoň 20 IU/ml IgG protilátek
proti viru zarděnek a méně než 100 IU/ml. Výsledek ukazující vysokou aviditu
nevylučuje možnost, že se jedná o nedávnou infekci. Na druhou stranu, vezmeme-li
v úvahu vysokou specificitu tohoto testu, naznačuje nízká avidita jasně infekci
získanou v průběhu 3 předešlých měsíců.
Serologický nález je třeba vždy interpretovat pouze v kontextu s výsledky ostatních
laboratorních testů a s klinickým obrazem pacienta.
9/12
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012
CHORUS Rubella IgG Avidity
CZ
13 Charakteristika soupravy
13.1 Diagnostická citlivost a specifita
Pro stanovení citlivosti a specifity bylo využito srovnání výsledků na jiné referenční
soupravě. Při srovnání bylo testováno 208 vzorků, 189 majících vysokou aviditu a 19
nízkou aviditu. Výsledky srovnání jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 2).
Tabulka 2 Výsledky srovnání zařazení testovaných vzorků
Referenční souprava
DIESSE
Nízká avidita
Vysoká avidita
Nízká avidita
17
2
Vysoká avidita
2
187
Souprava vykazuje 98,9% specifitu (CI95% 96,2 až 99,7) a 89,5% citlivost
(CI95% 68,5 až 96,9).
13.2 Přesnost měření
 Intra-assay: testované vzorky byly opakovaně změřeny; průměr naměřených
hodnot, směrodatná odchylka a variační koeficient (%) jsou uvedeny v tabulce
(Tabulka 3).
Tabulka 3 Intra-assay stanovení
10/12
Šarže
Průměr
naměřených
hodnot
Směrodatná
odchylka
Variační
koeficient (%)
011
84
8
10
343
82
10
12
370
74
11
15
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012
CHORUS Rubella IgG Avidity
CZ
 Inter-assay: všechny testované vzorky byly analyzovány průměr naměřených
hodnot, směrodatná odchylka a variační koeficient (%) každého vzorku jsou
uvedeny v tabulce (Tabulka 4).
Tabulka 4 Inter-assay stanovení
Avidita (%)
Vzorek
Průměrná
hodnota
Směrodatná
odchylka
Variační
koeficient (%)
Šarže
011
Šarže
343
Šarže
370
RAV 1
78
82
83
81
3
4
RAV 2
13
15
12
13
1
8
14 Literatura
1. S. Rousseau, K. Hedman. Rubella infection and reinfection distinguished by
avidity of IgG. Lancet 1: 1108 (1988).
2. H. Thomas, C. Morgan. Rubella-specific IgG subclass avidity ELISA and its role in
the differentiation between primary Rubella and rubella infection. Epidemiol.
Infect. 101: 591 (1988).
3. L. Matter, K. Kogelschats, D. Germann. Serum levels of rubella virus antibodies
indicating immunity: response to vaccination of subjects with low or
undetectable antibody concentrations. J. Inf. Dis. (1997).
11/12
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012
CHORUS Rubella IgG Avidity
CZ
15 Vysvětlení symbolů
Datum výroby
Použít do data
Nepoužívat opakovaně
Čtěte přiložené dokumenty
Výrobce
Počet testů
Skladovací teplota
Čtěte návod k použití
Biologická rizika
Katalogové číslo
Diagnostický zdravotnický prostředek in vitro
Číslo šarže
Diesse Diagnostica Senese
Via delle Rose 10
53035 Monteriggioni (Siena) – Italy
Tel. 0577-587111
12/12
IO-09/326-C; IFU 81095/MIT – Ed. 17.12.2012