C. difficile Ag (GDH)

Rapid-VIDITEST
C. difficile Ag (GDH)
(Jednokrokový test pro kvalitativní detekci glutamát dehydrogenázy Clostridium
difficile)
Návod k použití soupravy
Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565,
Fax: 261 090 566, E-mail: [email protected], Web: www.vidia.cz
POUŽITÍ:
Rapid-VIDITEST C. difficile Ag (GDH) je jednokrokový imunochromatografický test pro
kvalitativní detekci glutamát dehydrogenázy Clostridium difficile ve vzorcích stolice pro
diagnostiku infekcí způsobených Clostridium difficile. Pouze pro laboratorní použití.
ÚVOD:
Clostridium difficile je anaerobní gram-pozitivní sporulující bakterie. Klíčovou vlastností
umožňující přežívání v organizmu pacienta a v prostředí po delší dobu, a tím usnadňující
její přenos, je její schopnost tvořit spóry. C. difficile je přenášena fekálně-orální cestou.
C. difficile je nejzávažnějším původcem průjmů a/nebo pseudomembranózní kolitidy u
hospitalizovaných pacientů.
Vyzrálá střevní bakteriální flóra u zdravého dospělého jedince je obvykle rezistentní ke
kolonizaci bakterií C. difficile. Pokud dojde k narušení normální střevní flóry, tato
rezistence se ztrácí. To znamená, že jakýkoliv faktor spojený s porušením normální střevní
flóry zvyšuje riziko osídlení bakterií C. difficile po podávání antibiotik, hlavně těch se
širokospektrálním účinkem (penicilíny, cefalosporíny a clindamycin).
C. difficile může uvolňovat 2 vysokomolekulární toxiny, toxin A a toxin B, které jsou
zodpovědné za klinickou manifestaci infekce – od lehkého vodnatého průjmu až po
fulminantní pseudomembranózní kolitidu, toxický megakolon a smrt.
Clostridium difficile glutamát dehydrogenáza (GDH) je enzym produkovaný ve velkém
množství toxigenními i netoxigenními kmeny a proto je vynikajícím markerem přítomnosti
této bakterie.
PRINCIP TESTU:
Rapid-VIDITEST C. difficile Ag (GDH) je kvalitativní imunochromatografický test pro
detekci bakterií GDH antigenu ve stolici. Na testovacích zónách membrány testu jsou
navázány protilátky proti GDH antigenu.V průběhu testování vzorek reaguje s barevnými
červenými částicemi potaženými anti-GDH protilátkami, zasušenými na membráně. Směs
pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. Jak vzorek proudí skrz testovací
membránu, barevné částice migrují. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát
zachycen specifickými protilátkami ve „výsledkové zóně“, což se projeví jako červená
linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v „kontrolní zóně“,
kde se vždy na konci testu objeví zelená linka.
Přítomnost zelené linky ověřuje, že se použil dostatečný objem vzorku, že došlo ke
správné vzlínavosti vzorku, vnitřní kontrolu reagencií.
1
OBSAH SOUPRAVY:
- testovací kazety
- odběrové zkumavky s ředicím roztokem pro vzorky
- návod k použití
- certifikát kontroly balení
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU
- nádoba na sběr vzorků
- jednorázové rukavice
- stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ:
Odeberte dostatečné množství stolice (1-2 g nebo ml kapalného vzorku). Vzorky stolice
odebírejte do čistých odběrových nádob (bez konzervačních látek a transportních médií).
Vzorky lze uchovávat v chladničce (2-8°C) po dobu 7 dnů před testováním. V případě
delšího skladování (maximálně 1 rok) musí být vzorky skladovány zmrazené při -20°C. V
tomto případě se před testováním nechá vzorek zcela roztát a vytemperovat na
laboratorní.
PRACOVNÍ POSTUP:
Zpracování vzorků:
Pro každý vzorek použijte samostatnou odběrovou zkumavku. Odšroubujte víčko
odběrové zkumavky a pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte
(ponořením 4x do vzorku) malé množství vzorku stolice (cca 125 mg). Zašroubujte
lahvičku s pufrem a vzorkem stolice. Důkladně promíchejte zkumavku za účelem dobré
homogenizace vzorku. V případě kapalných vzorků stolice, odsajte fekální vzorek
kapátkem a přidejte 125 µl do odběrové lahvičky s pufrem.
Naberte malé množství
vzorku
Promíchejte vzorek
s ředícím roztokem
Odlomte špičku
zkumavky
vzorek
Průběh testu:
Před testováním nechte testovací kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na
laboratorní teplotu (15 - 30°C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test.
1. Vyjměte Rapid-VIDITEST C. difficile Ag (GDH) z obalové folie a použijte ho co nejdříve.
2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré
homogenizace vzorku. Odlomte konec špičky zkumavky.
3. Použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu pro každý vzorek. Přidejte přesně
4 kapky naředěného vzorku z odběrové zkumavky do oválného okénka označeného
(S). Zapněte časovač.
4. Po 10 minutách od nanesení vzorku odečtěte výsledek.
2
Aplikujte 4 kapky roztoku se vzorkem
INTERPRETACE VÝSLEDKU:
POZITIVNÍ
NEPLATNÝ
NEGATIVNÍ
NEPLATNÝ
POZITIVNÍ: Ve výsledkové zóně se objeví dvě linky. ČERVENÁ linka v místě označeném
T a ZELENÁ kontrolní linka v místě označeném C.
NEGATIVNÍ: Objeví se pouze ZELENÁ kontrolní linka v místě označeném C.
NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví zelená linka bez ohledu
na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně. Nejčastějšími příčinami selhání testu
jsou: nedostatečný objem vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií.
Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže
přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele.
POZNÁMKA K INTERPRETACI VÝSLEDKŮ:
Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve
vzorku. Nicméně, tímto testem nelze množství antigenu kvantitativně stanovit a ani
hodnotit vzestup nebo pokles koncentrace v průběhu onemocnění.
PLATNOST TESTU:
V testu je použit interní standard.
- Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje
dostatečný objem vzorku a správný průběh testu.
OMEZENÍ TESTU:
1. RAPID VIDITEST C. difficile Ag (GDH) test ukazuje jen přítomnost Clostridium difficile
ve vzorku (kvalitativní detekce) a měl by být použit jen pro detekci GDH antigenu
Clostridium difficile ve vzorku stolice. Tento test nemůže být použit ani pro kvantitativní
detekci ani pro určení míry zvyšování koncentrace antigenu.
2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se
hnědé linky). Vzorek více zřeďte ředicím roztokem a opakujte test.
3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní linky.
4. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu infekce Clostridium difficile. Potvrzení
diagnózy může provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu.
5. Pozitivní výsledek potvrzuje přítomnost Clostridium difficile-GDH ve vzorku stolice.
Nicméně, tento výsledek může znamenat přítomnost toxigenních i netoxigenních
kmenů. Po zjištění pozitivního výsledku by mělo navazovat rozlišení Clostridium difficile
kmenů dalšími laboratorními metodami.
3
OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY:
Clostridium difficile je spojováno s 95-100% případů pseudomembranózní kolitidy, s 6075% případů kolitidy související s podáváním antibiotik a s 35% případů průjmů, které
souvisí s podáváním antibiotik.
ÚČINNOST TESTU:
Citlivost a specifita:
Byla provedena studie se vzorky stolic od pacientů s průjmem. Výsledky z C. difficile Ag
(GDH) porovnané s jinými komerčními soupravami (C. DIFF QUIK CHEK Complete®
TechLab a WampoleTM C. Diff ChekTM-60, Techlab) byly:
citlivost > 99% a specifita > 99%
citlivost > 95% a specifita > 99%.
Křížová reaktivita:
Byla stanovena křížová reaktivita Rapid-VIDITEST C. difficile Ag (GDH) testu. Nebyla
nalezena žádná křížová reaktivita s běžnými střevními patogeny a dalšími organismy a
látkami občasně se vyskytujícími ve stolici: Campylobacter, E. coli, H. pylori, Listeria,
Salmonella, Shigella, Yersinia, Staphylococcus aureus.
SKLADOVÁNÍ A STABILITA:
Skladujte v originálním obalu chlazené nebo při laboratorní teplotě (2 - 30°C). Test je
stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Test musí zůstat v uzavřeném obalu až do
použití. Nezmrazujte.
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ:
- Pouze pro in vitro diagnostiku.
- Nepoužívejte po uplynutí expirační doby.
- Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do použití.
- Nepoužívejte test, pokud je sáček poškozen.
- Dodržujte zásady správné laboratorní praxe, používejte ochranný oděv, ochranné
rukavice, nejezte, nepijte a nekuřte.
- Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem.
- Odpad likvidujte v souladu jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými
předpisy.
- Test musí být proveden do 2 hodin od otevření sáčku.
REFERENCE:
1. Wren, M.W.D, et al. “Laboratory diagnosis of Clostridium difficile infection. An
evaluation of tests for faecal toxin, glutamate dehydrogenase, lactoferrin and toxigenic
culture in the diagnostic laboratory”. British Journal of Biomedical Science, 66 (1),
2009
2. Vaishnavi, Ch., “Clinical spectrum & pathogenesis of Clostridium difficile associated
diseases”. Indican J. Med. Res. 131, April 2010, pp 487-499
3. POUTANEN, S. M. et al. ”Clostridium difficile-associated diarrhoea in adults”, CMAJ,
171(1) July 2004, pp. 51-58.
POUŽITÉ SYMBOLY:
Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Výrobce
Datum exspirace
Teplotní omezení
Poslední revize tohoto návodu: 05/2015
4